匹 伐他汀、瑞舒伐他汀、氣伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等）；（2)抑制膽固醇吸收和/或膽汁 酸再吸收的抑制劑；（3)促進(jìn)脂蛋白分解代謝的藥劑（如煙酸）；及/或（4)激活在膽固醇 如22-徑基膽固醇的排泄過程中起作用的LXR轉(zhuǎn)錄因子的藥劑。在某些實(shí)施方案中，在抗 PCSK9抗體施用之前或同時，患者正在接受固定的治療劑組合，如依澤替米貝加辛伐他??； 一種他汀類藥物加一種膽汁樹脂（例如考來締胺、考來替泊、考來維侖）；煙酸加一種他汀 類藥物（例如煙酸加洛伐他?。?；或與其他降脂質(zhì)藥劑如ω-3脂肪酸乙醋（例如omacor) 的組合。 給藥方案
[0072] 依照本發(fā)明的某些實(shí)施方案，可在一個規(guī)定的時程內(nèi)給受試者施用多劑PCSK9抑 制劑（即包含PCSK9抑制劑的醫(yī)藥組合物）。依照本發(fā)明運(yùn)一方面的方法包括序貫給予受 試者多劑PCSK9抑制劑。本文所用的"序貫給藥"是指每劑PCSK9抑制劑是在例如不同日 子的不同時間點(diǎn)，按照預(yù)定的時間間隔（例如數(shù)小時、數(shù)天、數(shù)周或數(shù)月）施予受試者。本 發(fā)明包括一些方法，其包括序貫給予患者單劑初始劑量PCSK9抑制劑，之后施予一劑或多 劑第二種劑量PCSK9抑制劑，然后再可選地施予一劑或多劑第Ξ種劑量PCSK9抑制劑。
[007引術(shù)語"初始劑量"、"第二種劑量"和"第Ξ種劑量"是指包含PCSK9抑制劑的醫(yī)藥組 合物各劑量給藥的時間順序。因此，"初始劑量"是指在治療方案開始時給予的劑量（也稱 為"基線劑量"）；"第二種劑量"是指初始劑量之后的給藥劑量；"第Ξ種劑量"是指第二種 劑量之后的給藥劑量。所述初始、第二和第Ξ種劑量都可含有相同量的PCSK9抑制劑，但給 藥頻率通?？赡芑ゲ幌嗤?。但在某些實(shí)施方案中，在治療過程中，初始、第二和/或第Ξ種 劑量所含PCSK9抑制劑的量互不相同（例如可酌情上調(diào)或下調(diào)）。在某些實(shí)施方案中，作為 "負(fù)荷劑量"，在治療方案開始時給予兩個或更多個劑量（例如，2、3、4或5個劑量），隨后W 較低的給藥頻率給予后續(xù)劑量（例如，"維持劑量"）。
[0074] 依照本發(fā)明的典型實(shí)施方案，每劑第二種劑量和/或第Ξ種劑量于其前一劑量 給藥后 1 至 26 周（例如 1、iV2、2、2V2、3、3V2、4、4V2、5、5V2、6、6V2、7、7V2、8、8V2、9、9V2、 10、IOV2、11、111/2、12、I2V2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、I6V2、17、171/2、18、I8V2、19、 191/2、20、2〇1/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2周或^上）給藥。 本文所用的術(shù)語"前一劑量"是指在一系列多次給藥過程中在下一劑給藥之前施予患者的 一劑抗原結(jié)合分子，兩劑之間無其他劑量。
[00巧]依照本發(fā)明運(yùn)一方面的方法可W包括給患者施用任何次數(shù)的第二種劑量和/或 第Ξ種劑量PCSK9抑制劑。例如，在某些實(shí)施方案中，只施予患者一劑第二種劑量。在其他 一些實(shí)施方案中，施予患者兩個或更多個（例如2、3、4、5、6、7、8或更多個）第二種劑量。同 樣，在某些實(shí)施方案中，只施予患者單劑第Ξ種劑量。在其他一些實(shí)施方案中，施予患者兩 個或更多個（例如2、3、4、5、6、7、8或更多個）第^種劑量。
[0076] 在一些設(shè)及多個第二種劑量的實(shí)施方案中，每個第二種劑量都可W與其他第二種 劑量相同的頻率給藥。例如，每個第二種劑量可在其前一劑量給藥后1至2、4、6、8周或W 上施予患者。同樣，在一些設(shè)及多個第Ξ種劑量的實(shí)施方案中，每個第Ξ種劑量都可W與其 他第Ξ種劑量相同的頻率給藥。例如，每個第Ξ種劑量可在其前一劑量給藥后1至2、4、6、 8周或W上施予患者?；蛘?，施予患者第二種劑量和/或第Ξ種劑量的給藥頻率可在治療方 案療程中改變。在治療過程中，也可W由醫(yī)生在臨床檢查后根據(jù)個體患者的需要調(diào)整給藥 頻率。
[0077] 本發(fā)明包括包含上調(diào)滴定選項(xiàng)（本發(fā)明中也稱為"劑量調(diào)整"）的施用方案。本文 所用的"上調(diào)滴定選項(xiàng)"是指在接受了一定數(shù)量的PCSK9抑制劑劑量后，如果患者在一個或 多個指定治療指標(biāo)方面仍未達(dá)到特定下降程度的目標(biāo)，就將增加PCSK9抑制劑的劑量。例 如，在每兩周一次給患者施用75毫克劑量抗PCSK9抗體的治療方案中，如果8周后（即在 第ο周、第2周、第4周、第6周和第8周總計(jì)施用了 5個劑量），患者仍未達(dá)到血清LDkC水平小于70毫克/分升的目標(biāo)，則將抗PCSK9抗體的劑量增加至例如之后每兩周一次施用 150毫克（例如，從第10周或第12周或之后開始）。 級聯(lián)篩選方法
[0078] 本發(fā)明還包括一些級聯(lián)篩選方法，W識別患有或具有罹患常染色體顯性高膽固醇 血癥（ADH)風(fēng)險的受試者。本文所用的術(shù)語"級聯(lián)篩選"意為籍由追溯某種特定遺傳突變 的系統(tǒng)性家族追溯過程，識別患有或具有罹患某種遺傳病癥風(fēng)險的個體。（參閱化dand Sijbrands，PLoS化rr. 2011，3:RRN1238)。依照本發(fā)明運(yùn)一方面的方法包括：（a)識別攜帶 某種特定PCSK9-G(Fm的第一例ADH患者（即"源頭患者"）；及化）篩選與該源頭患者有血 緣關(guān)系的家族成員是否也有PCS腳-GOFm。此PCS腳-GOFm可W是與ADH相關(guān)的任何PCSK9功 能獲得性突變，例如V4I、E32K、D35Y、E48K、？7比、R96C、L108R、S127R、D129N、R21 甜、F21 化、 R218S、R357H、D374H、D374Y、S46化或R496W。
[0079] 本文所用的術(shù)語"有血緣關(guān)系的家族成員"包括與第一例患者有同一個祖先的任 何人，例如一級親屬、二級親屬、Ξ級親屬、四級親屬等。本發(fā)明之方法可包括其他篩選步 驟，包括例如測量血清、非皿レC、VLDレC、載脂蛋白B100、載脂蛋白A1、甘油Ξ 醋、Lp(a)及其組合的水平，W識別具有罹患ADH風(fēng)險的個體。標(biāo)準(zhǔn)基因測試和DNA測序方 法可用于篩選PCS腳-G(Fm。
[0080] 依照本發(fā)明運(yùn)一方面的方法，如果一位家庭成員有最初在源頭患者身上發(fā)現(xiàn)的 PCSK9-G0Fm，即可得出結(jié)論，該家族成員患有或具有罹患ADH的風(fēng)險。 實(shí)施例
[0081] 舉出W下實(shí)施例是為了向本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員就如何利用和使 用本發(fā)明之方法和組合物提供一個完整的公開和說明，并非是為了限制本發(fā)明人視為其發(fā) 明的范圍。業(yè)已作出努力W確保所用數(shù)據(jù)（例如量、溫度等）的準(zhǔn)確性，但也應(yīng)考慮到某些 實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。除非另有說明，份數(shù)是指重量份數(shù)，分子量是指平均分子量，溫度是指攝 氏度，壓強(qiáng)是指大氣壓或接近大氣壓。 實(shí)施例1 :抗人PCSK9的人源抗體的產(chǎn)生
[0082] 抗PCSK9的人源抗體是按照美國第8062640號專利所述而產(chǎn)生的。W下實(shí)施例 中所用的典型PCSK9抑制劑是稱為mAb316P(也稱為alirocum油）的人源抗PCSK9抗體。 mAb316P具有下列氨基酸序列的特點(diǎn)：含有90號序列的重鏈可變區(qū)（HCVR);含有92號序 列的輕鏈可變區(qū)化CVR);含有76號序列的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)UHCDR1);含有78號序列的 HCDR2 ;含有80序列的HCDR3 ;含有84號序列的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)ULCDR1);含有86號序列 的LCDR2;及含有88號序列的LCDR3。 實(shí)施例2 :確定和表征患有由前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9 (PCSK9)功能獲得性突變引起 的常染色體顯性高膽固醇血癥的患者，并與患有家族性高膽固醇血癥（FH)和家族性載脂 蛋白B缺陷癥（抑B)的患者作比較
[0083] 常染色體顯性高膽固醇血癥（ADH)是一種常見的脂質(zhì)代謝素亂，特點(diǎn)為高 血清LDL膽固醇（LDkC)水平和屯、血管疾病的早期發(fā)作。（Robinson,J.Manag.Care 化arm. 2013, 19:139-149)。引起ADH的最常見突變是LDL受體（LDLR;家族性高膽固醇 癥[F田）或其配體載脂蛋白B(ApoB;家族性載脂蛋白B缺陷癥[FDB])突變。ADH也可W由PCSK9 功能獲得性突變（PCSK9-G0Fm)引起。（Seid址etal.，Proc.化tl.Acad.Sci. USA.2003, 100:928-933)。PCSK9GOFm出現(xiàn)在約1%的ADH患者中。目前僅報(bào)告了少數(shù) PCSK9G(Fm患者，而且其臨床綜合征的表述并不完整。
[0084] 為了更好地理解PCS腳G(Fm的地理和家族分布及其臨床表現(xiàn)，并與FH和抑B作 比較，開展了一項(xiàng)回顧性橫斷面平行組觀察隊(duì)列研究。研究中對潛在研究中屯、進(jìn)行了一項(xiàng) 全球性調(diào)查，共聯(lián)系了 200家研究中屯、，其中180家研究中屯、回應(yīng)，有16家研究中屯、做出積 極回應(yīng)。共有12家來自八個國家（法國、日本、挪威、葡萄牙、南非、荷蘭、英國和美國）的 研究中屯、積極參與。收集的數(shù)據(jù)包括患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)資料、基因型（PCSK9、LDLR、載脂蛋 白B、載脂蛋白E)、基線和治療中的血脂狀況、降脂治療化LT)、是否患有黃色瘤、險黃瘤和 角膜環(huán)，化及CVD患病率和發(fā)病年齡。通過分子學(xué)測試值NA測序）確診的PCSK9GOFm患 者與來自荷蘭注冊數(shù)據(jù)庫的經(jīng)分子學(xué)測試確診的FH(N= 2126)及FDB(N= 470)患者在年 齡和性別上進(jìn)行了匹配。LDLR基因突變被定性為"缺陷突變"（錯義、小框內(nèi)插入/缺失、 附加剪接位點(diǎn)的同義突變）或"缺失突變"（大或移框插入/缺失、無義、剪接位點(diǎn)、啟動子 突變），并比較了相應(yīng)的血脂狀況。
[0085] 本研究聯(lián)系了世界各地200家脂質(zhì)專科中屯、，其中法國、日本、挪威、葡萄牙、南 非、荷蘭、英國和美國的12家研究中屯、確定了 164例（男83例，女81例）PCSK9G0F突變 患者。運(yùn)些患者有16種不同的錯義突變，其中6種W前未報(bào)告過，運(yùn)6種W前未報(bào)告過的 G0Fm分別是V4I、E48K、P71レR96C、D129N和S465L。個別PCS腳G0F突變一般地理分布都 很局限，并僅見于少數(shù)譜系（圖1A和1B)。實(shí)例包括在挪威僅見于2個譜系的22例R215H 患者，W及僅見于日本的12例V4I患者和30例E32K患者（圖1)。PCSK9G(Fm患者的匯 總分析表明，未經(jīng)治療的總膽固醇和LDL膽固醇平均水平分別為359毫克/分升和272毫 克/分升。11例患者有PCSK9和LDLR基因雙重雜合子突變，運(yùn)些患者中未經(jīng)治療的血脂水 平往往比僅有相同G0F突變的患者要高，運(yùn)與先前報(bào)告的3位E32K雙重雜合子突變患者的 情況一致。
[0086]G0F突變見于所有蛋白結(jié)構(gòu)域及9個編碼外顯子中的5個（圖2)，并且與不同程 度的血脂異常有關(guān)（圖1B)。一般而言，PCSK9G(Fm患者的血脂異常要比FH或抑B患者更 嚴(yán)重，未經(jīng)治療的平均LDkC水平在PCS腳G(Fm患者中最高，在抑B患者中最低（圖3)。 每種突變相關(guān)的未經(jīng)治療的血脂水平與全部GOFm患者的血脂水平進(jìn)行了比較：雖然相同 基因突變的攜帶者之間存在顯著差異，但D374Y和S127R攜帶者血脂異常較嚴(yán)重，而E32K、 R21甜和S46化攜帶者的血脂異常相對較輕。
[0087] 對于有可用數(shù)據(jù)的PCSK9患者，53%有黃色瘤的證據(jù)，15%有險黃瘤的證據(jù)，22% 有角膜環(huán)的證據(jù)；33%有冠狀動脈疾病史；平均發(fā)病年齡為49. 4(13. 8)歲。PCSK9G(Fm患 者的臨床表現(xiàn)與CVD負(fù)擔(dān)在表1A中概述。 表1A:PCSK9G(Fm患者的臨床表現(xiàn)與CVD負(fù)擔(dān)
ajansenetal. ,ArteriosclerThrombVaseBiol.2005,25:1475-1481. *"Fouchieretal. ,SeminVaseMed. 2004, 4:259-264. "deSauvageNoltingetal. ,JInternMed. 2003, 253:161-168. Hansonetal. ,ArteriosclerThrombVaseBiol.1997,17:741-747.
[008引與先前報(bào)告一致，PCSK9G(Fm患者中常見與膽固醇升高有關(guān)的物理斑（圖2)，發(fā) 生率與FH和抑B(家族性載脂蛋白B缺陷癥）患者類似（表1A)。此外，44 %的PCS腳GOFm 患者有屯、血管疾病史，運(yùn)也與FH和抑B患者類似。冠狀動脈疾?。–AD)是最常見的表現(xiàn) (33% )，平均發(fā)病年齡為49. 4+13. 8歲（圖2和表1A)。
[0089]將PCS腳G(Fm患者與來自荷蘭高膽固醇血癥注冊數(shù)據(jù)庫的FH和抑B患者比較， 未經(jīng)治療的平均LDL膽固醇水平在PCS腳G(Fm患者中最高，在抑B患者中最低（表1B)。 FH患者中，定性為有"缺失突變"的患者的未經(jīng)治療的LDL膽固醇水平比定性為有"缺陷突 變"的患者的LDL膽固醇水平要高（表1B)。雖然降脂治療（主要是他汀類藥物）改善了 PCSK9G(Fm患者的血脂狀況，但有相當(dāng)比例的患者未能達(dá)到指南規(guī)定的LDL膽固醇水平。 表1B:家族性PCSK9功能獲得性突變（FGP)、家族性載脂蛋白B缺陷癥（FDB)，W及定 性為有LDLR"缺陷突變"或"缺失突變"的家族性高膽固醇血癥（FH)患者的未經(jīng)治療的血 脂狀況（平均+SD)比較。
與PCS腳GOF突變攜帶者相比，沖<0. 05 ;*沖<0. 01 ;**沖<0. 001。11例有PCSK9和LDLR雙重雜合子突變的患者被排除在分析之外。
[0090] FH和抑B源頭患者都比其家庭成員有較高的基線LDLC水平，有LDLR"缺失突變" 的患者比有"缺陷突變"的患者有較高的基線LDLC水平。
[0091] 雖然現(xiàn)有LTT(例如，他汀類藥物、依澤替米貝）可W改善PCSK9GOFm患者的脂質(zhì) 狀況（圖4)，但超過70 %的患者沒有達(dá)到LDkC<100毫克/分升的目標(biāo)，僅不到2 %的患者 達(dá)到<70毫克/分升的目標(biāo)（圖5)。 結(jié)論
[0092]PCSK9G(Fm導(dǎo)致嚴(yán)重的ADH，并且大部分患者都未能在接受當(dāng)前治療后達(dá)到 LDL-C的治療目標(biāo)。本觀察研究表明PCSK9G0F變體大多地理分布很有限，僅見于少數(shù)譜 系，并且表現(xiàn)出顯著的疾病嚴(yán)重程度相關(guān)表型變異。雖然G0F突變見于整個PCSK9編碼序 列，但本研究證實(shí)，D374Y或S127R突變攜帶者的未經(jīng)治療的平均LDL膽固醇水平顯著高于 其他所有PCSK9G0F突變的攜帶者。G0F變體的地理隔離表明其很可能來自不同人群的區(qū)域 性突變。在本研究中，研究者開展了大量工作來確定荷蘭和日本ADH患者的遺傳結(jié)構(gòu)，沒有 發(fā)現(xiàn)變體重疊，支持PCSK9G0F突變的地理隔離結(jié)論。
[0093] 盡管各種突變引起的疾病嚴(yán)重程度有變異，匯總分析顯示，PCSK9G(Fm患者的LDL 膽固醇水平