ca2-8) 2 聚唾液酸、NeuAca2-6Galb、 化114誠2-66日1日（5化）、0日1日1-36日化1-461日臟誠（化114〇日2-8)3、0日1魁〇〇日-3(尸11〇〇1-2) Gale(血型A)、Gal口l-3(Fuc口l-2)Gale(血型B)、6Gal-HS03-SiaLex、 6GluNAc-服03-SiaLex及a2-6唾液酸化雙觸角N-聚糖。在一個實施例中，碳水化合物 抗原為GloboH。"GloboH"為己醋（Fuca1 一 2Gal0 1 一 3GalNAc0 1 一 3Gala1 一 4GalP1 一 4GlcP1)，其最初自人類乳癌細胞株MCF-7分離（MenardS、Tagli油ueE、Canevari S、化ssatiG、Colna曲iMI(1983)"與人類乳房的正常及癌癥細胞反應的單株抗原的產 生"（Generationofmonoclonalantibodiesreactingwithnormalandcancercells ofhumanbreast).癌癥研究期刊（CancerRes), 43, 1295-300 ;及化emerEG、Leve;rySB、 SonninoS、化idoniRXanevariS、KannagiR、化komoriS. (1984)"透過表現于人類乳腺 的正常和腫瘤上皮細胞的單株抗體MBrl界定的銷糖脂抗原的描述"煙laracterizationof aglycosphingolipidantigendefinedbythemonoclonalantibodyMBrlexpressed innormalandneoplasticepithelialcellsofhumanmammarygland).生物化學期 刊（JBiolChem)，259，14773-7)。GloboH在各種上皮細胞腫瘤（諸如結腸、卵巢、胃、膜 臟、子宮內膜、肺、前列腺及乳房癌）中表現（MenardS等人，前述；BremerEG等人，前述； CanevariS、FossatiG'BalsariA、SonninoS、Colna曲iMI(1983))。Glob細為可市售的 (例如卡波西斯公司，英國（Carbosynth，UK))且可藉由使用此項技術中熟知的方法連接醋 巧至神經酷胺而合成。
[0048] 在堿性條件下，亦即在超過或等于8、超過或等于9、超過或等于10、超過或等于 11或超過或等于12的抑下，制造碳水化合物抗原與類毒素蛋白的比率大于或等于5:1 的疫苗?？山逵纱隧椉夹g中已知的方法，例如MLDI-T0F質譜分析來測定碳水化合物抗 原與類毒素蛋白的比率。美國專利第8,268,969號；亦參見齡'6116￥，尸曰1(1￥，化^曰* F,MichalskiJC.MethodsMolBiol. 2009 ；534:5-21.doi:10. 1007/978-1-59745-022-5_ 1."使用MLDI-TOF質譜儀分析來自糖蛋白的N-及0-連接的聚醋"（AnalysisofN-and 0-1inkedglycansfromglycoproteinsusingMALDI-TOFmassspectrometry)。
[0049] 疫苗可進一步包含佐劑，其中該佐劑為諸如OPT-821的皂素，其在本文中描述或 為a-半乳糖基-神經酷胺的合成類似物（a -GalCer或C1)。
[0050] 術語"a-半乳糖基-神經酷胺"及"a-GalCer"是指刺激自然殺手T細胞來產生 T輔助（TH) 1及TH2細胞激素的醋脂，如美國專利第8, 268, 969號中所述，該美國專利的內 容W全文引用的方式并入本文中。在一個實施例中，a-GalCer佐劑具有W下結構：
[0051]
[0052]其中R為（邸2)24邸3、（邸2)yPhF、（邸2)1。化OPhF或（C肥）10化F。
[0053] 在一個實施例中，R為（邸2)1。化OPhF，稱為C34佐劑，具有W下結構：
[0054]
陽化引 新穎皂素化劑
[0056] 本發(fā)明提供可實質上純的0PT-821皂素。本發(fā)明包涵實質上純的0PT-821皂素W 及生物活性片段。本發(fā)明亦可包涵不純形式的0PT-821皂素。經純化的0PT-821皂素當與 本文所述的疫苗一起投與或與其他實質上純的皂素或非皂素佐劑混合時，展現增強的佐劑 效應。 陽057] 0PT-821皂素為天然存在的醋巧，藉由如例如美國專利第5, 057, 540號及美 國專利第6, 524, 584號（其內容W全文引用的方式并入本文中）中所描述的高壓液 相層析（HPLC)、低壓液體二氧化娃層析及親水性交互層析化ILIC)自奎拉雅屬皂樹 (如illajasaponariaMolinatree)的樹皮W高純度提取。高壓液相層析分析顯示0PT-821 為結構相關的異構化合物的混合物。0PT-821皂素不同的純化異構化合物在本文中掲示。
[0058] 0PT-821皂素包含至少一種如下經分離的式I化合物：
[0059]
W60] 其中
[0061] Ri為P-D-芹菜糖或P-D-木糖；及
[0062] R2及R3獨立地為H、烷基、
[00化]0PT-821皂素亦可包含經分離的式I化合物，其中（i)Ri為P-D-芹菜糖，R2為上 文所描繪的1989化合物的脂肪酷基部分，及R3為H(1989化合物VIA) ; (ii)R1為P-D-芹 菜糖，R2為H，及R3為上文所描繪的1989化合物的脂肪酷基部分（1989化合物V1B) Ri為P-D-木糖，R2為上文所描繪的1989化合物的脂肪酷基部分，及R3為H(1989化合物V2A);或（iv)Ri為P-D-木糖，R2為H，及R3為上文所描繪的1989化合物的脂肪酷基部分 (1989化合物V2B)?？傊?，1989化合物VIA、1989化合物V1B、1989化合物V2A及1989化合 物V2B稱為"1989化合物混合物"。
[0066] 表1概述1989化合物的官能基及1989化合物混合物中的各1989化合物的摩 爾％。
[0067]表1
[0068]
[0069]
[0070] OPT-821皂素可包含經分離的式I化合物，其中：（i)Ri為P-D-芹菜糖，R2為上文 所描繪的1857化合物的脂肪酷基部分，及R3為H(1857化合物VIA) ; (ii)R1為P-D-芹菜 糖，R2為H，及R3為上文所描繪的1857化合物的脂肪酷基部分（1857化合物V1B) ; (iii) Ri為P-D-木糖，R2為上文所描繪的1857化合物的脂肪酷基部分，及R3為H(1857化合物 V2A);或（iv)Rl為P-D-木糖，R2為H，及R3為上文所描繪的1857化合物的脂肪酷基部分 (1857化合物V2B)?？傊?，1857化合物VIA、1857化合物V1B、1857化合物V2A及1857化合 物V2B稱為"1857化合物混合物"。 陽071]表2概述1857化合物的官能基及1857化合物混合物中的各1857化合物的摩 爾％。 柳巧表2
[0073]
[0074]
陽0巧]0PT-821皂素包含W下化合物中的一種或多種：（i) 1857化合物VIA; (ii) 1857化 合物V1B; (iii) 1857 化合物V2A; (iii) 1857 化合物V2B; (iv) 1989 化合物VIA; (V) 1989 化 合物V1B; (vi) 1989化合物V2A;或（vii) 1989化合物V2B。0PT-821皂素中的1857化合物 混合物與1989化合物混合物的百分比在如下范圍內：
[0076] (i)約1摩爾％至約15摩爾％的1857化合物混合物；及
[0077] (ii)約85摩爾％至約99摩爾％的1989化合物混合物。
[0078] 所有摩爾％均可W0. 1 %增量變化（例如約87%至約90%、約90. 5%至約97%、 約3. 5%至約11 %、約10%至約14% )。
[0079] 1989化合物混合物可包含約60-70摩爾％的1989化合物VIA;約1-5摩爾％的 1989化合物V1B;約30-40摩爾％的1989化合物V2A;及約0. 1-3摩爾％的1989化合物 ￥28。所有摩爾％均可^〇.1增量變化（例如65%、2.5%、35.6%)。
[0080] 1857化合物混合物可包含約60-70摩爾％的1857化合物VIA;約1-5摩爾％的 1857化合物V1B;約30-40摩爾％的1857化合物V2A;及約0. 1-3摩爾％的1857化合物 ￥28。所有摩爾％均可^〇.1增量變化（例如67%、1.5%、33.9%)。
[0081] 在另一實施例中，實質上純的0PT-821是自奎拉雅屬皂樹粗提取物純化，其中該 0PT-821的特征為當在具有5ym粒度、1貧〇A孔隙、4.6mmIDX25cmL的對稱性C18管柱 的逆相HPLC上使用包含A:B為95% :5%至75% :25%的移動相的溶離程式分析11分鐘 時，單個主峰占層析圖中除溶劑峰外所有峰的總面積的90%或更多，其中移動相A為含有 0.1%S氣乙酸的蒸饋水且移動相B為含有0.1%S氣乙酸的乙臘，流動速率為Iml/min。
[0082] 在一個實施例中，醫(yī)藥組合物包含式（I)化合物
[0083]
[0084]其中， 陽0財 Ri為0 -D-芹菜糖或0 -D-木糖；及
[0086] R2及R3獨立地為H、烷基、或
[0087]
(1857化合物的脂肪酷基部分），
[0088] 及醫(yī)藥學上可接受的載劑。
[0089] 疫苗可包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及0PT-821皂素。在另一實施例 中，疫苗包含選自GloboH、SSEA-3、SSEA-4、抓-4或其混合物的碳水化合物抗原、DT及 0PT-821皂素。在又一實施例中，疫苗包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段；載體蛋白及 0PT-821皂素。載體蛋白的非限制性實例包括類毒素蛋白及非類毒素蛋白（諸如KLH)。
[0090] 類毒素蛋白
[0091] 與碳水化合物抗原結合的類毒素蛋白可為白喉毒素值T)或破