4] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/5,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入5倍體積、濃度為95 %的乙醇，均放置于4°C下保持36h，醇沉后離心，收集沉淀物，沉 淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0155] 所用酶為0. 3wt%葡萄糖氧化酶水溶液：取葡萄糖氧化酶3g，精密稱定，先用少量 的水溶解，然后加入適量的水，兩次加水共計l〇〇〇g，混勻，即得。
[0156] 經(jīng)檢測，提取得到的桑葚多糖提取物中含有多糖70wt % (苯酚-硫酸法）、糖醛酸 21wt% (間羥基聯(lián)苯比色法）、蛋白質(zhì)lwt% (Bradford法）和硫酸酯5wt% (氯化鋇-明 膠法）。其中多糖由質(zhì)量比為2.4 : 1 : 2.5 : 61 : 3.4 : 18.8 : 13的鼠李糖殘基、巖 藻糖殘基、木糖殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0157] 實施例5 -種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0158] (1)除雜：將100g桑葚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0159] (2)脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入300mL95%乙醇回流兩 次，再加入300mL90%乙醚回流兩次，每次回流120分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0160] (3)將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量20倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為6,保持溫度在60°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 004倍的葡萄糖氧化酶進行 酶解，酶解時間為90分鐘；
[0161] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進行超聲處理，超聲頻率為90KHz，時間為30分鐘，得 提取液；
[0162] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/3,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入4倍體積、濃度為95 %的乙醇，均放置于3°C下保持40h，醇沉后離心，收集沉淀物，沉 淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0163] 所用酶為0. 25wt%葡萄糖氧化酶水溶液：取葡萄糖氧化酶2. 5g，精密稱定，先用 少量的水溶解，然后加入適量的水，兩次加水共計l〇〇〇g，混勻，即得。
[0164] 經(jīng)檢測，提取得到的桑葚多糖提取物中含有多糖、糖醛酸、蛋白質(zhì)和硫酸酯，其中 多糖的含量為60wt % (苯酚-硫酸法），糖醛酸的含量為15wt % (間羥基聯(lián)苯比色法）。所 述多糖由質(zhì)量比為2.2 : 0.8 : 2.4 : 60 : 3.3 : 18.6 : 12. 7的鼠李糖殘基、巖藻糖殘 基、木糖殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
[0165] 實施例6 -種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0166] (1)除雜：將200g桑葚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用；
[0167] (2)脫脂、脫色：將步驟⑴所得原料置于容器中，先加入300mL85%乙醇回流兩 次，再加入200mL無水乙醚回流兩次，每次回流90分鐘，回流完畢后，晾干，備用；
[0168] (3)將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量21倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為7,保持溫度在50°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 005倍的葡萄糖氧化酶進行 酶解，酶解時間為45分鐘；
[0169] (4)將步驟⑶中酶解產(chǎn)物進行超聲處理，超聲頻率為60KHz，時間為15分鐘，得 提取液；
[0170] (5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/4,乙醇沉淀兩次，兩次 均加入6倍體積、濃度為90 %的乙醇，均放置于5°C下保持20h，醇沉后離心，收集沉淀物，沉 淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。
[0171] 經(jīng)檢測，提取得到的桑葚多糖提取物中含有多糖、糖醛酸、蛋白質(zhì)和硫酸酯，其中 多糖的含量為64wt% (苯酚-硫酸法），糖醛酸的含量為22wt% (間羥基聯(lián)苯比色法）。
【主權(quán)項】
1. 一種桑葚多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 除雜：將桑葚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用； (2) 脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先后加入乙醇、乙醚進行回流，回流 完畢后，晾干，備用； (3) 將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入水，調(diào)節(jié)pH值，保溫，加入葡萄糖氧化酶進行 酶解； (4) 將步驟（3)中酶解產(chǎn)物進行超聲處理，得提取液； (5) 將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮，醇沉兩次，離心，收集沉淀物，沉淀物用無 水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的桑葚多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 除雜：將桑葚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用； (2) 脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流兩次， 再加入90%~100%乙醚回流兩次，每次回流60~150分鐘，回流完畢后，晾干，備用； (3) 將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量6~25倍的水，調(diào) 節(jié)pH值為3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 001~0. 006倍 的葡萄糖氧化酶進行酶解，酶解時間為15~120分鐘； (4) 將步驟（3)中酶解產(chǎn)物進行超聲處理，超聲頻率為20~lOOKHz，時間為10~40 分鐘，得提取液； (5) 將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/5~1/3,乙醇沉淀兩次，兩 次均加入4~6倍體積、濃度為90 %~100 %的乙醇，均放置于3°C~5°C下保持12h~48h ; 醇沉后離心，收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的桑葚多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步驟： (1) 除雜：將桑葚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用； (2) 脫脂、脫色：將步驟（1)所得原料置于容器中，先加入無水乙醇回流兩次，再加入無 水乙醚回流兩次，每次回流105分鐘，回流完畢后，晾干，備用； (3) 將步驟（2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量11倍的水，調(diào)節(jié)pH 值為5,保持溫度在58°C，加入步驟（2)所得產(chǎn)物重量0. 003倍的葡萄糖氧化酶進行酶解， 酶解時間為38分鐘； (4) 將步驟（3)中酶解產(chǎn)物進行超聲處理，超聲頻率為80KHz，時間為20分鐘，得提取 液； (5) 將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮至原體積的1/4,乙醇沉淀兩次，兩次均加 入5倍體積、濃度為95%的乙醇，均放置于4°C下保持30h ;醇沉后離心，收集沉淀物，沉淀 物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到桑葚多糖提取物。4. 根據(jù)權(quán)利要求1~3任一項所述的桑葚多糖的提取方法，其特征在于：所述葡萄糖 氧化酶為0. 2wt %~0. 4wt %葡萄糖氧化酶水溶液。5. 如權(quán)利要求1~4任一項所述的桑葚多糖的提取方法提取得到的桑葚多糖提取物。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的桑葚多糖提取物，其特征在于：所述提取物中含有多糖、糖 醛酸、蛋白質(zhì)和硫酸酯，其中多糖的重量百分含量大于55%，糖醛酸的重量百分含量大于 12%〇7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的桑葚多糖提取物，其特征在于：按照重量百分?jǐn)?shù)計，所述提取 物中含有多糖65%~70%、糖醛酸16%~21 %、蛋白質(zhì)1 %~2%和硫酸酯5%~7%。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的桑葚多糖提取物，其特征在于：按照重量百分?jǐn)?shù)計，所述提取 物中含有多糖67. 9%、糖醛酸18. 5%、蛋白質(zhì)1.6%和硫酸酯6. 2%。9. 根據(jù)權(quán)利要求6、7或8所述的桑葚多糖提取物，其特征在于：所述多糖由質(zhì)量比為 1.8~2.4 : 0.3~1 : 1.9~2.5 : 60~61 : 2. 8~3.4 : 18~18.8 : 12.2~13 的鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、木糖殘基、甘露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖 殘基組成。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的桑葚多糖提取物，其特征在于：所述多糖由質(zhì)量比為 2. 1 : 0.6 : 2.2 : 60. 5 : 3.1 : 18.4 : 12. 5的鼠李糖殘基、巖藻糖殘基、木糖殘基、甘 露糖殘基、半乳糖殘基、半乳糖醛酸殘基和葡萄糖殘基組成。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種桑葚多糖的提取方法，包括以下步驟：1)除雜：將桑葚原料進行水洗，干燥，粉碎，備用；2)脫脂、脫色：將步驟1)所得原料置于容器中，先后加入乙醇、乙醚進行回流，回流完畢后，晾干，備用；3)將步驟2)所得產(chǎn)物置于容器中，加入水，調(diào)節(jié)pH值，保溫，加入酶進行酶解；4)將步驟3)中酶解產(chǎn)物進行超聲處理，得提取液；5)將提取液趁熱過濾，得濾液，將濾液濃縮，醇沉兩次，離心，收集沉淀物，沉淀物用無水乙醇反復(fù)洗滌，干燥，得到提取物。本發(fā)明的提取方法采用生物酶酶解與超聲相結(jié)合，提取效率是單獨超聲提取的1.61倍，得率達到16.16％左右，是一種安全、環(huán)保、高效的提取方法，所得提取物活性高。
【IPC分類】C08B37/00
【公開號】CN105037575
【申請?zhí)枴緾N201510432098
【發(fā)明人】周欣, 陳華國, 鄧青芳, 趙超, 龔小見
【申請人】貴州師范大學(xué)
【公開日】2015年11月11日
【申請日】2015年7月22日