一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，原料為銀杏葉提取物，經(jīng)乙酸乙酯磁力攪拌提取后得到溶液，旋蒸濃縮至干，采用甲醇溶解并超聲處理，作為檢測(cè)樣品，高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器分析檢測(cè)。本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果與中國藥典方法檢測(cè)結(jié)果一致，在銀杏葉萜類內(nèi)酯提取分離中，本發(fā)明更方便實(shí)用。檢測(cè)每個(gè)樣品時(shí)間低于12min(中國藥典方法45min)，大大提高了檢測(cè)效率，縮短試驗(yàn)周期，節(jié)約成本，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。該方法可以用于銀杏葉內(nèi)酯的定性與定量分析，本發(fā)明經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證表明，分離效果良好，方法線性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收率等均符合要求。本發(fā)明還適用于檢測(cè)以單種或多種銀杏葉萜類內(nèi)酯作為原料的制劑，適于工業(yè)化生產(chǎn)使用，有較大的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)方法，具體涉及中藥提取物的檢測(cè)方法，尤其涉及一種檢測(cè)銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物的葉子，主要化學(xué)成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物，具有重要的藥用價(jià)值和市場(chǎng)價(jià)值，因此，市場(chǎng)上已開發(fā)了許多銀杏葉系列產(chǎn)品。隨著社會(huì)的進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，銀杏葉萜類內(nèi)酯的重要性越來越受人們的關(guān)注。銀杏葉萜類內(nèi)酯是僅在銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的一類具有特殊結(jié)構(gòu)及顯著藥理活性的重要成分，迄今尚未發(fā)現(xiàn)存在于其他任何植物中，更重要的是它們具有獨(dú)特的藥理作用和治療價(jià)值，常見的銀杏葉萜類內(nèi)酯為銀杏內(nèi)酯A、B、C,白果內(nèi)酯B,均為強(qiáng)血小板活化因子(platelet-activatingfactor, PAF)受體拮抗劑，具有很好的藥用價(jià)值，它們獨(dú)特的藥理作用和治療價(jià)值已引起世界范圍制藥工業(yè)的極大興趣。隨著對(duì)銀杏葉內(nèi)酯的深度開發(fā)研究，準(zhǔn)確、方便、快捷的內(nèi)酯檢測(cè)方法有著關(guān)鍵性的作用。
[0003]蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)的檢測(cè)方法消除了常見于傳統(tǒng)HPLC檢測(cè)方法中的難點(diǎn)，它不同于紫外(UV)和熒光(FLD)檢測(cè)器，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測(cè)，不受其官能團(tuán)的影響。ELSD的響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比，因而能用于測(cè)定樣品的純度或者檢測(cè)未知物。蒸發(fā)光散射檢測(cè)器靈敏度比示差折光檢測(cè)器高，對(duì)溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。《中國藥典》2010年版中對(duì)銀杏葉萜類內(nèi)酯含量的測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以正丙醇-四氫呋喃-水(1:15:84)為流動(dòng)相；用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。但是每個(gè)樣品的檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)45min，因此，不能滿足銀杏葉內(nèi)酯快速的測(cè)定，需要進(jìn)一步改進(jìn)檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究設(shè)計(jì)快速、準(zhǔn)確檢測(cè)銀杏葉萜類內(nèi)酯的方法，縮短試驗(yàn)周期，提高檢測(cè)效率。本發(fā)明提供了一種銀杏葉萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，本發(fā)明的技術(shù)方案是:以銀杏葉提取物為原料，經(jīng)乙酸乙酯磁力攪拌提取后得到銀杏葉萜類內(nèi)酯組合物溶液，旋蒸濃縮至干，采用甲醇溶解并超聲處理，作為檢測(cè)樣品，進(jìn)行高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，以外標(biāo)兩點(diǎn)法定量，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈與水作為流動(dòng)相，流動(dòng)相流速為0.1?2.0mL/min，梯度洗脫，柱溫箱溫度20°C?50°C，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)(漂移管溫度為60°C?110°C，載氣壓力為
1.0 ?5.0bar,氣體流速 0.5L/min ?3.5L/min)。
[0005]具體的，本發(fā)明方法包括以下步驟:
[0006](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈為有機(jī)相，純化水為水相，梯度洗脫；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)(漂移管溫度為60。。~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar，氣體流速0.5L/min~3.5L/min)。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3500 ；
[0007](2)對(duì)照品溶液的制備:分別精密稱取白果內(nèi)酯對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯A對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品和銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品適量,加甲醇制成每ImL各含2mg、lmg、lmg、lmg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；
[0008](3)供試品溶液的制備:取銀杏葉提取物0.15g，精密稱定，用乙酸乙酯40°C恒溫提取3次(分別用30mL、20mL、1mL)，同時(shí)磁力攪拌器攪拌，每次lOmin，合并3次提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μ m濾膜過濾，取續(xù)濾液即得；
[0009](4)測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μ L、10 μ L，供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程分別計(jì)算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯Α、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，各內(nèi)酯總量即為銀杏內(nèi)酯含量。
[0010]本發(fā)明方法所述色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠。
[0011]所述蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的漂移管溫度為60°C~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar,氣體流速 0.5L/min ~3.5L/min。
[0012]所述流動(dòng)相條件:流動(dòng)相為有機(jī)相/水相，二者體積比為20:80~70:30 ;有機(jī)相為色譜級(jí)甲醇或乙腈或它們的混合溶液，所述混合溶液中甲醇與乙腈的體積比為10:90~80:20，水相為純化水。
[0013]柱溫箱溫度20V~50°C。
[0014]流動(dòng)相流速0.1 ~2.0mL/min。
[0015]梯度洗脫程序:
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，使用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器分析檢測(cè)，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以有機(jī)相/水相為流動(dòng)相，梯度洗脫；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于 3500 ； (2)對(duì)照品溶液的制備:分別精密稱取白果內(nèi)酯對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯A對(duì)照品、銀杏內(nèi)酯B對(duì)照品和銀杏內(nèi)酯C對(duì)照品適量,加甲醇制成每ImL各含2mg、Img> Img> Img的混合溶液，作為對(duì)照品溶液； (3)供試品溶液的制備:取銀杏葉提取物0.15g，精密稱定，用乙酸乙酯40°C恒溫分別用30mL、20mL、10mL提取3次，同時(shí)磁力攪拌器攪拌，每次lOmin，合并3次提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μ m濾膜過濾，取續(xù)濾液即得； (4)測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液5μ L、10 μ L，供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程分別計(jì)算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯Α、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，各內(nèi)酯總量即為銀杏內(nèi)酯含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(I)色譜柱的柱溫箱溫度20°C~50°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(I)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器的漂移管溫度為60°C~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar，氣體流速0.5L/min ~3.5L/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(I)流動(dòng)相為有機(jī)相/水相，二者體積比為20:80~70:30 ;有機(jī)相為色譜級(jí)甲醇或乙腈或它們的混合溶液，所述混合溶液中甲醇與乙腈的體積比為10:90~80:20，水相為純化水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟(I)流動(dòng)相流速0.1~2.0mL/min ； 梯度洗脫程序:
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104034826SQ201410321649
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月8日
【發(fā)明者】孫蓉, 尹小華, 呂署一, 李丁, 肖志勇 申請(qǐng)人:上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司