一種用于治療骨破壞性疾病的二萜化合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從干燥的款冬花中分離得到的一種具有治療 骨破壞性疾病作用的二祗類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】 陽00引款冬花別名冬花、蜂斗菜或款冬蒲公英，系菊科款冬屬植物款冬CTussilagofarfaru L.)的花蕾，分布于我國(guó)河北、新疆等省區(qū)?？疃幕ㄏ热~開放，花亭數(shù) 個(gè)，有鱗片狀巷葉10多片，花雌性，花期2-3月份?？疃娜胨幉课粸槠涓稍锘ɡ?，呈不整 齊棍棒狀分布，花頭外面長(zhǎng)有許多魚鱗狀巷片，通常在10月下旬至12月下旬花尚未出±時(shí) 采挖。藥材氣味清香，味道微微發(fā)苦?？疃ㄐ詼?，味辛，微苦，潤(rùn)肺下氣、止咳化疲，主治喘 咳疲多、勞嗽咯血、急慢性氣管炎等癥。在《本經(jīng)》中記載：對(duì)"寒束肺經(jīng)之飲邪喘、嗽最宜"。
[0003] 國(guó)內(nèi)外現(xiàn)已報(bào)道款冬花的化學(xué)成分類型主要包括黃酬、祗類、酪類、生物堿類和揮 發(fā)油類?？疃ň哂兄箍取⑵酱?、升壓、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等藥理活性?？疃顾灶w粒能明 顯延長(zhǎng)濃氨水引咳后小鼠咳嗽的潛伏期，減少咳嗽次數(shù)，增加小鼠氣管段酪紅排泌量?？疃?花素、甲基下酸款冬花醋和14-去乙酷氧基-3, 14-去氨-2-甲基下酸款冬花醋對(duì)血小板活 化因子引起的血小板聚集有抑制作用?？疃S酬對(duì)〇2 ·、·0Η、Η2033種自由基有較好的 清除能力，且在0. 38~47. 65mg/L1范圍內(nèi)呈現(xiàn)一定量效關(guān)系，對(duì)3種自由基的清除能力大 小化〇3>〇2 ·> -0H?？疃ㄒ掖继崛∥锟蒞明顯減少二甲苯致小鼠耳腫及角叉菜膠所致 小鼠足巧腫；款冬花乙醇提取物能明顯減少藍(lán)麻油、番瀉葉所致小鼠腹瀉，降低水浸應(yīng)激潰 瘍、鹽酸所致潰瘍及嗎I噪美辛-乙醇所致潰瘍?？疃ㄌ崛∥?，2-di-(3'，4'-dihy化oxyc innamo^)-巧chopenta-3-ol，山奈酪和搬皮素對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞LA795的增值均顯示出一 定的抑制作用，其中搬皮素對(duì)肺癌細(xì)胞LA795的抑制作用最顯著。有文獻(xiàn)表明，搬皮素亦可 抑制肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞的增長(zhǎng)，并使其調(diào)亡。搬皮素對(duì)其他腫瘤也顯示出較強(qiáng)的抑制作 用。
[0004] 破骨細(xì)胞是具有蝕骨功能的細(xì)胞，其形態(tài)多樣，通常呈油煎蛋狀，長(zhǎng)條形等，并可 見到偽足，較一般細(xì)胞大，多含有幾個(gè)至幾十個(gè)細(xì)胞核。破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞在骨的新陳代 謝中起著主要的作用，兩者間靠未知的機(jī)理維持著動(dòng)態(tài)平衡。當(dāng)破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)時(shí)，則W 骨吸收為主，有可能發(fā)生W骨吸收為主要特征的疾病如牙周炎，骨質(zhì)疏松癥等疾病；當(dāng)破骨 細(xì)胞活性受到抑制時(shí)也就是成骨細(xì)胞活性增強(qiáng)時(shí)，則W骨形成為主，有可能發(fā)生W骨過量 形成為主的疾病如石骨癥等疾病。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從干燥的款冬花中分離得到的一種具有治療骨破壞性 疾病作用的二祗類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007]具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將干燥的款冬花粉碎， 用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水飽 和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步驟（a) 中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫10 個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化）中75% 乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、55:1、30:1、15:1和1:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體 積比為20:1、15:1和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分 2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫， 收集8~10個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為85 %。
[0012] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療骨破壞性疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療骨破壞性疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0015]本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說明】 陽〇1引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0021] 實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。本發(fā)明所使用的不同濃 度的乙醇均為體積百分濃度。干燥的款冬花購(gòu)于安徽毫州中藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定確認(rèn)為菊科 款冬屬植物款冬燈ussilagofarfaruL.)的干燥花蕾。
[0023] 制備方法：（a)將干燥的款冬花（8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提?。?化X3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油酸0LX3次）、乙酸乙醋0LX3次）和水飽 和的正下醇0LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（355g)和正下醇萃 取物；化）步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫6個(gè)柱 體積，再用75 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫物 浸膏（136g) ;(c)步驟化）中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1(8 個(gè)柱體積）、55:1 (8個(gè)柱體積）、30:1化個(gè)柱體積）、15:1 (8個(gè)柱體積）和1:1巧個(gè)柱體積） 的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (31g)用正相硅膠進(jìn)一步 分離，依次用體積比為20:1 (8個(gè)柱體積）、15:1 (10個(gè)柱體積）和10:U6個(gè)柱體積）的二氯 甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (llg)用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-10個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（IH68mg)。
[0024]結(jié)構(gòu)確證出R-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z411. 1102,結(jié)合核磁特征可得分子式為 C20H2A，不飽和度為11。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)(卵m，DMS0-de，500MHz) 29,山J= 3. 5)，H-2 (3. 52,m)，H-3 (2. 35,ddd，J= 15. 0, 5. 0,1. 5)，H-3 (1. 83,ddd，J= 15. 5,12. 5， 2. 5)，H-4(2. 60,dd，J= 12. 5,5. 0)，H-6(l. 28,ddd，J= 11. 0,3. 0，1. 0)，H-6(l. 58,m)， H-7 (2. 05,m)，H-7 (1. 61，m)，H-8 (2. 59,m)，H-12 化 79,s)，H-14 化.28,m)，H-15 (7. 39,t，J =1.5)，H-16(7. 26，m)，H-19(4. 13，d，J= 8. 5)，H-19(4. 18，dd，J= 8. 5,2. 0)，H-20(1. 17， s)，2-OH巧.42,s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δc(卵m，DMSO-de，150MHz) :55. 6 (CH，1-C)，58. 1 (CH， 2-C)，19. 1 (細(xì)2, 3-C)，35. 2 (CH，4-C)，46. 7 (C，5-C)，20. 6 (細(xì)2, 6-C)，15. 9 (細(xì)2, 7-C)， 42. 7(CH，8-C)，44. 8(C，9-C)，72. 9(C，10-C)，212. 4(C，11-C)，84. 7(CH，12-C)，125. 2(C， 13-C)，107. 8(CH，14-C)，143. 7(CH，15-C)，138. 1(CH，16-C)，172. 4(C，17-C)，174.6 (C， 18-0,69. 8(CH2，19-C)，20. 2(CH3,20-C);碳原子標(biāo)記參見圖1。IR光譜表明該化合物含有 徑基（3472cm1)，丫-和δ-內(nèi)醋（1763和1734cm1)和巧喃環(huán)（879cm1)基團(tuán)。1?NMR譜 顯示有20個(gè)信號(hào)，含有一個(gè)甲基，四個(gè)亞甲基（一個(gè)含氧亞甲基），八個(gè)次甲基（Ξ個(gè)含氧 次甲基，Ξ個(gè)締控碳）和屯個(gè)季碳（Ξ個(gè)幾基碳，一個(gè)締控碳，一個(gè)含氧季碳）。核磁共振數(shù) 據(jù)表明該化合物含有環(huán)氧基（δ冊(cè).29,δ巧5. 6，CH-1和5C72. 9，C-10)，叔甲基（δ化.17，S，δC20. 2,CH3-2O)W及巧喃環(huán)（δ冊(cè).28,H-14 ;δH7. 39,H-15 ;δH7. 26,H-16)。通過對(duì) 上述數(shù)據(jù)分析可知該化合物為二祗類化合物。此外，從氨譜和碳譜數(shù)據(jù)可得知該化合物含 有一個(gè) 12, 17