專利名稱：一種檢測不同基質(zhì)中藥中兩種a型單端孢霉烯族毒素的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種測定不同基質(zhì)中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法，特別是涉及采用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確證中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法。
背景技術：
單端孢霉烯族毒素是一類由鐮刀菌屬中多種真菌所產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在自然界中分布極為廣泛，是自然發(fā)生的最危險的食品污染物，對人畜健康危害十分嚴重。由于鐮刀菌為土壤習居菌，很多中藥易受到鐮刀菌的侵染，是很多根和根莖類藥材根腐病的主要致病菌，而且上述鐮刀菌中部分為產(chǎn)毒菌，可產(chǎn)生單端孢霉烯族類毒素，因此，很有必要對中藥中單端孢霉烯族毒素進行研究，建立毒素的檢測方法，制訂其合理的限量標準，以保證中藥的安全有效。單端孢霉烯族化合物分為二大類，A型和B型，其中A型毒性最大，研究得也最多， T-2和HT-2毒素就屬于A型。T-2毒素是鐮刀菌所產(chǎn)生的單端孢霉烯族毒素中毒性最強的一種，HT-2毒素是T-2毒素的代謝產(chǎn)物。T-2毒素在多種谷物(小麥、玉米、大麥、燕麥、黑麥)及其制品(麥芽、啤酒、面包)中廣泛存在，其毒性強烈，至今已有3種地方病(食物中毒性白細胞缺乏癥、大骨節(jié)病、克山病)的病因被認為與T-2毒素有關，對人畜構成很大危害。1973年聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織在日內(nèi)瓦召開的聯(lián)席會議上，把這類毒素同黃曲霉素一樣作為自然存在的最危險的食品污染源，尤其是美國指責前蘇聯(lián)、越南在東南亞使用“黃雨(yellow rain)”毒素(其中含有T_2毒素)以后，有關Τ_2，ΗΤ-2毒素對人類健康的危害引起了各國政府和科學家的較大關注。

發(fā)明內(nèi)容
到目前為止，國內(nèi)外報道的方法大多僅限于對食品、農(nóng)產(chǎn)品以及飼料中Τ-2，ΗΤ-2 毒素的分析，對中藥中Τ-2，ΗΤ-2毒素的分析，目前還是空白。因此對中藥中Τ-2，ΗΤ-2毒素測定方法的建立研究迫在眉睫?，F(xiàn)有的測定食品、農(nóng)產(chǎn)品以及飼料中的Τ-2，ΗΤ-2毒素的方法，由于樣品基質(zhì)相對簡單，干擾較小，一般都較容易測定。本發(fā)明克服現(xiàn)有技術不足，選擇了適用于中藥中Τ-2，ΗΤ-2毒素的提取、凈化方法，優(yōu)化了氣相，氣質(zhì)的色譜條件，保證樣品處理快捷簡便，含量測定結果準確性高，重現(xiàn)性好，故采用該方法能更加準確的對不同基質(zhì)中藥中的Τ-2，ΗΤ-2毒素進行測定。本發(fā)明是通過采用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的Τ-2，ΗΤ-2毒素的方法，同事建立了不同基質(zhì)中Τ-2，ΗΤ-2毒素的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用確證法。具體的不同基質(zhì)中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素測定的方法，可以通過以下步驟實現(xiàn)儀器、藥品及材料
儀器Agilent GC-6890N氣相色譜儀、Ni電子捕獲檢測器，美國安捷倫公司；Agilent 768 系列自動進樣器，美國安捷倫公司；Varian 431氣相色譜儀，美國瓦里安公司；Varian 300三重四級桿質(zhì)譜儀，美國瓦里安公司；TGL-16C型高速離心機，上海安亭科學儀器廠；Waring高速均質(zhì)器，美國Waring公司；WH-861型旋渦混合器，金壇市盛藍儀器制造有限公司；PGG-OlD型干式氮吹儀，天津艾維歐科技發(fā)展有限公司DHG-9030A型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司T-2&HT-2test-HPLC 免疫親和柱，美國 VICAM 公司；GF/A型玻璃微纖維濾紙，英國WHATMAN公司。對照品T-2，HT_2毒素標準品購自美國Sigma公司，純度彡99%;N-七氟丁酰咪唑(HFBI)， 美國Afla Aesar公司；正己烷為色譜純，天津市光復精細化工研究所；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。樣品所測樣品分別購自江西樟樹、陜西寶雞、江蘇鎮(zhèn)江、北京以及貴州遵義，所有樣品均為市場上隨機購買而來，經(jīng)中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所張本剛教授鑒定，低溫干燥后備用。1、氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素a.色譜條件用毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣或氦氣為載氣， 進樣口溫度260-280°C，檢測器溫度290-3KTC，程序升溫，不分流進樣。b.溶液配制對照品溶液的配制分別稱取對照品適量，加乙腈或甲醇制成溶液；衍生化試劑的配制取七氟丁酰咪唑適量，加甲苯-乙腈溶液制成溶液。c.樣品溶液的制備樣品提取取藥材粉末，置具塞錐形瓶中，加氯化鈉適量，加甲醇-水溶液適量，高速勻質(zhì)提取，過濾，稀釋，震搖，靜置，再震搖，再靜置，玻璃纖維膜過濾，備用；樣品凈化取上述濾液緩慢通過T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，直至空氣通過柱體，再以水淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，并使空氣通過柱體。甲醇洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，氮氣吹干備用。衍生化加衍生化試劑適量于上述吹干樣品，密封，渦旋混合，放入烘箱中反應，冷卻，加正己烷適量，搖勻，加碳酸氫鈉水溶液適量，渦旋，離心 3-5min,取上層有機相，加正己烷定容。d.測定法分別精密吸取對照品和樣品溶液，注入氣相色譜儀，測定。2、用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用HP-5MS毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，進樣口溫度 260-280°C，程序升溫，不分流進樣；b.質(zhì)譜條件電子轟擊離子源，離子源溫度220_240°C，電離能量60_80eV，四級桿
6溫度140-160°C，傳輸線溫度270-290°C，溶劑延遲5-15min，全掃描。c.分別精密吸取對照品和樣品溶液，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證。上述的不同基質(zhì)中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的測定方法，優(yōu)選以下步驟1、用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用DB-1701毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣或氦氣為載氣，進樣口溫度260-2800C，檢測器溫度290-310°C，程序升溫，初始溫度80°C，保持 anin 后以 10°C /min 速率升至 200°C，再以 5°C /min 升至 220°C，再以 2°C /min 升至 230°C， 保持13min，再以3°C /min升至270°C，再以5°C /min升至280°C保持5min，不分流進樣。b.溶液配制對照品溶液的配制分別精密稱取HT-2和T-2毒素對照品適量，加乙腈或甲醇制成每ml含30-80 μ g的溶液；衍生化試劑的配制取七氟丁酰咪唑適量，按照1 3的比例加入加甲苯-乙腈 (90-96 :4-10, V/V)溶液制成溶液。c.樣品溶液的制備樣品提取精密取藥材粉末20_30g，置具塞錐形瓶中，加氯化鈉適量l_5g，加甲醇-水溶液(80-95 5-20，V/V)適量，高速勻質(zhì)提取l-5min，過濾，取5_15ml濾液加水 20-60ml稀釋，震搖l-2min，靜置l-3min，再震搖l-2min，靜置l-3min，玻璃纖維膜過濾，備用；樣品凈化取上述濾液5_15ml緩慢通過T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，直至 l-5ml空氣通過柱體，再以10-15ml水淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，并使l_5ml空氣通過柱體。加Iml甲醇洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，氮氣吹干備用。衍生化加衍生化試劑50-100于上述吹干樣品，密封，渦旋混合Ι-aiiin，放入烘箱中80°C反應，冷卻，加正己烷，搖勻，加3-5%碳酸氫鈉水溶液適量，渦旋，離心3-5min，取上層有機相50-100 μ L，加正己烷定容。d.測定法分別精密吸取對照品和樣品溶液1-2 μ L，注入氣相色譜儀，測定。2、用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用HP-5MS毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，進樣口溫度 260-280°C，程序升溫，初始溫度為80°C，以10°C /min速率升至220°C，以2°C /min升至 2300C，再以5°C升至270°C，再以10°C升至300°C，保持5min，不分流進樣；b.質(zhì)譜條件電子轟擊離子源，離子源溫度220_240°C，電離能量60_80eV，四級桿溫度140-160°C，傳輸線溫度270-290°C，溶劑延遲5-15min，全掃描，掃描范圍30_800u。c.分別精密吸取對照品和樣品溶液1-2 μ L，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證。本發(fā)明不同基質(zhì)中兩種A型單端孢霉烯族毒素的測定方法，更優(yōu)選的技術方案可以按下列測定步驟進行1、用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用DB-1701毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣載氣， 進樣口溫度270°C，檢測器溫度300°C，程序升溫，初始溫度80°C，保持^iin后以10°C /min 速率升至200°C，再以5°C /min升至220°C，再以2°C /min升至230°C，保持13min，再以3°C / min升至270°C，再以5°C /min升至280°C保持5min，不分流進樣。
b.溶液配制對照品溶液的配制分別精密稱取HT-2和T-2毒素對照品適量，加乙腈制成每ml 含40 μ g的溶液；衍生化試劑的配制使用無水硫酸鈉對甲苯-乙腈(95 5, V/V)溶液進行脫水干燥，取七氟丁酰咪唑適量，按照1 3的比例加入加甲苯-乙腈(95 5, V/V)溶液制成溶液。c.樣品溶液的制備樣品提取精密取藥材粉末25g，置具塞錐形瓶中，加氯化鈉適量2. 5g，加甲醇-水溶液(90 10，V/V) 100ml,高速勻質(zhì)提取3min，過濾，取IOml濾液加水40ml稀釋，震搖 lmin，靜置2min，再震搖lmin，靜置3min，玻璃纖維膜過濾，備用；樣品凈化取上述濾液IOml以1秒/滴的速度緩慢通過T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，直至2-3ml空氣通過柱體，再以IOml水淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，并使 2-3ml空氣通過柱體。準確加入1. OmL甲醇洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，50°C下氮氣吹
干備用。衍生化加衍生化試劑50yL于上述吹干樣品，密封，渦旋混合lmin，放入烘箱中 80°C反應40min，冷卻至室溫，加正己烷100 μ L，搖勻，加4%碳酸氫鈉水溶液300 μ L，渦旋， 離心3min，取上層有機相90 μ L，加正己烷定容至1ml。d.測定法分別精密吸取對照品和樣品溶液1 μ L，注入氣相色譜儀，測定ΗΤ-2和
Τ-2毒素含量。2、用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，進樣口溫度沈0_觀01，程序升溫，初始溫度80°C，保持anin后以10°C /min速率升至200°C，再以5°C /min升至220°C， 再以 2°C /min 升至 230°C，保持 13min，再以 3°C /min 升至 270°C，再以 5°C /min 升至保持5min，不分流進樣；b.質(zhì)譜條件電子轟擊離子源，離子源溫度230°C，電離能量70eV，四級桿溫度 150°C，傳輸線溫度280°C，溶劑延遲lOmin，全掃描，掃描范圍30_800u。c.分別精密吸取對照品和樣品溶液1 μ L，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證ΗΤ-2 和Τ-2毒素。經(jīng)過多次重復試驗，確認方法簡便，結果準確，可作為不同基質(zhì)兩種A型單端孢霉烯族毒素的測定方法。本發(fā)明提供了不同中藥中Τ-2，ΗΤ_2毒素的氣相色譜-電子捕獲檢測法；不同中藥中Τ-2，ΗΤ-2毒素的氣相色譜-質(zhì)譜確證法。結果準確，重現(xiàn)性好，可作為不同基質(zhì)中藥中 Τ-2，ΗΤ-2毒素的測定方法。1、用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素(1)衍生化過程中萃取溶液的選擇分別取Τ-2，ΗΤ-2毒素各10μ (40μ g/ml)，氮氣吹干，60°C衍生化60min，對文獻報道的兩種萃取溶液進行了比較，結果如表1-1。表1-1衍生化過程中萃取溶液的選擇
權利要求
1.一種檢測不同基質(zhì)中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；(2)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；
2.根據(jù)權利要求1的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣或氦氣為載氣，進樣口溫度260-280°C，檢測器溫度290-3KTC，程序升溫，不分流進樣。b.溶液配制對照品溶液的配制分別稱取對照品適量，加乙腈或甲醇制成溶液；衍生化試劑的配制取七氟丁酰咪唑適量，加甲苯-乙腈溶液制成溶液。c.樣品溶液的制備樣品提取取藥材粉末，置具塞錐形瓶中，加氯化鈉適量，加甲醇-水溶液適量，高速勻質(zhì)提取，過濾，稀釋，震搖，靜置，再震搖，再靜置，玻璃纖維膜過濾，備用；樣品凈化取上述濾液緩慢通過T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，直至空氣通過柱體， 再以水淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，并使空氣通過柱體。甲醇洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，氮氣吹干備用。衍生化加衍生化試劑適量于上述吹干樣品，密封，渦旋混合，放入烘箱中反應，冷卻， 加正己烷適量，搖勻，加碳酸氫鈉水溶液適量，渦旋，離心3-5min，取上層有機相，加正己烷定容。d.測定法分別精密吸取對照品和樣品溶液，注入氣相色譜儀，測定。(2)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用HP-5MS毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，進樣口溫度260-280°C，程序升溫，不分流進樣；b.質(zhì)譜條件電子轟擊離子源，離子源溫度220-240°C，電離能量60-80eV，四級桿溫度 140-160°C，傳輸線溫度270-290°C，溶劑延遲5-15min，全掃描。c.分別精密吸取對照品和樣品溶液，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證。
3.根據(jù)權利要求2的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用DB-1701毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣或氦氣為載氣，進樣口溫度260-280°C，檢測器溫度290-3KTC，程序升溫，初始溫度80°C，保持^iin后以10°C /min速率升至200°C，再以5°C /min升至220°C，再以2V /min升至230°C，保持 13min，再以3°C /min升至270°C，再以5°C /min升至280°C保持5min，不分流進樣。b.溶液配制對照品溶液的配制分別精密稱取HT-2和T-2毒素對照品適量，加乙腈或甲醇制成每 ml含30-60 μ g的溶液；衍生化試劑的配制取七氟丁酰咪唑適量，按照1 3的比例加入加甲苯-乙腈(90-96 4-10，V/V)溶液制成溶液。c.樣品溶液的制備樣品提取精密取藥材粉末20-30g，置具塞錐形瓶中，加氯化鈉適量l_5g，加甲醇-水溶液(80-95 5-20，V/V)適量，高速勻質(zhì)提取3_5min，過濾，取5_15ml濾液加水40_60ml 稀釋，震搖l-2min，靜置2-aiiin，再震搖l-2min，靜置l-3min，玻璃纖維膜過濾，備用；樣品凈化取上述濾液5-15ml緩慢通過T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，直至2_5ml 空氣通過柱體，再以10-15ml水淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，并使l_5ml空氣通過柱體。加Iml甲醇洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，氮氣吹干備用。衍生化加衍生化試劑50-60于上述吹干樣品，密封，渦旋混合l-2min，放入烘箱中 80°C反應，冷卻，加正己烷，搖勻，加3-5%碳酸氫鈉水溶液適量，渦旋，離心3-5min，取上層有機相50-100 μ L，加正己烷定容。d.測定法分別精密吸取對照品和樣品溶液1-2μ L，注入氣相色譜儀，測定。(2)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用HP-5MS毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，進樣口溫度260-280°C，程序升溫，初始溫度為80°C，以10°C /min速率升至220°C，以2°C /min升至230°C，再以5°C 升至270°C，再以10°C升至300°C，保持5min，不分流進樣；b.質(zhì)譜條件電子轟擊離子源，離子源溫度220-240°C，電離能量60-80eV，四級桿溫度 140-1600C，傳輸線溫度270-290°C，溶劑延遲5-15min，全掃描，掃描范圍30_800u。c.分別精密吸取對照品和樣品溶液1-2μ L，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證。
4.根據(jù)權利要求3的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)用氣相色譜-電子捕獲檢測法測定中藥中的兩種A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用DB-1701毛細管色譜柱分離，電子捕獲檢測器檢測，以氮氣載氣，進樣口溫度270°C，檢測器溫度300°C，程序升溫，初始溫度80°C，保持^iin后以10°C /min速率升至 200°C，再以 5°C /min 升至 220°C，再以 2°C /min 升至 230°C，保持 13min，再以 3°C /min 升至270°C，再以5°C /min升至280°C保持5min，不分流進樣。b.溶液配制對照品溶液的配制分別精密稱取HT-2和T-2毒素對照品適量，加乙腈制成每ml含 40 μ g的溶液；衍生化試劑的配制使用無水硫酸鈉對甲苯-乙腈(95 5，V/V)溶液進行脫水干燥， 取七氟丁酰咪唑適量，按照1 3的比例加入加甲苯-乙腈(95 5，V/V)溶液制成溶液。c.樣品溶液的制備樣品提取精密取藥材粉末25g，置具塞錐形瓶中，加氯化鈉適量2. 5g，加甲醇-水溶液 (90 10，￥八)1001111，高速勻質(zhì)提??；31^11，過濾，取101111濾液加水401111稀釋，震搖11^11，靜置2min，再震搖lmin，靜置3min，玻璃纖維膜過濾，備用；樣品凈化取上述濾液IOml以1秒/滴的速度緩慢通過T-2&HT-2test-HPLC免疫親和柱，直至2-3ml空氣通過柱體，再以IOml水淋洗免疫親和柱，棄去全部流出液，并使2-;3ml 空氣通過柱體。準確加入l.OmL甲醇洗脫，收集洗脫液于玻璃試管中，50°C下氮氣吹干備用。衍生化加衍生化試劑50 μ L于上述吹干樣品，密封，渦旋混合lmin，放入烘箱中80°C 反應40min，冷卻至室溫，加正己烷100 μ L，搖勻，加4%碳酸氫鈉水溶液300 μ L，渦旋，離心 3min，取上層有機相90 μ L，加正己烷定容至1ml。d.測定法分別精密吸取對照品和樣品溶液1 μ L，注入氣相色譜儀，測定ΗΤ-2和Τ-2毒素含量。(2)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測法確證中藥中的A型單端孢霉烯族毒素；a.色譜條件用毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，進樣口溫度260-280°C，程序升溫， 初始溫度80°C，保持anin后以10°C /min速率升至200°C，再以5°C /min升至220°C，再以 20C /min 升至 230°C，保持 13min，再以 3°C /min 升至 270°C，再以 5°C /min 升至 280°C保持 5min，不分流進樣；b.質(zhì)譜條件電子轟擊離子源，離子源溫度230°C，電離能量70eV，四級桿溫度150°C， 傳輸線溫度280°C，溶劑延遲lOmin，全掃描，掃描范圍30_800u。c.分別精密吸取對照品和樣品溶液1μ L，注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，確證ΗΤ-2和 Τ-2毒素。
5.根據(jù)權利要求2-4的任一種所述的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法， 其特征在于該方法的樣品提取過程為采用甲醇水高速勻質(zhì)提取。
6.根據(jù)權利要求5的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于該方法的樣品提取過程為采用甲醇水(90 10，V/V)高速勻質(zhì)提取。
7.根據(jù)權利要求2-4的任一種所述的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法， 其特征在于該方法的衍生化試劑的配置方法為取七氟丁酰咪唑適量，按照1 3的比例加入加甲苯-乙腈(95 5，V/V)溶液制成溶液。
8.根據(jù)權利要求7的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于該方法該方法的衍生化試劑的配置方法中的甲苯-乙腈(95 5，V/V)溶液需加無水硫酸鈉進行脫水干燥
9.根據(jù)權利要求根據(jù)權利要求2-4的任一種所述的中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于樣品的衍生化條件為80°C衍生化40min，加碳酸氫鈉水溶液除雜。
10.根據(jù)權利要求9的兩種A型單端孢霉烯族毒素的檢測方法，其特征在于樣品的衍生化條件為80°C衍生化40min，冷卻至室溫后，加4%碳酸氫鈉水溶液除雜，取上層有機相稀釋至Iml后進樣。
全文摘要
一種檢測不同基質(zhì)中藥中兩種A型單端孢霉烯族毒素的方法，包括樣品的提取，純化及檢測，所述的樣品加氯化鈉后采用甲醇-水(90∶10，V/V)高速勻質(zhì)提取，過濾，加水稀釋，玻璃纖維膜過濾，免疫親和柱凈化后氮氣吹干，加衍生化試劑80℃衍生化40min，4％碳酸氫鈉水溶液萃取雜質(zhì)，取上層有機相稀釋進樣。其中衍生化試劑的配置為無水硫酸鈉對甲苯-乙腈(95∶5，V/V)溶液進行脫水干燥，取七氟丁酰咪唑適量，按照1∶3的比例加入加甲苯-乙腈(95∶5，V/V)溶液制成溶液。所述樣品測定方法包括氣相色譜-電子捕獲檢測法測定，用DB-1701毛細管色譜柱分離，程序升溫，不分流進樣；氣-質(zhì)譜聯(lián)用法確證，用HP-5MS毛細管色譜柱分離，以氦氣為載氣，程序升溫，不分流進樣。
文檔編號G01N30/06GK102297904SQ20101020920
公開日2011年12月28日 申請日期2010年6月25日 優(yōu)先權日2010年6月25日
發(fā)明者張曉飛, 楊美華 申請人:中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所