專(zhuān)利名稱(chēng)：一種查爾酮肟及其組合物、制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種查爾酮肟，具體來(lái)說(shuō)是涉及2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮肟，并涉及其制備方法，以其為活性成分的組合物和在治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病，已成為人類(lèi)僅次于腦血管病的第二位死因。細(xì)胞毒類(lèi)的腫瘤化療藥物已發(fā)展幾十年，治療腫瘤已接近或達(dá)到平臺(tái)期，迫切需要新的治療藥物或方法。
許多腫瘤中存在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的異常，如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)在血管生成在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，上皮細(xì)胞腫瘤中常見(jiàn)EGFR家族受體的過(guò)度表達(dá)，乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌等常見(jiàn)上皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2受體)的擴(kuò)增和過(guò)度表達(dá)，膠質(zhì)瘤中常見(jiàn)血小板衍生性生長(zhǎng)因子受體(PDGFR)家族的過(guò)度表達(dá)等。這些受體的過(guò)度表達(dá)或生長(zhǎng)因子的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致受體的過(guò)度激活以及胞內(nèi)激酶突變激活等，導(dǎo)致其下游信號(hào)途徑的增強(qiáng)，激活Ras/MAPK、PI3K/AKT等信號(hào)途徑，最終導(dǎo)致細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、增殖和抵抗細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞存活。因此，許多學(xué)者致力于從阻斷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑角度來(lái)研究新的抗腫瘤藥物，并且已取得了巨大的突破，如針對(duì)HER2受體的人源化抗體HerceptinTM已被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于HER2過(guò)表達(dá)的乳腺癌的治療、針對(duì)EGFR酪氨酸激酶的Iressa治療非小細(xì)胞肺癌等，針對(duì)VEGF的抗體Avastin治療晚期轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌。血管生成是指從已存在的血管床產(chǎn)生新血管的過(guò)程，許多疾病如腫瘤，可出現(xiàn)持續(xù)的、不可控制的血管生成。血管生成不僅是腫瘤生長(zhǎng)所必需的，而且也是導(dǎo)致腫瘤向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的原因。腫瘤血管生成，是腫瘤防治研究中的一個(gè)新領(lǐng)域。VEGF是血管生成的強(qiáng)烈刺激因子，其受體的激活是血管生成步驟中重要的一步，干擾血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑已成為腫瘤治療的新策略。目前進(jìn)入臨床試驗(yàn)的針對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體的抗血管生成抑制劑有SU5416、SU6668、ZK222584等，其中SU5416在進(jìn)入臨床試驗(yàn)后由于療效不佳被終止。SU11248同樣是針對(duì)PDGFR、VEGFR、FLT3、KIT等多種受體酪氨酸激酶抑制劑對(duì)白血病、實(shí)體瘤表現(xiàn)有明顯的效果，很可能于近期批準(zhǔn)為新的抗腫瘤藥物。血管生成是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，除了VEGF/VEGFR信號(hào)途徑外，許多受體酪氨酸激酶參與血管生成，EGFR、HER2、PDGFR、FGFR等均能促進(jìn)血管生成，因此靶向多種受體酪氨酸激酶的抑制劑的多靶點(diǎn)藥物在臨床上表現(xiàn)更好的療效，具有著更好的前景，是當(dāng)代國(guó)際上抗腫瘤新靶點(diǎn)藥物研究的主要方向。抑制多種受體酪氨酸激酶不僅能更好地抑制與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的血管生成，同時(shí)對(duì)高表達(dá)酪氨酸激酶受體的腫瘤細(xì)胞具有很好的生長(zhǎng)抑制作用，即抑制血管生成又能抑制腫瘤細(xì)胞本身的生長(zhǎng)，因此作為抗腫瘤藥物具有顯著的優(yōu)勢(shì)。
國(guó)際上已發(fā)現(xiàn)查爾酮衍生物具有抗血管生成作用(參考文獻(xiàn)WO 01/46110)。國(guó)內(nèi)，我們從植物中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)抗血管生成天然查爾酮衍生物(2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮，DMD)并證明其具有顯著的體內(nèi)抗瘤作用(參考文獻(xiàn)Mol Pharmacol，2005，671444-1450)。但天然查爾酮普遍溶解性較差，難以通過(guò)注射給藥，而口服的生物利用度較低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于開(kāi)發(fā)出一種具有抗癌作用且溶解性好的查爾酮衍生物，另一目的是提供這種化合物的制備方法，進(jìn)一步的目的是提供以這種化合物為活性成分的組合物，另一目的是提供這種化合物及其組合物在預(yù)防和治療腫瘤中的應(yīng)用。
本發(fā)明通過(guò)2′，4′-二羥基-6’-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮與鹽酸羥胺在吡啶中經(jīng)加熱回流反應(yīng)得到2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮肟，該化合物溶解性好，并且以這種化合物為活性成分制成了有抗腫瘤作用的組合物，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
本發(fā)明的一種查爾酮肟，其特征是結(jié)構(gòu)由式(1)表示 式(1)本發(fā)明的一種查爾酮肟的制備方法，其特征是2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮與鹽酸羥胺在吡啶中溶解，加熱回流，分離，純化得到產(chǎn)物。
所述的2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮可以用常規(guī)的方法制備，例如參考文獻(xiàn)張鳳仙等，植物學(xué)報(bào)，1990，32(6)469-472，所述的回流時(shí)間可以是2小時(shí)，所述的分離可以采用通常的方法，例如將回流液在水中或酸性水中沉淀，然后過(guò)濾收集沉淀，所述的純化是將上述沉淀用乙酸乙酯溶解，溶液用水洗后減壓濃縮至干，上硅膠柱，以體積比6∶1石油醚-丙酮洗脫分離。
本發(fā)明的組合物含有治療有效量的上述式(1)的化合物為活性成分，以及含有一種或一種以上藥學(xué)上可以接受的載體。
上文所述藥學(xué)上可以接受的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，本發(fā)明的組合物可以使用通常的藥物劑型，例如注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑、溶液、懸浮劑或乳劑的形式，通過(guò)口服、靜脈、肌肉、皮膚給藥用于預(yù)防和治療惡性腫瘤，各種劑型可以按照藥物領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
本發(fā)明上述式(1)的化合物及其組合物可用于治療腫瘤。
本發(fā)明的查爾酮肟溶解性好，可以直接注射給藥，并且經(jīng)試驗(yàn)表明，能顯著抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體、HER2受體、PDGFR受體酪氨酸激酶的活性，抑制乳腺癌、肝癌等細(xì)胞的體外生長(zhǎng)，對(duì)ECV304細(xì)胞中KDR磷酸化、MDA-MB-453細(xì)胞中HER2磷酸化、C6細(xì)胞中PDGFR受體磷酸化均有明顯的抑制作用，呈現(xiàn)濃度效應(yīng)關(guān)系，而KDR受體、HER2受體、PDGFR受體蛋白表達(dá)水平不受其影響。


圖1DMDO對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶磷酸化(phospho-KDR)的抑制作用圖2DMDO對(duì)上皮生長(zhǎng)因子受體2酪氨酸激酶磷酸化(phospho-HER2)的抑制作用圖3DMDO對(duì)血小板衍生性生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶磷酸化(phospho-PDGFR)的抑制作用
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。
實(shí)施例1式(1)的化合物的制備取2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮100mg、鹽酸羥胺100mg，加入7mL吡啶溶解，加熱回流2小時(shí)，將反應(yīng)液倒入50mL 1mol/L的鹽酸水溶液中，過(guò)濾收集沉淀，用乙酸乙酯溶解，將乙酸乙酯溶液轉(zhuǎn)入一分液漏斗中用水洗三次，減壓濃縮至干，上硅膠柱，以石油醚-丙酮(體積比6∶1)洗脫分離獲得產(chǎn)物。
實(shí)施例2實(shí)施例1產(chǎn)物的鑒定黃色粉末狀固體。正離子HRTOFMS(m/z)314.1398[C18H19NO4+H]+(計(jì)算值314.1392)。正離子ESIMS352[M+K]+，336[M+Na]+，314[M+H]+，296[M-H2O+H]+，280，220，208，193，103。1H NMR(400MHz，acetone-d6)7.42(2H，d，J＝8.0Hz，H-2和H-6)，7.30(2H，t，J＝8.0Hz，H-3和H-5)，7.22(1H，t，J＝8.0Hz，H-4)，7.05(1H，d，J＝16Hz，H-β)，6.41(1H，d，J＝16Hz，H-α)，3.53(3H，s，OCH3)，2.11(3H，s，CH3)，2.09(3H，s，CH3)；13C NMR(100MHz，acetone-d6)155.8(C×2)，155.1(C)，151.2(C)，137.6(C)，134.6(CH)，129.4(CH×2)，128.8(CH)，127.5(CH×2)，127.0(CH)，110.0(C)，108.4(C)，107.0(C)，61.0(OCH3)，9.3(CH3)，9.2(CH3)。通過(guò)分析，證實(shí)實(shí)施例1得到的產(chǎn)物是式(1)的化合物，即2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮肟(DMDO)。
實(shí)施例3DMDO對(duì)受體酪氨酸激酶磷酸化的抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的ECV304(VEGFR2或KDR)、MDA-MB-453(HER2)、C6(PDGFR)細(xì)胞，用培養(yǎng)液配成5×105/mL，再將其加入12孔板中，每孔加入1mL。第2天，將培養(yǎng)液吸出，并加入無(wú)血清培養(yǎng)液，再加入受試不同濃度DMDO處理30分鐘，分別應(yīng)用抗KDR、抗HER2、抗PDGFR的抗體進(jìn)行免疫沉淀，再用抗磷酸酪氨酸抗體Western blot檢測(cè)KDR、HER2、PDGFR磷酸化水平。結(jié)果見(jiàn)附圖1～3。
實(shí)施例4DMDO對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453、肝癌細(xì)胞Hep3B等體外生長(zhǎng)的抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453、肝癌細(xì)胞Hep3B加入96孔板中，每孔100μL含有2000～4000個(gè)細(xì)胞。再加入藥物，每組設(shè)3個(gè)平行孔，置37℃培養(yǎng)72小時(shí)，實(shí)驗(yàn)終止前4h加入10μL 5mg/mL MTT液，再培養(yǎng)4h，棄去培養(yǎng)液加入0.2mL DMSO，待結(jié)晶溶解后在酶聯(lián)檢測(cè)儀上檢測(cè)570nm波長(zhǎng)的每孔的0D值。按下列公式求出生長(zhǎng)抑制率，再按BLISS法計(jì)算機(jī)程序求出半數(shù)抑制率(IC50值)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 DMDO對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-453、肝癌細(xì)胞Hep3B的體外生長(zhǎng)抑制作用

權(quán)利要求
1.下述式(1)的化合物 式(1)
2.式(1)的化合物的制備方法，其特征是2′，4′-二羥基-6′-甲氧基-3′，5′-二甲基查爾酮，鹽酸羥胺在吡啶中溶解，加熱回流，分離，純化得到產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的式(1)的化合物的制備方法，其特征是所述的回流時(shí)間是2小時(shí)，所述的分離是將回流液在水中或酸性水中沉淀，然后過(guò)濾收集沉淀，所述的純化是將所述沉淀用乙酸乙酯溶解，其溶液用水洗后減壓濃縮至干，上硅膠柱，以體積比6∶1石油醚-丙酮洗脫分離。
4.用于治療腫瘤的權(quán)利要求1化合物的組合物，其特征在于，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可以接受的載體。
5.權(quán)利要求1的化合物在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及下述式(1)表示的查爾酮肟，還涉及該化合物的組合物、制備方法和在治療腫瘤的應(yīng)用。本發(fā)明式(1)化合物通過(guò)2′，4′－二羥基－6′－甲氧基－3′，5′－二甲基查爾酮與鹽酸羥胺在吡啶中經(jīng)加熱回流反應(yīng)得到。該化合物溶解性好，可以直接注射給藥，并且經(jīng)試驗(yàn)表明，能顯著抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體、HER2受體、PDGFR受體酪氨酸激酶的活性，抑制乳腺癌、肝癌等細(xì)胞的體外生長(zhǎng)，對(duì)ECV304細(xì)胞中KDR磷酸化、MDA－MB－453細(xì)胞中HER2磷酸化、C6細(xì)胞中PDGFR受體磷酸化均有明顯的抑制作用，呈現(xiàn)濃度效應(yīng)關(guān)系，而KDR受體、HER2受體、PDGFR受體蛋白表達(dá)水平不受其影響，因而顯示了良好的抗腫瘤活性，可用于治療腫瘤。
文檔編號(hào)C07C249/08GK1807405SQ20051010171
公開(kāi)日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2005年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月25日
發(fā)明者魏孝義, 張鳳仙, 朱孝峰 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院華南植物園, 中山大學(xué)腫瘤防治中心