一種利用靛藍(lán)染料快速檢測(cè)食品中蛋白質(zhì)的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用靛藍(lán)染料快速檢測(cè)食品中蛋白質(zhì)的方法。利用靛藍(lán)與牛血清蛋白通過(guò)靜電作用和疏水作用力形成聚集體，造成靛藍(lán)的共振光散射強(qiáng)度發(fā)生相應(yīng)的增強(qiáng)，從而建立了一種測(cè)定食品中蛋白質(zhì)含量的方法。靛藍(lán)的共振光散射信號(hào)增加值與待測(cè)牛血清蛋白的濃度在2×10-8~6×10-7摩爾/升（1.3×10-3~3.9×10-2克/升）范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，方法檢出限為6×10-9摩爾/升（3.9×10-4克/升）。本發(fā)明克服了已有技術(shù)在檢測(cè)時(shí)存在靈敏度低、應(yīng)用范圍窄等缺點(diǎn)，提高了靈敏度和選擇性，對(duì)于食品中低濃度蛋白質(zhì)的檢測(cè)更加方便快速。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種利用靛藍(lán)染料快速檢測(cè)食品中蛋白質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用靛藍(lán)染料與共振光散射技術(shù)快速檢測(cè)食品中痕量蛋白質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白質(zhì)(protein)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ),在參與人體內(nèi)反應(yīng)、調(diào)節(jié)代謝、抵御外來(lái)物質(zhì)入侵及控制遺傳信息等方面都起著至關(guān)重要的作用，蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)更是生命科學(xué)的重要研究課題。因此，尋求具有高靈敏度，高選擇性的檢測(cè)食品中蛋白質(zhì)的方法具有重要意義。目前測(cè)定蛋白質(zhì)的方法主要有熒光分析法、色譜法、化學(xué)發(fā)光法、共振光散射法等。其中共振光散射技術(shù)應(yīng)用于生物大分子的分析具有簡(jiǎn)便、靈敏度高等特點(diǎn)，為生物化學(xué)和臨床分析中樣品的檢測(cè)提供了一條新的途徑，已成為目前研究生物大分子的重要手段。靛藍(lán)是最早發(fā)現(xiàn)的天然染料之一，因其色澤鮮艷、價(jià)格低廉等被廣泛用于印染、醫(yī)藥和食品等工業(yè)。研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于靛藍(lán)的研究主要集中在藥物中含量的測(cè)定及其染色能力等方面，而未見(jiàn)利用靛藍(lán)的共振光散射信號(hào)測(cè)定食品中蛋白質(zhì)的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，選擇性好，方便快速的對(duì)食品中痕量蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的方法。
[0004]構(gòu)思如下:靛藍(lán)染料具有穩(wěn)定、較強(qiáng)的共振光散射信號(hào)。當(dāng)向靛藍(lán)溶液加入不同濃度的牛血清蛋白后，靛藍(lán)的共振光散射強(qiáng)度發(fā)生相應(yīng)的增強(qiáng)，且其增加值與牛血清蛋白的濃度在2X10—8-6X10—7摩爾/升(1.3X10-3-3.9X 10_2克/升)范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。具體機(jī)理如下:由于牛血清蛋白肽鏈上的氨基酸帶正電荷，形成一個(gè)陽(yáng)離子，而靛藍(lán)結(jié)構(gòu)中的羰基氧原子電負(fù)性很強(qiáng)，二者可以通過(guò)靜電作用和疏水作用力形成聚集體，同時(shí)牛血清蛋白大分子形成的疏水性空腔可以與靛藍(lán)產(chǎn)生包結(jié)配合作用，形成超分子結(jié)合物。
[0005]具體步驟如下:
(I)檢測(cè)方法:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩爾/升的靛藍(lán)溶液，然后分別加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩爾 / 升的牛血清蛋白溶液，再分別用PH = 4.5、濃度為0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至刻度，反應(yīng)3分鐘后用熒光光度計(jì)進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)，令激發(fā)波長(zhǎng)同發(fā)射波長(zhǎng)相同，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5納米。
[0006](2)工作曲線(xiàn)的繪制:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩爾/升的靛藍(lán)溶液，然后分別加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩爾 / 升的牛血清蛋白溶液，再分別用PH = 4.5、濃度為0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻后放置反應(yīng)3分鐘，進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)；牛血清蛋白的濃度c在2 X 10-≥6 X IO-7摩爾/升(1.3 X 10-3.9 X IO-2克/升)范圍內(nèi)與熒光增敏量(Λ、)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性回歸方程為:ΛΙ=0.8654c+75.786，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r = 0.9987。
[0007]本發(fā)明克服了已有技術(shù)在檢測(cè)時(shí)存在靈敏度低、選擇性差、反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、穩(wěn)定差的缺點(diǎn)，更好地提高了靈敏度和選擇性，對(duì)于食品中低濃度蛋白質(zhì)的檢測(cè)更加準(zhǔn)確方便快速。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0008]圖1為本發(fā)明實(shí)施例在0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液(pH=4.5)中，不同濃度的牛血清蛋白對(duì)靛藍(lán)的共振光增敏光譜圖。其中a為IX 10_4摩爾/升的靛藍(lán)的共振光散射光譜，b、c、d分別為8X 10_8摩爾/升、2X 10_7摩爾/升、4X 10_7摩爾/升的牛血清蛋白對(duì)靛藍(lán)的共振光增敏光譜圖。
[0009]圖2為本發(fā)明實(shí)施例牛血清蛋白含量與靛藍(lán)共振光增敏量的關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例:
1、檢測(cè)方法:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩爾/升的靛藍(lán)溶液，然后分別加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩爾 / 升的牛血清蛋白溶液，再分別用PH = 4.5、濃度為0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至刻度，反應(yīng)充3分鐘后用熒光光度計(jì)進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)，令激發(fā)波長(zhǎng)同發(fā)射波長(zhǎng)相同，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5納米。
[0011]2、標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)的繪制:
在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0X 10_4摩爾/升的靛藍(lán)溶液，然后分別加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0Χ10-3 摩爾 / 升的牛血清蛋白溶液，再分別用PH = 4.5、濃度為0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻后放置反應(yīng)3分鐘，進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)；牛血清蛋白的濃度c在2 X 10-6 X IO-7摩爾/升(1.3 X 103.9 X IO-2克/升)范圍內(nèi)與熒光增敏量(Λ、)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性回歸方程為:ΛΙ=0.8654c+75.786，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r = 0.9987。
[0012]3、食品中蛋白質(zhì)含量的檢測(cè):
取市售牛奶樣品稀釋1000倍作為待測(cè)溶液。取市售啤酒樣品20毫升在60° C下加熱30分鐘以除去CO2，后將樣品稀釋1000倍作為待測(cè)溶液。
[0013]取適量的待測(cè)液按實(shí)驗(yàn)方法操作對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)加入回收試驗(yàn)，結(jié)果如表I所示，其RSD ( 2.1%(η=6)，加標(biāo)回收率在98.39101.7%，說(shuō)明方法具有較高的準(zhǔn)確度和較好的精密度。
[0014]表1:樣品測(cè)定和加標(biāo)回收試驗(yàn)數(shù)據(jù)
【權(quán)利要求】
1.一種利用靛藍(lán)染料快速檢測(cè)食品中蛋白質(zhì)的方法，其特征在于具體步驟為: (1)檢測(cè)方法:在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0* 10-4摩爾/升的靛藍(lán)溶液，然后分別加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0*10-3 摩爾 / 升的牛血清蛋白溶液，再分別用PH = 4.5、濃度為0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至刻度，反應(yīng)3分鐘后用熒光光度計(jì)進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)，令激發(fā)波長(zhǎng)同發(fā)射波長(zhǎng)相同，激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5納米； (2)工作曲線(xiàn)的繪制:在12支10毫升比色管中各加入1.00毫升1.0* 10-4摩爾/升的靛藍(lán)溶液，然后分別加入 20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600 微升 1.0*10-3 摩爾 / 升的牛血清蛋白溶液，再分別用PH = 4.5、濃度為0.05摩爾/升的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻后放置反應(yīng)3分鐘，進(jìn)行共振光強(qiáng)度檢測(cè)；牛血清蛋白的濃度c在2 * 10-8-6 * 10-7摩爾/升即1.3 * 10-3.9 * 10-2克/升范圍內(nèi)與熒光增敏量Δ IF呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性回歸方程為:Δ I=0.8654c+75.786，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r = 0.9987。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK103439307SQ201310394704
【公開(kāi)日】2013年12月11日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】陶慧林, 徐銘澤, 張慶軍, 黎舒懷, 廖秀芬, 孫超 申請(qǐng)人:桂林理工大學(xué)