一種廢紙漿制備細(xì)菌纖維素復(fù)合醫(yī)用敷料的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開(kāi)了一種廢紙漿制備細(xì)菌纖維素復(fù)合醫(yī)用敷料的方法，屬于醫(yī)用敷料領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，細(xì)菌纖維素作為敷料具有許多優(yōu)點(diǎn):高持水能力使其能吸收傷口滲出物，起到很好的引流效果，從而縮短創(chuàng)面干燥所需的時(shí)間；材料本身的空間三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)能有效地阻止微生物侵入，避免傷口感染，保證皮膚創(chuàng)傷治療過(guò)程中正常通氣;而細(xì)菌纖維素膜的高柔韌性保證了由其作為敷料可根據(jù)傷口形狀和位置進(jìn)行任意的形態(tài)設(shè)計(jì)。但是，純細(xì)菌纖維素作為敷料在應(yīng)用過(guò)程中仍存在一定的缺陷，如細(xì)菌纖維素本身較柔軟，貼合傷口時(shí)不易鋪展，從而限制了其應(yīng)用效率。
[0003]絲素蛋白是蠶絲纖維中的組分之一，作為天然生物蛋白，除了具有優(yōu)異的機(jī)械性能之外，還具有良好的生物相容性，能制備成膜、凝膠、微膠囊等多種形態(tài)的材料，由于它獨(dú)特的理化性能，絲素蛋白材料在生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域被廣泛的研究。制成無(wú)紡布作為醫(yī)用敷料使用，而且價(jià)格低廉，使用便利。但是純無(wú)紡布作為敷料使用也存在一定的缺陷，如保液性能不佳，生物相容性差等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題:針對(duì)目前細(xì)菌纖維素本身較柔軟，貼合傷口時(shí)不易鋪展，貼合度差，純無(wú)紡布作為敷料保液性能不佳，生物相容性差的問(wèn)題，提供了一種廢紙漿制備細(xì)菌纖維素復(fù)合醫(yī)用敷料的方法，本發(fā)明從廢紙漿中制備出細(xì)菌纖維素，再和從碎蠶繭中提取的絲素蛋白進(jìn)行混合得復(fù)合膜，最后通過(guò)浸泡、沖洗、晾干得到復(fù)合醫(yī)用敷料，本發(fā)明即解決了細(xì)菌纖維素不易貼合的問(wèn)題，又改善了絲素蛋白無(wú)紡布單獨(dú)作為敷料使用存在的保濕能力差、生物相容性不佳的不足，而且使廢紙漿得到綜合利用，生產(chǎn)成本低廉。
[0005]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)將200?300g硫酸鹽紙漿廢料和400?500mLpH為7?8的檸檬酸緩沖溶液混合后倒入酶解罐中，向酶解罐中加入3?5g纖維素酶，用攪拌棒攪拌均勻后移入恒溫箱中，在40?50°C下酶解36?48h，將酶解物放入高速離心機(jī)，在4?6°C下以4000?5000g的離心力離心10?15min，分離得到木楽酶解上清液，備用；
(2)稱取3?5g葡萄糖、1?2g酵母粉、0.5?]^蛋白胨和5?1OmL蒸饋水放入滅菌后的培養(yǎng)皿中，用玻璃棒攪拌均勻，通過(guò)接種環(huán)挑取1?2環(huán)木醋桿菌菌株接種于培養(yǎng)皿中，于30?40°C下培養(yǎng)12?15h，制得木醋桿菌復(fù)壯種子液；
(3)取100?200mL木漿酶解上清液，向里加入1?3g酵母粉和2?3g胰蛋白胨，用濃度為0.02mol/L的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至5?6，在105?110°C下滅菌20?30min，待其冷卻后以10?15%的接種量接入上述制得的復(fù)壯種子液，放入恒溫培養(yǎng)箱，在30?40°C下培養(yǎng)7?9天；
(4)培養(yǎng)結(jié)束后，用鑷子取出培養(yǎng)皿和空氣交界面形成的凝膠狀細(xì)菌纖維素，用蒸餾水反復(fù)沖洗3?5次后放入水浴鍋中，在80?90°C下水浴30?60min，去除殘余菌體，再用去離子水沖洗至中性，得細(xì)菌纖維素；
(5)將碎蠶繭和質(zhì)量濃度為5%的碳酸鈉溶液按固液比為1:50進(jìn)行混合，在95?100°C下水浴脫膠30?40min，再放入氯化鈣、乙醇和水的三元組分溶液中浸泡，于70?80°C下水浴直至絲素蛋白完全溶解；
(6)將溶解的絲素蛋白溶液靜置過(guò)夜，裝入透析袋中，以雙蒸水為透析液進(jìn)行透析60?70h，每2?3h更換一次透析液，透析結(jié)束后，將透析袋中溶液以6000?7000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理，分離得到上清液；
(7)將細(xì)菌纖維素和上述得到的上清液按固液比為1:2進(jìn)行混合后，倒入聚四氟乙烯模具中，進(jìn)行冷凍干燥得復(fù)合膜，將得到的復(fù)合膜放入烘箱，于50?60°C下干燥1?2h，再將其放入圓形容器中，加入適量濃度為0.lmol/L的氯化鈣溶液將復(fù)合膜浸沒(méi)，常溫下浸泡2?3h后再加入等體積的0.2mol/L的磷酸二氫鈉溶液，繼續(xù)常溫浸泡2?3天；
(8)將浸泡后的復(fù)合膜用雙蒸水和無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗3?5次后，自然晾干，與4?6°C下保存，備用，制得的即為一種廢紙漿制備細(xì)菌纖維素復(fù)合醫(yī)用敷料。
[0006]所述的木醋桿菌編號(hào)為ATCC 23770。
[0007]所述的氯化鈣、乙醇和水的三元組分溶液是由氯化鈣、無(wú)水乙醇和蒸餾水按質(zhì)量比為2:5:10復(fù)配得到。
[0008]本發(fā)明的應(yīng)用方法:本發(fā)明制得的復(fù)合醫(yī)用敷料可以用于各種外科手術(shù)、整形手術(shù)的術(shù)后切口或創(chuàng)面，使用前先用無(wú)菌紗布將創(chuàng)面周圍皮膚擦干，再選用比創(chuàng)面大4?6cm的復(fù)合醫(yī)用敷料覆蓋創(chuàng)面，之后再以無(wú)菌紗布包扎，使敷料與創(chuàng)面緊貼，更換時(shí)間根據(jù)創(chuàng)面滲出液而定，滲出液多，敷料吸收飽和應(yīng)及時(shí)更換，滲出液少，可隔2?3天更換即可。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:
(1)本發(fā)明既解決了細(xì)菌纖維素不易貼合的問(wèn)題，又改善絲素蛋白無(wú)紡布單獨(dú)作為敷料使用存在的保濕能力差、生物相容性不佳的不足；
(2)本發(fā)明使廢紙漿得到綜合利用，生產(chǎn)成本低廉。
【具體實(shí)施方式】
[0010]首先將200?300g硫酸鹽紙漿廢料和400?500mLpH為7?8的檸檬酸緩沖溶液混合后倒入酶解罐中，向酶解罐中加入3?5g纖維素酶，用攪拌棒攪拌均勻后移入恒溫箱中，在40?50°C下酶解36?48h，將酶解物放入高速離心機(jī)，在4?6°C下以4000?5000g的離心力離心10?15min，分離得到木楽酶解上清液，備用;稱取3?5g葡萄糖、1?2g酵母粉、0.5?lg蛋白胨和5?10mL蒸餾水放入滅菌后的培養(yǎng)皿中，用玻璃棒攪拌均勻，通過(guò)接種環(huán)挑取1?2環(huán)木醋桿菌菌株接種于培養(yǎng)皿中，于30?40°C下培養(yǎng)12?15h，制得木醋桿菌復(fù)壯種子液；取100?200mL木漿酶解上清液，向里加入1?3g酵母粉和2?3g胰蛋白胨，用濃度為0.02mol/L的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至5?6，在105?110°C下滅菌20?30min，待其冷卻后以10?15%的接種量接入上述制得的復(fù)壯種子液，放入恒溫培養(yǎng)箱，在30?40°C下培養(yǎng)7?9天;培養(yǎng)結(jié)束后，用鑷子取出培養(yǎng)皿和空氣交界面形成的凝膠狀細(xì)菌纖維素，用蒸餾水反復(fù)沖洗3?5次后放入水浴鍋中，在80?90°C下水浴30?60min，去除殘余菌體，再用去離子水沖洗至中性，得細(xì)菌纖維素;將碎蠶繭和質(zhì)量濃度為5%的碳酸鈉溶液按固液比為1:50進(jìn)行混合，在95?100°C下水浴脫膠30?40min，再放入氯化鈣、乙醇和水的三元組分溶液中浸泡，于70?80°C下水浴直至絲素蛋白完全溶解;將溶解的絲素蛋白溶液靜置過(guò)夜，裝入透析袋中，以雙蒸水為透析液進(jìn)行透析60?70h，每2?3h更換一次透析液，透析結(jié)束后，將透析袋中溶液以6000?7000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理，分離得到上清液;將細(xì)菌纖維素和上述得到的上清液按固液比為1:2進(jìn)行混合后，倒入聚四氟乙烯模具中，進(jìn)行冷凍干燥得復(fù)合膜，將得到的復(fù)合膜放入烘箱，于50?60°C下干燥1?2h，再將其放入圓形容器中，加入適量濃度為0.lmol/L的氯化鈣溶液將復(fù)合膜浸沒(méi)，常溫下浸泡2?3h后再加入等體積的0.2mol/L的磷酸二氫鈉溶液，繼續(xù)常溫浸泡2?3天;將浸泡后的復(fù)合膜用雙蒸水和無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗3?5次后，自然晾干，與4?6°C下保存，備用，制得的即為一種廢紙漿制備細(xì)菌纖維素復(fù)合醫(yī)用敷料。
[0011]所述的木醋桿菌編號(hào)為ATCC 23770。
[0012]所述的氯化鈣、乙醇和水的三元組分溶液是由氯化鈣、無(wú)水乙醇和蒸餾水按質(zhì)量比為2:5:10復(fù)配得到。
[0013]首先將200g硫酸鹽紙漿廢料和400mLpH為7的檸檬酸緩沖溶液混合后倒入酶解罐中，向酶解罐中加入3g纖維素酶，用攪拌棒攪拌均勻后移入恒溫箱中，在40°C下酶解36h，將酶解物放入高速離心機(jī)，在4°C下以4000g的離心力離心lOmin，分離得到木漿酶解上清液，備用;稱取3g葡萄糖、lg酵母粉、0.5g蛋白胨和5mL蒸餾水放入滅菌后的培養(yǎng)皿中，用玻璃棒攪拌均勻，通過(guò)接種環(huán)挑取1環(huán)木醋桿菌菌株接種于培養(yǎng)皿中，于30°C下培養(yǎng)12h，制得木醋桿菌復(fù)壯種子液；取100mL木漿酶解上清液，向里加入lg酵母粉和2g胰蛋白胨，用濃度為0.02mol/L的硫酸溶液調(diào)節(jié)pH至5，在105°C下滅菌20min，待其冷卻后以10%的接種量接入上述制得的復(fù)壯種子液，放入恒溫培養(yǎng)箱，在30°C下培養(yǎng)7天;培養(yǎng)結(jié)束后，用鑷子取出培養(yǎng)皿和空氣交界面形成的凝膠狀細(xì)菌纖維素，用蒸餾水反復(fù)沖洗3次后放入水浴鍋中，在80°C下水浴30min，去除殘余菌體，再用去離子水沖洗至中性，得細(xì)菌纖維素;將碎蠶繭和質(zhì)量濃度為5%的碳酸鈉溶液按固液比為1:50進(jìn)行混合，在95°C下水浴脫膠30min，再放入氯化鈣、乙醇和水的三元組分溶液中浸泡，于70°C下水浴直至絲素蛋白完全溶解;將溶解的絲素蛋白溶液靜置過(guò)夜，裝入透析袋中，以雙蒸水為透析液進(jìn)行透析60h，每2h更換一次透析液，透析結(jié)束后，將透析袋中溶液以6000r/min的轉(zhuǎn)速離心處理，分離得到上清液;將細(xì)菌纖維素和上述得到的上清液按固液比為1:2進(jìn)行混合后，倒入聚四氟乙烯模具中，進(jìn)行冷凍干燥得復(fù)合膜，將得到的復(fù)合膜放入烘箱，于50°C下干燥lh，再將其放入圓形容器中，加入適量濃度為0.lmol/L的氯化鈣溶液將復(fù)合膜浸沒(méi)，常溫下浸泡2h后再加入等體積的0.2mol/L的磷酸二氫鈉溶液，繼續(xù)常溫浸泡2天;將浸泡后的復(fù)合膜用雙蒸水和無(wú)水乙醇反復(fù)沖洗3次后，自然