本發(fā)明屬于納米材料加工應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及一種靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針及其制備方法。

背景技術(shù)：

介孔二氧化硅通過3-氨丙基-三乙氧基硅烷(3-Aminopropyltriethoxysilane，APTES)修飾后，表面存在大量的不飽和殘鍵和不同狀態(tài)的NH₂，具有很高的化學(xué)活性。納米SiO₂是一種正在規(guī)模化生產(chǎn)的納米材料，無定型納米SiO₂因其吸入和口服對(duì)生命體不會(huì)造成直接的危害而被認(rèn)為是生物安全的納米材料，已被廣泛用于生物分析和成像、藥物載體等的研究中。特別是介孔二氧化硅因具有有序介孔結(jié)構(gòu)、比表面積大、毒副作用小、生物相容性好及表面易于修飾等特點(diǎn)，單分散的介孔二氧化硅納米粒子還可以作為其他納米材料的硬模版等特性。介孔孔徑在2-50nm之間通過表面活性劑的性能、用量進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而賦予其許多獨(dú)特的性能，在生物醫(yī)藥等領(lǐng)域顯示出了極大的應(yīng)用前景。目前，介孔二氧化硅在藥物遞送領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。與傳統(tǒng)給藥模式相比，介孔二氧化硅的藥物遞送使得靶向性、生物利用度等都有很大提高，同時(shí)此類新型體系可以改善藥物穩(wěn)定性及藥物釋放動(dòng)力學(xué)行為，從而更大程度地提高治療效果并減小副作用。藥物載體的功能化修飾也趨多樣化，并已成功實(shí)現(xiàn)了靶向、成像等多種功能。因此，多功能化的介孔納米二氧化硅藥物、熒光劑等輸送體系是一類具有極大應(yīng)用價(jià)值的新型納米輸送體系。

吲哚菁綠(Indocyanine Green，ICG)是一種水溶性分子，當(dāng)其經(jīng)靜脈注入以后，98％--99％的分子會(huì)與血漿大分子蛋白緊密結(jié)合(主要是白蛋白)，只有少量處于游離狀態(tài)。其在體內(nèi)的消除完全經(jīng)由肝膽系統(tǒng)，由肝細(xì)胞主動(dòng)攝取，再經(jīng)肝細(xì)胞膜上的通道排入膽道，最后進(jìn)入腸道，并以原型排出體外，其間沒有代謝改變，也不經(jīng)歷腸肝循環(huán)。因而ICG從血液到膽道的消除速率體現(xiàn)了肝臟的排泄分泌功能。ICG在血液15分鐘滯留率是臨床評(píng)價(jià)肝臟儲(chǔ)備功能的重要指標(biāo)之一，并常規(guī)應(yīng)用于肝臟手術(shù)的術(shù)前肝臟儲(chǔ)備功能評(píng)估。當(dāng)ICG受到波長(zhǎng)為750—810nm的光波激發(fā)以后，會(huì)釋放出波長(zhǎng)大約為830nm的紅外光。在生物體內(nèi)，光束會(huì)因?yàn)檠t蛋白以及水的散射和吸收而迅速衰減。血紅蛋白會(huì)強(qiáng)烈地衰減700nm以下的光束(包括除了深紅色以外的全部可見光)；而水對(duì)于可見光和紅外光而言是“透明”的，但它會(huì)強(qiáng)烈地濾除900nm以上的光束。因而，波長(zhǎng)處于700—900nm之間的深紅和近紅外光具有最大的組織穿透能力。這也就是為什么從距離表層深達(dá)10mm處的ICG所釋放的近紅外光能被偵測(cè)到的原因。由于ICG具有上述特點(diǎn)，所以其已經(jīng)在臨床使用了40余年。長(zhǎng)期以來的不良反應(yīng)報(bào)道，只有少數(shù)個(gè)體會(huì)因?yàn)槭褂昧撕鈩┬偷腎CG出現(xiàn)過敏反應(yīng)。所以臨床使用含碘劑型ICG前應(yīng)當(dāng)皮試。ICG熒光在肝癌及癌旁組織聚集的現(xiàn)象是2007年Ishizawa T研究小組在肝癌手術(shù)中發(fā)現(xiàn)的。Yokoyama等又報(bào)道了用ICG熒光導(dǎo)航技術(shù)能夠偵測(cè)胰腺癌在肝臟的微小轉(zhuǎn)移灶的初期臨床結(jié)果，證實(shí)該技術(shù)在偵測(cè)肝臟內(nèi)表淺微小轉(zhuǎn)移灶方面是可行的，可發(fā)現(xiàn)小至1.5mm直徑的轉(zhuǎn)移灶。Harad N 2010年報(bào)道，ICG肝癌手術(shù)導(dǎo)航，術(shù)者在術(shù)中觀察到癌組織侵犯膽管后所導(dǎo)致的區(qū)域膽管梗阻。肝癌手術(shù)中一些經(jīng)過改進(jìn)的偵測(cè)設(shè)備，可以實(shí)現(xiàn)同時(shí)偵測(cè)手術(shù)視野的可見光和熒光圖像，甚至實(shí)現(xiàn)兩類圖像的融合。肝癌開腹或腹腔鏡切除手術(shù)中用ICG經(jīng)門靜脈插管，區(qū)域灌注，可以實(shí)時(shí)熒光顯示肝臟分段情況，以及各肝葉、肝段在肝臟表面的界限，進(jìn)而協(xié)助術(shù)者判斷，實(shí)現(xiàn)精確的規(guī)則性肝葉切除。2013年的一項(xiàng)臨床研究報(bào)道：肝癌的肝外轉(zhuǎn)移灶也能攝取并延遲排泌ICG，使其在手術(shù)中能實(shí)時(shí)顯示熒光，并能被術(shù)者偵測(cè)到。肝癌切除術(shù)后復(fù)發(fā)的再次切除手術(shù)中，由ICG熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)了常規(guī)超聲檢查沒有發(fā)現(xiàn)的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移癌灶。ICG肝癌手術(shù)導(dǎo)航技術(shù)在腹腔鏡肝癌手術(shù)中顯示了其更大的優(yōu)越性，彌補(bǔ)了術(shù)者無法用手捫查病變的缺陷，有利于淺表小肝癌的偵測(cè)。但在使用過程中，由于ICG不具有主動(dòng)靶向功能，對(duì)于肝硬化結(jié)節(jié)、肝臟增生不良結(jié)節(jié)等，該方法下也可以顯示較強(qiáng)的熒光，導(dǎo)致假陽性的發(fā)生，據(jù)報(bào)道，該方法下假陽性率高達(dá)40-50％。Ishizawa T.等報(bào)道的準(zhǔn)確率為65％(35/57病變)，當(dāng)肝硬化時(shí)，肝癌/硬化肝組織熒光對(duì)比度下降，檢測(cè)敏感性會(huì)下降。同時(shí)，ICG也應(yīng)用于前哨淋巴結(jié)的清掃、血管成像，在整形外科手術(shù)中也有應(yīng)用，但是不具有主動(dòng)靶向功能的ICG在臨床應(yīng)用方面還是受到了極大的局限性。

整合素αVβ3在正常組織器官及成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá)，在多種腫瘤(包括肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、骨肉瘤、肝癌、胰腺癌等)細(xì)胞表面和新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中有高表達(dá)，在腫瘤的新生血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。這種差異通過分子影像學(xué)的方法來體現(xiàn)。

根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)表的《全球癌癥報(bào)告2014》，研究稱2012年全球癌癥患者和死亡病例都在迅猛地增加，新增癌癥病例有近一半出現(xiàn)在亞洲，其中大部分在中國，中國新增癌癥病例高居第一位。WHO報(bào)告預(yù)測(cè)全球癌癥病例將呈現(xiàn)迅猛增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，由2012年的1400萬人，逐年遞增至2025年的1900萬人，到2035年將達(dá)到2400萬人。同時(shí)，2012年全世界共新增1400萬癌癥病例并有820萬人死亡。其中，中國新增307萬癌癥患者并造成約220萬人死亡，分別占全球總量的21.9％和26.8％。在過去的50年來，雖然各個(gè)國家在腫瘤治療方面的研究資金的投入在不斷的增加，比如美國，在2009年的美國國家癌癥研究所科研預(yù)算就達(dá)到了60億美金，但是，縱觀這50年來癌癥的治療效果，并沒有顯著的改善。但是對(duì)于實(shí)體瘤，手術(shù)治療是首選的方法。如果整個(gè)實(shí)體瘤能夠被完全的通過手術(shù)切除，那么腫瘤患者是可以被治愈的。但是，目前腫瘤患者的治療效果仍然非常差，主要存在兩方面的問題：1)現(xiàn)有的術(shù)前常規(guī)檢查手段CT、MRI、B超等，由于自身的分辨率的限制，對(duì)于微小腫瘤未能及時(shí)發(fā)現(xiàn)；2)在術(shù)中，醫(yī)生綜合術(shù)前檢查結(jié)果和術(shù)中的視診、觸診等來判斷腫瘤的邊界，醫(yī)生憑主觀經(jīng)驗(yàn)決定如何切除腫瘤。以上的因素導(dǎo)致了，手術(shù)后，腫瘤患者體內(nèi)微小腫瘤殘留，以及手術(shù)切緣有存留腫瘤細(xì)胞(陽性切緣)，這些是造成患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)以及預(yù)后差、甚至死亡的主要原因。而且，對(duì)于術(shù)后復(fù)發(fā)的腫瘤患者，二次手術(shù)或者術(shù)后化療的效果也是非常差，如乳腺癌，肝癌，結(jié)直腸癌，頭頸部癌等腫瘤的復(fù)發(fā)患者。面對(duì)以上現(xiàn)實(shí)問題，臨床醫(yī)生需要一種先進(jìn)的技術(shù)，這種技術(shù)可以幫助臨床醫(yī)師發(fā)現(xiàn)微小腫瘤灶以及在首次手術(shù)過程中就能獲得一個(gè)陰性切緣，提高腫瘤患者術(shù)后生存率，改善他們的生活質(zhì)量。在臨床腫瘤治療方法研究中，自2008年日本醫(yī)生開始將熒光手術(shù)導(dǎo)航應(yīng)用于肝臟腫瘤切除手術(shù)后，術(shù)中實(shí)時(shí)熒光導(dǎo)航技術(shù)就受到了臨床醫(yī)生的重視。與現(xiàn)有的成像儀器相比，術(shù)中熒光成像擁有低成本、簡(jiǎn)單容易、安全(比如沒有輻射)、實(shí)時(shí)、高分辨率等優(yōu)勢(shì)，對(duì)于微小腫瘤的實(shí)時(shí)檢測(cè)、高分辨率識(shí)別以及高特異性更是它的優(yōu)勢(shì)。目前在臨床上研究比較成熟的是基于吲哚菁綠為熒光材料的近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航儀。這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于在乳腺癌前哨淋巴結(jié)檢測(cè)、胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)檢測(cè)、原位肝癌、肝癌轉(zhuǎn)移灶、結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移等外科手術(shù)。但是，由于吲哚菁綠并沒有主動(dòng)靶向性，在應(yīng)用過程中的假陽性高。

已經(jīng)有少量的近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航儀已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了商業(yè)化生產(chǎn)，在臨床上也已經(jīng)開始使用，但是，目前仍然缺乏具有腫瘤特異性靶向的熒光分子探針。目前，能用于臨床的僅有吲哚菁綠這一種，且效果不甚理想，因此，本領(lǐng)域仍需要投入大量的科研力量來尋找更多的能夠用于近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航儀的熒光分子探針，從而使在近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航系統(tǒng)應(yīng)用于臨床的過程中，具有主動(dòng)靶向腫瘤的熒光分子探針真正輔助術(shù)者在術(shù)中精準(zhǔn)的定位腫瘤和腫瘤邊界，減少術(shù)后殘癌率和復(fù)發(fā)率，提高腫瘤患者生存率和生活治療，減少社會(huì)醫(yī)療資源的負(fù)擔(dān)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針及其制備方法，以期至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題之一。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供一種靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針的制備方法，其包括步驟：

步驟一：配制濃度為1.5～2.5mg/mL的十六烷基三甲基溴化銨溶液作為母液，調(diào)節(jié)母液的pH值呈堿性；取正硅酸乙酯(TEOS)分散于乙醇溶液中，得到TEOS分散液；

步驟二：在60～80℃下，邊攪拌邊向母液中滴加TEOS分散液，得到澄清透明的SiO₂原液；

步驟三：向SiO₂原液中加入吲哚菁綠溶液后混勻，離心棄上清，收集并烘干沉淀物，得到上載了熒光劑的介孔硅球(ICG@SiO₂)干粉；

步驟四：將上載了熒光劑的介孔硅球干粉分散于水中得到濃度為5～15mg/mL的ICG@SiO₂溶液，然后加入APTES和Lasp，攪拌溶解后置于180～210℃灼燒100～150min，得到白色干粉；

步驟五：將白色干粉分散于水中，超聲清洗后離心棄上清，收集沉淀物，得到介孔硅球納米粒子；

步驟六：將介孔硅球納米粒子加入聚乙二醇溶液內(nèi)，混勻后以PBS緩沖液稀釋，得到表面氨基功能化的上載了熒光劑的介孔硅球納米粒子，即靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針。

其中，步驟一中，所述調(diào)節(jié)母液的pH值呈堿性優(yōu)選調(diào)節(jié)母液的pH值至8～8.5；

所述TEOS和乙醇的體積比(V/V)優(yōu)選為1:10～1:8。

步驟二中，所述攪拌優(yōu)選采用恒溫水浴磁力攪拌器攪拌；

所述滴加TEOS分散液優(yōu)選分次滴加，每次優(yōu)選滴加200μL，每?jī)纱蔚渭硬僮髦袃?yōu)選間隔30分鐘，滴加完成后優(yōu)選繼續(xù)攪拌20min，直到激光照射有丁達(dá)爾現(xiàn)象。

步驟三中，所述SiO₂原液和吲哚菁綠溶液的質(zhì)量比優(yōu)選5:1～7:1，其中，所述吲哚菁綠溶液的濃度以10mg/mL計(jì)；

所述混勻優(yōu)選震蕩混勻；

所述離心的條件優(yōu)選以10000rpm轉(zhuǎn)速離心15分鐘。

步驟四中，所述APTES的加入量為50～200μL/mL，所述Lasp的加入量為200～300μg/mL；

所述灼燒優(yōu)選使用馬弗爐進(jìn)行。

步驟五中，所述離心的條件優(yōu)選以8000rpm轉(zhuǎn)速離心15分鐘；

所述將白色干粉分散于水中和所述超聲清洗后離心棄上清的操作優(yōu)選反復(fù)進(jìn)行5次。

步驟六中，所述混勻優(yōu)選震蕩混勻；

所述聚乙二醇溶液的用量?jī)?yōu)選為每mg介孔硅球納米粒子加入1mL聚乙二醇溶液中；

所述PBS緩沖液的使用量?jī)?yōu)選為：所述聚乙二醇溶液和所述PBS緩沖液的體積比為1:5。

本發(fā)明的另一個(gè)方面提供上述制備方法制得的靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針。

在符合本領(lǐng)域常識(shí)的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實(shí)例。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

本發(fā)明至少具有下述有益效果之一：

1、本發(fā)明所涉及的制備方法簡(jiǎn)便容易操作，納米粒子具有比表面積大、粒徑小，且單分散性良好等優(yōu)點(diǎn)；

2、本發(fā)明所制備的多功能介孔納米粒子具有穩(wěn)定的熒光特性、介孔性和良好的主動(dòng)靶向性；

3、本發(fā)明所制備的多功能介孔納米粒子的載藥量高達(dá)49％，生物利用度高，提供了表面修飾功能基團(tuán)的合成方法，同時(shí)在介孔硅層表面還可以復(fù)合多種其他種類的功能基團(tuán)，為生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用多種多功能的復(fù)合納米粒子的制備提供了有益借鑒；

4、本發(fā)明所制備的多功能介孔納米粒子具有重要的應(yīng)用價(jià)值，尤其在腫瘤手術(shù)治療方面，結(jié)合近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航系統(tǒng)，在術(shù)中可以輔助術(shù)者實(shí)時(shí)的精準(zhǔn)定位腫瘤的位置和腫瘤邊界，切實(shí)減少患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率，提高患者術(shù)后的生存率和生活質(zhì)量，減輕社會(huì)醫(yī)療負(fù)擔(dān)，表現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

附圖說明

圖1為根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式的靶向近紅外介孔硅球納米探針的制備方法流程圖；

圖2為實(shí)施例2靶向腫瘤的近紅外介孔硅球納米探針(ICG/MSN-Lasp)在裸鼠體內(nèi)的熒光信號(hào)檢測(cè)圖；

圖3為實(shí)施例2的無靶向功能的近紅外介孔硅球納米探針(ICG/MSN)制劑在裸鼠體內(nèi)的熒光信號(hào)檢測(cè)圖；以及

圖4為實(shí)施例3的靶向腫瘤的近紅外介孔硅球納米探針結(jié)合近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航儀，術(shù)者在為皮下肝癌裸鼠完成熒光導(dǎo)航手術(shù)，其中，A為術(shù)前，B為術(shù)后。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，并參照附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。

本發(fā)明提供一種靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針的制備方法，包括步驟：

步驟一：配制濃度為1.5～2.5mg/mL的十六烷基三甲基溴化銨溶液作為母液，調(diào)節(jié)母液的pH值呈堿性；取正硅酸乙酯(TEOS)分散于乙醇溶液中，得到TEOS分散液；

步驟二：在60～80℃下，邊攪拌邊向母液中滴加TEOS分散液，得到澄清透明的SiO₂原液；

步驟三：向SiO₂原液中加入吲哚菁綠溶液后混勻，離心棄上清，收集并烘干沉淀物，得到上載了熒光劑的介孔硅球(ICG@SiO₂)干粉；

步驟四：將上載了熒光劑的介孔硅球干粉分散于水中得到濃度為5～15mg/mL的ICG@SiO₂溶液，然后加入APTES和Lasp，攪拌溶解后置于180～210℃灼燒100～150min，得到白色干粉；

步驟五：將白色干粉分散于水中，超聲清洗后離心棄上清，收集沉淀物，得到介孔硅球納米粒子；

步驟六：將介孔硅球納米粒子加入聚乙二醇溶液內(nèi)，混勻后以PBS緩沖液稀釋，得到表面氨基功能化的上載了熒光劑的介孔硅球納米粒子，即靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針。

本發(fā)明還提供由該制備方法制得的靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針。

實(shí)施例1

請(qǐng)參考圖1，其為本發(fā)明靶向腫瘤的近紅外介孔硅球納米探針的制備方法流程圖，具體地，其步驟如下：

步驟一：稱取250mg的十六烷基三甲基溴化銨溶于120mL去離子水里，得到十六烷基三甲基溴化銨溶液；將875μL的氫氧化鈉溶液(2M)滴入溶液中，置于80℃恒溫水浴磁力攪拌器上反應(yīng)5分鐘，調(diào)節(jié)母液的pH呈8.5；

取100μL的正硅酸乙酯(TEOS)分散于900μL乙醇溶液中，得到TEOS分散液。

步驟二：向母液中分5次緩慢的滴入TEOS分散液，每次滴入200μL，滴入次數(shù)間隔30min，在此過程中，保持反應(yīng)條件為80℃恒溫水浴磁力攪拌器攪拌。待滴加完成后，持續(xù)攪拌20分鐘，得到SiO₂原液。

步驟三：向SiO₂原液中加入1mL 10mg/mL的吲哚菁綠溶液，振蕩15分鐘，以10000rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心15分鐘，棄上清液，收集并烘干沉淀物，得到上載了熒光劑的介孔硅球干粉；

步驟四：取5mg介孔硅球干粉，分散于500μL去離子水中，滴入100μL的3-氨丙基-三乙氧基硅烷(APTES)，150μg天冬氨酸(Lasp)，攪拌溶解后，置于坩堝中，在馬弗爐中180℃高溫灼燒120min，制得白色干粉。

步驟五：將白色干粉分散于5mL水中，超聲清洗后，以8000rpm轉(zhuǎn)速離心15分鐘，舍棄上清液，收集沉淀物，重復(fù)上述步驟離心、洗滌5次，得到直徑100nm的介孔硅球。

步驟六：將上述得到的上載了熒光劑的介孔硅球納米粒子加入1mL聚乙二醇溶液內(nèi)，振蕩5分鐘后用PBS液稀釋為5mL，得到表面氨基功能化的上載了熒光劑的介孔硅球納米粒子，即制得了靶向腫瘤的近紅外介孔二氧化硅納米探針。

實(shí)驗(yàn)測(cè)得本發(fā)明所制備的多功能介孔納米粒子的載藥量高達(dá)49％，生物利用度高，提供了表面修飾功能基團(tuán)的合成方法，同時(shí)在介孔硅層表面還可以復(fù)合多種其他種類的功能基團(tuán)，為生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用多種多功能的復(fù)合納米粒子的制備提供了有益借鑒。

實(shí)施例2

將實(shí)施例1制備得到的靶向性近紅外介孔硅球納米探針，用10Kd的超濾管將上述溶液進(jìn)行超濾，然后用超純水洗滌3次，然后用PBS液稀釋得到濃度為2mg/mL近紅外主動(dòng)靶向探針制劑。此納米制劑中的納米顆粒的平均粒徑為100納米。

將濃度為2mg/mL的上述近紅外熒光納米探針制劑注射入患有乳腺癌裸鼠體內(nèi)進(jìn)行熒光檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示。從圖2中可以看出，該近紅外熒光納米探針的近紅外熒光信號(hào)峰與裸鼠本身的的背景信號(hào)峰分離的很好，腫瘤區(qū)域和腫瘤周圍正常組織的對(duì)比度達(dá)到了5倍多，這樣背景干擾就小，可以給術(shù)者提供清晰的腫瘤位置和精確的腫瘤邊界，調(diào)腫瘤的檢測(cè)率、切除率。

將濃度為2mg/mL的上述近紅外熒光納米探針制劑注射入患有裸鼠體內(nèi)進(jìn)行熒光檢測(cè)，并將相同濃度的溶液PBS液內(nèi)的未進(jìn)行主動(dòng)靶向修飾的熒光硅球探針(ICG/MSN)注入患有乳腺癌的裸鼠中進(jìn)行熒光檢測(cè)作為對(duì)照，檢測(cè)結(jié)果如圖3所示。由圖3中可以看出，由于ICG/MSN不具有主動(dòng)靶向性，在腫瘤區(qū)域熒光信號(hào)弱，腫瘤邊界不清晰，未能給術(shù)者提供清晰的腫瘤位置和精確的腫瘤邊界。

實(shí)施例3

將上述實(shí)施例2中得到的濃度為2mg/mL的近紅外熒光納米探針制劑注射入患有肝癌裸鼠體內(nèi)進(jìn)行熒光檢測(cè)，并在近紅外熒光手術(shù)導(dǎo)航儀輔助下，術(shù)者完成實(shí)時(shí)熒光導(dǎo)航手術(shù)切除腫瘤，手術(shù)實(shí)施過程如圖4所示(其中，A為術(shù)前，B為術(shù)后)，在主動(dòng)靶向近紅外熒光探針和熒光手術(shù)導(dǎo)航儀的輔助下，術(shù)者可以精確的定位腫瘤邊界，并參考客觀的熒光腫瘤邊界進(jìn)行腫瘤的完全切除，即使是對(duì)于亞毫米的殘余病灶，術(shù)者依靠近紅外熒光信號(hào)，同樣的能夠進(jìn)行精準(zhǔn)的手術(shù)切除，減少手術(shù)殘癌率和手術(shù)切緣陽性率。

以上所述的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果進(jìn)行了進(jìn)一步詳細(xì)說明，應(yīng)理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。