,4H) ,2.67(s,4H) ,1.66(s,lH) ,0.45(d,2H,J = 4.8Hz),0.363(s,2H)〇LCMS:567(M+H) + ,RT = 1.22min.
[0464] N-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基）-1!1-吡唑并[3,4-13]吡啶-3-基）-4--((33， 5R)-3,4,5-三甲基哌啶-1-基)苯甲酰胺
[0466] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6):13.41(s，lH)，10.90(s，lH)，9.38(s，lH)，8.39((1,1H，J = 8.0Hz)，8.06(d，2H，J = 8.8Hz)，7.16(d，2H，J = 9.2Hz)，7.09((1,1H，J= 12.4Hz)，7.05(s， 1H)，4.19(d，2H，J=13.6Hz)，3.99(s，6H)，3.35-3.44(m，2H)，2.90-2.95(m，2H)，2.88(d， 3H ,J = 4.4Hz),1.39(d,6H ,J = 6.4Hz).
[0467] N-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1!1-吡唑并[3,4-13]吡啶-3-基)-4-(3,3-二 甲基哌嗪-1 -基)-3-氟苯甲酰胺
[0469] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6): 13.48(s，lH) ,11.10(s，lH)，8.86(brs，lH)，8.39((1, 1H，J = 8.0Hz) ,7.96~7.92(m，2H)，7.25(t，lH，J = 8.8Hz)，7.10((1, lH，J = 2.8Hz)，7.05(s， 1H)，3·99(s，6H)，3·35(s，4H)，3·18(s，2H)，1·41(s，6H)·
[0470] N-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1!1-吡唑并[3,4-13]吡啶-3-基)-2-(4-甲基 哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲酰胺
[0472] 1H NMR(400MHz,DMS0-d6):13.46(s,lH),11.08(s,lH),9.00(s,2H),8.42(d,lH,J = 8.4Hz) ,8.33(s,lH) ,7.09(d,lH,J = 8.4Hz) ,7.05(s,lH) ,3.99(s,6H) ,3.85-3.88(m, 4H),2.38-2.40(m,4H),2.23(s,3H).
[0473] 使用類似合成44的方法可得到如下化合物：
[0474] N-(6-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-1Η-吲唑-3-基)-4-(哌啶-1-基)苯甲酰胺
[0476] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6) :12.85(s，lH)，10.38(s，lH)，7.87(d，2H，J = 8.8Hz)， 7.77(d,lH,J = 8.4Hz) ,7.50(s,lH) ,7.08(t,2H,J = 8.4Hz) ,6.62(d,2H,J = 8.8Hz) ,6.34 (d,lH,J=6.4Hz),3.92(s,6H),3.77-3.82(m,lH),1.91-2.00(m,2H),1.65-1.73(m,2H), 1.55-1.62(m,2H),1.45-1.51(m,2H).
[0477] N-(6-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-lH_吲唑-3-基)-4-((4-甲基哌嗪_1-基）甲 基)苯甲酰胺
[0479] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6):13.01(s，lH)，10.91(s，1H)，8.10(s，2H)，7.79(s，1H)， 7.54(s，3H)，7.08(s，2H)，3.91(s，6H)，3.83(s，2H)，3.36-3.48(m，2H)，2.95-3.14(m，4H)， 2.79(s,3H),2.50-2.58(m,2H).
[0480] N-(6-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-1Η-吲唑-3-基)-4-(4-甲基-1,4-二氮雜環(huán) 庚烷-1-基)苯甲酰胺
[0482] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6):13.91(s，lH)，10.56(s，lH)，9.81(s，lH)，8.02((1,2H，J = 8.4Hz) ,7.78(d,lH ,J = 8.4Hz) ,7.52(s, 1H), 7.06-7.09(m, 2H), 6.89(d, 2H ,J = 8.8Hz), 3.92(s,6H),3.85-3.96(m,2H),3.67-3.74(m,lH),3.45-3.58(m,3H),3.12-3.26(m,lH), 2.86(d,3H ,J = 3.6Hz),2.15-2.25(m,2H).
[0483] ^(6-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基）-1!1-吲唑-3-基）-2-(4-甲基哌嗪-1-基）嘧 啶-5-甲酰胺
[0485] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6):12.99(s，lH)，10.95(s，lH)，9.08(s，2H)，7.84((1,1H，J =8.4Hz),7.54(s,lH),7.06-7.11(m,2H),4.75-4.95(m,2H),3.92(s,6H),3.35-3.55(m, 2H),3.05-3.35(m,4H),2.84(s,3H).
[0486] ^(6-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基）-1!1-吲唑-3-基)-4-(3,3-二甲基哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺
[0488] 1H NMR(400MHz，Me0D) :7.86((1, lH，J = 8.4Hz) ,7.69-7.72(m，2H)，7.54(s，lH)， 7.18(d,lH,J = 8.4Hz) ,7.09(d,lH,J = 8.0Hz) ,6.94(t,lH,J = 8.0Hz) ,3.98(s,3H) ,3.93 (s,6H),3.42-3.45(m,2H),3.35-3.39(m,2H),3.19(s,2H),1.54(s,6H).
[0489] N-(6-(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苯基)-lH_吲唑-3-基)-4-(3-(二甲氨基）吡咯烷-1-基)苯甲酰胺
[0491 ] 1H MMR(400MHz，DMS0-d6):12.88(s，lH)，10.51(s，lH)，8.00-8.01(m，2H)，7.78-7.80(m,lH),7.51(s,lH),7.08(s,2H),6.65-6.67(m,2H),3.92(s,6H),3.62-3.71(m,1H), 3.51-3.60(m,1H),2.50(s,6H),2.26-2.35(m,2H),1.97-2.15(m,1H).
[0492] 使用合成化合物63的方法可得到以下化合物：
[0493] N-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1!1-吡唑并[3,4-13]吡啶-3-基)-4-(3,3,5， 5-四甲基哌啶-1-基)苯甲酰胺
[0495] 1H NMR(400MHz，Me0D):8.51(d，lH，J = 8.4Hz)，8.03(d，lH，J = 7.6Hz) ,7.12-7.22 (m，3H)，6.95(s，lH)，3.99(s，6H)，3.47(s，4H)，1.52(s，12H).
[0496] N-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-lH-吡唑并[3,4-b]吡啶-3-基)基）-4-(3-(二甲氨基)啦咯烷-1-基)苯甲酰胺
[0498] 1H 匪R(400MHz，Me0D) :8.27(d，lH，J = 8.4Hz)，8.01(d，2H，J = 8.4Hz)，7.12((1, lH，J = 8.4Hz)，6.94(s，lH)，6.79(d，2H，J = 8.4Hz)，4.06-4.13(m，lH)，3.99(s，6H)，3.85-3.93(m,lH),3.70-3.75(m,lH),3.61-3.65(m,lH),3.46-3.52(m,lH),3.01(s,6H),2.60-2.67(m,lH),2.26-2.36(m,lH).
[0499] N-(6-(2,6-二氯-3,5-二甲氧基苯基)-1!1-吡唑并[3,4-13]吡啶-3-基)-4-(3,3-二 甲基哌嗪-1-基)-3-甲氧基苯甲酰胺
[0501] 1H NMR(400MHz，DMS0-d6): 13.46(s，lH) ,11.07(s，lH)，8.41((1,1H，J = 8.4Hz)， 7·23-7·50(m，2H),7.06-7.11(m，3H)，3.99(s，6H)，3.92(s，3H)，3.29(s，2H)，3.25(s，2H)， 3.07(s，2H)，2.58(s，lH)，1.41(s，6H).
[0502] 實施例2化合物在分子水平對FGFR1、FGFR2、FGFR3、KDR激酶酶活的影響
[0503] 1.試驗方法
[0504] 將酶反應底物Poly(Glu，Tyr)4: 1用無鉀離子的PBS(10mM磷酸鈉緩沖液， 150禮他(：1，？!17.2-7.4)稀釋成2(^8/1^，125以17孔包被酶標板，置37°(3反應12-16小時。棄去 孔中液體后洗板，用200yL/孔的T-PBS(含0.1 %TWeen-20的roS)洗板三次，每次5分鐘。于37 °C烘箱中干燥酶標板1-2小時。
[0505]每孔加入用反應緩沖液（50mM HEPES pH 7.4,50mM MgCl2,0.5mM MnCl2,0.2mM Na3V〇4, ImM DTT)稀釋的ATP溶液50yL，終濃度5μΜ?；衔镉肈MSO稀釋成合適的濃度，1μ!7孔 或者或含相應濃度的DMS0(陰性對照孔），再加入用49yL反應緩沖液稀釋的各激酶激酶域重 組蛋白啟動反應，每次實驗需設無 ATP對照孔兩孔。置37°C搖床（lOOrpm)反應1小時。T-PBS 洗板三次。加入一抗PY99稀釋液100μL孔，37°C搖床反應0.5小時。T-PBS洗板三次。加入二 抗辣根過氧化物酶標記羊抗鼠的IgG稀釋液100μL7孔，37°C搖床反應0.5小時。T-PBS洗板三 次。加入2mg/mL的0PD顯色液lOOyL/孔（用含有0.03%H 2〇2的0.1M檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液 (ρΗ=5·4)稀釋），25°C避光反應1-10分鐘。（0H)溶解時需用超聲，顯色液需現(xiàn)配現(xiàn)用）。加入 2M H2S〇450yL/孔中止反應，用可調(diào)波長式微孔板酶標儀SPECTRA MAX 190讀數(shù)，波長為 490nm。
[0506] 樣品的抑制率通過下列公式求得：
[0508] IC5Q值采用酶標儀隨機附帶軟件以四參數(shù)法回歸求得。
[0509] 2.結(jié)果
[0510] 下表中提供部分IC5Q資料。符號+代表1C5Q小于100nm，符號++代表1C5Q為100nm至 500nm，N/A代表暫無數(shù)據(jù)。

[0513] 結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物在極低濃度l〇〇nm)下，即可有效抑制各類FGFR激酶的 活性。
[0514] 實施例3化合物對FGFR1介導的腫瘤細胞增殖能力的影響試驗
[0515] 1、試驗方法
[0516]化合物對急性髓源白血病細胞株KG1細胞(細胞中FGFR1融合蛋白表達在胞漿中， 為FGFR1依賴性腫瘤細胞株，購自ATCC細胞庫）的生長抑制檢測CCK-8細胞計數(shù)試劑盒 (Dojindo)檢測。具體步驟如下：處于對數(shù)生長期的KG1細胞按合適密度接種至96孔培養(yǎng)板 中，每孔90yL，培養(yǎng)過夜后，加入不同濃度的化合物作用72hr，并設定溶劑對照組（陰性對 照）。待化合物作用細胞7 2 h后，化合物對細胞增殖的影響采用C C K - 8細胞計數(shù)試劑盒 (Dojindo)檢測，每孔加入10yL CCK-8試劑，置于37°C培養(yǎng)箱中放置2-4小時后，用全波長式 微孔板酶標儀SpectraMax 190讀數(shù)，測定波長為450nm。采用以下列公式計算化合物對腫瘤 細胞生長的抑制率（％ :抑制率（％ ) = (0D陰性對照孔-0D給藥孔)/0D陰性對照孔X 100%。 IC50值采用酶標儀隨機附帶軟件以四參數(shù)法回歸求得。
[0517] 2.結(jié)果
[0518]下表中提供部分化合物的IC5Q值。符號+代表1C5Q小于200nm，且符號++代表1C50為 200nm至lOOOnm。
[0520] 結(jié)果顯示，本發(fā)明化合物在極低濃度U lOOOnrn，較佳地< 200nm)下，即可有效抑 制腫瘤細胞增殖。
[0521] 在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨 引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領域技術(shù)人員可 以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范 圍。
【主權(quán)項】
1. 一種如下式I所示的化合物，或其藥學上可接受的鹽：其中， L選自下組:H、四氫吡喃基(THP); 各個X各自獨立地選自下組:C1、F、H、CN; W、Y、Z各自獨立地選自：N或CH; 環(huán)A為無、取代或未取代的5~8元亞芳基，或取代或未取代的5元~8元亞雜芳基，其中， 所述的雜芳基包含至少一個選自下組的雜原子:氮、氧，或硫;取代或未取代的3元~12元飽 和雜環(huán)或碳環(huán)，其中，所述的雜環(huán)包含至少一個選自下組的雜原子:氮、氧，或硫;或為R為H，或取代或未取代的選自下組的基團：其中，M選自下組:取代或未取代的C1-C6的亞烷基、取代或未取代的C6-C10的亞芳基、 取代或未取代的Cl-ClO的亞雜芳基、或M為無； 所述的任一取代是指上述基團上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵 素、未取代或鹵代的C1-C6烷基、未取代或鹵代的C1-C6烷氧基、未取代或鹵代的C2-C6烷氧 基烷基、未取代或鹵代的C3-C8環(huán)烷基、未取代或鹵代的C2-C6烷基羰基、未取代或鹵代的 C1-C6亞烷基-羥基、未取代或C1-C6烷基取代的胺基。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于， L選自下組:H、四氫吡喃基(THP); 各個X各自獨立地選自下組:H、C1、F、CN; W、Y、Z各自獨立地選自：N或CH; 環(huán)A為取代或未取代的6元芳基，或取代或未取代的5元~6元雜芳基，其中，所述的雜芳 基包含至少一個選自下組的雜原子:氮、氧，或硫，或取代或未取代的5元~6元飽和雜環(huán)或 碳環(huán)，其中所述的雜環(huán)包含至少一個選自下組的雜原子:氮、氧，或硫； M選自下組:取代或未取代的C1-C4的亞烷基、或M不存在； 所述的取代是指基團上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、未取代 或鹵代的C1-C4烷基、未取代或鹵代的C1-C4烷氧基、未取代或鹵代的C1-C4烷氧基烷基、未 取代或鹵代的C3-C8環(huán)烷基、未取代或鹵代的C2-C6烷基羰基、未取代或鹵代的C1-C4烷基-羥基、未取代或C1-C6烷基取代的胺基。3. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于， L為H; 各個X各自獨立地選自下組:H、C1、F; W、Y、Z各自獨立地選自：N或CH; 環(huán)A為選自下組的基團：無、苯基、吡唑基、吡啶基、噻唑基、嘧啶、吡嗪或哌啶基； M選自下組:取代或未取代的C1-C3的亞烷基、或M不存在； 所述的任一取代是指基團上的一個或多個氫原子被選自下組的取代基取代：鹵素、未 取代或鹵代的C1-C4烷基、未取代或鹵代的C1-C4烷氧基、未取代或鹵代的C2-C4烷氧基烷 基、未取代或鹵代的C3-C8環(huán)烷基、未取代或鹵代的C2-C6烷基羰基、未取代或鹵代的C1-C4 烷基-羥基、未取代或C1-C6烷基取代的胺基。4. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物，其特征在于，所述的式I化合物為選自下組的化合 物：14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、 44、45、46、47、48、54、55、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、83、84、85、86、87、88、 89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101，或表厶所示的化合物。5. 如權(quán)利要求1所述的式I化合物的制備方法，其特征在于，包括步驟：在惰性溶劑中，用式I-8化合物和式I-9化合物反應，得到式I化合物； 上述各式中，各基團的定義如權(quán)利要求1中所述。6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法還包括步驟：在惰性溶劑中，用式I化合物進行脫保護，得到式Γ化合物； 其中，L選自下組：四氫吡喃基(THP); 其余各基團的定義如權(quán)利要求1中所述。7. 如權(quán)利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于： (a) 制備治療與FGFR激酶活性或表達量相關的疾病的藥物； (b) 制備FGFR激酶靶向抑制劑； (c) 體外非治療性地抑制FGFR激酶的活性； (d) 體外非治療性地抑制腫瘤細胞增殖;和/或 (e) 治療與FGFR激酶活性或表達量相關的疾病。8. 如權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述FGFR激酶選自下組：FGFRI、FGFR2、 FGFR3,或其組合;和/或 所述的腫瘤細胞為白血病細胞株;較佳地為髓源白血病細胞株；更佳地為急性髓源白 血病細胞株KGl細胞。9. 一種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包括：（i)有效量的式I化合物，或 其藥學上可接受的鹽;和（ii)藥學上可接受的載體。10. -種抑制FGFR激酶活性的方法，其特征在于，包括步驟:對抑制對象施用抑制有效 量的如權(quán)利要求1所述的式I化合物或其藥學上可接受的鹽，或?qū)σ种茖ο笫┯靡种朴行Я?的如權(quán)利要求9所述的藥物組合物。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種作為FGFR激酶抑制劑的吲唑類化合物及其制備和應用，具體地，本發(fā)明提供了一種如下式I所示的化合物；其中，各基團的定義如說明書中所述。本發(fā)明的化合物具有很好的FGFR激酶抑制活性，可以用于制備一系列治療FGFR激酶活性相關的疾病的藥物。
【IPC分類】C07D401/12, C07D487/04, A61P35/00, C07D401/14, A61K31/496, C07D417/12, C07D403/12, A61K31/424, A61K31/5377, C07D471/04, A61P35/02, C07D231/56, A61K31/416, C07D519/00, C07D498/04, A61K31/519, A61K31/4545
【公開號】CN105524048
【申請?zhí)枴緾N201510512095
【發(fā)明人】耿美玉, 劉磊, 江磊, 黃敏, 查傳濤, 艾菁, 王磊, 曹建華, 丁健
【申請人】上海海和藥物研究開發(fā)有限公司, 中國科學院上海藥物研究所
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2015年8月19日
【公告號】WO2016026445A1