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一種基于新型磁性多孔材料的磷酸肽富集新方法與流程

文檔序號:12327217閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種基于新型磁性多孔材料的磷酸肽富集新方法,其特征在于,包括:

(1)磁性MOFs材料Fe3O4@DOTA-ZIF-90的制備

首先,將DOTA共價連接到經(jīng)過氨基修飾的磁性納米材料NH2-MNP表面;隨后金屬離子Zn2+通過與DOTA的螯合作用固定在材料表面形成Fe3O4@DOTA-Zn納米顆粒;然后,將所得到的Fe3O4@DOTA-Zn顆粒懸浮于含硝酸鋅和2-咪唑甲醛的DMF溶液中;

(2)磷酸肽富集

采用步驟(1)制備的磁性MOFs材料Fe3O4@DOTA-ZIF-90進行標準磷酸化蛋白和Hela細胞全蛋白提取物復(fù)雜樣本中的磷酸肽富集。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于新型磁性多孔材料的磷酸肽富集新方法,其特征在于,步驟(1)的具體操作步驟為:一、將1mLNH2-MNP置于含有10mgDOTA的乙腈溶液中,反應(yīng)4h,然后用水和乙醇分別洗滌三次;將磁性納米顆粒重懸在含有8mMZn(NO3)2·4H2O的乙醇溶液中,70℃條件下反應(yīng)6h,得到Fe3O4@DOTA-Zn2+顆粒;將得到的Fe3O4@DOTA-Zn2+顆粒用乙醇和去離子水分別洗滌三次,并在4℃條件下儲存?zhèn)溆?;二、將硝酸鋅和2-咪唑甲醛按2:3的摩爾比溶解于DMF溶液,然后從步驟一得到的Fe3O4@DOTA-Zn2+顆粒中取1mL加入到含硝酸鋅和2-咪唑甲醛的DMF溶液中,將混合物溶液在100℃條件下加熱18h,起始外層ZIF-90的生長,得到磁性MOFs材料Fe3O4@DOTA-ZIF-90;三、通過外加磁場對上述磁性MOFs材料Fe3O4@DOTA-ZIF-90進行分離和收集,并分別用DMF和二氯甲烷進行洗滌,最后將所得磁性MOFs材料Fe3O4@DOTA-ZIF-90在80℃烘箱中烘干備用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于新型磁性多孔材料的磷酸肽富集新方法,其特征在于,步驟(2)的具體步驟為:取磁性MOF材料置于1.5mL離心管中,用上樣緩沖液(50%乙腈,1%TFA)清洗三次;向離心管中加入150μL上樣緩沖液重懸磁性MOF材料,加入蛋白酶切產(chǎn)物,室溫渦旋15min;在外加磁場作用下,吸去上清液,用上樣緩沖液和洗滌緩沖液(50%乙腈,0.1%TFA)各漂洗材料三次;用1μL 0.1M氨水洗脫結(jié)合在材料上的磷酸肽,重復(fù)五次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于新型磁性多孔材料的磷酸肽富集新方法,其特征在于,所述NH2-MNP通過熱溶劑法制備。

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