本發(fā)明涉及具有模擬過氧化物酶特性的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料，屬于納米技術(shù)和仿生技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

天然酶主要是蛋白質(zhì)，少量為核酸，是在維持生物的生命活動(dòng)和化學(xué)反應(yīng)等基本過程中發(fā)揮重要作用的物質(zhì)。由于酶對底物結(jié)合的特異性及其高效的催化活性使得其在各個(gè)領(lǐng)域備受關(guān)注。然而，天然酶來源有限，提純復(fù)雜困難，保存條件苛刻，操作過程中易受多種物理、化學(xué)環(huán)境影響導(dǎo)致變性失活等諸多弊端限制了天然酶的應(yīng)用。具有天然酶相似功能的人工模擬酶恰恰能夠克服天然酶上述的缺點(diǎn)，并且在熱穩(wěn)定性、制備成本、催化活性、生物檢測等方面展現(xiàn)出巨大的優(yōu)勢。因此，人工模擬酶的研究開發(fā)與應(yīng)用越來越多的受到人們的重視。

過氧化物酶一般是催化過氧化氫或其他過氧化物，表現(xiàn)為易對多種有機(jī)物或無機(jī)物產(chǎn)生氧化作用。在過氧化物酶研究中，研究最為廣泛的是具有模擬過氧化物酶活性的碳納米材料。由于碳納米材料的低成本，易大規(guī)模生產(chǎn)，可長期存儲(chǔ)以及在惡劣環(huán)境中保持高度穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，使其被廣泛應(yīng)用于環(huán)境檢測和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。目前，石墨烯、氧化石墨烯、碳納米管、碳量子點(diǎn)、石墨烯量子點(diǎn)等均被報(bào)道具有過氧化物模擬酶活性，但相比于自然酶，這些碳材料的低催化性能限制了其應(yīng)用。

納米級(jí)別的鉑粒子具有獨(dú)特的物理和化學(xué)性質(zhì)，被廣泛地應(yīng)用于生物傳感器、光化學(xué)與電化學(xué)催化、半導(dǎo)體熒光探針、光電子器件等領(lǐng)域。近年來，研究者們致力研究鉑納米粒子穩(wěn)定劑以克服其在溶液中的低分散性、易產(chǎn)生團(tuán)聚沉降現(xiàn)象、電子傳遞途徑易被部分阻斷及表面活性位點(diǎn)易被掩蓋等缺陷?，F(xiàn)已報(bào)道的鉑納米粒子穩(wěn)定劑有水溶性小分子化合物檸檬酸鈉、烷基胺、乙二醇，水溶性聚合物聚乙烯吡咯烷酮、聚（酰胺-胺）、聚（丙烯酸），蛋白質(zhì)類牛血清白蛋白、去鐵鐵蛋白、溶菌酶，碳材料碳納米、氧化石墨烯、還原氧化石墨烯等。用上述穩(wěn)定劑制備的復(fù)合材料在一定程度上克服了鉑納米粒子本身存在的一些缺陷，但是其合成過程操作復(fù)雜、耗費(fèi)試劑多且制備時(shí)間長，或降低了原本鉑納米粒子的催化活性。因此，尋求快速、簡便的制備方法獲得高穩(wěn)定性、高活性的鉑納米材料具有重大意義。

本發(fā)明利用磺化石墨烯作為支撐載體，通過硼氫化鈉還原合成的方法，制備磺化石墨烯-納米鉑復(fù)合材料，該復(fù)合材料對底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和過氧化氫（H₂O₂）同時(shí)具有高親和力。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種以磺化石墨烯為基底，通過硼氫化鈉還原法合成鉑納米粒子-磺化石墨烯復(fù)合材料，利用鉑納米粒子-磺化石墨烯復(fù)合材料的優(yōu)良催化特性模擬過氧化物酶。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

本發(fā)明所述的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料模擬過氧化物酶，其特征是鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料具有過氧化物酶特性，催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色；所述的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料由以下方法制備的：往12.559 mL濃度為2.389 mg/mL的磺化石墨烯溶液中加入1.796 mL濃度7.9 mmol/L的氯鉑酸水溶液，混勻劇烈攪拌15分鐘后，逐滴加入0.645 mL濃度為2.5 mg/mL硼氫化鈉水溶液，攪拌4小時(shí)后即得鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，真空干燥后得到鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料粉末。

所述磺化石墨烯的制備方法為：將Hummers法制備出的氧化石墨烯分散于去離子水中，超聲處理3小時(shí)得到4 mg/mL氧化石墨烯的分散體系，往氧化石墨烯分散體系加入5wt%碳酸鈉溶液，使得體系pH值為9~10，然后加入30 mL濃度為 0.16 g/mL 硼氫化鈉溶液，在80 ℃下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心后用水洗滌沉淀，得到中性的還原氧化石墨烯，將還原氧化石墨烯分散于去離子水中，得到還原氧化石墨烯懸浮液75 mL，再將對氨基苯磺酸重氮鹽加入到還原氧化石墨烯懸浮液中并在冰浴條件下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，離心后用雙蒸水洗滌沉淀至pH值為7，得到呈中性的耦合物，將上述所得的耦合物分散于150 mL去離子水中，加入10 mL濃度為1.6 g/mL水合肼，在100 ℃下攪拌24小時(shí)進(jìn)行還原反應(yīng)，然后滴加5 wt %碳酸鈉溶液沉淀磺化石墨烯，將上述制得的磺化石墨烯用雙蒸水進(jìn)行徹底洗滌，然后將磺化石墨烯在一定溫度下進(jìn)行真空干燥，得到磺化石墨烯固體，取119.45 mg磺化石墨固體溶解于50 mL雙蒸水，常溫下超聲5小時(shí)，充分剝離后得到2.389 mg/mL透明澄清的棕黑色磺化石墨烯水溶液。

所述鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料中鉑納米粒子的平均粒徑為7.5 nm，鉑元素以0價(jià)和+4價(jià)兩種形式存在。

催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽生成藍(lán)色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在652 nm處有最大吸收峰。

鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽反應(yīng)體系的最佳條件為：pH為5.0，溫度為37 ℃，鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料的用量為1.125 μg/mL，3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽的濃度為0.338 mmol/L，反應(yīng)時(shí)間為10 min。

鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料對3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽的米氏常數(shù)為0.06244 mmol/L，對過氧化氫的米氏常數(shù)為47.76 mmol/L。

鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽的顯色產(chǎn)物吸光值與0.01~1 mmol/L濃度范圍內(nèi)的過氧化氫呈線性關(guān)系，檢測限為0.0025 mmol/L。

本發(fā)明所述的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料模擬過氧化物酶，具體技術(shù)方案為：

（一）磺化石墨烯的制備：首先，將Hummers法制備出的氧化石墨烯分散于去離子水中，超聲處理3小時(shí)得到4 mg/mL氧化石墨烯的分散體系。往氧化石墨烯分散體系加入5%碳酸鈉溶液，使得體系pH值為9~10，然后加入30 mL濃度為 0.16 g/mL 硼氫化鈉溶液，在80 ℃下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心后用水洗滌沉淀，得到中性的還原氧化石墨烯。將還原氧化石墨烯分散于去離子水中，得到還原氧化石墨烯懸浮液75 mL，再將對氨基苯磺酸重氮鹽加入到還原氧化石墨烯懸浮液中并在冰浴條件下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，離心后用雙蒸水洗滌沉淀至pH值為7，得到呈中性的耦合物。將上述所得的耦合物分散于150 mL去離子水中，加入10 mL濃度為1.6 g/mL水合肼，在100 ℃下攪拌24小時(shí)進(jìn)行還原反應(yīng)，然后滴加5%碳酸鈉溶液沉淀磺化石墨烯，將上述制得的磺化石墨烯用雙蒸水進(jìn)行徹底洗滌，然后將磺化石墨烯在一定溫度下進(jìn)行真空干燥，得到磺化石墨烯固體。取119.45 mg磺化石墨固體溶解于50 mL雙蒸水，常溫下超聲5小時(shí)，充分剝離后得到2.389 mg/mL透明澄清的棕黑色磺化石墨烯水溶液。

（二）鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料的制備：

往12.559 mL濃度為2.389 mg/mL的磺化石墨烯溶液中加入1.796 mL濃度7.9 mmol/L的氯鉑酸水溶液，混勻劇烈攪拌15分鐘后，逐滴加入0.645 mL濃度為2.5 mg/mL硼氫化鈉水溶液，攪拌4小時(shí)后即得鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液。所負(fù)載的納米鉑粒子平均粒徑為7.5 nm，4 ℃保存，能保持2個(gè)月以上的相對穩(wěn)定。以上過程中使用的所有玻璃器皿均經(jīng)過王水浸泡，并用雙蒸水徹底清洗，晾干。

（三）鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料模擬過氧化物酶活性：

通過鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化物酶底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽（TMB）產(chǎn)生藍(lán)色底物，驗(yàn)證和比較其過氧化物酶活性。在磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液中依次加入過氧化氫、3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后溫浴10分鐘，肉眼觀察顏色的變化或測定652 nm波長處的吸光度值。根據(jù)溶液顏色或通過測定吸光度值進(jìn)行比較過氧化物酶活性。

（四）鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料模擬過氧化物酶檢測過氧化氫：

通過鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化物酶底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽產(chǎn)生藍(lán)色底物，檢測低濃度過氧化氫。最優(yōu)條件下，在磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液中依次加入過氧化氫、3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后溫浴10分鐘，測定652 nm波長處的吸光度值。通過吸光度值標(biāo)準(zhǔn)曲線對過氧化氫濃度進(jìn)行定量。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

（1）本發(fā)明所得到的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料穩(wěn)定性好且制備方法簡單。

（2）本發(fā)明鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料具有良好的過氧化物酶活性。

（3）本發(fā)明鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料對底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽的親和力高。

（4）本發(fā)明鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料能定量檢測過氧化氫，檢測限低，靈敏度高。

附圖說明

圖1為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料透射電子顯微鏡圖。

圖2為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料鉑元素的X射線光電子能譜圖。

圖3為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料的X射線衍射圖。

圖4為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色體系的顏色變化圖。從左到右依次為TMB+H₂O₂溶液、磺化石墨烯+TMB+H₂O₂溶液、鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料+TMB+H₂O₂溶液，溶液由無色變?yōu)樗{(lán)色。

圖5為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料終濃度對催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色體系的影響圖。

圖6為pH值對鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色體系的影響圖。

圖7為溫浴溫度對鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色體系的影響圖。

圖8為3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽濃度對鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色體系的影響圖。

圖9為反應(yīng)時(shí)間對鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料催化過氧化氫氧化3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽顯色體系的影響圖。

圖10為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料對于3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽的穩(wěn)態(tài)動(dòng)力學(xué)曲線圖。

圖11為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料對于過氧化氫的穩(wěn)態(tài)動(dòng)力學(xué)曲線圖。

圖12為鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料檢測過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)例1：

Hummers法制備氧化石墨烯：稱取325目鱗片石墨2.7 g，加入到316 mL濃度為18.4 mol/L的濃硫酸和36 mL濃度為14.7 mol/L的磷酸的混合溶液中。充分?jǐn)嚢韬?，置于? ℃冰浴中。將16.2 g高錳酸鉀少量多次，緩慢加入到以上混合溶液中。保持0 ℃冰浴，磁力攪拌3小時(shí)后，將所得墨綠混懸液轉(zhuǎn)移至35 ℃溫水浴中，控溫1小時(shí)，然后將所得墨綠混懸液轉(zhuǎn)移至50 ℃溫水浴中，控溫12小時(shí)得到紫黑色混懸液混合物。360 mL冰水緩慢加入到得到的紫黑色混懸液混合物中，劇烈攪拌1小時(shí)。繼而往溶液中逐滴滴加12 mL 30wt%過氧化氫溶液，溶液顏色突變?yōu)榱咙S色，攪拌30 分鐘。所得溶液經(jīng)G1砂芯漏斗（孔徑20-30微米）過濾，繼而4000 轉(zhuǎn)每分鐘離心30分鐘，棄去上清液；加入180 mL 超純水充分振蕩洗滌，4000 轉(zhuǎn)每分鐘離心30分鐘，棄去上清液，沉淀顏色呈土黃色；再加入180 mL 30wt% 鹽酸充分振蕩洗滌，經(jīng)G1砂芯漏斗（孔徑20-30微米）過濾去除不溶顆粒，濾液4000 轉(zhuǎn)每分鐘離心30分鐘，棄去上清液，沉淀顏色繼續(xù)加深；接著多次用無水乙醇將沉淀物洗至pH值為中性，4000 轉(zhuǎn)每分鐘離心30分鐘，棄去上清液，沉淀呈棕黃色；最后用乙醚沖洗沉淀，經(jīng)G5砂芯漏斗（孔徑1.5-2.5微米）過濾。濾餅在室溫下過夜晾干，得到棕色的氧化石墨烯。

實(shí)例2：

對氨基苯磺酸重氮鹽制備：在裝有冷凝管、攪拌器、滴液漏斗和溫度計(jì)的150 mL四頸瓶中放入10 mL 5 wt%碳酸鈉溶液及2.1 g對氨基苯磺酸晶體，攪拌下溫?zé)崾蛊淙芙猓偌尤?.8 g亞硝酸鈉與6 mL水配成的溶液，用冰浴冷至0~5 ℃。在不斷攪拌下，將3 mL濃鹽酸與10 mL水配成的溶液滴入上述混合溶液中，在冰浴中繼續(xù)攪拌15 min，得到對氨基苯磺酸重氮鹽。

實(shí)例3：

將Hummers法制備出的氧化石墨烯分散于去離子水中，超聲處理3小時(shí)得到4 mg/mL氧化石墨烯的分散體系。往氧化石墨烯分散體系加入5wt%碳酸鈉溶液，使得體系pH值為9~10，然后加入30 mL濃度為 0.16 g/mL 硼氫化鈉溶液，在80 ℃下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，8000轉(zhuǎn)/分鐘離心后用水洗滌沉淀，得到中性的還原氧化石墨烯。將還原氧化石墨烯分散于去離子水中，得到還原氧化石墨烯懸浮液75 mL，再將對氨基苯磺酸重氮鹽加入到還原氧化石墨烯懸浮液中并在冰浴條件下攪拌反應(yīng)2小時(shí)，離心后用雙蒸水洗滌沉淀至pH值為7，得到呈中性的耦合物。將上述所得的耦合物分散于150 mL去離子水中，加入10 mL濃度為1.6 g/mL水合肼，在100 ℃下攪拌24小時(shí)進(jìn)行還原反應(yīng)，然后滴加5 wt %碳酸鈉溶液沉淀磺化石墨烯，將上述制得的磺化石墨烯用雙蒸水進(jìn)行徹底洗滌，然后將磺化石墨烯在60 ℃下進(jìn)行真空干燥，得到磺化石墨烯固體。取119.45 mg磺化石墨固體溶解于50 mL雙蒸水，常溫下超聲5小時(shí)，充分剝離后得到2.389 mg/mL透明澄清的棕黑色磺化石墨烯水溶液。

實(shí)例4：

往12.559 mL濃度為2.389 mg/mL的磺化石墨烯溶液中加入1.796 mL濃度7.9 mmol/L的氯鉑酸水溶液，混勻劇烈攪拌15分鐘后，逐滴加入0.645 mL濃度為2.5 mg/mL硼氫化鈉水溶液，攪拌4小時(shí)后即得鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液。一定溫度下真空干燥后得到鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料粉末。

實(shí)例5：

將實(shí)施例4所制得的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液滴涂到銅網(wǎng)上，進(jìn)行透射電子顯微鏡測試，結(jié)果表明鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料中鉑納米粒子的平均粒徑為7.5 nm（見圖1）。

實(shí)例6：

取一定量實(shí)施例4所制得的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料粉末，進(jìn)行X射線光電子能譜測試，結(jié)果表明鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料中鉑元素以0價(jià)和+4價(jià)兩種形式存在（見圖2）。

實(shí)例7：

取一定量實(shí)施例4所制得的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料粉末，進(jìn)行X射線衍射測試。如圖3所示，2θ=40.08o、46.02o和60.27o處為鉑的特征峰，分別對應(yīng)鉑的（111）、（200）和 （220）晶面；2θ=24.1o處為磺化石墨烯的特征峰。

實(shí)例8：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37 ℃溫浴10分鐘，溶液由無色變?yōu)樗{(lán)色。當(dāng)不加鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料或加入磺化石墨烯溶液時(shí)，反應(yīng)體系不發(fā)生顏色反應(yīng)（見圖4）。

實(shí)例9：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL不同濃度的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37℃溫浴10分鐘，測定652 nm波長處吸光度。如圖5所示，顯色產(chǎn)物的吸光度隨著鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料終濃度增大而增大，但當(dāng)鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料的濃度達(dá)到1.125 μg/mL后，體系的吸光值趨于平緩，故選擇鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料的最佳用量為1.125 μg/mL。

實(shí)例10：

在pH值分別為3、4、4.5、5、5.5、6、7、8的1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37 ℃溫浴10分鐘，測定652 nm波長處吸光度。鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料的相對催化活性在磷酸鹽緩沖液pH值為4.5~5.0時(shí)達(dá)到最大（見圖6），故選擇反應(yīng)體系的最佳pH值為5.0。

實(shí)例11：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后在不同溫度10℃、20℃、30℃、37℃、45℃、50℃、60℃溫浴10分鐘，測定652 nm波長處吸光度。如圖7所示，在溫度10~37℃間，吸光度值緩慢增大，當(dāng)溫度高于37℃時(shí)，吸光值則出現(xiàn)明顯的下降趨勢，故選擇反應(yīng)體系的最佳溫度為37℃。

實(shí)例12：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL不同濃度的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37℃溫浴10分鐘，測定652 nm波長處吸光度。如圖8所示，顯色產(chǎn)物的吸光度隨著3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽終濃度增大而增大，當(dāng)濃度達(dá)到0.338 mmol/L后吸光度幾乎不再增大，故反應(yīng)體系的最佳TMB濃度為0.338 mmol/L。

實(shí)例13：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37℃溫浴反應(yīng)，測定不同時(shí)間下652 nm波長處吸光度。如圖9所示，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長，吸光度值逐漸增大，在反應(yīng)時(shí)間達(dá)10 min之后，吸光度值變化緩慢，故選擇反應(yīng)體系的最佳反應(yīng)時(shí)間為10 min。

實(shí)例14：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL濃度為0.1 mmol/L的過氧化氫、0.04 mL不同濃度的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37℃溫浴反應(yīng)1分鐘，測定652 nm波長處吸光度，計(jì)算初速度。通過米氏方程擬合，可以得出鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料對底物3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽的米氏常數(shù)為0.06244 mmol/L（見圖10）。

實(shí)例15：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL不同濃度的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37℃溫浴反應(yīng)1分鐘，測定652 nm波長處吸光度，計(jì)算初速度。通過米氏方程擬合，可以得出鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料對底物過氧化氫的米氏常數(shù)為47.76 mmol/L（見圖11）。

實(shí)例16：

在1.74 mL磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（pH 5，200 mmol/L）中依次加入0.18 mL不同濃度的過氧化氫、0.04 mL濃度為16.9 mmol/L的3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺鹽酸鹽和40 μL濃度為1.125 μg/mL的鉑-磺化石墨烯復(fù)合納米材料水溶液，混合后37℃溫浴反應(yīng)10分鐘，測定652 nm波長處吸光度。過氧化氫濃度在0.01~1 mmol/L范圍內(nèi)，顯色產(chǎn)物的吸光度與過氧化氫濃度呈線性相關(guān)（r=0.997），式中r指相關(guān)系數(shù)，檢測限為0.0025 mmol/L（見圖12）。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改，等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。