。 [0026] 生物材料保藏信息
[0027]本發(fā)明的腸膜明串珠菌BD3749，已于2014年11月26日保藏在中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心（CGMCC)，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編： 100101，保藏編號為：CGMCC No. 10064,培養(yǎng)物名稱是BD3749,分類命名是腸膜明串珠菌 Leuconostoc mesenteroides〇
【附圖說明】
[0028]圖1顯示腸膜明串珠菌BD3749水不溶性胞外多糖的單糖組成測定結(jié)果。
[0029]圖2顯示腸膜明串珠菌BD3749水不溶性胞外多糖的紅外光譜測定結(jié)果。
[0030]圖3顯示腸膜明串珠菌BD3749水不溶性胞外多糖的核磁共振測定結(jié)果。
【具體實施方式】
[0031]下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0032] 本發(fā)明中所述的"室溫"是指進行試驗的操作間的溫度，一般為15~25°C，實施例 中所使用的試劑若未加說明，均為分析純試劑，購買自國藥集團。
[0033] 實施例1腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備和產(chǎn)量
[0034] 1、材料與方法
[0035] 種子(發(fā)酵菌種）的制備:將腸膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)(所述腸 膜明串珠菌的保藏編號為CGMCC No . 10064)的凍干粉用少量無菌蒸餾水溶解，用接種環(huán)取 一環(huán)劃線于含5%蔗糖的M17固體培養(yǎng)基(購買自0X0ID Co.，英國），30°C好氧培養(yǎng)48h取出， 用接種環(huán)挑取單菌落放入10mL含5%蔗糖的M17液體培養(yǎng)基(購買自0X0ID Co.，英國），運用 渦旋振蕩器將菌落均勻分散于液體培養(yǎng)基內(nèi)，30°C，180rpm振蕩培養(yǎng)24h取出，以2% (v/v) 接種量接種于含5%蔗糖的組7液體培養(yǎng)基(購買自(^010 0).，英國），30°〇，180印111振蕩培 養(yǎng)24h后，將培養(yǎng)物15，OOOrpm離心10分鐘，棄去上清，菌體用無菌蒸餾水洗滌2次后，用原培 養(yǎng)體積的無菌蒸餾水懸浮，得到發(fā)酵用的種子即腸膜明串珠菌種子液。所述腸膜明串珠菌 BD3749的凍干粉由以下方法制備:挑取2個菌落，接種于300mL的10%(w/w)的脫脂乳溶液里 30°C培養(yǎng)4h，-80°C預凍過夜，_20°C冷凍干燥。
[0036] 番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的制備：成熟番茄清洗，去皮，榨汁機壓榨，100目紗布過濾取 汁，煮沸5111；[11，800(^離心101]1；[11取上清，加入質(zhì)量百分比為10%的鹿糖加熱溶解后冷卻至室 溫，以Na 2C03調(diào)節(jié)pH至7，121°C滅菌20min，冷卻至室溫，即得無菌的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基。
[0037] 2、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備
[0038] 將所得的腸膜明串珠菌種子液按3% (v/v)的接種量接種于蔗糖質(zhì)量百分比為 10%，pH為7的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，30°C，200rpm振蕩發(fā)酵培養(yǎng)72小時獲得發(fā)酵液，將發(fā)酵 液凍干（即冷凍干燥)后，將凍干粉末與3M的NaOH溶液以lg: 3mL的比例混合室溫浸提2h，15， OOOrpm離心5min，取上清，用2M的HC1溶液調(diào)節(jié)pH至7,15,000印111離心5111；[11取沉淀，冷凍干燥 即得水不溶性胞外多糖A。
[0039] 3、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的產(chǎn)量
[0040] 經(jīng)稱重與計算，得BD3749水不溶性胞外多糖A的產(chǎn)量為9.2g/L。
[0041 ]實施例2腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備和產(chǎn)量 [0042] 1、材料與方法
[0043]種子(發(fā)酵菌種)的制備：同實施例1。
[0044] 番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的制備：成熟番茄清洗，去皮，榨汁機壓榨，120目紗布過濾取 汁，煮沸1〇111；[11，400(^離心121]1；[11取上清，加入質(zhì)量百分比為30%的鹿糖加熱溶解后冷卻至 室溫，以NaHC0 3調(diào)節(jié)pH至8，135°C滅菌10min，冷卻至室溫，即得無菌的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基。
[0045] 2、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備
[0046] 將所得的腸膜明串珠菌種子液按5% (v/v)的接種量接種于蔗糖質(zhì)量百分比為 30%，pH為8的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，15°C，300rpm振蕩發(fā)酵培養(yǎng)24小時獲得發(fā)酵液，將發(fā)酵 液凍干后，將凍干粉末與5M的NaOH溶液以lg: lmL的比例混合室溫浸提2h，8，OOOrpm離心 15min，取上清，用3M的HC1溶液調(diào)節(jié)pH至7，8，OOOrpm離心15min取沉淀，冷凍干燥即得水不 溶性胞外多糖B。
[0047] 3、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的產(chǎn)量
[0048]經(jīng)稱重與計算，得BD3749水不溶性胞外多糖B的產(chǎn)量為5.49g/L。
[0049] 實施例3腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備和產(chǎn)量
[0050] 1、材料與方法
[0051] 種子(發(fā)酵菌種）的制備：同實施例1。
[0052] 番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的制備:成熟番茄清洗，去皮，榨汁機壓榨，80目紗布過濾取汁， 煮沸l(wèi)min，12000g離心8min取上清，加入質(zhì)量百分比含量為5 %蔗糖加熱溶解后冷卻至室 溫，以NaOH調(diào)節(jié)pH至5，110°C滅菌30min，冷卻至室溫，即得無菌的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基。
[0053] 2、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備
[0054] 將所得的腸膜明串珠菌種子液按1 % (v/v)的接種量接種于蔗糖質(zhì)量百分比為 5%，？!1為5的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，37°〇，100印111振蕩發(fā)酵培養(yǎng)96小時獲得發(fā)酵液，將發(fā)酵 液凍干后，將凍干粉末與1M的NaOH溶液以lg:5mL的比例混合室溫浸提2h，10,000rpm離心 12min，取上清，用1M的HC1溶液調(diào)節(jié)pH至7，10，OOOrpm離心12min取沉淀，冷凍干燥即得水不 溶性胞外多糖C。
[0055] 3、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的產(chǎn)量
[0056]經(jīng)稱重與計算，得BD3749水不溶性胞外多糖C的產(chǎn)量為3.79g/L。
[0057]實施例4腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備和產(chǎn)量
[0058] 1、材料與方法
[0059]種子(發(fā)酵菌種）的制備：同實施例1。
[0060]番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的制備：成熟番茄清洗，去皮，榨汁機壓榨，100目紗布過濾取 汁，煮沸8min，10000g離心9min取上清，加入質(zhì)量百分比含量為20 %的蔗糖加熱溶解后冷卻 至室溫，以Na2C03和NaHC03調(diào)節(jié)pH至6，115°C滅菌25min，冷卻至室溫，即得無菌的番茄汁蔗 糖培養(yǎng)基。
[0061 ] 2、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備
[0062] 將所得的腸膜明串珠菌種子液按2% (v/v)的接種量接種于蔗糖質(zhì)量百分比為 20%，pH為6的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，25°C，250rpm振蕩發(fā)酵培養(yǎng)48小時獲得發(fā)酵液，將發(fā)酵 液凍干后，將凍干粉末與2M的NaOH溶液以lg: 4mL的比例混合室溫浸提2h，12，OOOrpm離心 8min，取上清，用1.5M的HC1溶液調(diào)節(jié)pH至7，12，OOOrpm離心8min取沉淀，冷凍干燥即得水不 溶性胞外多糖D。
[0063] 3、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的產(chǎn)量
[0064]經(jīng)稱重與計算，得BD3749水不溶性胞外多糖D的產(chǎn)量為6.01g/L。
[0065]實施例5腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備和產(chǎn)量
[0066] 1、材料與方法
[0067]種子(發(fā)酵菌種）的制備：同實施例1。
[0068] 番茄汁蔗糖培養(yǎng)基的制備:成熟番茄清洗，去皮，榨汁機壓榨，80目紗布過濾取汁， 煮沸3min，6000g離心llmin取上清，加入質(zhì)量百分比含量為15%的蔗糖加熱溶解后冷卻至 室溫，以Na 2C03、NaHC03和NaOH調(diào)節(jié)pH至6.5，125°C滅菌15min，冷卻至室溫，即得無菌的番茄 汁蔗糖培養(yǎng)基。
[0069] 2、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的制備
[0070]將所得的腸膜明串珠菌種子液按4% (v/v)的接種量接種于蔗糖質(zhì)量百分比為 15%，pH為6.5的番茄汁蔗糖培養(yǎng)基中，33°C、150rpm振蕩發(fā)酵培養(yǎng)84小時獲得發(fā)酵液，將發(fā) 酵液凍干后，將凍干粉末與4M的NaOH溶液以lg: 2mL的比例混合室溫浸提2h，14，OOOrpm離心 7min，取上清，用2.5M的HC1溶液調(diào)節(jié)pH至7，14，OOOrpm離心7min取沉淀，冷凍干燥即得水不 溶性胞外多糖E。
[0071 ] 3、腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的產(chǎn)量
[0072]經(jīng)稱重與計算，得BD3749水不溶性胞外多糖E的產(chǎn)量為7.88g/L。
[0073] 實施例6腸膜明串珠菌水不溶性胞外多糖的單糖組成測定
[0074] 取上述方法制備的胞外多糖A，以高效陰離子色譜法測定多糖的單糖組成。
[0075] (1)多糖水解
[0076] 稱取3mg胞外多糖A與2mL