基-葡糖酸鹽，菊粉，糖原，D-海藻糖，5-酮基-葡糖酸鹽，鼠李糖，L-海藻糖， α -甲基-D-甘露糖，棉子糖，D-松二糖，D-塔格糖，α -甲基-D-葡糖苷做碳源進(jìn)行發(fā)酵； 可以微弱利用淀粉，龍膽二糖，葡糖酸鹽做碳源進(jìn)行發(fā)酵。
[0051] 表1菌株QH1-666對不同碳源的發(fā)酵情況
[0052]
[0053] 注：" + "表示陽性，即能利用；表示陰性，即不能利用；"w"表示弱陽性，即微弱 利用。
[0054] 3、16S rDNA序列同源性分析
[0055] 提取步驟一所得的菌株QH1-666的基因組DNA，以其為模板，采用細(xì)菌通用引物進(jìn) 行PCR擴(kuò)增，獲得菌株QH1-666的16S rDNA片段，并進(jìn)行序列測定，其序列為序列表中序 列 1。將序列 1 在 GenBank 數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行 BLAST(http://blast.ncbi. nlm.nih.gov/Blast. cgi)同源性比對，確定菌種類別。
[0056] 根據(jù)上述形態(tài)、生理生化特征分析和16s rDNA序列同源性分析結(jié)果，將步驟一所 得的菌株QH1-666鑒定為乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. Iactis)，并于 2015年4月28日保藏于4月28日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（簡稱CCTCC，地址為： 湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號武漢大學(xué)校內(nèi)，武漢大學(xué)保藏中心，郵編430072)，其保 藏編號為CCTCC NO :M 2015255,其分類命名為乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus Iactis subsp. lactis)QHl-666〇
[0057] 實(shí)施例 2、乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666 在 不同溫度、PH及鹽濃度下的生長
[0058] 1、不同溫度下乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666的生長
[0059] 將活化的乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666CCTCC NO :M 2015255接種于MRS液體培養(yǎng)基，分別在5、10、45和50°C溫度下恒溫 培養(yǎng)24h，用分光光度計測定600nm處光吸收值（0D600)，以觀察不同溫度下乳酸乳球菌乳 酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QH1-666 的生長情況。
[0060] 其中，MRS液體培養(yǎng)基的溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下：蛋白胨10g/L，牛肉膏IOg/ L，酵母膏5g/L，葡萄糖20g/L，三水合乙酸鈉5g/L，吐溫801g/L，磷酸氫二鉀2g/L，檸檬酸銨 2g/L，硫酸鎂 2g/L，硫酸錳(λ 25g/L ;ρΗ6· 8。
[0061] 結(jié)果如表2所示，可見乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666CCTCC N0:M 2015255在5°C和10°C長勢良好，45°C環(huán)境生長微弱，在50°C不能生 長，表明該菌株均有良好的耐低溫生長能力。
[0062] 2、不同 pH 下乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QH1-666 的生長
[0063] 用lmol/L的鹽酸和lmol/L的氫氧化鈉將MRS液體培養(yǎng)基（配方同上）的起始pH 分別調(diào)至3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0、5. 5、6. 0、9. 0和10. 0, 30 °C恒溫靜置培養(yǎng)乳酸乳球菌乳酸 亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QH1-666CCTCC NO :M 2015255,培養(yǎng)24h，培養(yǎng)過 程中不調(diào)酸，用分光光度計測定600nm處光吸收值（0D600)，以觀察不同pH下乳酸乳球菌乳 酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QH1-666 的生長情況。
[0064] 結(jié)果如表2所示，可見乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666CCTCC NO :M 2015255在pH4. 0-9. 0的環(huán)境中生長良好，表明該菌株有較好的耐酸 堿生長能力。
[0065] 3、不同鹽濃度下乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666的生長
[0066] 將活化的乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666CCTCC NO :M 2015255分別接種于含有NaCl的質(zhì)量百分含量為3%和6. 5%的MRS 液體培養(yǎng)基（配方同上，PH6. 8)，于30°C恒溫靜置培養(yǎng)24h，用分光光度計測定600nm處光 吸收值（0D600)，以觀察不同鹽濃度下乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QH1-666的生長情況。
[0067] 結(jié)果如表2所示，可見乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666CCTCC NO :M 2015255在3. 00%和6. 50%的NaCl濃度中均生長良好微弱，表明該 菌株具有一般的耐鹽能力。
[0068] 4、低溫（5°C )培養(yǎng)定期測定pH變化
[0069] 將MRS液體培養(yǎng)基（配方同上，pH6. 8) I. 5ml放于2ml離心管，接入QH1-666單菌 落，5°C培養(yǎng)，分別在7天，10天，14天時用pH酸度計測定濾液的pH值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié) 果以平均值的形式表示。
[0070] 結(jié)果如表2所示，可見低溫條件（5°C )液體培養(yǎng)7天，乳酸乳球菌乳酸亞種 (Lactococcus lactis subsp. lactis)QHl-666CCTCC NO :M 2015255 的上清液pH 降到4.0， 培養(yǎng)到10-14天時pH降到3. 5,表明其產(chǎn)酸能力較好。
[0071] 表2菌株QH1-666在不同環(huán)境下的生長特征
[0072]
[0073] 注：" + "表示生長良好；"w"表示生長微弱（0D600大于0.3視為生長良好，大于 〇. 2小于等于0. 3為生長微弱）。
[0074] 根據(jù)以上結(jié)果，可知乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. Iactis) QH1-666CCTCC NO :M 2015255的生長適應(yīng)能力很強(qiáng)，可耐極端環(huán)境存活繁殖。
[0075] 實(shí)施例 3、乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QH1-666 的 抑菌活性測定
[0076] 供試細(xì)菌：藤黃微球菌，藤黃微球菌，沙門氏菌和大腸桿菌。
[0077] 1、將活化的乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-666CCTCC Ν0:Μ 2015255接種于MRS液體培養(yǎng)基（配方同上，pH6. 8)中，30°C培養(yǎng)48h， 發(fā)酵液經(jīng)1000 Orpm離心5min，取上清液用于測定。
[0078] 2、采用牛津杯雙層平板法測定其抑菌活性，將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到完全 融化，倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿15ml (下層），待其凝固。此外，將融化的PDA培養(yǎng)基冷卻到 50°C左右混入供試細(xì)菌，將混有菌的培養(yǎng)基5ml加到已凝固的培養(yǎng)基上待凝固（上層）。 以無菌操作在培養(yǎng)基表面直接垂直放上牛津杯（內(nèi)徑6mm、外徑8mm、高IOmm的圓形小 管），輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙，在杯中加入步驟1獲得的乳酸乳球菌乳酸亞種 (Lactococcus lactis subsp. lactis)QHl-666CCTCC NO :M 2015255發(fā)酵液。加滿后置37°C 培養(yǎng)16-18小時，觀察結(jié)果，抑菌圈用尺量。以MRS液體培養(yǎng)基取代發(fā)酵液作為對照。實(shí)驗(yàn) 重復(fù)3次，結(jié)果以平均值的形式表示。
[0079] 結(jié)果如表3所示，可見：在30°C培養(yǎng)條件下，乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis)QHl-666CCTCC NO :M 2015255對藤黃微球菌和沙門氏菌有較好的抑 制作用。
[0080] 表3菌株QH1-666的抑菌活性
[0081]
[0082] 注：抑菌圈直徑包含牛津杯外徑（7. 8mm) 表示無抑菌圈。
[0083] 實(shí)施例 4、乳酸乳球菌乳酸亞種（Lactococcus lactis subsp. lactis) QH1-6