專利名稱：一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)及其檢測方法，本發(fā)明還涉及一
種可包被反應(yīng)物的固相載體。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的基本理論體系是利用酶聯(lián)免疫法(ELISA)中的雙抗體夾心法測定未知 抗原。將抗原免疫動物獲得的抗體吸附于固相表面，加抗原，形成抗原-抗體復(fù)合物；加與 前一步同樣的抗體，形成抗體_抗原_抗體復(fù)合物，再加入酶標(biāo)標(biāo)記物；加入底物，結(jié)果判 定有色產(chǎn)物的生成量與抗原量成正相關(guān)。 現(xiàn)有酶聯(lián)免疫試劑盒的基本特征是將抗原或抗體固定在固相載體上制成微孔 板，利用酶標(biāo)記的抗原或抗體及底物，檢測樣品中與固相載體上的抗原或抗體相應(yīng)的抗原 或抗體。傳統(tǒng)材質(zhì)一般采用聚苯乙烯作為免疫吸附的載體，具有一定的局限性，其包埋率及 親水性都有限，所以對樣品的前期處理要求嚴(yán)格，耗費大量時間，需要專業(yè)的技術(shù)人員和實 驗室環(huán)境，在產(chǎn)品的使用操作和檢測靈敏度方面都受到了很大的限制，而且作為不可降解 的傳統(tǒng)聚苯乙烯塑料，不利于環(huán)保。試劑盒通常設(shè)計為96孔或48孔的板狀，微孔板在操作 上十分不便，樣品容易混淆，用肉眼辨別微孔上的變化容易誤判，若樣品數(shù)量較少則會造成 微孔的閑置浪費。并且所有操作不能為普通使用者所掌握。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)。
本發(fā)明的第二個目的是提供上述檢測系統(tǒng)的檢測方法。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種可包被反應(yīng)物的固相載體。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是 —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，包括置于一個檢測盒中的以下組件a、檢 測構(gòu)件；b、用于放置目標(biāo)樣品的空瓶；C、裝有經(jīng)冷凍干燥后抗體的試劑瓶；d、裝有酶標(biāo)標(biāo) 記物的試劑瓶；e、裝有用于定性的底物的試劑瓶；f、裝有用于定量的底物的試劑瓶；g、裝 有緩沖溶液的試劑瓶。 所述檢測構(gòu)件為包被有抗體的固相載體，并套有一個比色杯。 該固相載體的基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，其基質(zhì)里還嵌入帶有活性功能團(tuán)的化合 物。 此化合物為聚氨基酸，嵌入的聚氨基酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為
(o. l-8) : ioo。 聚氨基酸為聚天門冬氨酸、聚賴氨酸或聚谷氨酸。 所述以聚羥基丁酸酯為基質(zhì)主體的固相載體形狀為棒狀，即檢測棒。 所述檢測棒的制備方法為將聚氨基酸與聚羥基丁酸酯按(0. 1-8) : 100的質(zhì)量
比混合均勻后，送入壓塑機(jī)在110-21(TC的加工溫度下進(jìn)行壓塑并制成珠粒狀，然后再將珠
4粒狀壓塑物通過常規(guī)工藝制成棒狀，即得。
所述抗體可為任何種類的免疫球蛋白IgG，所述抗體的包被方法為首先將抗體
以20i! g/ml溶于磷酸鹽緩沖溶液，將檢測棒浸入到抗體溶液中，放入冰箱冷藏過夜；然后
取出檢測棒，再將其浸入封閉液中，封閉液為溶有體積濃度lX的Tween20的磷酸鹽緩沖溶
液，室溫下靜置兩小時后，取出自然晾干；檢測棒套入比色杯中，2-8t:冷藏保存。 所述裝有經(jīng)過冷凍干燥后的抗體的試劑瓶的制備方法為將抗體以lmg/ml溶于
磷酸鹽緩沖溶液，取20iU注入試劑瓶中，放入冷凍干燥器中過夜凍干，取出后2-『C冷藏
保存； 所述裝有酶標(biāo)標(biāo)記物試劑瓶的制備方法為將lmg金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯(lián)堿 性磷酸酶保存于1ml的50X 10—3mol/L Tris溶液中，然后再加入氯化鎂、氯化鋅、牛血清蛋 白、甘油和疊氮化鈉，使氯化鎂達(dá)到1. 0X10—^01/L、氯化鋅達(dá)到0. 1X10—^01/L、牛血清白 蛋白的體積濃度達(dá)到1%、甘油的體積濃度達(dá)到50%和疊氮化鈉達(dá)到15X10—^Ql/L，調(diào)pH 值為8. 0，即得工作濃度為lmg/ml的金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯(lián)堿性磷酸酶；取0. 4 iU注 入試劑瓶中，2-8t:冷藏保存； 所述用于定性測量的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽(BCIP)與氯 化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)的混合液，所述裝有底物試劑瓶的制備方法為將摩爾濃度為 4. 8 X 10—4mol/L的BCIP和摩爾濃度為5. 1 X 10—4mol/L NBT混合，然后取lml混合液注入試 劑瓶中，2-『C冷藏并避光保存； 所述用于定量測量的底物為溶于體積濃度為10%的二羥乙基胺的硝基苯磷酸鹽， 所述硝基苯磷酸鹽的質(zhì)量濃度為1. Omg/ml，所述溶液的pH值為9. 5，然后取lml混合液注 入試劑瓶中，2-8t:冷藏并避光保存； 所述裝有緩沖溶液試劑瓶的制備方法將牛血清白蛋白溶于磷酸鹽緩沖溶液中使 牛血清白蛋白的體積濃度達(dá)到1 % ，然后取5ml注入試劑瓶中，2-『C冷藏保存即得。
—種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)的檢測方法包括以下步驟
(1)測試材料為固體適當(dāng)研磨或打碎，液體無需制樣，按體積比1 : l加入權(quán)利要 求9中制得的緩沖溶液并均勻混合，充分震蕩；取震蕩后的懸浮液注入用于放置目標(biāo)樣品 的空試劑瓶，液面至試劑瓶一半體積處為0. 7-0. 9ml，然后將檢測棒插入裝有樣品液試劑瓶 中，室溫下靜置30分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗； (2)取緩沖溶液lml注入裝有凍干抗體的試劑瓶，震蕩讓其中的凍干抗體溶解后， 將檢測棒插入其中，室溫下靜置30分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗； (3)取緩沖溶液lml注入裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶，混合均勻后將檢測棒插入其 中，室溫下靜置20分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗； (4)用于快速定性檢測將裝有用于定性測量的底物的試劑瓶中的底物lml注入 套裝所配的比色杯中，將檢測棒插入比色杯等待顯色反應(yīng)，10分鐘后，取出檢測棒觀察。
此方法用于定性檢測，其中棒上顯示為藍(lán)紫色，棒上顏色均勻的為陰性；棒的下半 部分顏色明顯深于上半部分，并明顯呈現(xiàn)深淺兩極的為陽性；呈陽性的棒，根據(jù)棒下半部分 顏色深淺的比對也可進(jìn)行半定量的估算。 (5)用于快速定量檢測將裝有用于定量測量底物的試劑瓶中的底物lml注入套 裝所配的比色杯中，將檢測棒插入比色杯，10分鐘后，取出檢測棒。堿性磷酸酶對該底物的
5酶解產(chǎn)物呈可溶性黃色，最大吸收值在410nm，可直接將比色杯放入分光光度計中測量吸光
值，通過對標(biāo)準(zhǔn)樣品和目標(biāo)樣品吸光值的測定，對目標(biāo)樣品進(jìn)行定量分析。 —種可包被反應(yīng)物的固相載體，其基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，其基質(zhì)里還嵌入有
聚氨基酸，所嵌入的聚氨基酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為(0.1-8) : 100。 上述嵌入的聚氨基酸為聚天門冬氨酸、聚賴氨酸或聚谷氨酸。所述固相載
體的外形可為微球狀、管狀、梳齒狀或微孔板狀；其可包被反應(yīng)物的分子量范圍為
100Da-200000Da，所述反應(yīng)物可為蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原。 本發(fā)明的聚羥基丁酸酯分子式為 H-(0-CH(CH3)CH2COO-)nOH。 本發(fā)明的優(yōu)點是采用新型的可再生的聚羥基丁酸酯作為免疫吸附的載體基質(zhì)， 聚羥基丁酸酯是一種生物大分子，其聚合物和單體都是生物細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，具有生物相 容性，無毒無害，可生物降解，非常環(huán)保。用此種新材料為基質(zhì)包埋親水性的活性功能團(tuán)，可 以粘著吸附抗體分子，其表面結(jié)構(gòu)優(yōu)于酶聯(lián)免疫法所用的傳統(tǒng)聚苯乙烯材料，對抗體的包 埋容量極高且具有高親水性，使反應(yīng)更加靈敏，因此不需要樣品的前期制備。由此制成的檢 測棒體系亦可適用于單個樣品，小巧便攜，可攜帶至現(xiàn)場進(jìn)行檢測，快速定性不需要專業(yè)的 技術(shù)人員和實驗室環(huán)境，也能夠在實驗室進(jìn)行快速定量分析。本發(fā)明能夠脫離實驗儀器設(shè) 備和專業(yè)技術(shù)人員，有現(xiàn)場可操作性，檢測過程簡單快速，效果比傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫試劑盒更方 便準(zhǔn)確。快速檢測棒體系應(yīng)用的范圍非常廣泛，檢測棒可以包被任何種類的免疫球蛋白IgG 抗體，對各種狀態(tài)(固體或液體)的樣品進(jìn)行快速檢測，該固相載體可應(yīng)用免疫學(xué)、生物化 學(xué)及醫(yī)學(xué)的相關(guān)實驗中。
具體實施例方式
以下實施例用以說明本發(fā)明，但不用來限制本方明的范圍。 實施例1至3為本發(fā)明一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)的制備實施例，檢測 構(gòu)件僅以套有一個比色杯的包被有抗體的檢測棒作為實施例說明，但本發(fā)明的檢測構(gòu)件不 限于下述的三個實施例，檢測構(gòu)件可以是包被有抗體的固相載體，固相載體的外形可為棒 狀、微球狀、管狀、梳齒狀或微孔板狀等等。
實施例1 —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，包括置于一個檢測盒中的以下組件a、套 有一個比色杯的包被有抗體的檢測棒；b、用于放置目標(biāo)樣品的空瓶(1.5ml) ;c、裝有經(jīng)冷 凍干燥后抗體的試劑瓶(1.5ml) ;d、裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶(1.5ml) ;e、裝有用于定性的 底物的試劑瓶(1.5ml) ;f、裝有用于定量的底物的試劑瓶(1.5ml) ;g、裝有緩沖溶液的試劑 瓶(5ml)。 a、檢測棒的制備 檢測棒的基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，并在其基質(zhì)里嵌入帶有活性功能團(tuán)的化合物 聚天門冬氨酸，檢測棒套有一個比色杯。 將聚天門冬氨酸與聚羥基丁酸酯按O. 1 : 100的質(zhì)量比混合均勻后，送入壓塑機(jī) 在110-21(TC的加工溫度下進(jìn)行壓塑并制成珠粒狀，然后再將珠粒狀壓塑物通過常規(guī)工藝 制成棒狀，即得檢測棒。
蛋白質(zhì)抗體在檢測棒上的包被 首先將蛋白質(zhì)抗體以20i! g/ml溶于磷酸鹽緩沖溶液，將檢測棒浸入到蛋白質(zhì)抗 體溶液中，放入冰箱冷藏過夜；然后取出檢測棒，再將其浸入封閉液中，封閉液為溶有體積 濃度1%的Tween20的磷酸鹽緩沖溶液，室溫下靜置兩小時后，取出自然晾干；檢測棒套入 比色杯中，2-『C冷藏保存。 c、裝有經(jīng)過冷凍干燥后的蛋白質(zhì)抗體的試劑瓶的制備方法為 將蛋白質(zhì)抗體以lmg/ml溶于磷酸鹽緩沖溶液，取20 iU注入試劑瓶中，放入冷凍
干燥器中過夜凍干，取出后2-『C冷藏保存； d、裝有酶標(biāo)標(biāo)記物試劑瓶的制備方法為 將lmg金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯(lián)堿性磷酸酶保存于lml的50X10—3mol/ L Tris溶液中，然后再加入氯化鎂、氯化鋅、牛血清蛋白、甘油和疊氮化鈉，使氯化鎂達(dá)到 1. 0X10—^Ql/L、氯化鋅達(dá)到0. 1X10—^Ql/L、牛血清白蛋白的體積濃度達(dá)到1%、甘油的體 積濃度達(dá)到50%和疊氮化鈉達(dá)到15X 10—^01/L，調(diào)pH值為8. 0，即得工作濃度為lmg/ml的 金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯(lián)堿性磷酸酶；取0. 4iU注入試劑瓶中，2-8t:冷藏保存。
e、所述用于定性測量的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽(BCIP)與氯 化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)的混合液，所述裝有底物試劑瓶的制備方法為將摩爾濃度為 4. 8 X 10—4mol/L的BCIP和摩爾濃度為5. 1 X 10—4mol/L NBT混合，然后取lml混合液注入試 劑瓶中，2-『C冷藏并避光保存； f、所述用于定量測量的底物為溶于體積濃度為10%的二羥乙基胺的硝基苯磷酸 鹽，所述硝基苯磷酸鹽的質(zhì)量濃度為1. Omg/ml，所述溶液的pH值為9. 5，然后取lml混合液 注入試劑瓶中，2-8t:冷藏并避光保存；
g、裝有緩沖溶液試劑瓶的制備方法 將牛血清白蛋白溶于磷酸鹽緩沖溶液中使牛血清白蛋白的體積濃度達(dá)到1 % ，然 后取5ml注入試劑瓶中，2-8t:冷藏保存即得。
實施例2 —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，包括置于一個檢測盒中的以下組件a、套 有一個比色杯的包被有抗體的檢測棒；b、用于放置目標(biāo)樣品的空瓶(1.5ml) ;c、裝有經(jīng)冷 凍干燥后抗體的試劑瓶(1.5ml) ;d、裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶(1.5ml) ;e、裝有用于定性的 底物的試劑瓶(1.5ml) ;f、裝有用于定量的底物的試劑瓶(1.5ml) ;g、裝有緩沖溶液的試劑 瓶(5ml)。 a、檢測棒的制備 檢測棒的基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，并在其基質(zhì)里嵌入帶有活性功能團(tuán)的化合物 聚賴氨酸，檢測棒套有一個比色杯。 將聚賴氨酸與聚羥基丁酸酯按5 : 100的質(zhì)量比混合均勻后，送入壓塑機(jī)在
110-21(TC的加工溫度下進(jìn)行壓塑并制成珠粒狀，然后再將珠粒狀壓塑物通過常規(guī)工藝制
成棒狀，即得檢測棒。 其余步驟同實施例l。 實施例3 —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，包括置于一個檢測盒中的以下組件a、套
7有一個比色杯的包被有抗體的檢測棒；b、用于放置目標(biāo)樣品的空瓶(1.5ml) ;C、裝有經(jīng)冷
凍干燥后抗體的試劑瓶(1.5ml) ;d、裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶(1.5ml) ;e、裝有用于定性的 底物的試劑瓶(1.5ml) ;f、裝有用于定量的底物的試劑瓶(1.5ml) ;g、裝有緩沖溶液的試劑 瓶(5ml)。 a檢測棒的制備 檢測棒的基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，并在其基質(zhì)里嵌入帶有活性功能團(tuán)的化合物 聚谷氨酸，檢測棒套有一個比色杯。 將聚谷氨酸與聚羥基丁酸酯按8 : 100的質(zhì)量比混合均勻后，送入壓塑機(jī)在
110-21(TC的加工溫度下進(jìn)行壓塑并制成珠粒狀，然后再將珠粒狀壓塑物通過常規(guī)工藝制
成棒狀，即得檢測棒。 其余步驟同實施例l。 實施例4 —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)用于定性測量的步驟 (1)測試材料為固體適當(dāng)研磨或打碎，液體無需制樣，加入緩沖溶液以體積比 1 : l均勻混合，充分震蕩；取震蕩后的懸浮液注入空的試劑瓶，液面至試劑瓶一半體積處 為0. 8ml，然后將檢測棒插入裝有樣品液中，室溫下靜置30分鐘后，將檢測棒取出，用水沖 洗； (2)取緩沖溶液lml注入裝有凍干抗體的試劑瓶，震蕩讓其中的凍干抗體溶解后， 將檢測棒插入其中，室溫下靜置30分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗； (3)取緩沖溶液lml注入裝有底物的試劑瓶，混合均勻后將檢測棒插入其中，室溫 下靜置20分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗； (4)將裝有底物的試劑瓶中的底物lml注入套裝所配的比色杯中，將檢測棒插入 比色杯等待顯色反應(yīng)，10分鐘后，取出檢測棒觀察； 根據(jù)以上的檢測步驟，如果棒上顯示為藍(lán)紫色，棒上顏色均勻的為陰性；棒的下半 部分顏色明顯深于上半部分，并明顯呈現(xiàn)深淺兩極的為陽性；呈陽性的棒，根據(jù)棒下半部分 的顏色深淺的比對也可進(jìn)行半定量的估算；
實施例5 —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)用于定量測量的步驟 定量測量僅需替換所用底物，其它步驟與實施例4中的定性測量步驟相同。新的 底物為lmg硝基苯磷酸鹽溶于lml體積濃度為10%的二羥乙基胺，pH值為9. 5 ;堿性磷酸 酶對該底物的酶解產(chǎn)物呈可溶性黃色，最大吸收值在410nm，可直接將比色杯放入分光光度 計中測量吸光值，通過對標(biāo)準(zhǔn)樣品和目標(biāo)樣品吸光值的測定，對目標(biāo)樣品進(jìn)行定量分析。
實施例6 —種可包被反應(yīng)物的固相載體，其基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，基質(zhì)里還嵌入有聚 天門冬氨酸，該嵌入的聚天門冬氨酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為1 : 100。該固相載 體的外形可為微球狀，該固相載體的包被反應(yīng)物分子量范圍為100Da-200000Da，蛋白質(zhì)的 分子量在600Da-1000000Da，多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原的分子量普遍小于 2000Da，在此固相載體上可以實現(xiàn)大分子的非特異性吸附及特異性共價固定和小分子反應(yīng) 物的特異性共價固定。
實施例7 —種可包被反應(yīng)物的固相載體，其基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，基質(zhì)里還嵌入有聚
賴氨酸，該嵌入的聚賴氨酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為5 : 100。該固相載體的外
形為管狀，該固相載體的包被反應(yīng)物分子量范圍為100Da-200000Da，蛋白質(zhì)的分子量在
600Da-1000000Da，多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原的分子量普遍小于2000Da，在此
固相載體上可以實現(xiàn)大分子的非特異性吸附及特異性共價固定和小分子反應(yīng)物的特異性
共價固定。 實施例8 —種可包被反應(yīng)物的固相載體，其基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，基質(zhì)里還嵌入有聚 谷氨酸，該嵌入的聚谷氨酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為8 : 100。該固相載體的外形 為梳齒狀，該固相載體的包被反應(yīng)物分子量范圍為100Da-200000Da，蛋白質(zhì)的分子量在 600Da-1000000Da，多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原的分子量普遍小于2000Da，在此 固相載體上可以實現(xiàn)大分子的非特異性吸附及特異性共價固定和小分子反應(yīng)物的特異性 共價固定。 本發(fā)明在聚羥基丁酸酯中嵌入帶有活性功能團(tuán)的化合物聚賴氨酸或聚天門冬氨 酸或聚谷氨酸形成的固相載體，可以共價連接不同的分子。 聚羥基丁酸酯是一種生物大分子，其聚合物和單體都是生物細(xì)胞的代謝產(chǎn)物，具 有生物相容性，無毒無害，可生物降解，非常環(huán)保。用此種新材料為基質(zhì)包埋親水性的活性 功能團(tuán)的化合物聚賴氨酸或聚天門冬氨酸或聚谷氨酸，以此制成固相載體，可以同時吸附 或共價連接各種不同分子量的反應(yīng)物。傳統(tǒng)的以基苯乙烯材料為固相載體進(jìn)行包被時，反 應(yīng)物會吸附在固相載體的表面，這種連接固定的方式是非特異性的，也是很常見的。吸附連 接通常只需要反應(yīng)物的分子量大于2000Da，而小分子則不能以吸附的方式固定在載體上。 但在很多應(yīng)用領(lǐng)域(醫(yī)學(xué)，環(huán)境分析及藥學(xué)中的半抗原或短肽的分子量通常約1500Da)，小 分子與固相載體的連接對定量檢測也十分重要。固相載體聚羥基丁酸酯基質(zhì)里嵌入帶有活 性功能團(tuán)的化合物賴氨酸或聚天門冬氨酸或聚谷氨酸，可以實現(xiàn)大分子的非特異性吸附及 特異性共價固定和小分子反應(yīng)物的特異性共價固定。活性功能團(tuán)可以是氨基或羧基，氨基 可以與反應(yīng)物分子的羧基共價形成酰胺鍵，同理羧基可以與反應(yīng)物分子的氨基共價形成酰 胺鍵。因此除了大分子反應(yīng)物的吸附固定及特異性共價固定外，難以進(jìn)行吸附固定的小分 子反應(yīng)物也可以共價連接固定。因此可被包被的反應(yīng)物的分子量范圍可以達(dá)到100Da至 200000Da，反應(yīng)物可為蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原。
反應(yīng)物分子在聚羥基丁酸酯為基質(zhì)的固相載體上獲得功能團(tuán)來形成共價鍵，由此 被固定在載體上。與傳統(tǒng)的方法不同在于如今的載體不僅通過吸附而且通過特定的共價鍵 來固定包被反應(yīng)物分子。因而在使用時，蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原都 可以連接在載體表面。由此血液內(nèi)含物質(zhì)，水溶的農(nóng)藥，飼料和食品中的毒素或藥物殘留， 細(xì)菌，病毒等都可以被檢測。而且使用范圍也可擴(kuò)展至多肽和核苷酸的檢測，它們在醫(yī)學(xué)和 基因研究中是必不可少的。聚羥基丁酸酯成品通常為粗顆粒狀。含功能團(tuán)的化合物聚天門 冬氨酸或聚賴氨酸或聚谷氨酸可以占聚羥基丁酸酯質(zhì)量比為(0. 1-8) : IOO加入到聚羥基 丁酸酯粗顆粒中，進(jìn)入壓塑機(jī)進(jìn)行壓塑，制成珠狀。加工溫度在110-21(TC。得到的產(chǎn)品通 過常規(guī)工藝制成棒狀。
權(quán)利要求
一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是包括置于一個檢測盒中的以下組件a、檢測構(gòu)件；b、用于放置目標(biāo)樣品的空瓶；c、裝有經(jīng)冷凍干燥后抗體的試劑瓶；d、裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶；e、裝有用于定性的底物的試劑瓶；f、裝有用于定量的底物的試劑瓶；g、裝有緩沖溶液的試劑瓶。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述檢測構(gòu) 件為包被有抗體的固相載體，所述固相載體套有一個比色杯。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述固相載 體的基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，所述基質(zhì)里還嵌入有帶活性功能團(tuán)的化合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述帶 活性功能團(tuán)的化合物為聚氨基酸，所述嵌入的聚氨基酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為(o. l-8) : ioo。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述聚氨基 酸為聚天門冬氨酸、聚賴氨酸或聚谷氨酸。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3、4或5所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述 以聚羥基丁酸酯為基質(zhì)主體的固相載體形狀為棒狀，即檢測棒。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述檢測棒 的制備方法為將聚氨基酸與聚羥基丁酸酯按(0. 1-8) : 100的質(zhì)量比混合均勻后，送入壓 塑機(jī)在110-21(TC的加工溫度下進(jìn)行壓塑并制成珠粒狀，然后再將珠粒狀壓塑物通過常規(guī) 工藝制成棒狀，即得。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述抗 體可為任何種類的免疫球蛋白IgG，所述抗體的包被方法為首先將抗體以20ii g/ml溶于 磷酸鹽緩沖溶液，將固相載體浸入到抗體溶液中，放入冰箱冷藏過夜；然后取出固相載體， 再將其浸入封閉液中，封閉液為溶有體積濃度1%的Tween20的磷酸鹽緩沖溶液，室溫下靜 置兩小時后，取出自然晾干；固相載體套入比色杯中，2-8t:冷藏保存，所述固相載體為檢測 棒。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，其特征是所述裝有 經(jīng)過冷凍干燥后的抗體的試劑瓶的制備方法為將抗體以lmg/ml溶于磷酸鹽緩沖溶液，取 20 iU注入試劑瓶中，放入冷凍干燥器中過夜凍干，取出后2-『C冷藏保存；所述裝有酶標(biāo)標(biāo)記物試劑瓶的制備方法為將lmg金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯(lián)堿性磷 酸酶保存于lml的50X10—3mol/L Tris溶液中，然后再加入氯化鎂、氯化鋅、牛血清蛋白、甘 油和疊氮化鈉，使氯化鎂達(dá)到1. OX 10—、Ql/L、氯化鋅達(dá)到0. IX 10—^q1/L、牛血清白蛋白 的體積濃度達(dá)到1%、甘油的體積濃度達(dá)到50%和疊氮化鈉達(dá)到15X 10—^01/L，調(diào)pH值為 8. 0，即得工作濃度為lmg/ml的金黃色葡萄球菌蛋白A偶聯(lián)堿性磷酸酶；取0. 4 yl注入試劑瓶中，2-8t:冷藏保存；所述用于定性測量的底物為5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸鹽(BCIP)與氯化硝基四氮 唑藍(lán)(NBT)的混合液，所述裝有底物試劑瓶的制備方法為將摩爾濃度為4.8X10—iol/L的 BCIP和摩爾濃度為5. 1 X 10—4mol/L NBT混合，然后取lml混合液注入試劑瓶中，2_8"冷藏 并避光保存；所述用于定量測量的底物為溶于體積濃度為10%的二羥乙基胺的硝基苯磷酸鹽，所述硝基苯磷酸鹽的質(zhì)量濃度為1. Omg/ml，所述溶液的pH值為9. 5，然后取lml混合液注入試 劑瓶中，2-『C冷藏并避光保存；所述裝有緩沖溶液試劑瓶的制備方法將牛血清白蛋白溶于磷酸鹽緩沖溶液中使牛血 清白蛋白的體積濃度達(dá)到1%，然后取5ml注入試劑瓶中，2-8t:冷藏保存即得。
10. —種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)的檢測方法，其特征是包括以下步驟(1) 測試材料為固體適當(dāng)研磨或打碎，液體無需制樣，按體積比1 : l加入權(quán)利要求9 中制得的緩沖溶液并均勻混合，充分震蕩；取震蕩后的懸浮液注入權(quán)利要求1中用于放置 目標(biāo)樣品的空試劑瓶，液面至試劑瓶一半體積處為0. 7-0. 9ml，然后將檢測棒插入裝有樣品 液試劑瓶中，室溫下靜置30分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗；(2) 取緩沖溶液lml注入裝有凍干抗體的試劑瓶，震蕩讓其中的凍干抗體溶解后，將檢 測棒插入其中，室溫下靜置30分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗；(3取緩沖溶液lml注入裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶，混合均勻后將檢測棒插入其中，室 溫下靜置20分鐘后，將檢測棒取出，用水沖洗；(4) 用于快速定性檢測將裝有用于定性的底物的試劑瓶中的底物lml注入套裝所配的比色杯中，將檢測棒插入比色杯等待顯色反應(yīng)，10分鐘后，取出檢測棒觀察；(5) 用于快速定量檢測將裝有用于定量的底物的試劑瓶中的底物lml注入套裝所配 的比色杯中，將檢測棒插入比色杯，10分鐘后，取出檢測棒，將比色杯放入分光光度計中測 量吸光值，通過對標(biāo)準(zhǔn)樣品和目標(biāo)樣品吸光值的測定，對目標(biāo)樣品進(jìn)行定量分析。
11. 一種可包被反應(yīng)物的固相載體，其特征是所述固相載體的基質(zhì)主體為聚羥基丁酸 酯，所述基質(zhì)里還嵌入有聚氨基酸，所述嵌入的聚氨基酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為(o. l-8) : ioo。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種可包被反應(yīng)物的固相載體，其特征是所述聚氨基酸為 聚天門冬氨酸、聚賴氨酸或聚谷氨酸。
13. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的一種可包被反應(yīng)物的固相載體，其特征是所述固相載體的外形可為棒狀、微球狀、管狀、梳齒狀或微孔板狀；所述固相載體可包被的反應(yīng)物分子量范圍為100Da-200000Da，所述反應(yīng)物可為蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸、寡聚糖或低分子半抗原。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于酶聯(lián)免疫法的快速檢測系統(tǒng)，包括以下組件a、檢測構(gòu)件；b、用于放置目標(biāo)樣品的空瓶；c、裝有經(jīng)冷凍干燥后抗體的試劑瓶；d、裝有酶標(biāo)標(biāo)記物的試劑瓶；e、裝有用于定性的底物的試劑瓶；f、裝有用于定量的底物的試劑瓶；g、裝有緩沖溶液的試劑瓶；本發(fā)明公開了該系統(tǒng)的檢測方法，還公開了可以同時吸附或共價連接各種不同分子量的反應(yīng)物的固相載體，其基質(zhì)主體為聚羥基丁酸酯，所述基質(zhì)里還嵌入帶有活性功能團(tuán)的聚氨基酸，該嵌入的聚氨基酸與聚羥基丁酸酯基質(zhì)的質(zhì)量比為(0.1-8)∶100。本發(fā)明不需要前期的樣品制備，且制成的檢測棒體系亦可適用于單個樣品，小巧便攜，有現(xiàn)場可操作性，效果比傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫試劑盒更方便準(zhǔn)確。
文檔編號G01N33/544GK101769923SQ201010103698
公開日2010年7月7日 申請日期2010年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月1日
發(fā)明者夏晶, 陶正杰 申請人:陶正杰;夏晶