具有較高碳水化合物抗原密度的疫苗及新穎皂素佐劑的制作方法
【專利說(shuō)明】具有較高碳水化合物抗原密度的疫苗及新穎皂素佐劑
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)案的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)案主張2013年1月4日申請(qǐng)的美國(guó)申請(qǐng)案第61/748, 880號(hào)的權(quán)益，該美 國(guó)申請(qǐng)案的全部掲示內(nèi)容W引用的方式并入本文中。 陽(yáng)00引先前技術(shù)
[0004] 癌癥疫苗經(jīng)設(shè)計(jì)藉由免疫系統(tǒng)強(qiáng)化身體天然保護(hù)自身的能力來(lái)治療癌癥。其始終 代表一種極具吸引力的治療方法，尤其鑒于在癌癥治療中習(xí)知的手術(shù)、福射及化學(xué)療法存 在許多缺點(diǎn)。然而，由于癌癥碳水化合物抗原的低免疫原性及許多合成疫苗主要誘發(fā)IgM 及較低程度的IgG抗體，該癌癥疫苗的有效性仍為低的。已探索不同的方法（諸如使用佐 劑）W促進(jìn)免疫識(shí)別及活化。 陽(yáng)〇化]目前仍存在一種未滿足的需要，即開(kāi)發(fā)一種具有改良免疫反應(yīng)（尤其為IgG反應(yīng)） 的癌癥疫苗及有效佐劑。本發(fā)明提供針對(duì)碳水化合物抗原的疫苗及佐劑W滿足此等及其他 需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明掲示一種包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及類毒 素蛋白的疫苗，其中碳水化合物抗原與類毒素蛋白的比率在5:1至39:1范圍內(nèi)，其中該比 率表示碳水化合物抗原與類毒素蛋白的分子數(shù)比。已發(fā)現(xiàn)碳水化合物抗原與類毒素蛋白的 比率在5:1至39:1范圍內(nèi)的疫苗的IgG產(chǎn)量相比于碳水化合物抗原與類毒素蛋白的比率 等于或小于4:1的疫苗的IgG產(chǎn)量較高。
[0007] 本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例提供經(jīng)分離的式（I)化合物
[0008]
[0009] 或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽；
[0010] 其中
[0011] Ri選自0 -D-芹菜糖或0 -D-木糖； 陽(yáng)01引 R2及R3選自H、烷基或
[0013] 本發(fā)明另一實(shí)施例提供醫(yī)藥組合物，其包含式（I)化合物
[0014]
[0015] 或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，
[0016] 其中
[0017] R堪選自P-D-芹菜糖或P-D-木糖； 陽(yáng)0化]R2及R3是選自H、烷基或
[0019] 及醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑。
[0020] 本發(fā)明第S實(shí)施例提供新穎皂素佐劑0PT-821，其包含1857化合物VIA、1857化合 物V1B、1857化合物V2A及1857化合物V2B。
[0021] 本發(fā)明第四實(shí)施例提供包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及OPT-821皂素 佐劑的疫苗。在一個(gè)實(shí)施例中，疫苗進(jìn)一步包含載體蛋白。已發(fā)現(xiàn)含有0PT-821皂素佐劑 的疫苗的IgG產(chǎn)量、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)及/或補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性 (CDC)活性相比于不含0PT-821皂素佐劑的疫苗較高。
[0022] 本發(fā)明亦是關(guān)于用于W下的方法：（i)抑制癌細(xì)胞，其包含向有需要的個(gè)體投與 有效量的本文所述的疫苗，其中癌細(xì)胞受到抑制；及（ii)誘發(fā)免疫反應(yīng)，其包含向有需要 的個(gè)體投與有效量的本文所述的疫苗。
[0023] 本發(fā)明亦掲示包含本文所述的疫苗及醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑或載劑的醫(yī)藥組 合物。
[0024] 含有此等術(shù)語(yǔ)的陳述應(yīng)理解為不限制本文所述的主題或不限制W下專利申請(qǐng)專 利范圍的涵義或范疇。此專利涵蓋的本發(fā)明的實(shí)施例藉由W下申請(qǐng)專利范圍而非此發(fā)明內(nèi) 容限定。此
【發(fā)明內(nèi)容】
為本發(fā)明的各種態(tài)樣的高層次綜述且引入一些進(jìn)一步描述于W下具體 實(shí)施方式部分中的概念。此
【發(fā)明內(nèi)容】
并不意欲確定所主張的主題的關(guān)鍵或基本特征，亦不 意欲孤立使用W確定所主張的主題的范疇。主題應(yīng)參照整個(gè)說(shuō)明書(shū)的適當(dāng)部分、任一或所 有圖式及各申請(qǐng)專利范圍來(lái)理解。
[0025] 當(dāng)閱讀W下附圖及【具體實(shí)施方式】時(shí)，本發(fā)明將變得更加清楚。
【附圖說(shuō)明】
[00%] W下圖式詳細(xì)描述本發(fā)明的說(shuō)明性實(shí)施例：
[0027] 圖1A說(shuō)明W下組合物第24天的抗GloboHIgG效價(jià)的柱狀圖：GloboH/KLH/ OPT-821 皂素、GloboH/DT/0PT-821 皂素、GloboH/DT/C：M及GloboH/KLH/C34。
[0028] 圖IB為說(shuō)明圖lA中的組合物歷經(jīng)24天時(shí)期的抗GloboHIgG效價(jià)的線繪圖。
[0029] 圖2為顯示歷經(jīng)24天時(shí)期在小鼠中G2疫苗（GloboH/DT(8:1))、G3疫苗（Globo H/DT(8:1)/OPT-821)及G4 疫苗（GloboH/DT(24:1)/OPT-821)的活體內(nèi)ADCC及CDC活性 的柱狀圖組合。圖2A說(shuō)明ADCD原始資料，圖2B說(shuō)明ADCD標(biāo)準(zhǔn)化資料，圖2C說(shuō)明CDC原 始資料且圖2D說(shuō)明CDC標(biāo)準(zhǔn)化資料。
[0030] 圖3A及圖3B為說(shuō)明W下組合物歷經(jīng)24天時(shí)期的總體IgM及IgG效價(jià)的線繪圖： G1(GloboH/KLH/0PT-821)、G2(GloboH/DT(3:1) /OPT-821)、G3 及G4(GloboH/DT(8:1) / OPT-821)、G5(GloboH/DT(8:1)/C34)、G6(GloboH/KLH/C34)、G7(GloboH/DT(16:1)/ OPT-821)及G8(PBS)。
[0031] 圖4為顯示列于圖3中的組合物在第10天、第17天及第24天的IgM及IgG反應(yīng) 的柱狀圖組合：圖（A)至似說(shuō)明列于圖3中的組合物分別在第10天、第17天及第24天 的IgM反應(yīng)。圖做至（巧說(shuō)明列于圖3中的組合物分別在第10天、第17天及第24天的 IgG反應(yīng)。 陽(yáng)03引圖5A至圖5C為OPT-821 (包含化合物1989及1857)的質(zhì)譜影像。
[0033] 圖6為0PT-821的層析圖LC-UV影像。
[0034] 圖7為0PT-821的層析圖LC-MS影像組合。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 為了清晰及迅速理解本發(fā)明，本文定義某些術(shù)語(yǔ)。除非另外定義，否則本文所用的 所有技術(shù)及科學(xué)術(shù)語(yǔ)均具有熟習(xí)本發(fā)明所屬技術(shù)者通常所理解之相同含義。
[0036] 如本文所用有效量"是指疫苗或醫(yī)藥組合物的劑量足W減輕癌癥的癥狀及征 候，該等癥狀及征候包括（但不限于）體重減輕、疼痛及腫瘤塊，其可在臨床上由可觸知的 塊狀物或在放射學(xué)上經(jīng)由不同的成像方法來(lái)偵測(cè)。
[0037] 術(shù)語(yǔ)"個(gè)體"可指患有癌癥的脊椎動(dòng)物或被認(rèn)為需要癌癥治療的脊椎動(dòng)物。個(gè)體包 括溫血?jiǎng)游铮T如哺乳動(dòng)物，諸如靈長(zhǎng)類動(dòng)物且更佳為人類。非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物亦為個(gè)體。 術(shù)語(yǔ)個(gè)體包括經(jīng)馴養(yǎng)動(dòng)物（諸如貓、狗等）、家畜（例如牛、馬、豬、綿羊、山羊等）及實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物（例如小鼠、兔、大鼠、沙鼠、天竺鼠等）。由此，本文中涵蓋獸醫(yī)用途及醫(yī)學(xué)調(diào)配物。
[003引如本文所用，術(shù)語(yǔ)"烷基"是指直鏈或分支鏈單價(jià)控，除非另外說(shuō)明，否則其含有1至20個(gè)碳原子（例如C1至C8或C1至C4)，可經(jīng)取代或未經(jīng)取代（本發(fā)明可包涵其他鏈長(zhǎng) 度，例如21至30個(gè)）。烷基的實(shí)例包括（但不限于）甲基、乙基、正丙基、異丙基、正下基、 異下基及第=下基。
[0039] 術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)上純的"意謂實(shí)質(zhì)上不含通常與呈自然狀態(tài)皂素締合的化合物且展現(xiàn) 恒定且可重現(xiàn)的層析反應(yīng)、溶離特征及生物活性。術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)上純的"不意謂排除皂素與其 他化合物的人造或合成混合物。 W40] 本文中的所有數(shù)字均可理解為由"約"修飾。
[0041] 具有巧高碳水化合物比率的巧巧
[0042] 腫瘤相關(guān)的碳水化合物抗原通常展現(xiàn)不佳的免疫原性。已采用與載體蛋白結(jié)合的 碳水化合物抗原W提高該碳水化合物抗原的免疫原性。舉例而言，約700個(gè)GloboH分子 與一個(gè)無(wú)毒匙孔螺血氯蛋白化LH)蛋白質(zhì)結(jié)合，平均約2至4個(gè)GloboH分子與白喉毒素 值T)結(jié)合，約8個(gè)GloboH分子與牛血清白蛋白（BSA)結(jié)合，且約6個(gè)GloboH分子與破傷 風(fēng)類毒素結(jié)合（美國(guó)專利第8, 268, 969號(hào)的表1)。
[0043] 本發(fā)明提供一種包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及類毒素蛋白的疫苗，其 中碳水化合物抗原與類毒素蛋白的比率在5:1至39:1范圍內(nèi)，且該比率反映碳水化合物抗 原或其免疫原性片段的分子數(shù)與類毒素蛋白分子數(shù)的比率。該疫苗比碳水化合物抗原分子 數(shù)與類毒素蛋白分子數(shù)的比率等于或小于4:1的疫苗具有更佳的免疫原性。本發(fā)明亦包 涵其他范圍，包括碳水化合物抗原或其免疫原性片段的分子數(shù)與類毒素蛋白分子數(shù)的比率 為 4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、 20:1、21:1、22:1、23:1、24:1、25:1、26:1、27:1、28:1、29:1、30:1、31:1、32:1、33:1、34:1、 35:1、36:1、37:1、38:1 或 39:1。
[0044] 在一個(gè)實(shí)施例中，類毒素蛋白為破傷風(fēng)類毒素（TT)且碳水化合物-TT疫苗中碳水 化合物抗原與TT的比率在7:1至12:1范圍內(nèi)。
[0045] 本發(fā)明提供一種包含碳水化合物抗原或其免疫原性片段及白喉毒素值T)的疫 苗，其中碳水化合物抗原與DT的比率在5:1至39:1范圍內(nèi)，其中該比率反映碳水化合物抗 原或其免疫原性片段的分子數(shù)與DT分子數(shù)的比率。在另一實(shí)施例中，碳水化合物-DT疫苗 中碳水化合物抗原與DT的比率在8:1至24:1范圍內(nèi)。
[0046] 碳水化合物抗原的實(shí)例包括（但不限于）GloboH、階段特異性胚胎抗原3(SSEA3) (亦稱為Gb5)、階段特異性胚胎抗原4(SSEA-4)、Gb-4、Gb-3、路易斯抗原（諸如sLe\Le\ sLe。、Le。、Le〇、多醋抗原（諸如聚唾液酸（PSA)、sTn(c)、Tn(c)、Thomsen-Friedenreich抗 原〇^似））、神經(jīng)節(jié)巧脂（諸如601、602、603、海藻糖、611、611、612、613、601〇及612)。 其他碳水化合物抗原包括（但不限于）：a-半乳糖、a-甘露糖-6-憐酸鹽、aA-鼠李糖、 a-GalNAc燈n)、a-NeuAc-OC肥C6H4-對(duì)畑C00C肥、化Cal-2GalPl-4GalNAcP化類型 3)、 W47]NeuAca2-8NeuAca、（NeuA