專利名稱：甘氨酸的測定方法與甘氨酸測定試劑盒-9078的制作方法
甘氨酸的測定方法與甘氨酸測定試劑盒-9078
技術領域：
本發(fā)明涉及食品檢驗測定技術領域，更具體地，本發(fā)明涉及甘氨酸測定方法及其試齊U盒。
背景技術：
甘氨酸為非人體必需氨基酸。甘氨酸有獨特的甜味，能緩和酸、堿味，掩蓋食品中添加糖精的苦味并增強甜味。人體若攝入甘氨酸的量過多，不僅不能被人體吸收利用，而且會打破人體對氨基酸的吸收平衡而影響其它氨基酸的吸收，導致營養(yǎng)失衡而影響健康。甘氨酸不能被人體利用，只能分解轉化為熱能，這樣會增加肝臟負擔。而分解產物中的含氮化合物要通過尿液排出體外，又會增加腎臟負擔。如果大量、長期食用這類食品，可能造成肝腎損傷。部分含乳飲料企業(yè)為提高產品中蛋白質含量，在生產加工中違規(guī)使用甘氨酸，對青少年及兒童的正常生長發(fā)育很容易帶來不利影響。按照我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》GB2760規(guī)定，甘氨酸在作為食品添加劑只允許在調味劑與豆奶中使用，且最高限量為每公斤1克，但在含乳飲料中不允許使用。

發(fā)明內容[要解決的技術問題]本發(fā)明的目的是提供一種甘氨酸的測定方法。本發(fā)明的另一個目的是提供一種甘氨酸測定試劑盒。[技術方案]本發(fā)明是通過下述技術方案實現的。本發(fā)明的方法是一種采用間接酶循環(huán)擴增法(Indirect Enzymatic Recycling Method)、酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)與酶(偶)聯(lián)法(Couple Reaction) 的聯(lián)用技術，利用測定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處的吸光度變化測定甘氨酸的方法。本發(fā)明甘氨酸測定方法的的技術原理是根據下述氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶的系列催化反應完成 甘氨酸+2輔酶氰化氫合成酶氰化氫+ 二氧化碳+2還原型輔酶二氧化碳+丙酰輔酶A+還原型鐵氧還蛋白2-氧代丁酰合成酶2-氧代丁酸+輔酶A+氧化型鐵氧還蛋白輔酶A+3-甲酰乙酸+輔酶丙二酸-半酵脫氫酶二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶本發(fā)明的方法利用氰化氫合成酶(hydrogen cyanide synthase ；EC 1.4.99.5) 酶(偶)聯(lián)2-氧代丁酰合成酶O-oxobutyrate synthase ；EC 1. 2. 7. 2)、丙二酸半醛脫氫 Sl (malonate semialdehyde dehydrogenase ；EC 1. 2. 1. 18) BIiS反應連續(xù)監(jiān)IlJ法。ft化S1 合成酶、2-氧代丁酰合成酶作為作用酶，氰化氫合成酶功能為將甘氨酸酶解產生二氧化碳，2-氧代丁酰合成酶的酶促作用使二氧化碳產生輔酶A ；丙二酸半醛脫氫酶作為循環(huán)酶丙二酸半醛脫氫酶再將輔酶A再次變回二氧化碳，使二氧化碳不斷地被重復循環(huán)利用。丙二酸半醛脫氫酶又作為顯色酶，將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在 340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的速度，這樣可以通過測量340nm處吸光度上升的速度，可以測算甘氨酸的濃度大小。本發(fā)明是通過下述技術方案實現的。本發(fā)明涉及一種甘氨酸的測定方法。該甘氨酸測定方法的步驟如下A、樣品準備A. 1標準樣品的制備將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將甘氨酸濃度調整到1毫摩爾/升，得到的溶液作為標準樣品；A. 2待測樣品的制備待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中；A. 3空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升；B、試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A與3-甲酰乙酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0. 001-7mol/L、 0. l-5mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-lOOmmol/L、l-100mmol/L 與 l-100mmol/L ；C、待測樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進行混合，在溫度15-45°C下反應5-60分鐘，在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制可以不設副波長)下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟A)標準樣品的吸光度隨時間的變化；E、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時間的變化；F、數據處理由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化，根據下式計算得到
甘氨酸的含量
ΔΑ(樣品)-ΔΑ (空白)
甘氨酸含量= -又標準濃度(mmol/L)
ΔΑ (標準)-ΔΑ (空白)式中Δ A(樣品)表示步驟C)得到的待測樣品的吸光度變化；Δ A(空白)表示步驟Ε)得到的空白樣品的吸光度變化；Δ A (標準)表示步驟D)標準樣品的吸光度變化。根據本發(fā)明，在所述的甘氨酸測定方法中，所述的緩沖液應該理解是能夠使其測定介質的PH基本保持穩(wěn)定(一般是6. 5-8. 5)的溶液。如果該pH高于8. 5或pH低于6. 5， 則該測定方法使用的酶的活性達不到預期的活性效果，因此需要添加更多的介質與酶，才有可能達到預期的活性效果。在本發(fā)明中，所述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液。優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、 磷酸鹽緩沖液或“PBS”緩沖液。更優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液或磷酸鹽緩沖液。根據本發(fā)明，在所述的甘氨酸測定方法中，所述的穩(wěn)定劑應該理解是一種能保護試劑中的介質(底物)與酶，使其不會隨著時間推移而改變其性質，進而失去活性的物質， 它會使得試劑具備很長的活性壽命，通常長達數月，甚至一、二年。如果沒有所述的穩(wěn)定劑， 則試劑的活性在溶液中只能維持數十小時，頂多數天，就會逐漸失去活性而不再具備檢測性能。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑使用量是0.01-7mol/L。如果所述的穩(wěn)定劑使用量不夠， 則試劑活性的壽命就會縮短；如果所述的穩(wěn)定劑使用量過高，則會增加成本。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自硫酸銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉或疊氮鈉防腐劑的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自硫酸銨、氯化鈉、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉或疊氮鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自甘油、硫酸銨或雙乙酸鈉的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中，所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio_NAD+的輔酶。根據一種本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用全自動生化分析儀測定甘氨酸時， 待測樣品、所述標準樣品與所述空白樣品由該分析儀在設定條件下(參數)自動取樣，然后在下述條件下進行測定測定方法為速率法或二點終點法，溫度37°C，反應時間10分鐘，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測甘氨酸樣品與試劑的體積比例為1/10-1/500，反應方向為正反應，延遲時間1/0分鐘，檢測時間4/5分鐘。根據另一種本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的試劑溶液配制成如下雙劑試劑由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A與3-甲酰乙酸組成的試劑1 ；由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶與丙二酸半醛脫氫酶組成的試劑2 ；其中輔酶、氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A、3-甲酰乙酸在試劑1或試劑2中的位置是不限定的。根據另一種本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明使用的試劑配制成如下三劑試劑由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A與3-甲酰乙酸組成的試劑1 ；
由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、2-氧代丁酰合成酶與丙二酸半醛脫氫酶組成的試劑2 ；
由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑與氰化氫合成酶組成的試劑3 ；
其中輔酶、氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A、3-甲酰乙畫g在試劑1、試劑2或試劑3中的位置是不限定的。
在本發(fā)明甘氨酸測定方法中使用的測定儀器可以是紫外/可見光分析儀，例如上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計、天津喀納斯光學分析儀器有限公司銷1S的723可見分光光度計；半自動生化分析儀，例如上海偉思醫(yī)用設備有限公司的BTS-330半自動生化分析儀；全自動生化分析儀，例如由邁瑞公司以商品名BS-300、奧林帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商品名CB8000或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動生化分析儀。
本發(fā)明還涉及甘氨·I測定試劑盒。該甘氨酸測定試劑盒由下述粉狀試劑組成，在使用時用水將它們溶解得到具有下述濃度范圍的可直接使用的液體試劑
緩沖液20-500mmol/L
穩(wěn)定劑0.001-7mol/L
輔酶0.l-5mmol/L
氰化氫合成酶1000-80000U/L
2-氧代丁酰合成酶1000-80000U/L
丙二酸半醛脫氫酶1000-80000U/L
還原型鐵氧還蛋白l-100mmol/L
丙酰輔酶Al-100mmol/L
3-甲酰乙酸l-100mmol/Lo
根據一種本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明的甘氨酸測定試劑盒有
試劑1
緩沖液1OOmmo1/L
穩(wěn)定劑500mmol/L
輔酶1. 25mmol/L
還原型鐵氧還蛋白5mmol/L
丙酰輔酶A5mmol/L
3-甲酰乙酸5mmol/L ；
組成如下的試劑2
緩沖液IOOmmo1/L
穩(wěn)定劑500mmol/L
氰化氫合成酶16000U/L
2-氧代丁酰合成酶18000U/L
丙二酸半醛脫氫酶12000U/L。
根據另一種本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明的甘氨酸測定試劑盒有
試劑1
緩沖液IOOmmo1/L
穩(wěn)定劑500mmol/L
輔酶1. 25mmol/L還原型鐵氧還蛋白 5mmol/L丙酰輔酶A 5mmol/L3-甲酰乙酸 5mmol/L ；組成如下的試劑2 緩沖液IOOmmol/L穩(wěn)定劑500mmol/L2-氧代丁酰合成酶 18000U/L丙二酸半醛脫氫酶 12000U/L ；組成如下的試劑3 緩沖液IOOmmol/L穩(wěn)定劑500mmol/L氰化氫合成酶 16000U/L。根據另一種本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，在本發(fā)明的甘氨酸測定試劑盒中，所述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液。優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(TriS-HCl)緩沖液、 磷酸鹽緩沖液或“PBS”緩沖液。更優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(TriS-HCl)緩沖液或磷酸鹽緩沖液。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自硫酸銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉或疊氮鈉防腐劑的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自硫酸銨、氯化鈉、丙二醇、甘油、雙乙酸鈉或疊氮鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自甘油、硫酸銨或雙乙酸鈉的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中，無論是單劑試劑、雙劑試劑或三劑試劑，在本發(fā)明測定甘氨酸的方法中，所述的輔酶可以是一種或多種選自NADP+、NAD+或thio-NAD+的輔酶。使用本發(fā)明的甘氨酸測定試劑盒時，可以使用紫外/可見光分析儀，例如上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計、天津喀納斯光學分析儀器有限公司銷售的723可見分光光度計；半自動生化分析儀，例如上海偉思醫(yī)用設備有限公司的BTS-330半自動生化分析儀；全自動生化分析儀，例如由邁瑞公司以商品名BS-300、奧林帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商品名CB8000 或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動生化分析儀。在采用本發(fā)明方法測定甘氨酸時，根據實驗要求進行多次試驗，然后將得到的這些試驗結果按照下式計算出精密度(CV)S= V Σ (X-Xi) 2/η-1式中
云-試驗結果平均值；Xi-各次試驗結果；Π-試驗次數·N彡10CV = S/ X * 100%將得到的這些試驗結果按照下式計算出相對極差~ (X + Y + Ζ)+3χ——第一批各次試驗結果平均值γ——第二批各次試驗結果平均值2—第三批各次試驗結果平均值U——為X，Y，Z中的最大值γ——為X，Y，Z中的最小值每批試樣數取η彡3經過大量試驗確定，對于甘氨酸含量為0-2mmol/L的樣品，其分析誤差可以達到
く 5%。本發(fā)明方法的靈敏度可以達到0. 0001mmol/Lo通過大量試驗確定，本發(fā)明方法測定甘氨酸含量范圍是0-2mmol/L，本發(fā)明方法適 合于食品檢測。
具體實施方式下述實施例說明本發(fā)明而不限制本發(fā)明的保護范圍。實施例1 牛奶中甘氨酸含量的測定1)標準樣品的制備將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將甘氨酸濃度調整到1毫摩爾/升；2)待測樣品預處理牛奶樣品作為待測樣品，無須預處理；3)空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升；B、試劑溶液的制備本實施例的甘氨酸測定試劑為單劑試劑，它含有三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液 lOOmmol/L甘油lmol/LNADP+0. 75mmol/L氰化氫合成酶16000U/L2-氧代丁酰合成酶18000U/L丙ニ酸半醛脫氫酶12000U/L還原型鐵氧還蛋白5mmol/L
丙酰輔酶A3mmol/L3-甲酰乙酸4mmol/L。按照上述濃度將這些試劑加入去離子水全部溶解配制好待用。C、待測牛奶樣品，與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/50進行混合，在溫度 37°C下反應5分鐘，在主波長340nm與副波長405nm下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化ΔΑ(樣品)為0.0667 ；D、在與步驟C)同樣的條件下測定步驟Α)標準樣品的吸光度隨時間的變化 △ Α (標準)為 0. 2124 ；Ε、在與步驟C)同樣的條件下測定在步驟Α)使用的水作為空白溶液的吸光度隨時間的變化八六(空白)為0.0017 ；F、數據處理由步驟C-E)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化，根據下式計算得到
甘氨酸的含量
權利要求
1.一種利用酶循環(huán)擴增法、酶比色法及酶聯(lián)法技術的甘氨酸濃度測定方法，其測定的技術原理是根據下述氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶的系列催化反應完成甘氨酸+2輔酶氰化氫合成酶氰化氫+ 二氧化碳+2還原型輔酶二氧化碳+丙酰輔酶A+還原型鐵氧還蛋白2-氧代丁酰合成酶2-氧代丁酸+輔酶A+氧化型鐵氧還蛋白輔酶A+3-甲酰乙酸+輔酶丙二酸-半酵脫氫酶二氧化碳+乙酰輔酶A+還原型輔酶
2.一種甘氨酸的測定方法，其特征在于該方法的步驟如下 2. 1樣品準備2. 1.1標準樣品的制備將一定量的甘氨酸溶于水或緩沖液中，再將其濃度調整到1毫摩爾/升； 2. 1.2待測樣品的制備待測液體樣品直接測試，無須預處理；將一定量的待測固體樣品像制備標準樣品一樣溶于水或緩沖液中； 2. 1.3空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其甘氨酸濃度為0毫摩爾/升； 2. 2試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A與3-甲酰乙酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0. 001-7mol/L、0. l-5mmol/ L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-100mmol/L、l-100mmol/L 與 l-100mmol/L ；2. 3待測樣品與在步驟2. 2)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進行混合，在溫度15-45°C下反應5-60分鐘，在主波長340nm與副波長405nm(如果受儀器限制，可以不設副波長)下進行測定，測定其吸光度隨時間的變化；2. 4在與步驟2. 3)同樣的條件下測定步驟2. 1. 1)標準樣品的吸光度隨時間的變化； 2. 5在與步驟2. 3)同樣的條件下測定在步驟2. 1. 3)使用的水或緩沖液作為空白溶液的吸光度隨時間的變化； 2. 6數據處理由步驟2. 3-2. 5)所述測定的主波長340nm的吸光度隨時間的變化，根據下式計算得到甘氨酸的含量
3.根據權利要求1、2所述的測定方法，其特征在于使用全自動生化分析儀測定時，待 測樣品、所述標準樣品與所述空白樣品由該分析儀在設定條件下自動取樣，然后在下述條 件下進行測定測定方法為速率法，溫度37°C，反應時間10分鐘，測試主波長340nm，測試副 波長405nm，被測甘氨酸樣品與試劑的體積比例為1/10-1/500，反應方向為正反應，延遲時 間1/0分鐘，檢測時間4/5分鐘。
4.根據權利要求1、2或3所述的測定方法，其特征在于，所述的穩(wěn)定劑是一種或多種 選自硫酸銨、氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉、疊氮鈉等防腐劑的穩(wěn)定劑；所述的 緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲燒-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪唑-鹽酸 緩沖液、磷酸氧二鈉-梓檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼 砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液；所述的輔酶是一種或多種選自NADP+、 NAD+ 或 thio-NAD+ 的輔酶。
5.根據權利要求1、2或3所述的測定方法，其特征在于 5. 1所述的試劑溶液配制成如下單劑試劑它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A、3-甲酰乙酸、氰 化氧合成酶、2-氧代丁酰合成酶與丙二酸半酸脫氧酶組成的； 5. 2所述的試劑溶液配制成如下雙劑試劑試劑1，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A與3-甲酰 乙酸組成的；試劑2，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氰化氧合成酶、2-氧代丁酰合成酶與丙二酸半 酸脫氧酶組成的；其中輔酶、氰化氧合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半酸脫氧酶、還原型鐵氧還蛋白、 丙酰輔酶A、3-甲酰乙酸在試劑1或試劑2中的位置是不限定的?！?.3所述的試劑配制成如下三劑試劑試劑1，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、還原型鐵氧還蛋白、丙酰輔酶A與3-甲酰 乙酸組成的；試劑2，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、2-氧代丁酰合成酶與丙二酸半酸脫氧酶組成的；試劑3，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑與氰化氧合成酶組成的； 其中輔酶、氰化氧合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半酸脫氧酶、還原型鐵氧還蛋白、 丙酰輔酶A、3-甲酰乙酸在試劑1、試劑2或試劑3中的位置是不限定的。
6.一種甘氨酸測定試劑盒，其特征在于·6. 1它由下述粉狀試劑組成，在使用時用水將它們溶解得到具有下述濃度范圍的可直 接使用的液體試劑緩沖液20-500mmol/L穩(wěn)定劑0.001-7mol/L輔酶0. l-5mmol/L氰化氧合成酶1000-80000U/L·2-氧代丁酰合成酶 1000-80000U/L 丙二酸半酸脫氧酶 1000-80000U/L還原型鐵氧還蛋白丙酰輔酶A 3-甲酰乙酸l-100mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/Lo6. 2根據權利要求6. 1所述的甘氨酸測定試劑盒，其特征在于它有組成如下的試劑1 緩沖液20-500mmol/L穩(wěn)定劑0.001-7mol/L輔酶0.l-5mmol/L還原型鐵氧還蛋白l-100mmol/L丙酰輔酶Al-100mmol/L3-甲酰乙酸l-100mmol/L ；組成如下的試劑2 緩沖液20-500mmol/L穩(wěn)定劑0.001-7mol/L氰化氫合成酶1000-80000U/L2-氧代丁酰合成酶1000-80000U/L丙二酸半醛脫氫酶1000-80000U/L。6. 3根據權利要求6.1所述的甘氨酸測定試劑組成如下的試劑1 緩沖液20-500mmol/L穩(wěn)定劑0.001-7mol/L輔酶0.l-5mmol/L還原型鐵氧還蛋白l-100mmol/L丙酰輔酶Al-100mmol/L3-甲酰乙酸l-100mmol/L ；組成如下的試劑2 緩沖液20-500mmol/L穩(wěn)定劑0.001-7mol/L2-氧代丁酰合成酶1000-80000U/L丙二酸半醛脫氫酶1000-80000U/L ；組成如下的試劑3 緩沖液 20-500mmol/L 穩(wěn)定劑0.001-7mol/L氰化氫合成酶 1000-80000U/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用酶循環(huán)擴增法、酶比色法及酶聯(lián)法技術的甘氨酸含量的測定方法、試劑的組成及成分，其測定的技術原理是依據氰化氫合成酶、2-氧代丁酰合成酶、丙二酸半醛脫氫酶的系列催化反應完成，本發(fā)明還涉及一種甘氨酸測定試劑盒。本發(fā)明的測定方法靈敏度高、誤差小，因此本發(fā)明的測定方法與試劑盒可以廣泛地應用于食品檢驗。
文檔編號G01N21/33GK102297998SQ20101020937
公開日2011年12月28日 申請日期2010年6月23日 優(yōu)先權日2010年6月23日
發(fā)明者王爾中 申請人:蘇州艾杰生物科技有限公司