一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種培養(yǎng)基，特別是一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 假單胞桿菌菌株產(chǎn)生的抗菌蛋白對(duì)蔬菜灰霉病由較強(qiáng)的抗性。因此，開(kāi)展提高假 單胞桿菌拮抗物質(zhì)的分泌產(chǎn)量研究具有重要意義。
[0003] 因此尋找一種能夠提高假單胞桿菌拮抗能力的培養(yǎng)基能夠?yàn)榇龠M(jìn)假單胞桿菌藥 物在生物防治農(nóng)作物病害中的應(yīng)用具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對(duì)上述存在的問(wèn)題，提供一種能夠促進(jìn)假單胞桿菌在 生物防治農(nóng)作物病害中的應(yīng)用具有重要的意義，提高假單胞桿菌拮抗能力的培養(yǎng)基。
[0005] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0006] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，由3. 0%~7%醋酸鈉，0. 7%~4. 7%丙酸鈉， 0· 9%~1. 5%硫酸錳，2. 2%~2. 8%氯化鎂，1. 3%~2. 3%氯化鈣，0· 4%~1. 4%硝酸銨， 2. 6%~4. 6%谷氨酸，14. 0%~16. 0%緩沖液，15. 5%~21. 5%蛋白胨，3. 4%~9. 4%酵 母膏，13. 0%~14. 8%牛肉膏，5. 6%~L4%芒果提取物，L3%~2. 3%蘆薈膠，L8%~ 2. 8%瓊脂，0. 5%~1. 1%Gemini表面活性劑組成和16. 8%~17. 4%去離子水組成。
[0007] 由于采用了上述技術(shù)方案，采用蛋白胨、牛肉膏和芒果提取物作為細(xì)菌培養(yǎng)的氮 源和碳源，芒果中不僅含有大量的類(lèi)胡蘿卜素、維生素C、果膠和膳食纖維等有益物質(zhì)，同時(shí) 還含有特殊的芒果苷，芒果酸和類(lèi)似維他命P復(fù)合物的槲黃素，均能夠促進(jìn)細(xì)菌的生長(zhǎng)。
[0008] 緩沖液的存在保證培養(yǎng)基的pH處于一定的恒定范圍內(nèi)，避免細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中， 代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生改變培養(yǎng)基的pH環(huán)境，使得pH變化過(guò)大而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。
[0009] 醋酸鈉，丙酸鈉，硫酸錳，氯化鎂，氯化鈣和硝酸銨作為細(xì)菌生長(zhǎng)的必要微量元素 提供成分，缺乏微量元素錳、鈣、鎂等會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，但如果無(wú)機(jī)鹽的含量過(guò)高，會(huì)在 培養(yǎng)基中形成難溶物，反而會(huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，因此，上述比例為最合理的范圍。
[0010] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，由5.0%醋酸鈉，2. 7%丙酸鈉，1.2%硫酸錳， 2. 5 %氯化鎂，1. 8 %氯化鈣，0. 9 %硝酸銨，3. 6 %谷氨酸，15. 0 %緩沖液，18. 5 %蛋白胨， 6. 4%酵母膏，13. 9%牛肉膏，6. 5%芒果提取物，1. 8%蘆薈膠，2. 3%瓊脂，0. 8%Gemini表 面活性劑組成和17. 1 %去離子水組成。
[0011] 由于采用了上述技術(shù)方案，上述比例為最佳值。
[0012] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，所述蛋白胨為螺旋藻蛋白胨。
[0013] 由于采用了上述技術(shù)方案，現(xiàn)有技術(shù)通常采用日本蛋白胨來(lái)培養(yǎng)細(xì)菌，價(jià)格較為 昂貴，成本較高，螺旋藻的組物中其中60%以上的是蛋白質(zhì)，主要包括異亮氨酸，亮氨酸，賴(lài) 氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，蘇氨酸，色氨酸和纈氨酸，此外，還含脂肪，碳水化合物，葉綠素，類(lèi) 胡蘿卜素，藻青素，維生素4、81、82、86、8124，煙酸，肌酸，丫-亞麻酸，泛酸|丐，葉酸（￡〇1;^ acid)及鈣，鐵，鋅，鎂等?？梢詮穆菪逯蟹蛛x提取出新的廉價(jià)的優(yōu)質(zhì)蛋白胨，由螺旋藻制 成的螺旋藻蛋白胨能夠?yàn)榧?xì)菌生長(zhǎng)提供所需的氮源和碳源。
[0014] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，所述Gemini表面活性劑的結(jié)構(gòu)式如下，
[0015]
[0016] 由于采用了上述技術(shù)方案，該表面活性劑可以刺激細(xì)菌拮抗物質(zhì)的產(chǎn)生，并提高 拮抗物質(zhì)的產(chǎn)量。
[0017] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，所述芒果提取物通過(guò)以下步驟制備，
[0018] 步驟一：取用新鮮芒果，按芒果：淀粉的質(zhì)量比12:1，將淀粉溶解在溫度為25~ 38°C的水中清洗芒果；
[0019] 步驟二：將步驟一中清洗好的芒果浸泡在濃度為4. 82mol/L的鹽水中，在微波功 率為550W，溫度為27°C的條件下預(yù)處理20min;
[0020] 步驟三：將步驟二中經(jīng)過(guò)處理的芒果取出，用常溫清水清洗；
[0021] 步驟四：將步驟三中晾干的芒果浸泡在無(wú)水乙醇中，芒果：無(wú)水乙醇的質(zhì)量比為 1:1. 5,在微波功率為400W，溫度為30°C的條件下預(yù)處理20min;
[0022] 步驟五：對(duì)經(jīng)過(guò)步驟四處理的芒果在無(wú)水乙醇中進(jìn)行破碎，加水將無(wú)水乙醇稀釋 為73%的乙醇溶液，在壓力0.62奸 &，溫度78°(：的條件下回流511;
[0023] 步驟六：將步驟五中的反應(yīng)體系趁熱過(guò)濾，得濾液一與濾渣一，取濾渣一溶于乙酸 乙酯中，濾渣：乙酸乙酯的質(zhì)量比為1:1. 5,在溫度78°C的條件下回流5h;
[0024] 步驟七：將步驟六中的反應(yīng)體系趁熱過(guò)濾，得濾液二與濾渣二；
[0025] 步驟八：取步驟六中制得的濾液一，將體系中的乙醇除去，冷卻至常溫，置于 360nm，2kW的高壓萊燈下，在光強(qiáng)為96mW/cm2,福照距離為8cm的條件下福照2h，體系表面 形成一層膜狀物，棄去膜狀物，得懸濁液；
[0026] 步驟九：將步驟八中的懸濁液與步驟七中濾液二混合，去除溶劑水和乙酸乙酯，得 到芒果提取物。
[0027] 由于采用了上述技術(shù)方案，在微波的作用，能夠迅速破壞植物細(xì)胞中的細(xì)胞壁提 高分子運(yùn)動(dòng)速率，使得芒果中含有的天然產(chǎn)物更夠更好更快地從植物細(xì)胞中滲透出，提高 提取的效率和提取物的產(chǎn)量。芒果中含有一種特殊的物質(zhì)一一芒果漆酚，該物質(zhì)不利于細(xì) 菌的生長(zhǎng)，漆酚不溶于水，且為油狀物，漆酚的密度小于水的密度；漆酚具有成膜的物理性 質(zhì)，高壓栗燈能夠發(fā)出強(qiáng)的紫外光，在強(qiáng)的紫外光照射下，漆酚能夠迅速成膜，利用該特性 既能夠高效地去除掉提取物中的漆酚。
[0028] 的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，其特征在于：所述緩沖液為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀 緩沖液，所述緩沖液由9mL的Na2HP04溶液和lmL的狃丨04溶液組成，所述Na2即04溶液的濃 度為0· 067mol/L，所述ΚΗ2Ρ04溶液的濃度為0· 66mol/L〇
[0029] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的pH為7. 73。
[0030] 由于采用了上述技術(shù)方案，該pH值為最適宜細(xì)菌生長(zhǎng)的pH值。
[0031] 本發(fā)明的一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基在提高假單胞桿菌拮抗能力的應(yīng) 用。
[0032]由于采用了上述技術(shù)方案，使用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的假單胞桿菌拮抗能力較普通培養(yǎng) 基的能力有所提高，且經(jīng)過(guò)該培養(yǎng)基培養(yǎng)的假單胞桿菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)產(chǎn)量也有所提高。
[0033] 綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明的有益效果是：
[0034] 1、為細(xì)菌生長(zhǎng)提供所需的氮源，碳源和微量元素，為細(xì)菌提供穩(wěn)定的生長(zhǎng)環(huán)境，且 較廉價(jià)。
[0035] 2、使用該培養(yǎng)基培養(yǎng)的假單胞桿菌拮抗能力較普通培養(yǎng)基的能力有所提高，且經(jīng) 過(guò)該培養(yǎng)基培養(yǎng)的假單胞桿菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì)產(chǎn)量也有所提高。
【附圖說(shuō)明】
[0036]圖1為本發(fā)明培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基的拮抗能力對(duì)比曲線圖。
[0037] 圖2為本發(fā)明培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況對(duì)比曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0038] 下面對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)的說(shuō)明。
[0039] 為了使發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn) 行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限 定本發(fā)明。
[0040] 實(shí)施例1
[0041] 一種多組分細(xì)菌培養(yǎng)基，由3. 0%醋酸鈉，4. 7%丙酸鈉，0. 9%硫酸猛，2. 8%氯化 鎂，1. 3%氯化鈣，1. 4%硝酸銨，2. 6%谷氨酸，16. 0%緩沖液，15. 5%蛋白胨，9. 4%酵母膏， 13. 0%牛肉膏，7. 4%芒果提取物，1. 3%蘆薈膠，2. 8%瓊脂，0. 5%Gemini表面活性劑組成 和17. 4 %去離子水組成。