用下，可W在儀器下讀出OD 值，而不含有馨合金屬隸的低密度脂蛋白，則不會被抗隸的特異性抗體所捕獲，也不會與辣 根過氧化物酶、堿性磯酸酶等酶標記的抗體所捕獲，而所用試劑中也不含有金屬隸（陰性 對照組結(jié)果為陰性），因而當所讀取的OD值結(jié)果顯示為陽性時，即可證明檢測出低密度脂 蛋白上馨合的金屬隸。
[0103] 方法二：酶巧免疫與原子吸收光譜結(jié)合法巧LISA法+AAS法）檢測隸-低密度脂 蛋白馨合物按照如下步驟檢測：
[0104] 1)包被；將能夠捕獲低密度脂蛋白的蛋白，如抗低密度脂蛋白抗體（抗低密度脂 蛋白抗體）包被于固相載體上；用稀釋緩沖液稀釋抗低密度脂蛋白抗體至250-2000倍，加 入化ISA板微孔中，4°C過夜16-18小時，或37°C水浴1-3小時，儲存冰箱；
[0105] 2)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時，移去封閉液，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37°C放置1小時；
[0106] 3)加待測樣本，并且溫育；從循環(huán)系統(tǒng)中取樣，作待測樣本；W已知含量的隸-低 密度脂蛋白馨合物作標準品；用稀釋緩沖液稀釋至10-40倍，加至微孔中，37°C作用1-2小 時；
[0107] 4)洗脫；移去待測樣本，洗漆，加入洗脫液，在37°C下洗脫1-3小時；
[010引W檢測；從ELISA微孔中取樣，于原子吸收光譜儀檢測馨合于低密度脂蛋白上的 隸，讀出相應(yīng)數(shù)值；
[0109] 該實施例利用ELISA原理對低密度脂蛋白進行捕獲，并結(jié)合原子吸收光譜（AA巧 儀檢測馨合于低密度脂蛋白上的隸；由于溶液中僅含有低密度脂蛋白，且所用試劑中不含 任何重金屬（陰性對照組結(jié)果為陰性），不會對結(jié)果造成干擾，因而當所讀取的結(jié)果顯示為 陽性時，即可證明檢測出低密度脂蛋白上馨合的金屬隸。
[0110] 立法三^酶聯(lián)免疫與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法巧LISA法+ICP-MS法）檢測 隸-低密度脂蛋白馨合物按照如下步驟檢測：
[01川 1)包被；將能夠捕獲低密度脂蛋白的蛋白，如抗低密度脂蛋白抗體包被于固相載 體上，用稀釋緩沖液稀釋抗低密度脂蛋白抗體至250-2000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過 夜16-18小時，或37°C水浴1-3小時，儲存冰箱；
[0112] 2)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時，移去封閉液，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小時；
[0113] 3)加待測樣本，并且溫育；從循環(huán)系統(tǒng)取全血，作待測樣本；W已知含量的隸-低 密度脂蛋白馨合物作標準品；用稀釋緩沖液稀釋至10-40倍，加至微孔中，37°C作用1-2小 時；
[0114] 4)洗脫；移去待測樣本，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進行洗漆，待洗漆完成后，加入洗脫 液，在37°C下洗脫1-3小時；
[0115] 5)酸化；在步驟4)中的溶液中加入酸化劑對溶液進行酸化，封口過夜，徹底酸 化；
[0116] 6)檢測；加入過氧化氨，并且加熱趕酸，并從化ISA試劑板中洗脫的溶液中取 〇.5mL液體，于電感禪合等離子體質(zhì)譜儀下檢測馨合于低密度脂蛋白的隸，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[0117] 該方法在利用ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合感禪合等離子體質(zhì)譜（ICP-M巧原理，用 電感禪合等離子體質(zhì)譜儀檢測馨合于低密度脂蛋白上的隸；即先采用ELISA原理將隸-低 密度脂蛋白馨合物提取出來，再采用感禪合等離子體質(zhì)譜儀對馨合于低密度脂蛋白上的隸 進行定量檢測；由于溶液中僅含有低密度脂蛋白，且所用試劑中不含任何重金屬（陰性對 照組結(jié)果為陰性），不會對結(jié)果造成干擾，因而當所讀取的結(jié)果顯示為陽性時，即可證明檢 測出低密度脂蛋白上馨合的金屬隸。
[0118]方法四；提純東-低密麼脂軍白謗合物與酶巧免疫結(jié)合法(提純法+ELISA法）檢 測隸-低密度脂蛋白馨合物，按照如下步驟檢測：
[0119] 1)提取非特異性低密度脂蛋白；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠過濾層 析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取低密度脂蛋白，并將提取出的低密度脂蛋白復溶， 得低密度脂蛋白的溶液；
[0120] 2)包被；將抗隸抗體包被于固相載體上，用稀釋緩沖液稀釋抗隸抗體至 2500-20000倍，加入化ISA板微孔中，4°C過夜16-18小時，或37°C水浴1-3小時，儲存冰 箱；
[0121] 3)封閉；移去稀釋緩沖液，并用洗漆緩沖液進行洗漆，待洗漆完成后，加入封閉 液，37°C放置1小時，移去封閉液，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小時；
[0122] 4)加待測樣本，并且溫育；從提取的非特異性低密度脂蛋白的溶液中取樣，作待 測樣本；W已知含量的隸-低密度脂蛋白馨合物作標準品；用稀釋緩沖液稀釋至10-40倍， 加至微孔中，37°C作用1-2小時；
[0123] 5)酶結(jié)合物溫育：移去低密度脂蛋白的溶液，并用洗漆緩沖液進行洗漆，待洗漆 完成后，加入用稀釋緩沖液稀釋的酶標抗體，37°C作用1-2小時，使其與酶標抗體反應(yīng)；
[0124] 6)底物溫育；移去酶標抗體，并用相應(yīng)洗漆緩沖液進行洗漆，待洗漆完成后，加入 底物，37°C避光作用30分鐘；
[01巧]7)終止反應(yīng)；滴加終止液至每一微孔；
[01%] 8)取波長450nm，加完終止液后，在酶標儀上分別讀取待測樣本組和標準品的OD 值，繪制標準曲線，通過與標準品組比較，求得待測樣本的含量。
[0127] 本方法中，也可不使用酶標儀，直接通過顯色情況進行定性檢測。
[0128] 方法五；提純束-低密度脂蛋白馨合物與原子吸收光譜結(jié)合法（提純法+AAS法） 檢測血樣中隸-低密度脂蛋白馨合物，按照如下步驟檢測：
[0129] 1)從全血中提取非特異性低密度脂蛋白；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝 膠過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取低密度脂蛋白，并將提取出的低密度脂蛋 白復溶，得低密度脂蛋白的溶液；
[0130] 2)檢測；從步驟1)中的溶液中取樣，于原子吸收光譜儀檢測馨合于低密度脂蛋白 上的隸，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[0131] 方法六；提純東-低密度脂蛋白馨合物與電感禪合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法（提純法 +ICP-MS法）檢測隸-低密度脂蛋白馨合物，按照如下步驟檢測：
[0132] 1)從全血中提取非特異性低密度脂蛋白；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝 膠過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取低密度脂蛋白，并將提取出的低密度脂蛋 白復溶，得低密度脂蛋白的溶液；
[0133] 2)酸化；從步驟1)中的溶液中取樣，在溶液中加入硝酸對溶液進行酸化，封口過 夜，徹底酸化；
[0134] 扣檢測；加入過氧化氨，并且加熱趕酸后取0. 5mL溶液，于電感禪合等離子體質(zhì)譜 儀下檢測馨合于低密度脂蛋白上的隸，讀出相應(yīng)數(shù)值。
[0135] 方法四、方法五和方法六均是從全血中提取法分離出低密度脂蛋白，再采用特異 性檢測方法，測定低密度脂蛋白中隸-低密度脂蛋白馨合物上隸的含量；即先采用物理分 離手段，如超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠過濾層析法等，將低密度脂蛋白從待測血漿 樣本中分離出來并復溶于生理鹽水中，再利用ELISA原理、原子吸收光譜檢測或進行檢測 電感禪合等離子體質(zhì)譜法檢測隸-低密度脂蛋白馨合物上的隸含量。
[0136] 方法^;：;電泳法+ELISA/AAS^CP-MS法檢測隸-低密度脂蛋白馨合物，具體如下；
[0137] 1)從全血中提取非特異性低密度脂蛋白；采用超速離屯、法、高壓液相層析法、凝 膠過濾層析法、凝膠電泳法等方法，從全血中提取低密度脂蛋白，將提取出來的低密度脂蛋 白復溶于生理鹽水中，得低密度脂蛋白的溶液；
[0138] 2)制備膠床；根據(jù)需要選擇合適的介質(zhì)（如瓊脂糖凝膠、聚丙締酷胺凝膠等），按 照相應(yīng)要求制備好相應(yīng)膠床；
[0139] 如加樣；從步驟1)的溶液中取8化溶液，W已知含量的隸-低密度脂蛋白馨合 物作標準品，加入2UL上樣緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品槽中；
[0140] 4)電泳；連接電泳板，加電泳緩沖液，進行電泳，并根據(jù)需求將蛋白按照分子量、 等電點等參數(shù)的不同進行分離；
[0141] 5)檢測；在膠床上找出含有金屬的蛋白條帶，將該條帶取出，將該蛋白條帶溶解， 然后再分別利用化ISA或ICP-MS或AAS等原理檢測溶解的隸含量。
[0142] 此外，還可W利用此方法檢測隸-低密度脂蛋白馨合物的等電點、分子量及含量 等。
[0143] 在方法走中，將低密度脂蛋白從全血中提取出來，再采用凝膠電泳法對所提取的 低密度脂蛋白進行分離，再找出富含隸的相應(yīng)條帶，再檢測相關(guān)低密度脂蛋白的含量；即低 密度脂蛋白可W用多種方法提純出來（例如超速離屯、法、高壓液相層析法、凝膠過濾層析 法、凝膠電泳法，ELISA方法等），將提純出來的低密度脂蛋白復溶于溶液中，取一定量的低 密度脂蛋白，利用電荷移動原理，進行電泳（electro地oresis，E巧，在凝膠板（可根據(jù)需要 采用不同介質(zhì)）上可根據(jù)分子量、等電點等不同跑出不同的條帶，尋找出富含隸的相應(yīng)條 帶，將凝膠中的蛋白質(zhì)復溶于溶液中，即可W在特定波長下檢測相關(guān)低密度脂蛋白的含量， 也可W利用ELISA、AAS、ICP-MS等原理檢測出馨合于低密度脂蛋白上的隸含量，由于溶液 中僅含有低密度脂蛋白，且所用試劑中不含任何重金屬（陰性對照組結(jié)果為陰性），不會對 結(jié)果造成干擾，因而當所讀取的結(jié)果顯示為陽性時，即可證明檢測出低密度脂蛋白上馨合 的金屬隸。
[0144] 連施例1 ;合成法合成東-低密度脂蛋白塞合物，即包括W下步驟：
[0145] 本實施例所制備的隸-低密度脂蛋白塞合物，通過凝膠電泳進一步分離，并通過 電感禪合等離子體質(zhì)譜或原子吸收光譜進行檢測定性鑒定。
[0146] 本實施例使用的試劑如下；1)棚酸鹽緩沖液，其摩爾濃度為0.01M，其制備方法如 下；稱取0. 31g棚酸溶于400血d地2〇中，用0.1mol/L的化0H調(diào)節(jié)抑至9. 0,定容至500血。
[0147] 2化DTA-NaHC〇3溶液，其制備方法如下；取1. 86g邸TA?2H2〇和16. 8g NaHC〇3,溶 于900血d地2〇中，用1. 0M化OH調(diào)整抑至8. 0定容至1000血，高壓滅菌，室溫保存；
[0148] 3HTCBE購...