一種墨西菊寧Ⅰ的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了一種植物提取物的制備方法及應(yīng)用，特別涉及一種墨西菊寧I的制 備方法及抗腫瘤應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 墨西菊寧I (Mexicanin I)為倍半貓內(nèi)醋類物質(zhì)，CAS號(hào)41653-83-2， mp. 257-260°C，分子式C15H18O4,分子量262. 31，結(jié)構(gòu)式為：
墨西菊寧I來源于菊科（Compositae)牙鳥蔥葉堆心菊Helenium scorzoneraefolium(DC.) Gray的地上部分。研宄表明，墨西菊寧I具有抗?jié)冏饔?，大凰口?0mg/kg，對(duì)EtOH所致 罝損害的保護(hù)作用為〇. 25 (無損害）；具有細(xì)胞毒活性，對(duì)KB細(xì)胞的ED50為1. 9 μ g/mL。
[0003] 通過文獻(xiàn)檢索，國內(nèi)尚未見墨西菊寧I用于制備抗腫瘤藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為滿足臨床需要，擴(kuò)大用藥品種，更好地治療癌癥，提供一種墨西菊寧I的制備方 法及抗腫瘤應(yīng)用。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案： 墨西菊寧I的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為 18000rpm條件下保持3-5min后，過40目篩備用； (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0. 3-0. 5%的纖維 素酶，在超聲功率500-700W、45-60°C條件下酶解60-90min，得到酶解原料； (3) 將酶解原料投入加入閃式提取器中，加入提取溶劑，進(jìn)行閃式提取，過濾得到提取 液，濃縮干燥得到粗提物； (4) 將所得粗提物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng) 梯度洗脫，收集墨西菊寧I流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶； (5) 將粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到墨西菊寧I結(jié)晶。
[0006] 所述步驟（2)中乙醇水溶液體積百分比為70-80%。
[0007] 所述步驟（2)中提取溶劑為70-85%的乙醇溶液。
[0008] 所述步驟（3)中閃式提取電壓為150V，提取時(shí)間為3_5min。
[0009] 所述步驟（4)中所述高壓硅膠柱層析，硅膠目數(shù)為200目，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為 250mm，層析柱徑高比為I :10。
[0010] 所述步驟（4)中氯仿-甲醇的體積比為1:1-1:13。
[0011] 所述制備的墨西菊寧I，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑，包含中鏈脂肪酸鹽、 膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。
[0012] 采用本法制備墨西菊寧I，工藝簡便易操作，制備量大，產(chǎn)品得率高，而且低污染； 添加腸吸收促進(jìn)劑，有利于提高生物利用度。
[0013] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1 : 墨西菊寧I的制備 以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為 18000rpm條件下保持5min后，過40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:4(g/ml)的比例加入 80%乙醇水溶液后，再加入0. 5%的纖維素酶，在超聲功率700W、50°C條件下酶解70min，得 到酶解原料，加入閃式提取器中，加入6L80%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V， 提取時(shí)間為3min，進(jìn)行閃式提取2次，過濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用 甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為 250mm，層析柱徑高比為1 :10,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:6、1:13梯度洗脫，收集墨西菊 寧I流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到墨西菊寧I結(jié)晶，含量 為 95. 8%。
[0015] 實(shí)施例2: 墨西菊寧I的制備 以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為 18000rpm條件下保持3min后，過40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:6 (g/ml)的比例加 入70%乙醇水溶液后，再加入0. 4%的纖維素酶，在超聲功率700W、45°C條件下酶解90min， 得到酶解原料，加入閃式提取器中，加入4. 5L75%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為 150V，提取時(shí)間為5min，進(jìn)行閃式提取2次，過濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提 物，用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑 為250mm，層析柱徑高比為1 :10,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:7、1:13梯度洗脫，收集墨西 菊寧I流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到墨西菊寧I結(jié)晶，含 量為94. 4%。
[0016] 實(shí)施例3: 墨西菊寧I的制備 以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為 18000rpm條件下保持5min后，過40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:5(g/ml)的比例加入 75%乙醇水溶液后，再加入0. 5%的纖維素酶，在超聲功率600W、55°C條件下酶解75min，得 到酶解原料，加入閃式提取器中，加入4L70%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V， 提取時(shí)間為4min，進(jìn)行閃式提取2次，過濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用 甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為 250mm，層析柱徑高比為1 :10,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:5、1:12梯度洗脫，收集墨西菊 寧I流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到墨西菊寧I結(jié)晶，含量 為 95. 4%。
[0017] 實(shí)施例4: 墨西菊寧I的制備 以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為 18000rpm條件下保持5min后，過40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:6(g/ml)的比例加入 75%乙醇水溶液后，再加入0. 3%的纖維素酶，在超聲功率500W、60°C條件下酶解60min，得 到酶解原料，加入閃式提取器中，加入5L85%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V， 提取時(shí)間為3min，進(jìn)行閃式提取2次，過濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用 甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為 250mm，層析柱徑高比為1 :10,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:7、1:13梯度洗脫，收集墨西菊 寧I流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到墨西菊寧I結(jié)晶，含量 為 94. 9%。
[0018] 實(shí)施例5: 墨西菊寧I的抗腫瘤應(yīng)用 1、材料 動(dòng)物：昆明種小鼠，雌雄各半性，體重20±2g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)提供。
[0019] 細(xì)胞株：Sarc〇ma 180腹水型瘤株（S180)，由中國科學(xué)院上海藥物研宄所提供。
[0020] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接種S18tl瘤液，次日隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為生 理鹽水對(duì)照組（NS組)、陽性對(duì)照組、墨西菊寧I低劑量組（2mg/kg)、中劑量組（4mg/kg)、高 劑量組（8mg/kg)。接種24h后墨西菊寧I給藥組灌胃給藥，連續(xù)7,陽性對(duì)照組試驗(yàn)期間腹 腔注射2次，隔日給藥。期間，每日觀察小鼠的一般活動(dòng)、皮毛、糞便等情況。最后一次給藥 24h后斷頸處死，稱重，并計(jì)算抑瘤率。
[0021] 3、結(jié)果 本發(fā)明植物提取物對(duì)小鼠 S18tl皮下荷瘤有明顯的抑制作用，抑瘤率為70. 86-76. 04%， 結(jié)果見表1。
[0022] 抑瘤率（％)=( 1-治療組平均瘤重/空白對(duì)照組平均瘤重）X% 表1本發(fā)明植物提取物對(duì)S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10, ^ ±S)
注：與陽性對(duì)照組相比，#P < 0. 01。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種墨西菊寧I的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為 18000rpm條件下保持3-5min后，過40目篩備用； (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0. 3-0. 5%的纖維 素酶，在超聲功率500-700W、45-60°C條件下酶解60-90min，得到酶解原料； (3) 將酶解原料投入加入閃式提取器中，進(jìn)行閃式提取，過濾得到提取液，濃縮干燥得 到粗提物； (4) 將所得粗提物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng) 梯度洗脫，收集墨西菊寧I流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶； (5) 將粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到墨西菊寧I結(jié)晶。2. 如權(quán)利要求1所述的墨西菊寧I的制備方法，其特征在于所述步驟（2)中乙醇水溶 液體積百分比為70-80%。3. 如權(quán)利要求1所述的墨西菊寧I的制備方法，其特征在于所述步驟（2)中提取溶劑 為70-85%的乙醇溶液。4. 如權(quán)利要求1所述的墨西菊寧I的制備方法，其特征在于所述步驟（3)中閃式提取 電壓為150V，提取時(shí)間為3-5min。5. 如權(quán)利要求1所述的墨西菊寧I的制備方法，其特征在于所述步驟（4)中所述高壓 硅膠柱層析，硅膠目數(shù)為200目，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱徑高比為1 :10。6. 如權(quán)利要求1所述的墨西菊寧I的制備方法，其特征在于所述步驟（4)中所述氯 仿-甲醇的體積比為1:1-1:13。7. 根據(jù)權(quán)利要求1~6所述方法制備的墨西菊寧I，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn) 劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的墨西菊寧I，其特征在于腸吸收促進(jìn)劑包含中鏈脂肪酸鹽、 膽酸鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物提取物的制備方法及應(yīng)用，尤其涉及一種墨西菊寧Ⅰ的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用。制備方法包括以下步驟：（1）以鴉蔥葉堆心菊地上部分為原料，粉碎；（2）原料加入乙醇水溶液后，再加入纖維素酶，在超聲條件下酶解，得到酶解原料；（3）將酶解原料投入加入閃式提取器中，進(jìn)行閃式提取，過濾、濃縮干燥得到粗提物；（4）粗提物干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫，收集流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶；（5）重結(jié)晶。采用本發(fā)明制備方法，工藝操作簡便、得率高，污染小，適合高純度墨西菊寧Ⅰ的生產(chǎn)。墨西菊寧Ⅰ具有抗腫瘤作用，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑，利于提高生物利用度。
【IPC分類】A61P35/00, C07D307/93
【公開號(hào)】CN104910115
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510263789
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年5月22日