一種異黃酮苷類化合物的制備和用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥及天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種新的異黃酮苷類化合物及其制備方法和用途。所述的異黃酮苷類化合物結(jié)構(gòu)如下，本發(fā)明首先采用正相（硅膠）柱色譜分離，再采用反相（開放ODS）柱色譜分離，最后經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物2′?羥基大豆苷。本發(fā)明的化合物能夠用于預(yù)防和治療由于體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多或清除自由基能力下降引起的各種疾病。
【專利說明】
一種異黃酮苷類化合物的制備和用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥及天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種新的異黃酮苷類化合物及其制 備方法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 綠豆為豆科植物綠豆(Vigna radiate L.)的干燥成熟種子，具有清熱解毒、燥濕 的功效?？捎糜谥委熗聻a、斑疹、疔瘡、疥癬等病癥。《本草匯言》中記載用綠豆治疔毒、癍疹， 金、石、丹、火諸毒及霍亂吐下。目前，并未有綠豆植株的藥理活性及活性物質(zhì)的報(bào)道。
[0003] 異黃酮苷類化合物在植物界普遍存在，目前從綠豆植株中發(fā)現(xiàn)的新的異黃酮苷化 合物為2'-羥基大豆苷結(jié)構(gòu)，是尚未發(fā)現(xiàn)的新化合物。
[0004] 近年來，硅膠與0DS等填料在天然藥物化學(xué)成分的提取、分離純化、制劑工藝改革、 制劑質(zhì)量分析等方面有了較廣泛的應(yīng)用研究，并明確顯示出其獨(dú)特的作用。利用硅膠與0DS 的相反的吸附功能和物質(zhì)的相似相容原理可從中藥提取液中分離精制有效成分或有效部 位，最大限度地去粗取精，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化研究的發(fā)展。
[0005] 自由基在信號(hào)傳導(dǎo)和免疫等方面具有重要的作用，但過多的活性氧自由基就會(huì)產(chǎn) 生破壞行為，通過鏈?zhǔn)椒磻?yīng)攻擊細(xì)胞內(nèi)或體液中的生物分子，如DNA、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等，導(dǎo)致 人體正常細(xì)胞和組織的損壞，從而引起多種疾病，如癌癥、衰老和各種心血管疾病。與此同 時(shí)，具有自由基清除活性的合成抗氧化劑或天然抗氧化劑已成為國(guó)內(nèi)外各學(xué)科領(lǐng)域的研究 熱點(diǎn)，其中對(duì)異黃酮類化合物的研究是自由基清除劑研究中的熱門領(lǐng)域。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種新的異黃酮苷化合物及其化學(xué)結(jié)構(gòu)和名稱，即 2'-羥基大豆苷，英文名為2'_hydroxydaidzin，其具體結(jié)構(gòu)式如下：
[0008] 該化合物具有如下光譜學(xué)特征JH-NMR及13C-NMR及HMBC譜如表1所示。
[0009] 表1.化合物Y -羥基大豆苷的h-NMR及13C-NMR及HMBC譜數(shù)據(jù)
[0011 ] HR-ESIMS數(shù)據(jù):對(duì)于該化合物來說，其高分辨質(zhì)譜給出分子離子峰(negative ion mode): m/z = 455 · 0929 [M+Na] + (calcd · for C2iH2〇OioNa，455 · 0949)，分子式：C21H2QO10 〇
[0012] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述異黃酮苷化合物的制備方法。具體步驟如下：
[0013] (1)取綠豆植株的干燥莖枝，用乙醇或甲醇提取，過濾，合并濾液，得醇提液;將醇 提液減壓回收醇至無醇味，得粗提液；
[0014] (2)所獲得的粗提液依次用不同極性有機(jī)溶劑萃取，棄去萃取液，再用正丁醇萃 取，合并正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇，得綠豆植株提取物；
[0015] (3)所得的綠豆植株提取物，用適量甲醇分散，加入適量硅膠，攪拌均勻，裝入預(yù)先 處理好的硅膠柱中，以兩種有機(jī)溶劑混合的混合有機(jī)溶劑（100:0~0:100)進(jìn)行梯度洗脫， 收集混合有機(jī)溶劑(50:50~30:70)洗脫液，濃縮至濃稠狀，加適量甲醇分散;上開放0DS柱， 以醇-水(0:100~100:0)，優(yōu)選為醇-水（15:85~30:70)，進(jìn)行梯度洗脫，收集醇-水（15:85 ~25:75)洗脫液，經(jīng)濃縮得到異黃酮苷化合物；
[0016] (4)所得的異黃酮苷化合物，用甲醇重結(jié)晶，得到羥基大豆苷。
[0017] 本發(fā)明中，步驟(1)中所述的乙醇或甲醇的濃度為30%~100%。
[0018] 本發(fā)明中，步驟（1)中所述的提取是用5~20倍量的30%~100%乙醇或甲醇閃式 提取1~3次，并合并提取液。
[0019] 本發(fā)明中，步驟(2)中所述的不同極性有機(jī)溶劑包括，但不僅限于：石油醚、環(huán)己 烷、二氯甲烷、氯仿、醋酸乙酯。
[0020] 本發(fā)明中，步驟(2)中所述的不同極性有機(jī)溶劑、正丁醇的用量為0.5~2倍體積， 萃取次數(shù)為1~5次。
[0021] 本發(fā)明中，步驟(3)中所述的混合有機(jī)溶劑為二氯甲烷-甲醇，或氯仿-甲醇，或二 氯甲烷-乙醇，或氯仿-乙醇。
[0022] 本發(fā)明中，步驟(3)中所述的醇-水為甲醇-水或乙醇-水。
[0023]本發(fā)明中，首先采用正相(硅膠)柱色譜分離，再采用反相(開放0DS)柱色譜分離， 最后經(jīng)甲醇重結(jié)晶得到化合物2'-羥基大豆苷。
[0024] 本發(fā)明中，采用硅膠柱色譜分離時(shí)，采用干法上樣;采用開放0DS柱色譜分離時(shí)，采 用濕法上樣。
[0025] 本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供該化合物在制備用于預(yù)防和治療由于體內(nèi)自由基 產(chǎn)生過多或清除自由基能力下降引起的各種疾病，比如心臟病、老年癡呆癥、腫瘤和衰老等 藥物中的用途。
【附圖說明】
[0026]圖1為2'-羥基大豆苷的氫譜圖。
[0027]圖2為2'-羥基大豆苷的碳譜圖。
[0028] 圖3為羥基大豆苷的HMBC譜圖。
[0029] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例2'-羥基大豆苷的提取分離流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 實(shí)施例一、2'-羥基大豆苷的分離制備
[0031] 1 ·植物材料:豆科植物綠豆(Vigna radiate L.)的干燥莖枝。
[0032] 2.分離制備方法:綠豆植株干燥莖枝25kg，用10、10倍量的95%乙醇閃式提取2次， 過濾，合并濾液，減壓回收乙醇至無醇味，得濃縮液約5L;分別用石油醚5L、二氯甲烷5L、正 丁醇5L各萃取3次，合并正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇，得綠豆植株提取物;將綠豆植株提 取物，用適量甲醇分散，并取適量硅膠拌樣;將拌好的樣品裝入硅膠柱中，用二氯甲烷-甲醇 (100:0~0:100)梯度洗脫，得到6個(gè)流分，流分6〔二氯甲烷-甲醇（20:80~0:100)〕經(jīng)開放 0DS柱，甲醇-水（15:85~30:70)梯度洗脫得4個(gè)流分，流分2〔甲醇-水(20:80)〕在甲醇中析 出結(jié)晶，得到羥基大豆苷。
[0033] 實(shí)施例二、2'-羥基大豆苷的體外抗氧化活性測(cè)試
[0034] 1.儀器:U-1900型分光光度計(jì)（Hitachi)，AB135-S型電子天平(Mettler Toledo)， 酶標(biāo)儀(B 10-RAD)，pH-2TC(0.01級(jí))精密數(shù)顯酸度計(jì)(上海之信儀器有限公司）。
[0035] 2.試劑:氯化鈉(NaCl)、氯化鉀(KC1)、磷酸二氫鉀(KH2P〇4)、磷酸氫二鉀(K 2HP〇4)、 過硫酸鉀(K2S2〇8)、2，連氮基-雙-(3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)，抗壞 血酸。
[0036]實(shí)驗(yàn)所用的羥基大豆苷為發(fā)明人自制，其化學(xué)結(jié)構(gòu)經(jīng)氫譜、碳譜、質(zhì)譜確定無 誤，即^：純度在98%以上。
[0037] 3 .實(shí)驗(yàn)方法：用pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液（PBS)配制7mmo 1 /L的ABTS溶液和 2.45mmol/L的過硫酸鉀溶液，將兩種溶液等體積混合，并在室溫下、于黑暗處反應(yīng)12h，得自 由基正離子(ABTS' + ?溶液。然后用PH7.4的PBS溶液稀釋40倍，稀釋后避光放置30min，在 734nm處測(cè)定吸光度為0.71(可用于抗氧化活性的測(cè)試）。用甲醇配制羥基大豆苷和抗壞 血酸的系列濃度溶液，濃度分別為6臟〇1凡、31111]1〇1凡、1.51111]1〇1凡、0.31111]1〇1凡和0.151111]1〇1/匕 將各濃度供試品l〇〇yL與3mL的ABTS ^在室溫下避光放置6min，用酶標(biāo)儀在734nm下測(cè)定吸 光度值A(chǔ)s。陰性對(duì)照用甲醇代替，用酶標(biāo)儀在734nm下測(cè)定吸光度值A(chǔ) C<3ABTS'+清除率（％ )計(jì) 算公式如下：
[0038] ABTS.+清除率（％ ) = (1-As/Ac) X 100%
[0039] 用SPSS 17.0軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度（IC50)。
[0040] 4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:見表2。
[00411表2.化合物2'-羥基大豆苷體外ABTS'+清除結(jié)果
[0043]該發(fā)明測(cè)試結(jié)果表明，化合物2'-羥基大豆苷具有ABTS'+抑制活性，且活性強(qiáng)于維 生素 C，故該化合物具有較強(qiáng)的體外抗氧化活性。尤其適用于預(yù)防和治療心血管系統(tǒng)疾病， 且其制備原料來源廣泛，成本低廉，具有良好的應(yīng)用、開發(fā)前景。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有如下結(jié)構(gòu)的2'-羥基大豆苷：2. 權(quán)利要求1所述化合物的制備方法，包括以下步驟： (1) 綠豆植株粗提液的制備：取綠豆植株適量，用乙醇或甲醇提取，過濾，合并濾液，得 醇提液，將醇提液減壓回收醇至無醇味，得粗提液； (2) 綠豆植株提取物的制備:取綠豆植株粗提液，依次用不同極性有機(jī)溶劑萃取，棄去 萃取液，再用正丁醇萃取，合并正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇，得綠豆植株提取物； (3) 異黃酮苷化合物的制備:所得的綠豆植株提取物，用適量甲醇分散，加入適量硅膠， 攪拌均勻，裝入預(yù)先處理好的硅膠柱中，以兩種有機(jī)溶劑混合的混合有機(jī)溶劑（100:〇~〇: 100)進(jìn)行梯度洗脫，收集混合有機(jī)溶劑(50:50~30:70)洗脫液，濃縮至濃稠狀，加適量甲醇 分散;上開放ODS柱，以醇-水(0 :100~100:0)，優(yōu)選為醇-水（15 :85~30 :70)，進(jìn)行梯度洗 脫，收集醇-水(15:85~25:75)洗脫液，經(jīng)濃縮得到異黃酮苷化合物； (4) 異黃酮苷化合物的純化:取得到的異黃酮苷化合物，經(jīng)甲醇重結(jié)晶，得到高純度的 2:羥基大豆苷。3. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)中采用5~20倍量的30 %~ 100%乙醇或甲醇提取1~3次，并合并提取液。4. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，先用0.5~2倍體積石油醚或 環(huán)己烷萃取1~5次后，再用0.5~2倍體積二氯甲烷或氯仿或醋酸乙酯萃取1~5次，最后用 0.5~2倍體積的正丁醇萃取1~5次。5. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的混合有機(jī)溶劑為二氯 甲烷-甲醇，或氯仿-甲醇，或二氯甲烷-乙醇，或氯仿-乙醇。6. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的醇-水梯度洗脫，其醇-水為甲醇-水或乙醇-水。7. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1所述的2'-羥基大豆苷化合物和藥學(xué)上可接受的載 體。8. -種藥物制劑，包含權(quán)利要求1所述的2'-羥基大豆苷化合物或權(quán)利要求7所述的組 合物和藥學(xué)上可接受的載體，所述的載體可以為片劑、膠囊、顆粒劑、口服溶液、注射用無菌 粉末或注射劑。9. 權(quán)利要求1所述的2'-羥基大豆苷化合物或權(quán)利要求7所述的藥物組合物在制備用于 預(yù)防和治療由于體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多或清除自由基能力下降引起的各種疾病的藥物中的 應(yīng)用。10. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的由于體內(nèi)自由基產(chǎn)生過多或清除自 由基能力下降引起的各種疾病包括心臟病、老年癡呆癥、腫瘤或衰老癥。
【文檔編號(hào)】A61P17/18GK105949257SQ201610402511
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月8日
【發(fā)明人】于治國(guó), 趙云麗, 白巖
【申請(qǐng)人】沈陽(yáng)藥科大學(xué)