專利名稱：用于保護免于二級病原體引起的疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
發(fā)現(xiàn)施用針對初級病原體的疫苗保護免于二級或機會病原體引起的疾病。例如，通過針對旁系病原體(collateral pathogens)免疫保護犬免于二級病原體如馬鏈球菌獸疫亞種 ^Streptococcus equi subspecies zooepidemicus)(馬鏈球菌(51 equi))引起的 疾病。
背景技術(shù)：
馬鏈球菌CS equi)與犬傳染性呼吸道疾病(CIRD)相關(guān)，其已被公認為主要影響舍養(yǎng)狗(kenneled dogs)的多因素感染(Chalker 等，Veterinary Microbiology 95(2003) :149-156)。然而發(fā)現(xiàn)，可以從無癥狀的、健康的非舍養(yǎng)狗分離馬鏈球菌。馬鏈球菌僅僅與其它病原體相結(jié)合促成CIRD的嚴重性。犬流感(CIV)已經(jīng)被鑒定為與馬流感病毒高度同源的H3N8病毒。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)犬流感在某些類型的狗中是強毒的。例如，發(fā)現(xiàn)它是殺死Jacksonville, Florida的狗舍中數(shù)條賽狗(racing Greyhounds)的病發(fā)的原因。雖然100%的暴露的狗被感染,但是僅僅發(fā)現(xiàn)80%顯現(xiàn)出感染的臨床體征。而且，盡管一些暴露于CIV的狗發(fā)生具有肺炎的臨床體征的急性疾病，大多數(shù)狗經(jīng)歷較溫和的綜合征，如持續(xù)10-21天的咳嗽。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，馬鏈球菌和CIV的嚴重性均通過與其中另一病原體的共感染增加。發(fā)明概述
保護犬免于二級病原體引起的疾病的方法包括施用針對初級病原體的疫苗。在一個優(yōu)選的實施方案中，以CIV疫苗免疫待保護的犬，從而保護犬免于二級病原體如馬鏈球菌引起的疾病。作為結(jié)果，犬針對Civ和馬鏈球菌二者得以保護。附圖簡要說明


圖1，CIV攻擊后的臨床評分，該圖表示從CIV攻擊前2天至攻擊后13天每個處理組的平均臨床評分。在研究的第35天用CIV攻擊所有的狗，從CIV攻擊前第2天至CIV攻擊后13天每天監(jiān)測臨床體征。將每個處理組的平均臨床評分針對攻擊后的天數(shù)作圖。臨床評分參見表4。圖2，攻擊后的鼻CIV脫落，該圖表示通過在攻擊后第1-10天每天收集鼻拭子測定的每組的平均病毒滴度。在第35天用CIV攻擊第1、3和4組中所有的狗。在攻擊前那天(第-I天)收集鼻拭子以驗證小狗沒有CIV。通過每天收集鼻拭子(攻擊后第I天至第10天)達10天以及在MDCK單層上進行滴定以監(jiān)測被攻擊的狗中的鼻病毒脫落。計算每個處理組的平均病毒滴度(表示為Log 10 TCID5tlAiL)并針對攻擊后的天數(shù)作圖。圖3，從鼻拭子和肺灌洗液分離馬鏈球菌，該圖表示從CIV攻擊前那天至攻擊后第14天每組中馬鏈球菌陽性的狗的百分比。發(fā)明的詳細說明
本發(fā)明涉及保護犬免于二級病原體引起的疾病的方法，所述二級病原體在不存在損害性因素如與另一種病原體共感染的情況下沒有表現(xiàn)臨床體征。在這種情況下，即使任一病原體本身不會表現(xiàn)臨床體征，但它們兩種一起導致增強的發(fā)病和臨床顯著的疾病。犬流感病毒(CIV)亞型H3N8在某些狗中可以 引起急性呼吸道疾病。我們通過研究用CIV和馬鏈球菌共感染狗之后的發(fā)病確定了馬鏈球菌獸疫亞種(馬鏈球菌)加重了 CIV引起的疾病。類似地，我們發(fā)現(xiàn)，單獨用馬鏈球菌感染的狗沒有表現(xiàn)臨床體征，但是當用CIV和馬鏈球菌二者攻擊時，觀察到活躍的臨床疾病。然后我們發(fā)現(xiàn)，用CIV疫苗免疫保護狗免于強毒的CIV和馬鏈球菌的雙重攻擊。出乎意料的是，通過施用針對CIV的疫苗可以預防馬鏈球菌引起的呼吸道疾病。單獨用馬鏈球菌攻擊的狗沒有表現(xiàn)任何臨床體征、細菌脫落(shedding)或肺部病變。單獨用CIV攻擊的狗發(fā)生了一些臨床體征、病毒脫落和肺部病變。當與單獨用CIV或單獨用馬鏈球菌攻擊的狗相比時，用CIV加上馬鏈球菌攻擊的狗中的臨床評分、CIV和/或馬鏈球菌脫落和肺部評分實質(zhì)上更高。當與單獨用CIV或用CIV加上馬鏈球菌攻擊的未接種的狗相比時，用CIV加上馬鏈球菌攻擊的CIV接種的狗中肺部評分、臨床評分和細菌脫落明顯更低。本發(fā)明使用的術(shù)語初級病原體是指在一些動物中可能引起疾病的臨床體征、但未必達到在所有暴露于病原體的動物中可檢測出該疾病的這種嚴重性的病原體。本發(fā)明使用的術(shù)語二級病原體是指除非通過暴露于另一種病原體而使動物虛弱或者動物另外處于虛弱狀態(tài)、否則在暴露于該病原體的動物中不可能引起疾病的臨床體征的病原體，有時也稱為機會病原體。當連同一種或更多種其它二級病原體存在時，自身是二級病原體并且不可能引起疾病的臨床體征的病原體可以作為初級病原體起作用。為了說明而不是限制的目的，在文提供的實施方案中，CIV可被稱為初級病原體，馬鏈球菌可被稱為二級病原體。犬舍咳(Kennel cough)是許多病毒和細菌病原體引起的在犬中的重要疾病。CIV和馬鏈球菌是近年來從犬呼吸道疾病病例中、尤其是舍養(yǎng)狗和收養(yǎng)狗(shelter dogs)中頻繁分離的兩種新的病原體。我們在狗中研究了 CIV和馬鏈球菌雙重感染的發(fā)病機理并評價了 CIV疫苗在雙重感染中的效應。和單獨用CIV感染的狗不同，大多數(shù)CIV加上馬鏈球菌感染的狗表現(xiàn)持續(xù)更久的臨床發(fā)熱，以及更嚴重的臨床體征，尤其是持續(xù)更久的咳嗽。關(guān)于脫落和脫落持續(xù)時間陽性的狗的數(shù)量，雙重攻擊的狗中的鼻馬鏈球菌脫落非常高。而且，與單獨的CIV或單獨的馬鏈球菌相比，雙重攻擊誘導了明顯更高的肺部評分。我們發(fā)現(xiàn)，單獨用馬鏈球菌攻擊的狗沒有表現(xiàn)臨床發(fā)熱、呼吸道疾病的臨床體征或肺部病變。而且，在單獨用馬鏈球菌攻擊的狗的鼻分泌物中沒有檢測到馬鏈球菌。我們發(fā)現(xiàn)，單獨的馬鏈球菌不能誘導任何疾病，馬鏈球菌是在CIV存在的情況下導致細菌群集的機會病原體。馬鏈球菌加重了 CIV引起的發(fā)熱、其它臨床體征和相關(guān)的肺病態(tài)。我們發(fā)現(xiàn)，施用CIV疫苗減輕不僅是單獨的CIV而且是CIV加上馬鏈球菌誘導的臨床體征、病毒/細菌脫落和肺部病變。針對Civ的接種預防CIV以及機會病原體如馬鏈球菌引起的呼吸道疾病。用于攻擊的馬鏈球菌可以從被感染的動物獲得，如隨后的實施例中使用的分離物，或者可以從保藏中心獲得，如從ATCC編號6580獲得的分離物?？梢杂糜诠?如在下面的實施例中)和/或用于制備用于根據(jù)本發(fā)明的施用的疫苗的犬流感病毒的例子包括美國專利申請?zhí)?1/582，652 (2006年10月18日提交，公開的申請US 2007/0092537)、美國專利申請?zhí)?1/544，841 (2006年10月6日提交，公開的申請US 2007/0082012)、國際申請?zhí)朠CT/US2006/04161 (2006年10月19日提交)和美國專利申請?zhí)?1/956，658 (2007年12月14日提交)中所述的H3N8病毒中的任一種，上述所有文獻在此處被完整地通過弓I用并入。本發(fā)明的CIV疫苗將具有無毒的、減毒的或滅活的病毒，或包含抗原亞單位。無毒和減毒的病毒意在包括重組病毒以及無毒分離物、傳代的病毒、冷適應的病毒(coldadapted viruses)和通過其它方法使其具有更弱毒性或非致病性的病毒。CIV疫苗也可以是商業(yè)的疫苗，如從 Intervet Inc. /Schering-Plough Animal Health, Elkhorn, NE, NOBIVAC Canine Flu H3N8可獲得的CIV疫苗。根據(jù)本發(fā)明可以使用任何有效的CIV疫苗。本發(fā)明進一步提供了組合疫苗，其用于引起針對流感病毒例如犬流感病毒(CIV)、和其他疾病例如其它犬傳染病的保護性免疫。這種疫苗將具有無毒的、減毒的和/或滅活的病毒和/或細菌，和/或包含抗原亞單位。因此，本發(fā)明提供了組合疫苗，其包括一種或更多種的CIV株，例如失活的CIV H3N8，連同一種或更多種其它犬病原體和/或免疫原，包括，例如，用于引起針對犬瘟熱病毒、犬腺病毒、2型犬腺病毒、犬細小病毒、犬副流感病毒、犬冠狀病毒、犬皰疫病毒、犬肺炎病毒和/或鉤端螺旋體血清型(Leptospira serovars),如寇氏鉤端螺旋體傷寒感冒血清型(Leptospira kirschneri serovar grippotyphosa)、問號鉤端螺旋體犬血清型(Leptospira interrogans serovar canicola)、問號鉤端螺旋體出血黃痕血清型(Leptospira interrogans icterohaemorrhagiae)和/或問號鉤端螺旋體波蒙那血清型(Leptospira interrogans serovar Pomona)的免疫的病原體/免疫原?？梢约尤氡景l(fā)明的組合疫苗的額外的犬病原體/免疫原包括支氣管敗血波氏桿菌(Bordeteiia bronchiseptica);利什曼蟲生物，如碩大利什曼原蟲(Leishmania major)和嬰兒利什曼原蟲(Leishmania infantum);包柔氏屬物種(spp.)螺旋體,包括狹義伯氏疏螺旋體(B. burgdorferi sensu stricto (ss))、伯氏包柔螺旋體(B. burgdorferi ss)、伽氏疏螺旋體(B. garinii)和阿弗西尼疏螺旋體(B. afzelir);支原體屬物種(例如，犬支原體(Mycoplasma cynos));狂犬病毒和犬埃立克體(Ehrlichia canis)。在具體的實施方案中，本發(fā)明的組合疫苗包括以任何這種組合的CIV與犬副流感病毒(CPI)和/或2型犬腺病毒(CAV2)和/或支氣管敗血波氏桿菌(BB)和/或犬細小病毒(CPV)和/或犬瘟熱病毒(CDV)和/或犬冠狀病毒。在一個這種實施方案中，疫苗包括犬流感病毒、支氣管敗血波氏桿菌和犬副流感病毒。在另一個這種實施方案中，疫苗包括犬流感病毒、犬瘟熱病毒、2型犬腺病毒、犬細小病毒和犬副流感病毒。在一個具體的實施方案中，當本發(fā)明的組合疫苗包括一種或更多種病毒和/或細菌株時，這些株是無毒的、減毒的和/或滅活的?？梢酝ㄟ^任何途徑施用本發(fā)明的疫苗，包括腸胃外施用、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、皮內(nèi)注射、口腔施用、鼻內(nèi)施用、劃痕及其組合。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，通過肌肉注射施用疫苗。本發(fā)明的疫苗可以包含佐劑或不包含佐劑。本發(fā)明用于疫苗中的佐劑的例子包括包含油和水乳劑的那些，和/或氫氧化鋁。在后一種情況下，可以使用來自商業(yè)來源的氫氧化招，例如，Alhydrogel, [Superfos Biosector, Frederikssund, Denmark]和Rehydrogel (Reheis Inc.)。油和水乳劑典型地包括礦物油或可代謝的油(例如，植物油，魚油)。非離子去垢劑或表面活性劑可以用作乳化劑。乳化劑的例子包括吐溫80/ Span80、Arlecel 80 /吐溫80、和Montanides (Seppic,巴黎,法國)。在佐劑乳劑的情況下,通常5-25 %的體積是油，75-95 %的體積是水相。在一些實施方案中，佐劑乳劑是按體積計20 %的油和80%水相。氫氧化鋁的量通常為水相的約5%-15%。在一些實施方案中，Emunade 是佐劑。對于一些實施方案，ISCOM可以用作佐劑。ISCOM是免疫刺激復合物(ImmuneStimulating Complex)的首字母縮寫詞，該技術(shù)由 Morein 等[Nature 308:457-460 (1984)]所述?？梢砸詢煞N方法中的一種方便地形成ISC0M。在一些實施方案中，抗原在其制劑期間被物理地摻入結(jié)構(gòu)中。在其它實施方案中，ISCOM-基質(zhì)(如例如Isconova所提供的)不包含抗原，但在免疫前由最終用戶將其與選擇的抗原混合?；旌虾螅乖cISCOM-基質(zhì)存在于溶液中，但沒有被物理地摻入結(jié)構(gòu)中。為了更清楚地理解本發(fā)明，提供了下列實施例。這僅僅是說明性的，應理解為不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍或根本原則。根據(jù)本文的實施例和說明書，要求保護范圍內(nèi)的本發(fā)明的各種修改對于本發(fā)明所涉及的本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。
實施例介紹
在本研究中使用總共32只7-8周大的狗。一組10只狗用兩次劑量的犬流感H3N8滅活的病毒疫苗接種，間隔21天施用。在增強接種后兩周，用強毒的CIV和馬鏈球菌攻擊接種的狗。在沒有接種的單次和雙重攻擊后，用剩余的3組狗來評價疾病發(fā)生。單獨用CIV攻擊一組6只狗，單獨用馬鏈球菌攻擊另一組6只狗。用CIV和馬鏈球菌二者攻擊一組10只狗。對所有的狗監(jiān)測呼吸道疾病的臨床體征和病毒和/或細菌脫落。在接種之前從接種組采集血液樣本，在攻擊施用之前從所有組采集血液樣本，在尸體解剖時從所有組采集血液樣本以確定針對CIV的抗體滴度。在CIV攻擊后14天(研究的第49天)將狗安樂死，評價肺部的肺部病變。在尸體解剖時，收集肺灌洗樣本用于分離馬鏈球菌。將一批商售的犬流感H3N8滅活的病毒疫苗(Intervet Inc.，Elkhorn, NE)用來接種第4組中7-8周大的狗。在首次免疫時，第4組中所有狗都是CIV血清陰性的，在CIV攻擊時，第1、2和3組中所有狗都是CIV血清陰性的。表I處理組
權(quán)利要求
1.保護動物免于二級病原體引起的疾病的方法，其包括提供針對初級病原體的包含抗原的疫苗以及將免疫原性有效量的所述針對初級病原體的疫苗施用于所述動物。
2.保護犬免于二級病原體引起的疾病的方法，其包括提供針對初級病原體的包含抗原的疫苗以及將免疫原性有效量的所述針對初級病原體的疫苗施用于所述犬。
3.保護犬免于二級病原體引起的疾病的方法，其包括提供針對犬流感病毒(CIV)的疫苗以及將免疫原性有效量的所述CIV疫苗施用于所述犬。
4.權(quán)利要求3的方法,其中所述二級病原體是馬鏈球菌獸疫亞種{Streptococcusequi subsp. Zooepidemicus) ((51. equi))
5.保護犬免于犬傳染性呼吸道疾病(CIRD)的方法，其包括提供針對犬流感病毒(CIV)的疫苗以及將免疫原性有效量的所述CIV疫苗施用于所述犬。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述疫苗是組合疫苗，其進一步包含一種或更多種額外的免疫原。
7.權(quán)利要求6的方法，其中一種或更多種額外的免疫原選自犬瘟熱病毒、犬腺病毒、犬細小病毒、犬副流感病毒、犬冠狀病毒、犬皰疹病毒、犬肺炎病毒、鉤端螺旋體H印tospira)血清型、利什曼蟲{Leishmania)生物、包柔氏屬(Borrelia)物種(spp.)、支氣管敗血波氏桿菌{Bordetella bronchiseptica)、支原、體屬(Mycoplasma)物種、狂犬病毒、犬埃立克體Qihrlichia can is)及其任意組合。
8.權(quán)利要求4的方法，其中所述疫苗是組合疫苗，其進一步包含一種或更多種額外的免疫原。
9.權(quán)利要求8的方法，其中一種或更多種額外的免疫原選自犬瘟熱病毒、犬腺病毒、犬細小病毒、犬副流感病毒、犬冠狀病毒、犬皰疹病毒、犬肺炎病毒、鉤端螺旋體血清型、利什曼蟲生物、包柔氏屬物種(SPP.)、支氣管敗血波氏桿菌、支原體屬物種、狂犬病毒、犬埃立克體及其任意組合。
10.CIV疫苗在保護犬免于二級病原體引起的疾病中的用途，包括將所述CIV疫苗施用于所述犬。
11.Civ疫苗在保護犬免于馬鏈球菌疾病中的用途，包括將所述CIV疫苗施用于所述犬。
全文摘要
保護動物免于二級病原體引起的疾病的方法，其包括提供針對初級病原體的包含抗原的疫苗以及將免疫原性有效量的該針對初級病原體的疫苗施用于動物。
文檔編號A61K39/145GK102791287SQ201180013028
公開日2012年11月21日 申請日期2011年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月10日
發(fā)明者H.G.賈亞帕, M.S.德什潘德, N.P.拉克什馬南, T.L.瓦斯莫恩 申請人:英特維特國際股份有限公司