伴pcsk9功能獲得性突變的常染色體顯性高膽固醇血癥的治療方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設及治療伴血脂和脂蛋白水平升高的疾病和病癥的領(lǐng)域。更具體地說，本 發(fā)明設及使用PCSK9抑制劑來治療有一個或多個PCSK9基因功能獲得性突變的常染色體顯 性高膽固醇血癥患者。
【背景技術(shù)】
[0002] 常染色體顯性高膽固醇血癥（ADH)的特征是遺傳性高血清LDL膽固醇（LDkC)水 平和屯、血管疾病早期發(fā)作。A畑的病因包括LDL受體（LDLR)及其配體載脂蛋白B(apoB) 突變，W及（約1%的患者中）肝細胞LDLR的強效調(diào)節(jié)因子前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素 9 (PCS腳）的功能獲得性突變（G(Fm)。
[0003] 前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一種前蛋白轉(zhuǎn)化酶，屬于分泌性枯草桿菌 酶家族的蛋白酶K亞族。為降低血清總膽固醇、LDL膽固醇和血清甘油Ξ醋而使用PCSK9抑 制劑（抗PCSK9抗體），在美國第8062640、8357371號專利和第2013/0064834號美國專利 申請公開書中已有所說明。 發(fā)明概述
[0004]本發(fā)明提供了用于治療常染色體顯性高膽固醇血癥（ADH)，例如，由PCSK9功能 獲得性突變引起或與PCSK9功能獲得性突變相關(guān)的ADH的方法。本發(fā)明的方法包括選擇 PCSK9基因等位基因中有一個或兩個功能獲得性突變（GOFm)的ADH患者，并給患者施用含 有PCSK9抑制劑的醫(yī)藥組合物。
[0005] 可按照本發(fā)明的方法施用的PCSK9抑制劑包括例如抗PCSK9抗體或其抗原結(jié)合片 段?？捎糜趯嵤┍景l(fā)明之方法的具體的典型抗PCSK9抗體，包括如美國第8357371號專利 所述和/或本文所公開的任何抗體或抗原結(jié)合片段。
[0006] 所述PCSK9抑制劑可W皮下或靜脈注射的方式給受試者注射。此外，所述PCS腳 抑制劑也可施予在治療性干預時正在接受他汀類藥物治療方案的患者。
[0007] 在審閱隨后的詳細說明過程中，本發(fā)明的其他實施方案將變得明顯。 附圖的簡要說明
[0008] 圖1A顯示來自所分析的不同國家有各種PCSK9突變的個體人數(shù)（η)及每個相應 國家的系譜數(shù)目（Ρ)。"最小"表示譜系的最小數(shù)目（一些個體沒有顯示系譜）。
[0009] 圖1Β提供了家族性PCSK9功能獲得性突變（GOFm)患者的臨床數(shù)據(jù)摘要。
[0010] 圖2顯示有PCS腳GOFm而沒有LDLR突變的患者的基線LDL-C分布。P值是指有 特定突變時LDL-C的平均水平是否比有遺傳變體的群體顯著升高（向上箭頭）或下降（向 下箭頭）。
[0011]圖 3 顯示PCS腳GOFm(無LDLR突變，N=134)、即（有LDLR突變，N=2126 [受 試者與荷蘭注冊數(shù)據(jù)庫中的患者在年齡和性別上進行了匹配])和抑B(ApoB突變，N= 470 [受試者與荷蘭注冊數(shù)據(jù)庫中的患者在年齡和性別上進行了匹配])受試者的平均總膽 固醇、LDkC、皿心(：和甘油Ξ醋水平。（t)表示與PCS腳-GOFm受試者比較，P<0. 0001 ;(扣 表示與PCS腳-GOFm受試者比較，P<0. 001。
[0012] 圖4顯示PCS腳-G(Fm受試者對當前降脂治療化LT)的反應，依據(jù)是用藥前后報告 的血脂狀況。（*)表示p<0.0001 表示P<0.0002。LLT包括他汀類藥物（阿托伐他汀 10-80毫克、西伐他汀0. 3毫克、氣伐他汀30毫克、匹伐他汀1-4毫克、普伐他汀10-20毫 克、瑞舒伐他汀5-40毫克、辛伐他汀20-80毫克）、依澤替米貝10毫克或非諾貝特100-250 毫克。
[0013] 圖5顯示PCS腳G(Fm患者對當前降脂治療化LT)的反應，依據(jù)是有PCS腳G(Fm、 沒有LDLR突變、基線和治療中LDkC達到LDkC目標的情況（N= 63)。LDkC目標是基于 NCEP-ATPIII指南（Grundyetal.，Circulation2004,110:227-239)。
[0014] 圖6是實施例3中描述的臨床試驗的示意圖。A組患者在第-14、57、85和99天接 受安慰劑任80)，并在第1、15、29、43和71天接受減6316?(減6)。6組患者在第-14、1、71 和99天接受安慰劑（PB0)，并在第15、29、43、57和85天接受mAb316P(mAb)。兩組的單盲 安慰劑導入期都是第-14天到第1天；兩組的雙盲治療期都是第1天至第99天。隨訪期是 第99天至第155天。
[0015] 圖7顯示實施例3中描述的臨床試驗的所有13名患者在第8周時LDkC、載脂蛋 白B、TG、皿心(：、載脂蛋白A1和Lp(a)自基線的百分比變化。
[0016] 圖8顯示A組和B組患者在接受沿X軸灰色和白色箭頭所示的治療后，LDL-C測 量值（暈克/分升）隨時間的變化。
[0017] 圖9顯示A組和B組患者在接受沿X軸灰色和白色箭頭所示的治療后，游離PCSK9 自基線隨時間的變化（％)。
[001引 圖10顯示有各種PCS腳G0F突變值364Y、L108R、S127R和R218巧的患者在接受 沿X軸灰色和白色箭頭所示的治療后，LDkC自基線隨時間的變化（％)。
[0019] 圖11顯示有各種PCS腳G0F突變值364Y、L108R、S127R和R218巧的患者在接受 沿X軸灰色和白色箭頭所示的治療后，游離PCSK9自基線隨時間的變化（％ )。 詳細說明
[0020] 在說明本發(fā)明之前先要指出，應該理解，本發(fā)明并不限于所述的具體方法和實驗 條件，因為運些方法和條件是可W改變的。還應理解，本文所用的術(shù)語僅出于說明具體實施 方案的目的，并非意在限制本發(fā)明，因為本發(fā)明之范圍僅受所附權(quán)利要求書的限制。
[0021] 除非另有定義，本文所用的所有技術(shù)和科學術(shù)語的含義均將與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng) 域的普通專業(yè)人員通常理解的相同。本文中所用的術(shù)語"大約"，當用于列出的某一具體數(shù) 值時，意為該數(shù)值可在與所列數(shù)值相差不超過1 %的范圍內(nèi)變化。例如，本文中所用的表達 "約100"包括99和101W及運兩者之間所有數(shù)值（例如99. 1、99. 2、99. 3、99. 4等）。
[0022] 盡管與本文所述的方法和材料類似或相當?shù)娜魏畏椒ê筒牧隙伎捎糜诒景l(fā)明之 實施，但現(xiàn)在說明的是首選的方法和材料。本文所提及的所有出版物均通過引用而W其整 體納入本文。 治療常染色體顯性高膽固醇血癥的方法
[0023] 本發(fā)明提供了治療常染色體顯性高膽固醇血癥（ADH)的方法。在某些實施方案 中，本發(fā)明提供了一些方法，用于治療由PCSK9的一個或多個功能獲得性突變（GOFm)引起 或與PCSK9的一個或多個功能獲得性突變（GOFm)有關(guān)的ADH。如本文所用/'PCS腳G(Fm"運一表達是指編碼PCSK9蛋白的一個或兩個等位基因的任何突變，其導致的氨基酸改變可 增強人類患者體內(nèi)PCSK9降低LDL受體水平的能力，或與高膽固醇血癥有關(guān)或相關(guān)。典型的 PCS腳G0F突變包括V4I、E32K、D35Y、E48K、P71L、R96C、L108R、S127R、D129N、R21甜、F21化、 R218S、R357H、D374H、D374Y、S46化和R496W。
[0024]本發(fā)明的方法包括選擇PCSK9基因的一個或兩個等位基因有GOFm的患者，并給患 者施用含有PCSK9抑制劑的醫(yī)藥組合物。G(Fm可W是任何PCS腳G0F突變。根據(jù)某些實施 方案，所述G(Fm編碼含有氨基酸替換的PCSK9變體蛋白，該氨基酸替換選自由V4I、E32K、 D35Y、E48K、P71L、R96C、L108R、S127R、D129N、R215H、F216L、R218S、R357H、D374H、D374Y、 S46化和R496W組成的一組突變。確定患者是否有PCS腳G(Fm的方法是本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知 的。例如，在本發(fā)明的背景下，可W使用PCSK9基因的DNA序列分析來確定攜帶編碼PCS腳 GOFm的一個或多個等位基因的患者。用于確定PCSK9G0F突變的基于蛋白質(zhì)組學的方法也 包括在本發(fā)明的方法范圍內(nèi)。
[0025]在某些實施方案中，可基于是否顯示高膽固醇血癥的一個或多個其他特征或風險 因素來進一步選擇患者。例如，本發(fā)明包括W下方法：即在給予含有PCSK9抑制劑的醫(yī)藥 組合物之前基于血漿LDL-C水平大于或等于約70毫克/分升運一指標，進一步選擇PCS腳 GOFm患者進行治療。在其他實施方案中，在給予含有PCSK9抑制劑的醫(yī)藥組合物之前基于 身體質(zhì)量指數(shù)（BMI)大于約18. 0千克/平方米運一指標，進一步選擇PCS腳G(Fm患者。
[0026]根據(jù)本發(fā)明，在給予含有PCSK9抑制劑的醫(yī)藥組合物之時或之前，患者可正在接 受背景降脂治療。背景降脂治療的實例包括他汀類藥物[例如，西伐他汀、阿托伐他汀、辛 伐他汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、氣伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等]、依澤替米貝、貝特類、煙 酸、ω-3脂肪酸和膽汁酸樹脂。
[0027]將W本發(fā)明之方法治療的患者可基于由選自下列一組因素的一個或多個因素來 選擇：年齡（例如40、45、50、55、60、65、70、75或80歲W上）、種族、民族起源、性別（男性或 女性）、鍛煉習慣（例如經(jīng)常鍛煉、不鍛煉）、其他原有疾病（例如II型糖尿病、高血壓等）， W及目前的用藥狀態(tài)（例如目前正在服用他汀類藥物[例如西伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他 汀、匹伐他汀、瑞舒伐他汀、氣伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等]、β-受體阻斷劑、煙酸等）。 本發(fā)明的方法還可W用于治療對常規(guī)他汀類藥物治療不耐受、無反應或反應不足的ADH患 者?？赡艿幕颊呷诉x可在用本發(fā)明之方法治療之前，在一種或多種前述選擇因素的基礎上 選擇/篩選（例如通過問卷、診斷評估等）。
[002引本發(fā)明的方法導致了選自由LDkC、載脂蛋白Β100、非皿kC、總膽固醇、VLDkC、 甘油Ξ醋、Lp(a)和殘余膽固醇組成的一組脂質(zhì)組分的一種或多種脂質(zhì)組分的血清水平下 降。例如，根據(jù)本發(fā)明的某些實施方案，給PCS腳G(Fm受試者施用含有PCSK9抑制劑的醫(yī)藥 組合物后，導致血清低密度脂蛋白膽固醇（LDkC)自基線平均下降百分比為至少約25%、 30%、40%、50%、60%或^上；載脂蛋白8100自基線平均下降百分比為至少約25%、30%、 40%、50%、60%或W上；非皿kC自基線平均下降百分比為至少約25%、30%、40%、50%、 60%或W上；總膽固醇自基線平均下降百分比為至少約10%、15%、20%、25%、30%、35% 或W上；VLDkC自基線平均下降百分比為至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%或^上； 甘油Ξ醋自基線平均下降百分比為至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%或^上； 及/或Lp(a)自基線平均下降百分比為至少約5 %、10 %、15 %、20 %、25 %或W上。 PCSK9抑制劑
[0029] 本發(fā)明之方法包括給患者施用含有PCSK9抑制劑的治療組合物。本文所用的術(shù)語 "PCSK9抑制劑"是在體外或體內(nèi)與人PCSK9結(jié)合或與其相互作用并抑制PCSK9的正常生物 功能的任何藥劑。PCSK9抑制劑類別的非限制性實例包括小分子PCSK9括抗劑、膚基PCS腳 括抗劑（例如"膚抗體"分子），W及與人PCSK9特異性結(jié)合的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段。
[0030] 本文所用的術(shù)語"人類前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9"或"人PCS腳"或"hPCS腳"是 指含有序列754所示核酸序列和序列755所示氨基酸序列或其生物活性片段的PCSK9。
[0031] 本文所用的術(shù)語"抗體"意指由四條多膚鏈，即兩條重做鏈和兩條輕（L)鏈W二 硫鍵相互連接而組成的免疫球蛋白分子及其多聚體（例如IgM)。每條重鏈均包含一個重 鏈可變區(qū)（本文簡稱為HCVR或Vh)和一個重鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含Ξ個結(jié)構(gòu)域，CJ、 句2和句3。每條輕鏈均包含一個輕鏈可變區(qū)（本文中簡稱為LCVR或\)和一個輕鏈恒定 區(qū)。該輕鏈恒定區(qū)包含一個結(jié)構(gòu)域（CJ)。Vh和Vl區(qū)可進一步分為稱為互補決定區(qū)（CDR) 的高變區(qū)，其中散布著較保守的稱為框架區(qū)（FR)的區(qū)域。每個Vh和Vl均由Ξ個CDR和四 個FR組成，從氨基端到簇基端按W下順序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在 本發(fā)明另一些實施方案中，抗PCSK9抗體（或其抗原結(jié)合部分）的FR可能與人類種系序列 相同或可能經(jīng)過天然或人工修飾。氨基酸共有序列可根據(jù)兩個或兩個W上CDR的并排分析 而定義。
[0032] 本文所用的術(shù)語"抗體"還包括完整抗體分子的抗原結(jié)合片段。本文所用的抗體 的"抗原結(jié)合部分"、抗體的"抗原結(jié)合片段"等術(shù)語，包括與抗原特異性結(jié)合而形成復合體 的任何天然產(chǎn)生的、可W酶促方式獲得的、合成的或基因改造的多膚或糖蛋白?？贵w的抗原 結(jié)合片段可W利用任何適宜的標準技術(shù)，例如蛋白水解消化或設及編碼抗體可變區(qū)和（可 選）恒定區(qū)的DNA之操縱和表達的重組基因改造技術(shù)，從例如完整抗體分子產(chǎn)生。此類DNA 是已知的及/或很容易從例如市售來源、DNA庫（包括例如隧菌體-抗體庫）獲得，或可W 合成。該DNA可W測序且W化學方法或分子生物學技術(shù)加W操縱，例如將一個或多個可變 區(qū)和/或恒定區(qū)排列成一種適宜的結(jié)構(gòu)，或引入密碼子、產(chǎn)生半脫氨酸殘基、修飾、添加或 刪除氨基酸等。
[003引抗原結(jié)合片段的非限制性實例包括：（i)F油片段；（ii)F(油'）2片段；（iU)Fd片段；（iv)Fv片段；(V)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；及（vii)由模擬該抗體高變區(qū)的 氨基酸殘基（例如一個孤立的互補決定區(qū)CDR，如CDR3膚）或FR3-CDR3-FR4結(jié)構(gòu)約束膚組 成的最小識別單位。本文所用的"抗原結(jié)合片段"運一術(shù)語還包括其他工程改造的分子，如 結(jié)構(gòu)域特異性抗體、單域抗體、結(jié)構(gòu)域刪除的抗體、嵌合抗體、CDR嫁接的抗體、雙抗體、Ξ聚 抗體、四聚抗體、微型抗體、納米抗體（例如單價納米抗體、二價納米抗體等）、小模塊免疫 藥物（SMIP)及整魚可變IgNAR域。
[0034] 抗體的抗原結(jié)合片段通常會包含至少一個可變區(qū)?？勺冇蚩蒞是任何大小或可具 有任何氨基酸組成，且通常會包含至少一個鄰近于一個或多個框架序列或位于其中的CDR。 在含有與V返相連接之VΗ區(qū)的抗原結(jié)合片段中，該VΗ區(qū)和V厄的相對位置可W任何適宜 方式排列。例如，該可變區(qū)可W是二聚化的且含有二聚體?；蛘?，抗體 的抗原結(jié)合片段可含有一個單一的Vh區(qū)或V^區(qū)。
[0035] 在某些實施方案中，抗體的抗原結(jié)合片段可含