含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物及其制備方法和應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物、其幾何異構體及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物或前藥，及其制備方法。本發(fā)明含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，及其藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成份，與藥學上可接受的載體或賦型劑混合制備成組合物，并制備成臨床上可接受的劑型。本發(fā)明化合物在制備治療和/或預防增生性疾病藥物中的應用，在制備治療和/或預防癌癥的藥物中的應用，在制備治療和/或預防前列腺癌、肺癌、乳腺癌的藥物中應用。
【專利說明】
含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物及其制備方法和應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及索拉非尼衍生物，具體地指一種含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物 及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 惡性腫瘤是一種嚴重危害人類生命健康的疾病，隨著環(huán)境污染等外界因素的變 化，全世界癌癥發(fā)病人數(shù)正在逐年上升，據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計，目前全世界每年約診 斷出1000萬腫瘤患者，700萬人死于由腫瘤引起的相關疾病，因此惡性腫瘤已成為僅次于心 血管疾病的人類第二類大殺手。
[0003] 索拉非尼（Sorafenib，BAY43_9006，商品名Nexevar)(結構式見下式）是拜爾和 Onyx PHarmaceuticals公司開發(fā)的一種新型的的雙芳基脲類小分子口服多祀點受體酪氨 酸激酶抑制劑，分別于2005年12月和2007年10月被美國Π )Α快速審批用于治療晚期腎細胞 癌和晚期肝癌。它具有雙重的抗腫瘤作用，一方面通過抑制Ras/Raf/MEK信號轉(zhuǎn)導通路直接 抑制腫瘤生長，另一方面通過抑制VEGF和血小板衍生生長因子(PDGF)受體而阻斷腫瘤新生 血管的形成，間接地抑制腫瘤細胞的生長。在體外研究中發(fā)現(xiàn)索拉非尼還可以作用于c-Kit、Flt-3和RET等多種酪氨酸激酶。該藥是近10多年來世界上被批準用于治療晚期腎癌的 第一個新藥，也是醫(yī)療界第一次找到能夠延長晚期肝癌患者生命的藥物。
[0004] 近幾年，索拉非尼衍生物及相關報到急劇增加。文獻(RSC AdvanCes，2014,4(23): 11569-11579.報道了一系列查爾酮以及其衍生物的VEGFR-2抑制劑，如化合物A、B。其中多 數(shù)化合物的IC 5〇值均在50nmol. L-1 以下。文獻(Molecules，2014，19( 11): 18656-18675.)中 報道了一系列吡唑啉衍生物以及其抗腫瘤活性，多數(shù)化合物具有較好的抗腫瘤活性，如C。 文獻(Medicinal Chemistry Research,2013,22(8) :3863-3880 ·)報道了查爾酮，吡唑，異 惡唑，和嘧啶衍生物的抗結核活性。
[0006] 本發(fā)明在參考文獻的基礎上，設計合成了一系列含查爾酮及其類似結構的索拉非 尼衍生物，然后化合物經(jīng)體外對多種腫瘤細胞株進行抗腫瘤活性篩選。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的就是要克服現(xiàn)有技術所存在的不足，提供一種含查爾酮類似結構的 索拉非尼衍生物及其制備方法和應用。
[0008] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種如通式Μ所示的含查爾酮類似結構的索拉非尼 衍生物、其幾何異構體及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶劑化物或前藥，通式Μ如下：
[0012] R為1~4個相同或不同的選自氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、疊氮 基、硝基、氰基、巰基、&~C4)烷基、C3~C6環(huán)烷基、&~C4烯基、&~C4炔基、&~C4烷氧基、& ~C4烷硫基、烯丙基、（2-甲基)烯丙基、(^~〇4烷氧基甲基、(^~〇4烷基?；騺喭榛?^?氧基的取代基；
[0013] 辦為1~4個相同或不同的選自氫或鹵素的取代基。
[0014] 本發(fā)明優(yōu)選涉及如上述通式Μ的化合物、其幾何異構體、及其藥學上可接受的鹽、 水合物、溶劑化物或前藥，其中：
[0016] R為1~4個相同或不同的選自氫、氟、氯、溴、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、疊 氮基、硝基、氰基、巰基、甲基、乙基、叔丁基、丙烯基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、環(huán)丙氧基、叔 丁氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、異丙氧基甲基、甲?；?、乙?；?、丙酰基或環(huán)丙?；?br>[0017] 選自氫、氟、氯、溴或碘。
[0018] 本發(fā)明如上述通式Μ的化合物，其幾何異構體、及其藥學上可接受的鹽、水合物、溶 劑化物或前藥選自下列化合物中的一種，但這些化合物并不意味著對本發(fā)明的任何限制：
[0019] (Ε)-4-(4-(3-(2-氯-4-氟苯基)丙烯酰基)苯氧基)-Ν_甲基吡啶酰胺、
[0020] (Ε)-4-(4-(3-(4-硝基苯基)丙烯酰基)苯氧基)- Ν-甲基吡啶酰胺、
[0021] (Ε)-4-(4-(3-(2,4-二氯苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0022] (Ε)-4-(4-(3-(3,4,5-三甲氧基苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0023] (Ε)-4-(4-(3_(4-氰基苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν_甲基吡啶酰胺、
[0024] (Ε)-4-(4-(3_(3-溴苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν_甲基吡啶酰胺、
[0025] (Ε)-4-(4-(3_(4-氟苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν_甲基吡啶酰胺、
[0026] (Ε)-4-(4-(3_(4-溴苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν_甲基吡啶酰胺、
[0027] (Ε)-4-(4-(3_(3,4-二氯苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν_甲基吡啶酰胺、
[0028] 4-( 4-(5-( 2，4_二氯苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0029] 4-(4-(5-(3,4，5_三甲氧基苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶 酰胺、
[0030] 4-(4-( 5-(2-氯-4-氟苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0031] 4-(4-( 5-(3-溴苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0032] 4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0033] 4-(4-(5-(4-氰基苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0034] 4-(4-( 5-(4-氟苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0035] 4-(4-( 5-(4-溴苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0036] 4-( 4-(5-( 3，4_二氯苯基)-4,5-二氫-1Η-吡唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0037] 4-(4-( 5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫異唑-3-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、
[0038] 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代_1，2，5，6_四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶 酰胺、
[0039] 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-硫代-1，2，5,6_四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶 酰胺、
[0040] (E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、
[0041] (E)-4-(4-(3_(4-溴苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺、
[0042] (E)-4-(4-(3_(4-氯苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺、
[0043] 4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-5-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、
[0044] 4-(4-( 5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫異唑-5-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、
[0045] 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代_2,3，4,5-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶 酰胺、
[0046] 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-硫代-2,3，4,5-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶 酰胺。
[0047] 下面的合成路線描述了本發(fā)明的上述通式Μ的含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生 物的制備方法，所有的原料都是通過路線1和2中描述的方式、通過有機化學領域普通技術 人員熟知的方法制備的或者可商購。本發(fā)明全部最終含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物 都是通過路線1和2中描述的方法或通過與其類似的方法制備的，這些方法是有機化學領域 普通技術人員熟知的。路線1和2中應用的全部可變因數(shù)如下文的定義。
[0049]路線1目標化合物的合成路線
[0051]路線2目標化合物的合成路線
[0052]本發(fā)明上述通式Μ的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，可按照路線1和2 的合成方法，以2-吡啶甲酸為原料，經(jīng)氯代、酰胺化、取代反應制備得到關鍵中間體4和a;化 合物5和b分別由化合物4與取代苯甲醛和化合物a與取代苯乙酮經(jīng)羥醛縮合反應得到;化 合物I、II、III、IV和c、d、e、f分別由化合物5和b與水合肼、羥胺水溶液、脲或硫脲縮合制備 得到。上述合成路線中的化合物的取代基定義與通式Μ目標化合物的取代基定義相同。反應 式所示其他化合物可以通過有機化學領域普通技術人員熟知的方法制備或者可商購。 [0053]按照本發(fā)明所屬領域的一些通常方法，本發(fā)明中上述通式Μ的含查爾酮及其類似 結構的索拉非尼衍生物可以與酸生成藥學上可接受的鹽?？伤幱眉映甥}包括無機酸和有機 酸加成鹽，與下列酸加成的鹽是特別優(yōu)選的：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對 甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒 石酸、苯甲酸等。
[0054] 此外，本發(fā)明還包括本發(fā)明衍生物的前藥。本發(fā)明衍生物的前藥是上述通式Μ的衍 生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒有活性，但是在給藥后，在生理條件下（例如通 過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉(zhuǎn)化成相應的生物活性形式。
[0055] 本發(fā)明中"鹵素"是指氟、氯、溴或碘代；"烷基"是指直鏈或支鏈的烷基；"亞烷基" 是指直鏈或支鏈的亞烷基；"環(huán)烷基"是指取代或未取代的環(huán)烷基。
[0056] 本發(fā)明可以含有上述通式Μ的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，及其藥 學上可接受的鹽、水合物或溶劑化物作為活性成份，與藥學上可接受的載體或賦型劑混合 制備成組合物，并制備成臨床上可接受的劑型，上述藥學上可接受的賦型劑是指任何可用 于藥學領域的稀釋劑、輔助劑和/或載體。本發(fā)明的衍生物可以與其他活性成份組合使用， 只要它們不產(chǎn)生其他不利的作用，例如過敏反應。
[0057] 本發(fā)明上述通式Μ的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物用于患者的臨床劑 量可以根據(jù):活性成分在體內(nèi)的治療功效和生物利用度、它們的代謝和排泄速率和患者的 年齡、性別、疾病期來進行適當調(diào)整，不過成人的每日劑量一般應當為10~500mg，優(yōu)選為50 ~300mg。因此，當本發(fā)明的藥物組合物被制成單位劑型時，考慮到上述有效劑量，每單位制 劑應當含有10~500mg上述通式的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，優(yōu)選為50~ 300mg。按照醫(yī)生或藥師的指導，這些制劑可以以一定間隔分若干次給藥（優(yōu)選為一至六 次)。
[0058] 本發(fā)明的藥用組合物可配制成若干種劑型，其中含有藥物領域中一些常用的賦形 劑。如上所述的若干種劑型可以采用注射劑、片劑、膠囊劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外 用搽劑和軟膏劑等劑型藥物。
[0059] 用于本發(fā)明藥物組合物的載體是藥物領域中可得到的常見類型，包括:粘合劑、潤 滑劑、崩解劑、助溶劑、稀釋劑、穩(wěn)定劑、懸浮劑、無色素、矯味劑、防腐劑、加溶劑和基質(zhì)等。 藥物制劑可以經(jīng)口服或胃腸外方式(例如靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或局部)給藥，如果某些藥物 在胃部條件下不穩(wěn)定的，可將其配制成腸衣片劑。
[0060] 本發(fā)明的活性化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可作為唯一的抗增生性藥物單 獨使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗增生性藥物聯(lián)合使用，用于治療和/或預防增生性疾病， 如肺癌、前列腺癌、乳腺癌。
[0061] 本發(fā)明化合物體外具有抑制腫瘤細胞生長活性，因此，它可以用作制備治療和/或 預防癌癥的藥物，如乳腺、肺、前列腺細胞瘤等。
[0062]通過體外抑制乳腺癌細胞MCF-7、人前列腺癌細胞PC-3,肺腺癌細胞A549活性實 驗，本發(fā)明化合物對乳腺癌細胞、前列腺癌細胞以及肺腺癌細胞具有顯著抑制作用，特別用 于制備治療和/或預防前列腺癌、乳腺癌的藥物。
[0063]通過對VEGFR激酶活性測試發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物具有顯著的抑制VEGFR激酶活性， 對VEGFR2/KDR高表達的乳腺癌細胞、人前列腺癌細胞等有較強的抑制作用，特別用于制備 治療和/或預防乳腺癌、前列腺癌的藥物。
[0064] 本發(fā)明的活性化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可作為唯一的抗腫瘤藥物單獨 使用，或者可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物(如鉑類藥物順鉑、喜樹堿類藥物伊立替康、長春 花堿類藥物諾維本、脫氧胞昔類藥物吉西他濱、足葉乙甙、紫杉醇等)聯(lián)合使用。聯(lián)合治療通 過將各個治療組分同時、順序或隔開給藥來實現(xiàn)。
【具體實施方式】
[0065] 為了更好地解釋本發(fā)明，以下結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明，但 它們不對本發(fā)明構成限定。
[0066]實施例旨在闡述而不是限制本發(fā)明的范圍。衍生物的核磁共振氫譜用Bruker ARX-400測定，質(zhì)譜用Agi lent 1100LC/MSD測定;所用試劑均為分析純或化學純。
[0067]本發(fā)明實施例1~28的結構式如下表1所示。
[0069] 表1實施例1~28的結構式


[0073] 路線一合成目標化合物：
[0074] 實施例1
[0075] (E)-4-(4-(3_(2-氯-4-氟苯基)丙烯酰基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺 [0076] 步驟1 4-氯吡啶甲酰氯(式2)
[0077] 將10g(0.081mol)的2-吡啶甲酸與1.38(0.013!11〇1)的溴化鈉和1311^氯苯置于 250mL三頸瓶中，升溫至50°C后，緩慢滴加24mL二氯亞砜，滴加完畢繼續(xù)攪拌3分鐘，升溫至 85°C，回流20h。反應完畢，減壓蒸除溶劑及過量的二氯亞砜，加入15mL甲苯攪拌5min后，蒸 除溶劑后，得黃色油狀液體，即4-氯吡啶甲酰氯(式2)，再加入50mL甲苯，該溶液直接用于下 步反應。
[0078] 步驟2 4-氯-N-甲基吡啶甲酰胺(式3)
[0079] 將33 %的甲胺水溶液30mL至于250mL圓底燒瓶，在冰水浴中緩慢滴加步驟1制得4-氯吡啶甲酰氯的甲苯溶液，滴加完畢，室溫攪拌6h』h后反應液抽濾，濾液甲苯層以60mL水 分三次洗滌;水層用20mL甲苯分兩次洗滌，合并甲苯層，減壓蒸干溶劑得棕色油狀液體。油 狀液體溶于60mL四氫呋喃中，緩慢加入25mL的36 %濃鹽酸，并控溫10~20°C，析出粉色固 體，加畢同溫攪拌lh后，抽濾。濾餅溶于80mL水中，以20 %的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH= 7，并控溫15 ~20°C，調(diào)畢同溫攪拌lh，析出淡黃色固體，抽濾洗滌并于20°C以下干燥，得到4-氯-N-甲基 吡啶甲酰胺（式3)。前兩步合并收率70 %左右。純度95%肩.p. : 34-36°C ; 4匪R(400MHz， DMS0)58.85(s,lH),8.63(d ,J = 5.2Hz,lH),8.03(s,lH) ,7.76(d ,J = 5.2Hz , 1H), 2.84(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0080] 步驟3 4-(4-乙?；交?-N-甲基吡啶酰胺(式4)
[0081 ] 將步驟2得到4-氯-N-甲基吡啶甲酰胺3g(0.017mol)及碳酸鉀4.86g(0.035mol)、 對羥基苯乙酮3.47g(0.025mol)溶于100mL的DMS0，160°C回流5h。
[0082] 將反應液冷卻至10~20 °C，加水400mL析出大量褐色固體，同溫攪拌1小時，抽濾， 濾餅干燥，得到4-(4-乙?；交?N-甲基吡啶酰胺（式4)，純度在98%左右，收率為55-60% 〇
[0083] ESI-MS[M+H]m/z:271.2
[0084] 步驟4(E)-4-(4-(3-(2-氯-4-氟苯基)丙烯?；?苯基)-N-甲基吡啶酰胺(式5)
[0085] 將4-(4-乙?；交?-N-甲基吡啶酰胺0.3g(l. 1 lmmol)、2_氯-4-氟苯甲醛0.19g (l.llmmol)溶于20mL甲醇，將lg氫氧化鉀溶于3mL水加入到上述甲醇溶液中，室溫反應12h。 有固體析出，反應液抽濾，濾餅干燥，得淺棕色固體〇. 35g，即（E)-4-(4-(3-(2-氯-4-氟苯 基)丙烯?；?苯基)-N-甲基吡啶(式5)，收率76.9%。
[0086] NMR(400MHz，DMS0)S8.83(d，J = 4.8Hz，lH)，8.59(d， J = 5.6Hz,lH),8.35(dd ,J = 9.4,5.3Hz,2H),8.33(s,lH),8.10(d ,J = 8.8Hz,lH),8.04(d ,J = 6.5Hz,lH) ,8.01 (d,J= 15.6Hz, 1H) ,7.62(dd,J = 8.8,2.6Hz,lH) ,7.51 (d,J = 2.5Hz, 1H) ,7.43(d,J = 5.2Hz,lH),7.42-7.39(m,lH),7.30(dd,J = 5.6,2.6Hz,lH),2.80(d,J = 4.8Hz,3H).
[0087] 按照實施例1的方法，首先以不同取代的苯甲醛與中間體式4按照上述步驟的方法 進行反應，分別得到實施例2~9化合物。
[0088] 實施例2
[0089] (E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基)丙烯?；?苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0090] ESI-MS[M+Na]m/z:426.3;1H NMR(400MHz，DMS0)S8.83(d，J = 4.9Hz，lH)，8.58(t， J = 7.6Hz,lH) ,8.35(d ,J = 5.3Hz,lH) ,8.34(s, 1H), 8.31 (s, 1H) ,8.29(s , 1H) ,8.22(d ,J = 4.5Hz,lH) ,8.19(d,J = 2.3Hz,lH) ,7.86(d,J=15.6Hz,lH) ,7.51(d,J = 2.5Hz,lH) ,7.42 (d,J = 8.7Hz,2H) ,7.34(d,J = 8.7Hz,lH),7.29(dd,J = 5.5,2.6Hz,lH),2.79(d,J = 4.8Hz, 3H).
[0091] 實施例3
[0092] (E)-4-(4-(3_(2,4-二氯苯基)丙烯?；?苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺
[0093] ESI-MS[M+K]m/z:465·2;咕 NMR(400MHz，DMS0)δ8·82(s，1H)，8·59(d，J = 5·5Hz， 1H)，8.33(d，J = 8.7Hz，2H)，8.22(d，J = 8.1Hz，lH)，8.07(s，2H)，7.76(d，J = 8.0Hz，lH)， 7.49(dd,J = 10.0,5.5Hz,2H) ,7.42(d,J = 8.7Hz,2H) ,7.29(dd,J = 5.5,2.5Hz,lH) ,2.79 (d ,J = 4.8Hz,3H).
[0094] 實施例4
[0095] (E)-4-(4-(3_(3,4,5-三甲氧基苯基)丙烯?；?苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺
[0096] ΕΒΙΗ^ΕΜ+ΝαΙπι/ζΜΤυ;1!! NMR(400MHz，CDCl3)S8.82(d，J = 4.2Hz，lH)，8.58(d， J = 5.5Hz,lH) ,8.31 (d,J = 8.5Hz,2H) ,7.94(d,J= 15.5Hz, 1H) ,7.74(d,J= 15.5Hz, 1H), 7.51(d,J = 2. ΙΗζ,ΙΗ) ,7.41(d,J = 8.4Hz,2H) ,7.31-7.27(m,lH) ,7.27(s,2H) ,3.87(s, 5H),3.34(s,3H),2.80(d ,J = 4.7Hz,3H).
[0097] 實施例5
[0098] (E)-4-(4-(3_(4-氰基苯基)丙烯?；?苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺
[0099] ESI-MS[M+K]m/z:422.2；ΧΗ NMR(400MHz,DMS0)δ8.82(d,J = 5.0Hz,1Η),8.58(t,J = 6.5Hz,lH) ,8.34(d,J = 5.8Hz,lH) ,8.32(s,lH) ,8.19-8.12(m, 1H) ,8.12-8.02(m, 1H), 8.02-7.95(m,lH),7.94-7.88(m,lH),7.85-7.75(m,lH),7.50(d,J=2.5Hz,lH),7.43(t,J = 9.7Hz,2H),7.33(d ,J = 8.4Hz,lH),7.29(dd ,J = 5.5,2.4Hz,lH),2.78(t ,J = 8.1Hz,3H).
[0100] 實施例6
[0101] (E)-4-(4-(3-(3-溴苯基)丙烯?；?苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0102] ESI-MS[M+K]m/z : 476.3 ； ΧΗ NMR(400MHz ,DMS0) δ8.82(d ,J = 4.8Hz , 1H), 8.59(d ,J = 5.6Hz,1H),8.35(s,1H),8.33(s,1H) ,8.25(s, 1H), 8.09(d ,J= 15.7Hz , 1H) ,7.89(d ,J = 7.2Hz,lH) ,7.74(d,J=15.8Hz,lH) ,7.65(d,J = 8.0Hz,lH) ,7.51(d,J = 2.5Hz,lH) ,7.44 (d ,J = 5.1Hz,lH),7.43-7.37(m,2H),7.29(dd ,J = 5.6,2.6Hz,lH),2.79(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0103] 實施例7
[0104] (E)-4-(4-(3-(4-氟苯基)丙烯?；?苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0105] NMR(400MHz,DMS0)S8.83(s, 1H) ,8.59((1, J = 5.6Hz, 1H) ,8.31(d ,J = 8.6Hz,2H),8.04-7.97(m,2H),7.78(d ,J=15.7Hz,lH) ,7.51 (s, 1H), 7.40 (d ,J = 8.6Hz,2H),7.33(d ,J = 8.8Hz,2H),7.29(d ,J = 6.7Hz,2H),2.80(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0106] 實施例8
[0107] (E)-4-(4-(3_(4-溴苯基)丙烯酰基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺
[0108] ΕΒΙ-ΜΞ?Μ+Η?πι/ζ^βδ.δ^Η NMR(400MHz ,DMS0)58.83(d ,J = 4.7Ηζ , 1Η), 8.59(t ,J = 5.1Hz,lH),8.32(d,J = 8.7Hz,2H),8.05(d,J=15.6Hz,lH),7.89(d,J = 8.5Hz,2H) ,7.75 (d ,J= 15.6Hz, 1H), 7.68(d,J = 8.4Hz,2H), 7.51 (d,J = 2.5Hz,lH), 7.41 (d,J = 8.7Hz,2H), 7.29(dd ,J = 5.6,2.6Hz,lH),2.80(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0109] 實施例9
[0110] (E)-4-(4-(3-(3,4-二氯苯基)丙烯?；?苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0111] ESI-MS[M+H]m/z:465·2;4 NMR(400MHz，DMS0)δ8·82(s，1H)，8·59(d，J = 5·7Hz， 1H)，8.34(d，J = 5.2Hz，lH)，8.32(d，J = 3.7Hz，2H) ,8.11 (d，J= 14.4Hz，1H)，7.91((1, J = 8.4Hz,lH) ,7.76(d ,J = 6.4Hz,1H),7.73(s,1H),7.51(s,1H) ,7.41 (d ,J = 7.3Hz , 2H), 7.29 (s,lH),2.80(d ,J = 3.8Hz,3H).
[0112] 實施例10
[0113] 步驟5 4-(4-(5-(2,4-二氯苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基）苯氧基)-N-甲基吡啶 酰胺(I)
[0114] 將^)-4-(4-(3-(2,4-二氯苯基）丙烯?；┍窖趸?.甲基吡啶酰胺0.218 (0.5mmo 1)與水合肼0.25g (5mmo 1)溶于1 OmL乙酸，加熱至100 °C反應1~2h。TLC點板檢測反 應完全，冷卻至室溫，加入100mL水中，調(diào)節(jié)pH至6-7,室溫攪拌30min，抽濾干燥得0.13g紫色 固體，g卩4-(4-(5-(2,4-二氯苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺，收 率 59 %。
[0115] ESI-MS[M+Na]m/z:464.1；1H NMR(400MHz ,DMS0)58.80(d ,J = 4.9Hz, 1H) ,8.54(d, J = 5.6Hz,lH) ,7.92(s,lH),7.90(s,lH) ,7.58(d,J = 6.8Hz,lH) ,7.42(d,J = 2.5Hz,lH), 7.33(dd,J=10.0,5.8Hz,2H) ,7.30( s,lH) ,7.22(dd,J = 5.6,2.6Hz,lH) ,7.07(d,J = 7.5Hz,lH),5.80(dd,J=12.1,5.0Hz,lH),4.02(d,J=12.0Hz,lH),3.97(d ,J=11.9Hz, lH),2.78(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0116] 按照實施例10的方法，首先以不同取代的查爾酮衍生物(化合物5)為原料與水合 肼按照上述方法進行反應，分別制得實施例11~18化合物。
[0117] 實施例11
[0118] 4-(4-(5-(3,4，5_三甲氧基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶 酰胺
[0119] ESI-MS[M+H]m/z:463.2；ΧΗ NMR(400MHz,DMS0)δ8.80(d,J = 4.4Hz,1Η),8.55(d,J = 5.5Ηζ,1Η) ,7.91 (d,J = 8.7Hz,2H) ,7.43(d,J = 2.5Hz, 1H) ,7.33(s,lH) ,7.31 (s,lH), 7.23(dd,J = 5.6,2.5Hz, 1H) ,6.48(s,2H) ,5.49(dd,J=12.2,5. ΙΗζ,ΙΗ) ,3.86(q,J = 12.0Hz,2H),3.66(dd ,J = 42.5,15.3Hz,9H),2.78(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0120] 實施例12
[0121] 4-( 4-( 5-( 2-氯-4-氟苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0122] ΕΒΙ-ΜΞ?Μ+Κ?πι/ζ^θβ.β^Η NMR(400MHz ,DMS0)58.80(d, J = 4.9Hz,lH) ,8.54(d, J = 5.5Hz,lH) ,7.91(d,J = 8.7Hz,2H) ,7.50(dd,J = 8.8,2.4Hz,lH) ,7.42(d,J = 2.5Hz, 1H) ,7.32(d,J = 8.7Hz,2H) ,7.22(dd,J = 5.6,2.6Hz,lH) ,7.17(dd,J = 8.0,2. ΙΗζ,ΙΗ), 7.14(s,lH) ,5.74(dd,J=12.0,5.2Hz,lH) ,3.97(dd,J=18.0,11.9Hz,lH),3.14(dd,J = 15.2,5.1Hz,lH),2.78(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0123] 實施例13
[0124] 4-( 4-( 5-( 3-溴苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0125] ESI-MS[M+H]m/z : 452 · 1;咕 NMR(400MHz，DMS0)δ8 · 81 (s, 1H), 8 · 55(d, J = 5 · 4Hz， 1H) ,7.91(d ,J = 8.2Hz,2H),7.49-7.42(m,3H),7.35-7.28(m,3H) ,7.21 (d ,J = 7.2Hz , 2H), 5.56(dd,J = 11.8,4.6Hz,lH) ,3.89(dd,J=18.0,12.2Hz,lH) ,3.23(dd,J=18.3,4.5Hz, lH),2.79(d ,J = 4.4Hz,3H).
[0126] 實施例14
[0127] 4-( 4-( 5-( 4-硝基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0128] ESI-MS[M+H]m/z : 418 · 3;咕 NMR(400MHz，DMS0)δ8 · 81 (d，J = 4 · 7Hz，1H)，8 · 55(d，J = 5.5Hz,lH),8.27-8.16(m,2H),7.92(d ,J = 8.5Hz,2H),7.50(t ,J = 10.6Hz,2H),7.42(d ,J = 2.3Hz,lH) ,7.33( t,J = 9. lHz,2H) ,7.23(dd,J = 5.5,2.5Hz,lH) ,5.70(dd,J= 12.0, 5.0Hz,lH),4.02-3.95(m,lH),3.93(d ,J=12.0Hz,lH),3.23(d ,J = 5.0Hz,lH),2.78(d ,J = 4.7Hz,3H).
[0129] 實施例15
[0130] 4-( 4-( 5-( 4-氰基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)- N-甲基吡啶酰胺
[0131] ΕΒΙ-ΜΞ?Μ+Η?πι/ζιβθδ.β^Η NMR(400MHz ,CDC13)58.82(d ,J = 4.7Ηζ , 1Η) ,8.55(d ,J = 5.5Hz,lH) ,7.92(s,lH) ,7.90(s,lH) ,7.82(d,J = 7.3Hz,lH) ,7.78(s,lH),7.43(d,J = 4.5Hz,lH) ,7.43-7.37(m,2H) ,7.32( t,J = 9.2Hz,2H) ,7.23(dd,J = 5.5,2.5Hz,lH) ,5.64 (dd ,J=11.9,4.8Hz,lH) ,3.95(d,J= 12. ΙΗζ,ΙΗ) ,3.91 (d,J= 12.0Hz, 1H) ,3.20(d,J = 4.8Hz,lH),2.78(d ,J = 4.7Hz,3H).
[0132] 實施例16
[0133] 4-(4-(5-(4-氟苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0134] ΕΒΙΗ^ΕΜ+?πι/ζ^θυ;1!! NMR(400MHz,DMS0)S8.81(s，lH)，8.55(d，J = 5.5Hz， 1H)，7.92(d，J = 8.6Hz，2H)，7.43(s，lH)，7.33(d，J = 8.2Hz，2H) ,7.30-7.25(m，2H) ,7.24 (d，J = 6 · 9Hz，1H)，7 · 16(t，J = 8 ·6Ηζ，2H)，5.57(d，J = 7.6Hz，lH)，3.93-3.83(m，lH) ,3.20 (dd ,J = 18.1,4.3Hz,lH),2.79(d ,J = 4.5Hz,3H).
[0135] 實施例17
[0136] 4-( 4-( 5-( 4-溴苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0137] ΕΒΙΗ^ΕΜ+?πι/ζ^δ〗^;1!! NMR(400MHz,DMS0)S8.80(s, 1H) ,8.55((1, J = 5.5Hz, 1H) ,7.91(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.53(d,J = 8.3Hz,2H) ,7.43(d,J = 2.5Hz,lH) ,7.33(d,J = 8.6Hz,2H),7.22(dd ,J = 5.5,2.6Hz,lH),7.18(d ,J = 8.4Hz,2H),5.54(dd ,J=11.6,4.6Hz, lH),3.89(dd ,J = 18.2,11.9Hz,lH),3.20(dd ,J = 18.0,4.5Hz,lH),2.78(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0138] 實施例18
[0139] 4-(4-(5-(3,4-二氯苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺
[0140] NMR(400MHz，DMS0)S8.80(d，J = 5.3Hz，lH)，8.55(d, J = 5.6Hz，lH)，7.91(d，J = 8.4Hz，2H)，7.60(d，J = 8.2Hz，lH)，7.52(s，lH)，7.43(s，lH)， 7.34(d,J = 8.2Hz,2H),7.22(t,J = 8.1Hz,2H),5.57(dd,J=11.9,4.8Hz,lH) ,3.89(dd,J = 18.1,11.9Hz,lH),3.27(dd ,J = 18.2,4.7Hz,lH),2.79(d ,J = 4.6Hz,3H).
[0141] 實施例19
[0142] 步驟6 4-(4-(5-(4-硝基苯基）-4,5-二氫異唑-3-基）苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺 (II)
[0143] 將（E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基）丙烯酰基）苯氧基）-N-甲基吡啶酰胺0.135g (0.33mol)與輕胺鹽酸鹽水溶液0.023g(0.33mmol)溶于10mL甲醇，室溫下滴入氫氧化鈉水 溶液2mL，反應液攪拌回流20ΚΤΙΧ點板檢測反應完全，冷卻至室溫，旋蒸，得到的液體加入 50mL水調(diào)節(jié)pH至5-6，析出米色固體，抽濾、干燥得到0.08g。即4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4，5-二氫異唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺，收率58%。
[0144] ESI-MS[M+H]m/z:419.3
[0145] 實施例20
[0146] 步驟7 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代-1，2,5,6-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲 基吡啶酰胺(III)
[0147] 將（E)-4-(4-(3_(4-硝基苯基）丙烯?；┍窖趸?N_甲基吡啶酰胺0.135g (0.33臟〇1)與尿素0.28(3.3臟〇1)溶于101^甲醇，加熱至65°(：反應1一211。11(：點板檢測反應 完全，冷卻至室溫，加入100mL水，20mL乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉干燥半小時，旋蒸有機相 得到0.08g橙色固體，即4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代-1，2,5,6-四氫嘧啶-4-基)苯基)-N-甲基吡啶酰胺，收率51%.
[0148] ESI-MS[M+H]m/z:446.2
[0149] 實施例21
[0150] 步驟8 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-硫代-1，2,5,6-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲 基吡啶酰胺(IV)
[0151] 將（E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基）丙烯酰基）苯氧基）-N-甲基吡啶酰胺0.135g (0.33mmol)與硫脲0.25g(3.3mmol)溶于10mL甲醇，加熱至65°C反應3.5ΚΤΙΧ點板檢測反應 完全，冷卻至室溫，加入100mL水，60mL乙酸乙酯分3次萃取，無水硫酸鈉干燥半小時，旋蒸有 機相得到0.09g淡黃色固體，即4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-硫代_1，2,5，6_四氫嘧啶-4-基） 苯基)-N-甲基吡啶酰胺，收率50 · 2 % ·
[0152] ESI-MS[M+H]m/z:461.2
[0153] 路線二合成目標化合物：
[0154] 實施例22
[0155] 步驟一 4-(4-甲?；交?-N_甲基吡啶酰胺(式a)
[0156] 將路線一合成目標化合物的步驟2得到4-氯-N-甲基吡啶甲酰胺3g(17mm〇l)、叔丁 醇鉀3.92g(35mmol)、對羥基苯甲醛3.05g(25mmol)溶于 100mL的DMF，153°C 回流5h。經(jīng)TLC檢 測，反應基本完全。
[0157] 反應液冷卻至室溫，加入150mL水，3*50mL二氯甲烷萃取，有機層用大量水洗，旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)出去二氯甲烷，有固體析出，用異丙醇洗滌，過濾得淡黃色固體2.5g，即4-(4-甲?；?基)-N-甲基吡啶酰胺(式a)，純度在97%左右，收率為58.1%。
[0158] ESI-MS[M+H]m/z:257.2
[0159] 步驟二(E)-4-(4-(3_(4-硝基苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺(式b)
[0160] 將4-硝基苯乙酮(0.09g，0.56mmol)溶于10mL甲醇，0.024g的NaH加入上述甲醇溶 液中，室溫攪拌lh。同時將步驟一制得的4-(4-甲?；交?N-甲基吡啶酰胺（0.15g， 0.56mmol)溶于10mL甲醇，室溫攪拌。lh后將4-(4-甲?；交?-N-甲基吡啶酰胺溶液滴入 4-硝基苯乙酮甲醇溶液中，經(jīng)TLC檢測，15h反應完全。有固體析出，過濾干燥得棕色固體 0.16g，即（E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺(式b)，收率 71.1%。
[0161] ΕΒΙΗ^ΕΜ+?πι/ζΜΟ?1!! NMR(400MHz，DMS0)S8.81(s，lH)，8.56(d，J = 5.6Hz， lH),8.39(s,4H) ,8.08(d ,J = 8.5Hz , 2H) ,7.99(d ,J = 15,6Hz, 1H) ,7.86(d ,J= 15.8Hz , 1H), 7.46(s,lH),7.34(d ,J = 8.6Hz,2H),7.26-7.21(m,lH),2.79(d ,J = 4.7Hz,3H).
[0162] 按照實施例22的方法，以不同取代的苯乙酮與中間體a按照上述方法進行反應，分 別制得實施例23~24化合物。
[0163] 實施例23
[0164] (E)-4-(4-(3_(4-溴苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺
[0165] ESI-MS[M+H]m/z : 438 · 4; 4 NMR(400MHz，DMS0) δ8 · 80(d，J = 4 · 4Hz，1H)，8 · 56(d，J = 5.5Hz,lH),8.12(d,J = 8.3Hz,2H),8.06(d,J = 8.3Hz,2H),7.95(d,J=15.7Hz,lH) ,7.83 (d,J = 5.3Hz,lH),7.80(d,J = 7.9Hz,2H),7.46(s,lH) ,7.33(d,J = 8.3Hz,2H) ,7.26-7.20 (m,lH),2.79(d ,J = 4.6Hz,3H).
[0166] 實施例24
[0167] (E)-4-(4-(3_(4-氯苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N_甲基吡啶酰胺
[0168] ESI-MS[M+H]m/z:493.5；ΧΗ NMR(400MHz,DMS0)δ8.80(d,J = 4.8Hz,1Η),8.55(t,J = 7.7Hz,lH),8.20(d ,J = 8.5Hz,2H), 8.05(t,J= 10.2Hz, 2H), 8.00-7.92(m,lH), 7.81 (dj = 15.6Ηζ,1Η), 7.66(d,J = 8.5Hz,2H) ,7.46(d,J = 2.5Hz,lH) ,7.33(d,J = 8.5Hz,2H), 7.24(dd ,J = 5.5,2.5Hz,lH),2.79(d ,J = 4.8Hz,3H).
[0169] 實施例25
[0170] 步驟三4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-5-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰 胺(式c)
[0171] 將（E)-4-(4-(3_(4-硝基苯基）羰基丙烯基）苯氧基）-N_甲基吡啶酰胺O.llg (0 · 25mmol)與水合餅0 · 125g(2 · 55mmol)溶于12mL乙醇，在加入0 · 034g(0 · 25mmol)醋酸納， 加熱至78°C反應6~81UTLC點板檢測反應完全，冷卻至室溫，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)出去乙醇，加入冰水 中，室溫攪拌3011^11，析出固體，抽濾干燥得0.068棕色固體，8卩4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-5-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺，收率65%。
[0172] ESI-MS[M+H]m/z:418.4
[0173] 實施例26
[0174] 步驟四4-(4-(5-(4-硝基苯基）-4,5-二氫異唑-5-基）苯氧基）-N_甲基吡啶酰胺 (式d)
[0175] 將（E)-4-(4-(3_(4-硝基苯基）羰基丙烯基）苯氧基）-N_甲基吡啶酰胺0.135g (0.33111〇1)與羥胺鹽酸鹽水溶液0.0238(0.33臟〇1)溶于101^乙醇，室溫下滴入50%氫氧化 鈉乙醇溶液2mL，反應液攪拌回流24KTLC點板檢測反應完全，冷卻至室溫，旋蒸，得到的液 體加入50mL水，抽濾、干燥得到0.07g固體，即4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5_二氫異唑-5-基） 苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺，收率57%。
[0176] ESI-MS[M+H]m/z:419.3
[0177] 實施例27
[0178] 步驟五4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代-2,3,4,5-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)4-甲 基吡啶酰胺(式e)
[0179] 將（E)-4-(4-(3_(4-硝基苯基）羰基丙烯基）苯氧基）-N_甲基吡啶酰胺0.135g (0 · 33mmol)與尿素0 · 2g(3 · 3mmol)溶于10mL乙醇，再加入2 · 5mL氫氧化鈉乙醇溶液(2g)，加 熱至78°C反應8-10h。TLC點板檢測反應完全，冷卻至室溫，倒入冰水中，攪拌lh，在冰箱中靜 置24h，有固體析出，抽濾、水洗、干燥得到0.09g淡黃色固體，即4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代-2，3，4，5-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺，收率52% .
[0180] ESI-MS[M+H]m/z:446.3
[0181] 實施例28
[0182] 步驟六4-(4-(6-( 4-硝基苯基)-2-硫代-2,3,4，5_四氫嘧啶-4-基）苯氧基)-N-甲 基吡啶酰胺(式f)
[0183] 將（E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基）羰基丙烯基）苯基）-N-甲基吡啶酰胺0.135g (0.33mmo 1)與硫脲0.25g(3.3mmo 1)溶于1 OmL乙醇，再加入2.5mL氫氧化鈉乙醇溶液(2g)，加 熱至78°C反應8-10h。TLC點板檢測反應完全，冷卻至室溫，倒入冰水中，攪拌lh，在冰箱中靜 置24h，有固體析出，抽濾、水洗干燥得到0.08g淡黃色固體，即4-( 4-(6-(4-硝基苯基)-2-硫 代-2，3，4，5-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺，收率53.3% .
[0184] ESI-MS[M+H]m/z:462.3
[0185] 本發(fā)明產(chǎn)物的藥理研究
[0186] 體外細胞毒活性
[0187] 對按照本發(fā)明的上述通式Μ的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物進行了體 外抑制乳腺癌細胞MCF-7、肺癌細胞Α549、前列腺癌PC-3活性篩選，對照品索拉非尼按照文 獻所述方法制備得到。
[0188] 1)細胞復蘇并傳代2-3次穩(wěn)定后，用胰蛋白酶溶液(0.25 % )使其從培養(yǎng)瓶底部消 化下來。將細胞消化液倒入離心管中后，之后加入培養(yǎng)液以終止消化。將離心管在800r/min 下離心10min，棄去上清液后加入5mL培養(yǎng)液，吹打混勻細胞，吸取10yL細胞混懸液加入細胞 計數(shù)板中計數(shù)，調(diào)整細胞濃度為1〇 4個/孔。96孔板中除A1孔為空白孔不加細胞外，其余皆加 入1 OOyL細胞混懸液。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。
[0189] 2)用50yL二甲基亞砜溶解受試樣品，然后加入適量培養(yǎng)液，使樣品溶解成2mg/mL 藥液，然后在24孔板中將樣品稀釋為20、4、0.8、0.16、0.032yg/mL。
[0190] 每個濃度加入3孔，其中周圍兩行兩列細胞長勢受環(huán)境影響較大，只和為空白細胞 孔使用。將96孔板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。
[0191] 3)將96孔板中帶藥培養(yǎng)液棄去，用磷酸緩沖溶液(PBS)將細胞沖洗兩遍，在每孔中 加入MTT(四氮唑）（0.5mg/mL) 100yL放入培養(yǎng)箱中4h后，棄去MTT溶液，加入二甲基亞砜100μ L。在磁力振蕩器上振蕩使存活細胞與ΜΤΤ反應產(chǎn)物甲臜充分溶解，放入酶標儀中測定結果。 通過Bliss法可求出藥物IC5Q值。
[0192] 化合物的抑制乳腺癌細胞MCF-7、肺癌細胞A549、前列腺癌PC-3活性結果見表2。
[0193] 實驗結果如表2所示。表1中抑制率> = 80%，以"+++"表示，80%>抑制率> = 60%， 以"++"表示，60%>抑制率> = 40%，以"+"表示，抑制率〈 = 40%，以表示，"NA"表示無活 性，"ND"表不未測試。
[0194] 表2目標化合物體外抗腫瘤活性和酶活性
[0195]


[0198] 從上述試驗結果可以清楚地看出，本發(fā)明所要保護的上述通式Μ的化合物，具有良 好的體外抗腫瘤活性，相當或優(yōu)于已上市的抗腫瘤藥物索拉非尼。
[0199] 本發(fā)明中上述通式Μ的化合物可單獨施用，但通常是和藥用載體混合物給予，所述 藥用載體的選擇要根據(jù)所需用藥途徑和標準藥物實踐，下面分別用該類化合物的各種藥物 劑型，例如片劑、膠囊劑、注射劑、氣霧劑、栓劑、膜劑、滴丸劑、外用搽劑和軟膏劑的制備方 法，說明其在制藥領域中的新應用。
[0200] 應用例1:片劑
[0201 ]以實施例1化合物10g，按照藥劑學一般壓片法加輔料20g混勻后，壓制成100片，每 片重300mg。
[0202]應用例2:膠囊劑
[0203]以實施例11化合物10g，按照藥劑學膠囊劑的要求將輔料20g混勻后，裝入空心膠 囊，每個膠囊重300mg。
[0204]應用例3:注射劑
[0205]以實施例19化合物10g，按照藥劑學常規(guī)方法，進行活性炭吸附，經(jīng)0.65μπι微孔濾 膜過濾后，填入氮氣罐制成水針制劑，每只裝2mL，共灌裝100瓶。
[0206] 應用例4:氣霧劑
[0207]以實施20化合物10g，用適量丙二醇溶解后，加入蒸餾水及其他輻料后，制成500mL 的澄清溶液即得。
[0208] 應用例5:栓劑
[0209] 以實施例21化合物10g，將之研細加入甘油適量，研勻后加入已熔化的甘油明膠， 研磨均勻，傾入已涂潤滑劑的模型中，制得栓劑50顆
[0210] 應用例6:膜劑
[0211] 以實施例23化合物10g，將聚乙烯醇、藥用甘油、水等攪拌膨脹后加熱溶解，80目篩 網(wǎng)過濾，再將實施例15化合物加入到濾液中攪拌溶解，涂膜機制膜100片。
[0212] 應用例7:滴丸劑
[0213] 以實施例25化合物15g，與明膠等基質(zhì)50g加熱熔化混勻后，滴入低溫液體石蠟中， 共制得滴丸1000丸。
[0214] 應用例8:外用搽劑
[0215] 以實施例26化合物10g，按照常規(guī)藥劑學方法與乳化劑等輔料2.5g混合研磨，再加 蒸餾水至200mL制得。
[0216] 應用例9:軟膏劑
[0217] 以實施例27、28化合物10g，研細后與凡士林等油性基質(zhì)500g研勻制得。
[0218] 盡管已經(jīng)通過特定實施方案描述了本發(fā)明，但修改和等價變化對于精通此領域的 技術人員而言是顯見的，且它們都包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
【主權項】
1. 一種含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物，其特征在于，結構式如通式Μ所示： 、… ' R為1~4個相同或不同的選自氫、鹵素、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、疊氮基、硝 基、氛基、疏基、Ci~C4《元基、(?~Cfi環(huán)丨元基、Ci~C4烯基、Ci~C4炔基、Ci~〇4丨元氧基、Ci~Cd元 硫基、稀丙基、（2-甲基)稀丙基、Ci~C4烷氧基甲基、Ci~C4烷基醜基或Ci~C3亞烷基_?氧基 的取代基； 心為1~4個相同或不同的選自氫或鹵素的取代基；2. 根據(jù)權利要求1所述的含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物，其特征在于：R為1~4個相同或不同的選自氫、氟、氯、溴、羥基、三氟甲基、三氟甲氧基、氨基、疊氮 基、硝基、氰基、巰基、甲基、乙基、叔丁基、丙烯基、乙炔基、甲氧基、乙氧基、環(huán)丙氧基、叔丁 氧基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、異丙氧基甲基、甲?；?、乙?；⒈；颦h(huán)丙?；? Ri選自氫、氟、氯、溴或碘。3. 根據(jù)權利要求1所述的含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物，其特征在于:所述通式 Μ的化合物為選自下列化合物中的一種： (Ε)-4-(4-(3-(2-氯-4-氟苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (Ε)-4-(4-(3-(4-硝基苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (Ε)-4-(4-(3-(2,4-二氯苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (Ε)-4-(4-(3-(3,4,5-三甲氧基苯基)丙烯酰基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (Ε)-4-(4-(3-(4-氰基苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (Ε)-4-(4-(3-(3-溴苯基)丙烯?；?苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (Ε)-4-(4-(3-(4-氟苯基)丙烯酰基)苯氧基)-Ν-甲基吡啶酰胺、 (E)-4-(4-(3-(4-溴苯基)丙烯酰基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 (E)-4-(4-(3-(3,4-二氯苯基)丙烯酰基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(2，4_二氯苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(3,4，5_三甲氧基苯基）-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基）苯氧基）-N-甲基吡啶酰 胺、 4-(4-(5-(2-氯-4-氟苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(3-溴苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-氰基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-氟苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-溴苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(3，4_二氯苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫異唑-3-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代-1，2,5,6-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4- (4- (6- (4-硝基苯基)-2-硫代-1，2，5，6-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 (E)-4-(4-(3-(4-硝基苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 (E)-4-(4-(3-(4-溴苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 (E)-4-(4-(3-(4-氯苯基)羰基丙烯基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫-1H-吡唑-5-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(5-(4-硝基苯基)-4,5-二氫異唑-5-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4-(4-(6-(4-硝基苯基)-2-氧代-2，3,4,5_四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺、 4- (4- (6- (4-硝基苯基)-2-硫代-2，3，4，5-四氫嘧啶-4-基)苯氧基)-N-甲基吡啶酰胺。4. 一種根據(jù)權利要求1所述的含查爾酮類似結構的索拉非尼衍生物的制備方法，其特 征在于:所述含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物按照如下反應路線制備得到：s 關鍵中間體4和a以2-吡啶甲酸為原料，經(jīng)氯代、酰胺化、取代反應制備得到;化合物5和 b分別由化合物4與取代苯甲醛和化合物a與取代苯乙酮經(jīng)羥醛縮合反應得到;化合物1、11、 III、IV和C、d、e、f分別由化合物5、b與水合肼、羥胺水溶液、脲或硫脲縮合制備得到;合成路 線中的化合物的取代基定義與通式Μ目標化合物的取代基定義相同。5. -種如權利要求1所述的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，在制備治療和/ 或預防增生性疾病藥物中的應用。6. -種如權利要求1所述的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，在制備治療和/ 或預防癌癥的藥物中的應用。7. -種如權利要求1所述的含查爾酮及其類似結構的索拉非尼衍生物，在制備治療和/ 或預防前列腺癌、肺癌、乳腺癌的藥物中應用。
【文檔編號】A61K31/513GK105949117SQ201610303941
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月10日
【發(fā)明人】鄭鵬武, 朱五福, 王敏, 徐珊, 唐啟東, 武春江, 王文惠, 王林嘯, 歐陽宜強
【申請人】江西科技師范大學