環(huán)糊精、葡萄糖、吐溫、聚乙二醇單硬脂酸醋中的一種或幾種。
[0056]將本發(fā)明所述獻菁娃配合物溶解在5-35%(wt%)二甲亞諷的水溶液，可作為局部給 藥用的制劑。
[0化7] 實施例12 本發(fā)明所制備的光動力藥物或光敏劑，在光動力治療，或光動力診斷，或光動力消毒中 的使用方法與已有技術(shù)中運用非本發(fā)明所述的獻菁或化嘟化合物制備的光動力藥物或光 敏劑的使用方法相同，但需配套適宜的光源，所述適宜的光源可W由普通光源連接合適的 濾光片來提供或由特定波長的激光來提供，光源的波長范圍為300-800nm，優(yōu)選680-700 nm O
[0化引實施例13 將實施例3、4、5的獻菁娃配合物溶于1%藍麻油衍生物(化emophor EL，wt%)水溶液中， 制成ImM或0.5mM的光敏藥劑。測試它們對人肝癌細胞化pG2的暗毒性和光動力活性。
[0059]將上述光敏藥劑稀釋后加入到細胞培養(yǎng)液中，制成不同濃度的含獻菁化合物的細 胞培養(yǎng)液。將等量癌細胞分別加入到該培養(yǎng)液中培養(yǎng)2小時，而后棄培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞 后，加入新的培養(yǎng)液(不含獻菁化合物）。光照實驗組，對細胞進行紅光照射(所用激發(fā)光光 源為波長大于610nm的紅光，照射30分鐘，照射光的功率為15mw ? CHf2);不照光組，將細胞置 于暗處20分鐘。光照或不光照后，細胞的存活率采用MTT法考察。具體實驗步驟參見 《Bioorganic & Medicinal 化emistry Letters》，2006,16,2450-2453。上述波長大于 610nm的紅光是通過500W的面素燈連接隔熱水槽加大于610nm的濾光片來提供的。
[0060]結(jié)果表明，實施例3、4、5所得軸向末端二膚或簇基取代娃獻菁稀釋到濃度為 0.0 lOmM(即10 X 1(T6 mol/L)時，若不進行光照，則對人肝癌細胞化pG2沒有殺傷和生長抑制 作用，表明它們沒有暗毒性;但如果進行紅光照射，其均可100%殺傷癌細胞。說明實施例3、 4、5所提供的獻菁化合物具有高的光動力抗癌活性。
[0061 ] 將上述1%藍麻油衍生物（(：'日1]1〇911〇'￡1^，'\￥1%)水溶液換成1%藍麻油衍生物 (Cremophor EL，wt%)憐酸鹽緩沖溶液(PBS)或0.5%藍麻油衍生物(Cremo曲or EL，wt%)水溶 液，也可得到同樣的實驗結(jié)果。
[0062] 實施例14 按照實施例13的方法，測試阿霉素和實施例6-8所得獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物對人肝癌細 胞化9&的暗毒性(化學(xué)治療活性)和光動力活性。結(jié)果表明，實施例8所得通過酷胺鍵連接 的獻菁娃-阿霉素在紅光照射下100%殺傷癌細胞的抑制濃度為〇.3Xl(T 6mol/L，并且具有 暗毒性(化療活性)（ICso值為5.0 X 1(T6 mol/L)，說明其具有光療和化療雙重活性。
[0063] 實施例6和7所得通過二膚橋連的獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物的化療活性明顯小于阿霉 素，阿霉素在無光照下抑制化pG2的半數(shù)致死濃度（ICsg)為2.7 X 1〇-6 mol/L，而實施例6、7所 得獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物在無光照下抑制化此2的ICso值為6.0-8.OX 10 6 mol/L。另一方面， 實施例6、7所得通過二膚橋連的獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物的光療活性也明顯小于相應(yīng)的獻菁 娃化合物，它們在紅光照射下100%殺傷癌細胞的抑制濃度升至1.5-3.0 X 1(T6 mol/L。運說 明實施例6-7所得獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物不但可做為化學(xué)藥阿霉素的前藥，而且也可W作為 光療藥獻菁的前藥。
[0064] 實施例15 測試在成纖維細胞激活蛋白（FAP)存在下，實施例6、7所得獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物對人 肝癌細胞化的光動力活性：先將獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物與FAP共解育24小時（偶聯(lián)物與 FAP的摩爾比為100:1)，之后按照實施例13的方法測試光照下的抗癌活性。
[0065] 結(jié)果表明，在FAP存在下，實施例6、7所得獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物顯示了高的光動力 抗癌活性，100%殺傷癌細胞的抑制濃度可低至0.1-0.5 X 1(T6 mol/L。運說明獻菁娃-阿霉素 偶聯(lián)物的抗癌活性在FAP存在下得到顯著加強，其抗癌活性顯著高于FAP不存在時獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物的光動力活性，也高于阿霉素的化療活性和相應(yīng)游離獻菁的光動力活性，顯 示了高的光療和化療協(xié)同效應(yīng)。
[0066] 成纖維細胞激活蛋白是一種腫瘤組織特異性高表達的水解酶蛋白，實施例6-8所 得獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物是通過甘氨酸-脯氨酸二膚連接的，該連接膚段可被FAP特異性識 別和酶切水解。相對于單獨的阿霉素，獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物在無關(guān)照條件下的毒性明顯下 降，但是當獻菁娃-阿霉素偶聯(lián)物到達腫瘤組織時，腫瘤組織中特異高表達的成纖維細胞激 活蛋白可將膚段水解而釋放出獻菁娃和阿霉素，從而恢復(fù)阿霉素的化學(xué)治療抗癌作用，同 時在紅光激發(fā)下，獻菁娃產(chǎn)生光動力抗癌活性。因此，本發(fā)明所提供的獻菁娃-阿霉素偶聯(lián) 物是一種酶激活式的具有光療-化療雙重效應(yīng)的祀向抗癌藥物。
[0067] W上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與 修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種軸向取代的酞菁硅配合物，其特征在于：軸向末端為羧基二取代，其結(jié)構(gòu)式如 下：2. -種軸向取代的酞菁硅配合物，其特征在于:軸向末端為二肽取代，其結(jié)構(gòu)式為：3. -種軸向取代的酞菁硅-阿霉素偶聯(lián)物，其特征在于:其結(jié)構(gòu)式為：4. 一種制備如權(quán)利要求1所述軸向取代的酞菁硅配合物的方法，其特征在于：以2-[4-(2-氨基乙基)苯氧基]硅酞菁和戊二酸酐為反應(yīng)物，以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，在N，N-二 異丙基乙胺存在和氮氣保護下，室溫~35°C攪拌反應(yīng)12~36小時，然后采用柱層析法分離獲 得所述軸向末端羧基二取代硅酞菁； 其中，2-[4-(2_氨基乙基)苯氧基]硅酞菁與戊二酸酐的摩爾比為1:2.2~6.0; N，N-二異丙基乙胺的用量為每mmol 2-[4-(2_氨基乙基）苯氧基]硅酞菁使用1.5~ 3mmol〇5.-種制備如權(quán)利要求2所述軸向取代的酞菁硅配合物的方法，其特征在于:包括以下 步驟： 1) 以軸向末端羧基取代硅酞菁和N-羥基琥珀酰亞胺為反應(yīng)物，以N，N-二甲基甲酰胺為 溶劑，在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽存在和氮氣保護下，-5~5°C中攪拌 反應(yīng)1~2小時，然后于室溫~35°C繼續(xù)攪拌反應(yīng)12~36小時，再采用柱層析法分離得到硅酞菁 羧基活化物； 2) 以步驟1)所得硅酞菁羧基活化物和甘氨酸-脯氨酸二肽為原料，以N，N-二甲基甲酰 胺為溶劑，在N，N-二異丙基乙胺存在和氮氣保護下，室溫~35°C下攪拌反應(yīng)2~6小時，然后采 用柱層析法分離得到所述軸向末端二肽取代硅酞菁； 其中，步驟1)中軸向末端羧基取代硅酞菁與N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1:1.5~5,所述軸向末端羧基取代硅酞菁為軸向末端羧基二取代硅酞菁 或軸向不對稱單羧基取代硅酞菁1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽的用量為每mmol軸向末端羧基取代硅 酞菁使用1.5~4mmol; 步驟2)硅酞菁羧基活化物和甘氨酸-脯氨酸二肽的摩爾比為1:1~3.5; N，N-二異丙基乙胺的用量為每mmol娃酞菁羧基活化物使用1.5~3_〇1。6. -種制備如權(quán)利要求3所述酞菁硅-阿霉素偶聯(lián)物的方法，其特征在于：以軸向取代 的硅酞菁和阿霉素鹽酸鹽為反應(yīng)物，以N，N-二甲基甲酰胺為溶劑，在1-乙基-(3-二甲基氨 基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑、N-甲基嗎啡啉存在和氮氣保護下，-5~5°C下 攪拌反應(yīng)1~5小時，然后于室溫~35°C繼續(xù)攪拌反應(yīng)12~48h，通過溶劑法純化得到所述酞菁 硅-阿霉素偶聯(lián)物；其中，所述軸向取代的硅酞菁與阿霉素鹽酸鹽的摩爾比為1:1.2~4.5,所述軸向取代的 硅酞菁為軸向末端二肽取代硅酞? 或軸向不對稱單羧基取代硅酞菁所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、1-羥基苯并三唑和Ν-甲基嗎啡 啉的用量均為每mmol娃酞菁使用1.5~4mmol。7. -種如權(quán)利要求1或2所述軸向取代的酞菁硅配合物的應(yīng)用，其特征在于：用于制備 光動力藥物，或光敏藥劑，或光敏劑-化療藥偶聯(lián)物，或光敏劑-抗體偶聯(lián)物。8. -種如權(quán)利要求3所述酞菁硅-阿霉素偶聯(lián)物的應(yīng)用，其特征在于：用于制備光動力 藥物，或光敏藥劑，或具有光動力治療-化學(xué)治療雙重效應(yīng)的藥物，或靶向激活的抗腫瘤藥 物。9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其特征在于：其應(yīng)用方法是以水或水與其他物質(zhì)的 混合液為溶劑，溶解所述酞菁硅配合物或酞菁硅-阿霉素偶聯(lián)物，酞菁濃度不高于飽和濃 度，并在其中加入添加劑以保持藥劑的化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性； 所述其他物質(zhì)為蓖麻油聚氧乙烯35醚、二甲亞砜、乙醇、甘油、N，N-二甲基甲酰胺、聚乙 二醇300-3000、環(huán)糊精、葡萄糖、吐溫、聚乙二醇單硬脂酸酯中的一種或幾種，其在混合液中 的濃度不高于1 ; 所述添加劑包括抗氧化劑、緩沖劑和等滲劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種軸向取代的酞菁硅配合物及其阿霉素偶聯(lián)物，以及它們的制備方法與應(yīng)用，屬于光敏劑和藥物制備技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所得配合物可制成新型高效光動力藥物或光敏劑，并可與阿霉素制成酞菁硅-阿霉素偶聯(lián)物，該偶聯(lián)劑具有光動力治療和化療雙重效應(yīng)，可制成新型抗癌藥物。
【IPC分類】C07K5/062, A61K47/48, A61K31/704, A61K41/00, A61P35/00, C07F7/02, C07D487/22
【公開號】CN105669735
【申請?zhí)枴緾N201610133730
【發(fā)明人】黃劍東, 柯美榮, 陳少芳
【申請人】福州大學(xué)
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2016年3月10日