專利名稱：全血的病原體滅活的制作方法
全血的病原體滅活相關(guān)申請的交叉引用本申請根據(jù)35 U.S.C.119(e)要求于2007年8月1日提交的美國臨時申請 60/953374和于2008年7月30日提交的美國申請12/182280的權(quán)益。背景血液供給被感染性微生物例如HIV、肝炎和其他病毒及細菌的污染對必須接受全 血輸血或各種血液組分施用的那些人造成嚴重健康危害，所述血液組分例如血小板、紅細 胞、血漿、因子VIII、纖溶酶原、纖連蛋白、抗凝血酶III、冷沉淀物、人血漿蛋白成分、白蛋 白、免疫血清球蛋白、凝血酶原復(fù)合物、血漿生長激素和從血液中分離的其他組分。血液篩 選操作可能遺漏污染物，并且近期已開發(fā)了不損害細胞血液組分但有效滅活所有感染性病 毒和其他微生物的滅菌操作。吸收確定波長的光且將吸收的能量轉(zhuǎn)移給電子受體的光敏劑或化合物可能是上 述問題的解決方法。光敏劑可以用于滅活可能污染血液產(chǎn)品的感染性微生物或其他不希望 有的元素例如白細胞，而不損害所需血液組分。存在許多可用于滅活不希望有的元素的本領(lǐng)域已知的光敏劑化合物。此種光敏劑 的例子包括卟啉、補骨脂素、染料例如中性紅、亞甲藍、吖啶、甲苯胺、黃素(鹽酸吖啶黃)和 吩噻嗪衍生物、香豆素、喹諾酮、醌、蒽醌(anthroquinones)和內(nèi)源光敏劑例如核黃素。從志愿者供體收集的用于輸血受者的全血一般使用各種已知方法分離為血小板、 血漿和紅細胞。如果光敏劑用于滅活血液中的病原體，那么在對每種組分實施病原體滅活 操作前，通常使全血分離為其組分。這是因為全血的紅細胞組分吸收激活特定光敏劑所需 的大部分光，增加了可能存在的任何病原體未被滅活的可能性。在紅細胞的存在下，將光遞 送給全血以滅活病原體的所需的量將高至足以引起對全血中的其他組分的損害。在其分離 為組分前減少全血的病原體正是本發(fā)明針對的問題。發(fā)明概述本發(fā)明涉及滅活全血的病原體的方法。其步驟包括將來自供體的全血收集到袋 內(nèi)；以足夠的能量用光照射全血，從而使得全血中存在的咯嗪光敏劑可以光解以滅活全血 中可能存在的任何病原體；并且貯存病原體滅活的全血。本發(fā)明還包括將病原體滅活的全 血分離為組分的方法。附圖簡述

圖1是本發(fā)明的一組袋和過程流程圖的示意圖。圖2是本發(fā)明的另一組袋和另一種過程的示意圖。圖3是可以與本發(fā)明一起使用的血液組分壓榨器(expresser)的示意圖。圖4是可以與本發(fā)明一起使用的全血分離設(shè)備的橫截面視圖。圖5是設(shè)計用于與圖4的自動化全血分離設(shè)備一起使用的一組分離和收集袋的示 意圖和部分截面圖。圖6是使用圖4的設(shè)備將病原體滅活的全血分離為組分的過程的流程圖。圖7是設(shè)計用于與另一種自動化全血分離設(shè)備一起使用的另一組分離和收集袋的示意圖。圖8是可以與本發(fā)明一起使用的另一種全血分離設(shè)備的橫截面視圖。圖9是圖8的分離設(shè)備的轉(zhuǎn)子的頂視圖。圖10是使用圖8的設(shè)備將病原體滅活的全血分離為組分的過程的流程圖。圖11A和11B是根據(jù)照射能量的有包膜和無包膜病毒的對數(shù)減少的圖。圖12是根據(jù)照射能量的在處理的紅細胞的冷凍貯存過程中的溶血的圖。圖13是根據(jù)照射能量的在處理的紅細胞的冷凍貯存過程中的ATP水平的圖。圖14是根據(jù)照射能量的在冷凍貯存過程中的處理的紅細胞的平均滲透脆性的 圖。圖15是根據(jù)照射能量的處理的和未處理的全血(全血在室溫下貯存5天)中的 鉀水平的圖。圖16A和16B是根據(jù)照射能量的在冷凍貯存過程中的血漿品質(zhì)的圖。圖17是根據(jù)照射能量的關(guān)于處理的和未處理的血小板的血小板品質(zhì)的測量值的表。詳述在本發(fā)明中使用的“光敏劑”定義為吸收在一個或多個確定波長下的放射并且隨 后利用吸收的能量執(zhí)行化學(xué)過程的任何化合物。內(nèi)源光敏劑可以在本發(fā)明中使用。術(shù)語“內(nèi)源”意指，由于機體的合成或因為作為 必需食品(例如，維生素)攝入或在體內(nèi)形成代謝產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物，而在人或哺乳動物體 內(nèi)天然發(fā)現(xiàn)。當(dāng)使用內(nèi)源光敏劑時，特別是當(dāng)此種光敏劑并非固有有毒或在光輻射后不產(chǎn) 生有毒光產(chǎn)物時，在凈化后無需去除或純化步驟，并且凈化產(chǎn)物可以直接施用于患者?？梢栽诒景l(fā)明中使用的此種內(nèi)源光敏劑的例子是咯嗪例如7，8_ 二甲基-10-核糖 醇基異咯嗪(核黃素)、7，8，10_三甲基異咯嗪(光黃素)、7，8_ 二甲基咯嗪(光色素)、異 咯嗪腺嘌呤二核苷酸(黃素腺嘌呤二核苷酸[FAD])和咯嗪單核苷酸(也稱為黃素單核苷 酸[FMN]和核黃素-5-磷酸鹽)。術(shù)語“咯嗪”包括異咯嗪。內(nèi)源異咯嗪作為光敏劑以滅活血液和血液組分的用途在美國專利6，258，577和 6，277，337中描述，所述2個專利都頒給Goodrich等人，并且通過引用合并入本文至不矛盾 的程度。與待滅活的全血混合的光敏劑的量將是這樣的量，其足以充分滅活可能存在于液 體中的任何病原體相關(guān)核酸，但小于有毒(對于血液組分)或不可溶的量。病原體可以定 義為在血液中發(fā)現(xiàn)的任何不希望有的元素，例如細菌、病毒和白細胞。如果核黃素用作光敏劑，那么它可以以約50-500 iiM的終濃度加入全血。病原體 相關(guān)核酸包括任何不希望有的核酸，例如白細胞、細菌或病毒中包含的核酸。核酸包括脫氧 核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)或兩者。使已向其中加入光敏劑的全血暴露于合適波長的光，以激活光敏劑并且基本上滅 活病原體相關(guān)核酸和引起對病原體相關(guān)核酸的永久性損傷?；旧嫌谰眯該p傷意指核酸在 貯存過程中或在輸注到供體內(nèi)后將不經(jīng)歷自我修復(fù)或復(fù)制，同時維持病原體的抗原潛力以 由接受者的免疫系統(tǒng)去除。應(yīng)當(dāng)指出，附圖中的同樣的元素由同樣的數(shù)字表示。
如圖1中所示，待滅活病原體的全血可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法從供體收 集。一般地，單位全血( 450mL)從供體1收集到全血收集袋3內(nèi)。收集袋可以是標(biāo)準(zhǔn)血 液收集袋(在圖1中顯示)，或可以是圓形袋，例如圖5中顯示的袋11。收集全血后，血液 可以轉(zhuǎn)移至分開的照射袋(參見圖2)，或可以在收集袋3中進行照射，取決于收集袋的材 料。如果照射在收集袋中進行，那么收集袋必須是至少光可透過的，且具有允許全血和光敏 劑在照射過程中混合的大小。將袋5中包含的35mL 500 yM核黃素加入至袋3的全血中， 并且袋3中的全血+核黃素用22-110J/mLKBe的輻射進行照射。照射后，滅活的全血可以貯 存用于隨后使用或可以分離為所需組分，所述組分可以立即使用或貯存用于隨后使用。病 原體滅活的全血可貯存少于半小時，或可貯存一段時間直至血液不再有活力。對于本發(fā)明， 在添加光敏劑、照射和后續(xù)病原體滅活前全血無需去白細胞，或者在輸注入患者前的任何 時間點上全血或分開的病原體減少的血液組分無需去白細胞。在圖2中顯示的另一個實施方案中，將全血收集到全血收集袋2中，并且轉(zhuǎn)移至照 射袋4。袋2隨后從其余管道組中取出。光敏劑5隨后加入至照射袋4的全血中，并且袋在 照明器6中進行照射。照射后，病原體滅活的全血可以轉(zhuǎn)移至固有附著或預(yù)連接的貯存袋 8。如果希望將滅活的全血分離為各種血液組分，那么滅活的全血可以手工分離或使 用自動化全血分離機進行分離。全血最通常手工分離為組分。從患者收集全血后，在實驗室中處理全血。在處 理實驗室中，技術(shù)人員將包含全血的袋放置到大型搖擺斗式離心機(swinging bucket centrifuge)中，當(dāng)裝載袋時，所述離心機必須小心平衡。啟動離心機并且以高速率旋轉(zhuǎn)袋。 在第一次離心中，其為最稠密組分的紅細胞被迫至袋底部，而較輕的富含血小板的血漿上 升至頂部。技術(shù)人員接下來將每個袋放置在壓榨器80 (參見圖3)中，所述壓榨器80包括通 過彈簧加載的鉸鏈84連接的2塊剛性板81、82。所述板之一是固定的，并且另一塊是可動 的。將血液袋86置于2塊板之間，并且釋放彈簧銷，促使可動板擠壓袋。在袋頂部的口 87 隨后打開并且將富含血小板的血漿壓榨到預(yù)連接的空袋88內(nèi)。當(dāng)技術(shù)人員觀察到紅細胞 將要到達排出口時，停止壓榨并且夾緊管道。如果要分離血小板，那么將包含富含血小板的血漿的袋放回離心機中，使轉(zhuǎn)子再 次平衡并且開始第二次旋轉(zhuǎn)，這次以更高的速度。這次離心將血小板迫至袋的底部，并且允 許更輕的血漿上升至頂部。隨后重復(fù)上文描述的壓榨過程，從而使得血小板可以遞送至分 開的袋用于貯存。全血也可以通過使用自動化全血分離機分離為組分?？梢詧?zhí)行全血分離以獲得2 種組分產(chǎn)物，例如血漿和紅細胞(RBC)，或獲得3種(或更多)組分產(chǎn)物，例如血漿、RBC和 血沉棕黃層或血小板產(chǎn)物。當(dāng)要將病原體減少的全血以完全無菌的方式分離為組分時，本 系統(tǒng)和方法可能是特別希望的。圖4顯示用于通過離心分離一定體積的復(fù)合液體的設(shè)備的實施方案。該設(shè)備 包含適合于接受圖5中顯示的分離袋的離心機和用于促使分離的組分轉(zhuǎn)移到附屬袋 (satellite bag)內(nèi)的組分轉(zhuǎn)移裝置。離心機包含由軸承組件30 (其允許轉(zhuǎn)子圍繞豎直中心軸線(未顯示)轉(zhuǎn)動)支承的轉(zhuǎn)子。轉(zhuǎn)子包括圓柱狀轉(zhuǎn)子軸32、33 ；用于容納附屬袋的中央?yún)^(qū)室34，其與轉(zhuǎn)子軸32、33 連接；用于支承在中央?yún)^(qū)室34內(nèi)的確定位置中的至少一個附屬袋的支承部件(圖4中未顯 示)；和用于支承分離袋的圓形轉(zhuǎn)臺35，其與區(qū)室34連接。轉(zhuǎn)子軸包含第一上部部分32和第二下部部分33。軸的上部部分32部分延伸通過 軸承組件30。滑輪36與軸的上部部分32的下端連接。離心機進一步包含通過接合于滑輪36的凹槽中的帶41與轉(zhuǎn)子偶聯(lián)的電動機40， 以便使轉(zhuǎn)子圍繞中心豎直軸線轉(zhuǎn)動。分離設(shè)備進一步包含第一、第二和第三夾管閥(pinch valve)部件(未顯示)，其 安裝在轉(zhuǎn)子上用于選擇性阻斷或允許液體流經(jīng)軟塑料(flexible plastic)管，并且選擇性 密封且切斷塑料管。轉(zhuǎn)臺35包含中心截頭圓錐形(frusto-conical)部分46 (其上部、較小邊緣與區(qū) 室34的緣連接)，與截頭圓錐形部分46的下部、較大邊緣連接的環(huán)狀扁平部分47，和從環(huán) 狀部分47的外圍向上延伸的外部圓柱狀凸緣48。轉(zhuǎn)臺35進一步包含通過鉸鏈固定至凸 緣48的拱形圓形蓋49，以便在開啟和閉合位置之間樞轉(zhuǎn)。蓋49配備栓51，借此蓋49可以 在閉合位置封閉。蓋49在其上部包含大型斷流器，其提供進入轉(zhuǎn)子的中心區(qū)室34的通道。 蓋49具有如此成形的環(huán)狀內(nèi)表面，當(dāng)蓋49處于閉合位置時，它與轉(zhuǎn)臺38的截頭圓錐形部 分46和環(huán)狀扁平部分47 —起限定截頭圓錐形環(huán)狀區(qū)室53 (其具有基本上平行四邊形形狀 的徑向截面)。截頭圓錐形環(huán)狀區(qū)室53(隨后的“分離區(qū)室”)意欲用于容納分離袋11。組分轉(zhuǎn)移裝置包含擠壓系統(tǒng)，用于擠壓在分離區(qū)室53內(nèi)的分離袋且促使分離的 組分轉(zhuǎn)移到附屬袋內(nèi)。擠壓系統(tǒng)包含如此成形的彈性環(huán)狀隔板54，以便沿轉(zhuǎn)臺35的截頭 圓錐形部分46和環(huán)狀扁平部分47排列，它沿著它的較小和較大圓形邊緣固定至所述部分。 擠壓系統(tǒng)進一步包含液壓泵站60，用于經(jīng)由導(dǎo)管37 (其從轉(zhuǎn)子軸的下部部分33的下端通過 轉(zhuǎn)子延伸到轉(zhuǎn)臺35)將液壓液體泵進和泵出在彈性隔板54和轉(zhuǎn)臺35之間限定的可膨脹液 壓室。泵站60包含具有可在液壓缸62中移動的活塞61的活塞泵，所述液壓缸62經(jīng)由轉(zhuǎn) 動流體聯(lián)軸節(jié)38與轉(zhuǎn)子導(dǎo)管37流體連接。活塞61通過步進電動機63驅(qū)動，所述步進電 動機63推動與活塞桿連接的導(dǎo)螺桿64。液壓缸62還與具有由閥66控制的入口的液壓貯 液器65連接，用于選擇性允許將液壓液體引入或抽出液壓回路，所述液壓回路包括液壓缸 62、轉(zhuǎn)子導(dǎo)管37和可膨脹液壓室。壓力表67與液壓回路連接用于測量其中的液壓。分離設(shè)備進一步包含控制器70，其包括控制單元(微處理器)以及用于給微處理 器提供信息和程序指令的存儲器，所述信息和程序指令與各種分離方案和依照此種分離方 案的設(shè)備操作有關(guān)。特別地，微處理器經(jīng)編程用于接受與離心速度(在分離過程的各個階 段中轉(zhuǎn)子將以所述離心速度轉(zhuǎn)動)有關(guān)的信息，以及與各種轉(zhuǎn)移流速(分離的組分將以所 述轉(zhuǎn)移流速從分離袋11轉(zhuǎn)移到附屬袋12、14內(nèi))有關(guān)的信息。與各種轉(zhuǎn)移流速有關(guān)的信息 可以例如表示為在液壓回路中的液壓液體流速，或液壓泵站60的步進電動機63的轉(zhuǎn)動速 度。微處理器進一步經(jīng)編程用于直接接受或通過存儲器接受來自壓力表67和光電池(未 顯示)的信息，且用于控制離心電動機40、步進電動機63和夾管閥部件，以便促使分離設(shè)備 按照選擇的分離方案運轉(zhuǎn)。可以與本發(fā)明的系統(tǒng)/機器一起使用的各種備選的容器組10顯示于圖5中。分 離容器11可以是袋組的部分，其中在一個實施方案中，分離容器11是環(huán)狀和/或具有環(huán)形形狀。在某些實施方案中，其可以是扁平的，或其可以是稍微截頭圓錐形分離容器11，并且 可以由軟塑料材料制成，其在某些情況下，可以是與常規(guī)血液或血液組分或其他生物學(xué)流 體袋中使用的相同或相似的類型。如果要照射袋11，那么它必須是至少光可透過的。如圖5的基本上示意性實施方案中所示，第一組分收集容器12可以通過管13與 分離容器11連接，并且第二組分收集容器14可以相似地通過第二管15與分離容器11連 接。這2個連接都可以在環(huán)袋11的內(nèi)圓周處，或盡管未顯示，任一者或兩者可以與外圓周 連接或在其間的任何希望的徑向位置處。組分收集容器12、14可以以多種方法中的任何一 種成形，和/或由多種材料中的任何一種制成，盡管如顯示的，在某些實施方案中，它們可 以是由基本上常規(guī)類型的軟塑料片材料制成的基本上矩形的袋，塑料片材料優(yōu)選考慮到可 能選擇貯存在各自的容器中的細胞或血液組分產(chǎn)物的類型而進行選擇。在圖4的二組分 (2C)的組10中，這2個組分收集袋12、14是僅有的末端組分袋；然而，在三組分(3C)的組 中，第三組分收集袋(未顯示)也可以通過第三管道線與環(huán)袋11連接。在病原體滅活的全 血(WB)的分離中，第一收集袋12可以適合于接受血漿，第二收集袋14適合于接受RBC，并 且第三收集袋(在3C組中)適合于接受血小板。在病原體滅活的全血的分離和病原體滅活的血液組分的制備中，袋最初可以都是 空的，或一個或多個最終的組分收集容器或產(chǎn)物袋，例如第二組分容器14 (在圖5中)，最初 可以裝有一定量的添加或貯存流體或液體16，用于將組分例如紅細胞分配在其中。此種流 體的例子可以包括貯存溶液，例如SAG、SAG-M、AS-1、AS-3或AS-5。可選地，貯存或添加溶液可以預(yù)先分配在任選的分離袋中，參見例如，圖5中的附 屬袋26，其將或可以經(jīng)由從袋14引導(dǎo)的添加溶液管27以及連接管28與袋14連接。還可 以包括在管線28上示意性表示的任選的無菌屏障或濾器29。添加或貯存溶液16隨后可 以經(jīng)由管線28、27從附屬容器26傳遞到容器14。在某些實施方案中，溶液袋26可以與袋 14預(yù)先連接，即在組10的制造過程期間連接，或可選地，添加溶液袋26可以隨后經(jīng)由無菌 對接或長釘連接進行連接或?qū)?，并且因此先前未貯存在組10內(nèi)或作為組10的部分，而是 相反地在不同時間(在血液組分分離/處理前或后)加入。在此種情況下，組分容器14可 以隨后暫時密封(通過例如易碎或折斷銷17，或其他密封裝置例如可剝離或壓力可斷裂封 條)，以維持密封在其中的溶液直至可能需要使用它時，即直至裝載到離心機中且準(zhǔn)備接受 組分產(chǎn)物例如RBC時。對于其他組分袋，貯存或添加溶液可以類似地預(yù)先分配在袋中或適合于加入袋 中，以有益于隨后加入其中的組分產(chǎn)物。如果要收集血小板，那么第三組分收集容器可以包 含用于血小板的貯存溶液，例如PAS、PAS IIIM或Composol。在例如舉例說明的實施方案中，分離容器11可以裝備連接管19，所述連接管19可 以通過無菌對接部23與病原體滅活的全血的來源20連接。在另一個實施方案中，依照上 文圖1和2中描述的原理，全血可以在分離容器11中收集并且進行病原體滅活。在這個實 施方案中，將不需要袋20和管道線19。如圖6中所示，在一般過程110的第一個步驟121中，將病原體滅活的全血供應(yīng)給 分離容器/袋11。隨后在第二個一般步驟122中，病原體滅活的全血進行離心并從而分離 組分部分。接下來，如框123中所示，將第一組分產(chǎn)物從分離容器11中移出或壓榨到第一 組分容器12。第二組分產(chǎn)物也從分離容器11中移出或壓榨到其第二組分容器14。這由過
8程圖解110中的框124描述。最后，第一和/或第二組分容器12、14通過裝閥(valving)、 密封和/或切斷至其上的入口例如管道線進行封閉。這由框125/在框125中描述。注意， 作為一般概念，第三個、第四個和第五個步驟123、124和125可以獨立地發(fā)生，和/或在第 二個步驟122的離心機轉(zhuǎn)速下降和分離后發(fā)生，或更一般地，步驟122的轉(zhuǎn)動/離心持續(xù)貫 穿其他步驟123、124和/或125和任何備選和/或另外的中間步驟的執(zhí)行。因此，此處轉(zhuǎn) 動/離心和分離步驟122將最通常僅在步驟123、124和/或125和任何另外的中間和/或 備選步驟完成后停止。隨后，第二個步驟122的停止將構(gòu)成通常過程的結(jié)束(注意，盡管如 此，但如果執(zhí)行后處理，那么還有卸出和/或其他管理類型的操作過程，標(biāo)識、標(biāo)記、貯存等 離心后過程步驟)。注意，在圖5中還顯示了(以虛線)備選、任選的過程線123a，以強調(diào) 備選方案，即裝閥、密封和/或切斷步驟125可以相對于第一組分容器執(zhí)行，在第四個步驟 124前或期間，并且無論如何，在第二產(chǎn)物容器的裝閥、密封和/或切斷步驟前且與其分開。如果收集第三產(chǎn)物，那么中間步驟126可以用于將第三產(chǎn)物從分離容器中移出或 壓榨到第三產(chǎn)物容器。注意，還顯示了(以虛線)備選、任選的過程線124a，以強調(diào)備選方 案，即裝閥、密封和/或切斷步驟125可以相對于第二組分容器執(zhí)行，在中間任選步驟126 前或期間，并且無論如何，在第三產(chǎn)物容器的裝閥、密封和/或切斷步驟前且與其分開。圖7顯示適合于與另一種系統(tǒng)/機器的一組袋的另一個例子，所述系統(tǒng)/機器可 以用于將病原體滅活的全血離心分離為組分產(chǎn)物。這個袋組包含彈性分離袋1000和與之 連接的3個彈性附屬袋200、300、150。分離袋1000可以用作全血收集袋、病原體滅活袋和用于將病原體滅活的全血分 離為組分的袋。分離袋1000是扁平的并且一般是矩形的。它由2片矩形塑料材料制成，所 述塑料材料熔接在一起，以便在其間限定具有與三角形頂端的下游部分連接的主要矩形部 分的內(nèi)部空間。第一管400與三角形部分的尖端連接，并且第二管500和第三管600分別 與三角形部分的任一側(cè)面邊緣連接。三根管400、500、600的近端嵌入2片塑料材料之間， 以便平行。分離袋1000在其各個角中進一步包含開孔800，其與三根管400、500、600鄰近。 開孔800用于將分離袋固定至分離區(qū)室。最初將一定體積的抗凝血劑(對于約450ml的捐獻血液一般約63ml)加入分離 袋，并且第一管400和第三管600在其近端分別配備可折斷塞90、100，用于阻止液體流動通 過其。第二管500是具有與其遠端連接的針120的收集管。在獻血開始時，將針120插 入供體的靜脈中，并且血液流入收集(分離)袋1000內(nèi)。在收集(分離)袋1000中已收 集所需體積的血液后，密封且切斷收集管500。光敏劑可以在加入全血前最初加入袋1000， 或可以在全血加入后通過管道500加入。它還可以通過分離管(未顯示)加入。第一個附屬袋200意欲用于接受血漿組分。它是扁平的且基本上矩形的。它與第 一管400的遠端連接。第二個附屬袋300意欲用于接受紅細胞組分。它是扁平的且基本上矩形的。它與 第三管600的遠端連接。第二個附屬袋300可能包含一定體積的貯存溶液用于貯存紅細胞， 并且第三管600在其遠端處配備可折斷塞140，用于阻止液體流動通過其。第三個附屬袋150意欲用于接受血小板組分。如同第一個和第二個附屬袋200、 300，第三個附屬袋150是扁平的且基本上矩形的。
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袋組還包含T形三向連接器160，其支腿通過第一管400與分離袋1000連接，第一 臂通過第四管170與第一個附屬袋200 (血漿組分袋)連接，和第二臂通過第五管180與第 三個附屬袋150 (血小板組分袋)連接。用于通過離心同時分離4個具有各自體積的病原體滅活的全血的設(shè)備可以與圖7 的袋組一起使用。該設(shè)備包括適合于接受4個圖7中顯示的袋組的離心機，其中在4個分 離袋中包含4個具有各自體積的復(fù)合液體；用于將至少一種分離的組分從各個分離袋轉(zhuǎn)移 入與其連接的附屬袋的組分轉(zhuǎn)移系統(tǒng)；當(dāng)4個分離袋的重量不同時，用于使轉(zhuǎn)子初始平衡 的第一平衡系統(tǒng)；和當(dāng)轉(zhuǎn)移到附屬袋內(nèi)的分離的組分的重量引起轉(zhuǎn)子不平衡時，用于使轉(zhuǎn) 子平衡的第二平衡系統(tǒng)。如圖8中所示，離心機包含由軸承組件3000支承的轉(zhuǎn)子，允許轉(zhuǎn)子圍繞旋轉(zhuǎn)軸線 310轉(zhuǎn)動。轉(zhuǎn)子包括滑輪330與之連接的圓柱狀轉(zhuǎn)子軸320 ；用于容納附屬袋的包含中心 圓柱狀容器340的系統(tǒng)，其與轉(zhuǎn)子軸320在轉(zhuǎn)子軸上端處連接，從而使得轉(zhuǎn)子軸320的縱向 軸線和容器340的縱向軸線與旋轉(zhuǎn)軸線310 —致，以及截頭圓錐形轉(zhuǎn)臺350，其與中心容器 340的上部連接，從而使得它的中心軸線與旋轉(zhuǎn)軸線310—致。截頭圓錐形轉(zhuǎn)臺350在容器 340的開口下外展。4個相同的分離小室4000安裝在轉(zhuǎn)臺350上，以便形成相對于旋轉(zhuǎn)軸 線310的對稱布置。離心機進一步包含通過接合于滑輪330的凹槽中的帶370與轉(zhuǎn)子偶聯(lián)的電動機 360，以便使轉(zhuǎn)子圍繞旋轉(zhuǎn)軸線310轉(zhuǎn)動。每個分離小室4000包含具有長方體的一般形狀的容器410。分離小室4000安裝 在轉(zhuǎn)臺350上，以使得它們各自的中間縱向軸線420與旋轉(zhuǎn)軸線310相交，使得它們基本上 位于距離旋轉(zhuǎn)軸線310的相同距離處，并且使得它們的中間縱向軸線420之間的角基本上 相同(即，90度)。調(diào)整分離小室4000在轉(zhuǎn)臺350上的確切位置，以使得當(dāng)分離小室4000 是空的時，轉(zhuǎn)臺上的重量均勻分布，即使得轉(zhuǎn)子是平衡的。由于分離小室4000在轉(zhuǎn)臺350 上的布置，分離小室4000相對于旋轉(zhuǎn)軸線310傾斜與平截頭圓錐體的角相等的銳角，所述 圓錐體在幾何學(xué)上限定轉(zhuǎn)臺350。每個容器410包含腔430，其如此成形且具有如此尺寸，以便松散容納具有圖4中 顯示的類型的、充滿液體的分離袋1000。腔430(其在下文中也稱為“分離區(qū)室”)通過距 離旋轉(zhuǎn)軸線310最遠的底壁，與轉(zhuǎn)臺350最近的下壁，與下壁相對的上壁，和2個側(cè)壁限定。 腔430包含由底壁延伸的主要部分，其具有帶圓角的基本上長方體的形狀；以及上部，其具 有基本上含會聚三角形基部的棱柱的形狀。換言之，腔430上部由朝向腔430的中心中軸 線420會聚的2對相對的壁限定。這種設(shè)計的一個益處是在通過離心分離后促使全血的次要組分(例如，血小板) 的薄層的輻射擴張，并且使得它在分離袋的上部中可更容易檢測。如圖8中所示，分離小室 4000的上部的2對相對的壁朝向3個圓柱形平行通道440、450、460會聚，在容器410的頂 部開口，并且當(dāng)將分離袋1000置于容器410中時，3根管400、500、600在其中延伸。容器410還包含鉸接的側(cè)蓋(未顯示)，其由容器410外壁(即與轉(zhuǎn)臺350相對的 壁)的上部組成。蓋具有如此的尺寸以便在打開時能夠容易地將充滿液體的分離袋1000 裝載到分離小室4000內(nèi)。容器410包含通過其蓋可以鎖定至容器410的其余部分的牢固 的鎖定裝置(未顯示)。
容器410還包含用于將分離袋1000固定在分離小室4000內(nèi)的固定裝置。袋固定 裝置包含在蓋的內(nèi)表面上突出的接近于分離小室4000的頂部的2個銷(未顯示)，和在容 器410的上部中的2個對應(yīng)凹部。2個銷如此隔開且具有如此的尺寸，以便裝配在分離袋 1000的上方角中的2個開孔800。分離設(shè)備進一步包含組分轉(zhuǎn)移裝置，用于將至少一種分離的組分從各個分離袋轉(zhuǎn) 移到與其連接的附屬袋內(nèi)。組分轉(zhuǎn)移裝置包含擠壓系統(tǒng)，用于擠壓在分離區(qū)室430內(nèi)的分 離袋1000且促使分離的組分轉(zhuǎn)移到附屬袋200、300、150內(nèi)。擠壓系統(tǒng)包含固定至各個容器410的彈性隔板500，以便限定在容器腔中的可膨 脹室510。更具體而言，隔板500具有如此的尺寸，以便沿腔430的底壁和腔430的大部分 下壁排列，其最接近于轉(zhuǎn)臺350。擠壓系統(tǒng)進一步包含外圍圓形歧管520，其在轉(zhuǎn)臺350內(nèi)形成環(huán)，延伸接近轉(zhuǎn)臺 350外圍。各個膨脹室510通過供應(yīng)通道530與歧管520連接，所述供應(yīng)通道530延伸通過 各自容器410的壁，接近于其底部。擠壓系統(tǒng)進一步包含液壓泵站6000，用于將液壓液體泵進和泵出在分離小室 4000內(nèi)的可膨脹室510。液壓液體經(jīng)選擇，以便具有略高于待分離的復(fù)合液體中較密集組 分(例如，當(dāng)復(fù)合液體是血液時，紅細胞)的密度。因此，在離心過程中，在可膨脹室510內(nèi) 的液壓液體，無論其體積，將一般保留在分離小室4000的最外部中。泵站6000經(jīng)由導(dǎo)管 560，通過轉(zhuǎn)動密封部690與可膨脹室510連接，所述導(dǎo)管560延伸通過轉(zhuǎn)子軸320，中心容 器340的底壁和側(cè)壁，并且從中心容器340的邊緣輻射通過轉(zhuǎn)臺350，并在轉(zhuǎn)臺350中與歧 管520連接。泵站6000包含具有可在液壓缸620中移動的活塞610的活塞泵，所述液壓缸620 經(jīng)由轉(zhuǎn)動流體聯(lián)軸節(jié)與轉(zhuǎn)子導(dǎo)管540流體連接?；钊?10由步進電動機640驅(qū)動，所述步 進電動機640推動與活塞桿連接的導(dǎo)螺桿650。液壓缸620還與具有由閥670控制的入口 的液壓貯液器660連接，用于選擇性允許將液壓液體引入或抽出液壓回路，所述液壓回路 包括液壓缸620、轉(zhuǎn)子導(dǎo)管560和可膨脹液壓室510。壓力表680與液壓回路連接用于測量 其中的液壓。分離設(shè)備進一步包含4對第一和第二夾管閥部件700、710，其安裝在轉(zhuǎn)子上中心 容器340的開口周圍。每對夾管閥部件700、710朝向它與之關(guān)聯(lián)的一個分離小室4000。夾 管閥部件700、710設(shè)計用于選擇性阻止或允許液體流動通過軟塑料管，并且選擇性密封和 切斷塑料管。每個夾管閥部件700、710包含細長的圓柱形主體和具有凹槽720的頭部，所 述頭部通過固定的上鉗夾以及可在打開和關(guān)閉位置之間移動的下鉗夾限定。凹槽720具有 如此的尺寸，以使得當(dāng)下鉗夾處于打開位置時，圖7中顯示的袋組的管400、170、180之一可 以緊貼地接合于其中。細長的主體包含用于移動下鉗夾的機構(gòu)，并且它與供應(yīng)密封和切斷 塑料管所需的能量的射頻發(fā)生器連接。夾管閥部件700、710安裝在中心容器340內(nèi)，鄰近 其內(nèi)表面，從而使得它們的縱向軸線與旋轉(zhuǎn)軸線310平行，并且它們的頭部突出于容器340 的緣。通過滑動環(huán)陣列將電力供應(yīng)給夾管閥部件700、710，所述滑動環(huán)陣列安裝在轉(zhuǎn)子軸 320的下部周圍。分離設(shè)備進一步包含第一平衡裝置，當(dāng)分離小室4000中包含的4個分離袋1000 的重量不同時，其用于使轉(zhuǎn)子初始平衡。第一平衡裝置基本上包含與上文描述的組分轉(zhuǎn)移裝置的元件相同的結(jié)構(gòu)元件，即通過外圍圓形歧管520互聯(lián)的4個可膨脹液壓室510，和 用于通過轉(zhuǎn)子導(dǎo)管560將液壓液體泵到液壓室510內(nèi)的液壓液體泵站6000，所述導(dǎo)管560 與圓形歧管520連接。為了使轉(zhuǎn)子初始平衡(它的4個分離小室4000包含4個具有各自體 積的復(fù)合液體，所述復(fù)合液體可能不具有相同重量(因為4個體積可能不相等，和/或相互 之間液體密度可能略微不同))，控制泵站6000，以便在分離過程開始時，將預(yù)定體積的液 壓液體(其經(jīng)選擇以便能夠平衡處于最不平衡位置的轉(zhuǎn)子)泵到互聯(lián)的液壓室510內(nèi)。對 于病原體滅活的全血，該平衡體積的確定考慮到2份捐獻血液之間的最大體積差異，以及2 份捐獻血液之間的最大血細胞比容(即，密度)差異。在離心力下，取決于分離袋1000的 重量差異，液壓液體將在4個分離小室4000中不均勻地分布，并且使轉(zhuǎn)子平衡。為了獲得 最佳初始平衡，分離小室4000的腔430的體積應(yīng)進行選擇以使得腔430，無論其中包含的分 離袋1000的體積，在將確定量的液壓液體泵入互聯(lián)的膨脹室510后不是充滿的。分離設(shè)備進一步包含第二平衡裝置，當(dāng)轉(zhuǎn)移到中心容器340中的附屬袋200、300、 150內(nèi)的組分的重量不同時，其用于使轉(zhuǎn)子平衡。例如，當(dāng)2份捐獻血液具有相同血細胞比 容和不同體積時，從每份捐獻血液提取的血漿體積不同，和當(dāng)2份捐獻血液具有相同體積 和不同血細胞比容時，情況也是一樣的。如圖9中所示，第二平衡裝置包含4個彈性矩形小袋810、820、830、840，所述小袋 通過4個管部分(未顯示)互聯(lián)，每個管部分通過其底部連接2個鄰近小袋。小袋810、820、 830,840包含一定體積的具有與復(fù)合液體密度接近的密度的平衡液體。平衡液體體積經(jīng)選 擇，以便能夠平衡處于最不平衡位置的轉(zhuǎn)子。4個小袋810、820、830、840具有如此的尺寸， 以便沿中心容器340的內(nèi)表面排列并且具有大于平衡液體體積的內(nèi)部容量，從而使得平衡 液體可以在小袋810、820、830、840的任何一個中自由擴張。在操作過程中，如果例如分別 與4個小袋810、820、830、840鄰近的4個附屬袋200接受不同體積的血漿組分，那么4個 附屬袋200在離心力下將不均勻地壓迫4個小袋810、820、830、840，這將導(dǎo)致平衡液體在4 個小袋810、820、830、840中變得不均勻分布，并且補償附屬袋200中的重量差異。分離設(shè)備進一步包含控制器900，其包括控制單元(例如，微處理器)以及用于 給微處理器提供信息和程序指令的存儲器單元，所述信息和程序指令與各種分離方案(例 如，用于分離血漿組分和血細胞組分的方案，或用于分離血漿組分、血小板組分和紅細胞組 分的方案)和依照此種分離方案的設(shè)備操作有關(guān)。特別地，微處理器經(jīng)編程用于接受與離 心速度(在分離過程的各個階段(例如，組分分離階段、血漿組分壓榨階段、血小板在血漿 級分中懸浮的階段、血小板組分壓榨階段等)期間，轉(zhuǎn)子將以所述速度轉(zhuǎn)動)有關(guān)的信息， 和與各種轉(zhuǎn)移流速(分離的組分將以所述流速從分離袋1000轉(zhuǎn)移到附屬袋200、300、150 內(nèi))有關(guān)的信息。與各種轉(zhuǎn)移流速有關(guān)的信息可以例如表示為在液壓回路中的液壓液體流 速，或液壓泵站6000的步進電動機640的轉(zhuǎn)動速度。微處理器進一步經(jīng)編程用于直接接受 或通過存儲器接受來自壓力表680和4對光電池730、740的信息，且用于控制離心電動機 360、泵站6000的步進電動機640以及4對夾管閥部件700、710，以便促使分離設(shè)備按照選 擇的分離方案運轉(zhuǎn)。根據(jù)圖10中所示的分離方案，將4個具有各自體積的病原體減少的全血分離為血 漿組分，包含血小板、白細胞、一些紅細胞和小體積血漿的第一細胞組分(隨后的“血沉棕 黃層”組分)，和主要包含紅細胞的第二細胞組分。各個體積的血液包含在圖7中表示的袋組的分離袋1000中(先前已使用收集管500將它從供體收集到所述分離袋1000中)。在 血液收集后，收集管500在接近分離袋處密封且切斷。一般地，4個分離袋1000中的血液體 積不同，并且血細胞比容在分離袋1000之間相互不同。因此，分離袋1000具有略微不同的重量。如圖10中所示，通過將4個袋組裝載到轉(zhuǎn)子上的4個分離小室4000中開始分離 操作的第一個階段。在第二個階段中，轉(zhuǎn)子進行平衡，以便補償分離袋的重量差異。在第三個階段中，將分離袋1000內(nèi)的病原體滅活的全血沉降至所需水平。在第四個階段中，將血漿組分轉(zhuǎn)移到血漿組分袋200內(nèi)。在第五個階段中，將血小板組分轉(zhuǎn)移到血小板組分袋150內(nèi)。在第六個階段中，離心過程結(jié)束。當(dāng)?shù)谖鍌€階段完成時，將紅細胞從分離袋1000轉(zhuǎn)移到紅細胞組分袋300內(nèi)。病原體滅活的全血還可以使用美國專利6，910，998中描述的全血分離機分離為 血液組分。在上文描述的任何全血分離過程中，在病原體滅活的全血分離為單獨組分前無需 在先的去白細胞(leukoreduction)。在分離后紅細胞也無需去白細胞。使用核黃素和光進 行的全血的病原體滅活在功能上滅活全血中的白細胞。這在下文實施例1中顯示。當(dāng)收集 包含白細胞的血沉棕黃層時，病原體滅活操作特別重要。方法對于對照單元，手工處理全血，使用柔和旋轉(zhuǎn)(soft spin)離心，壓榨富含血小板 的血漿(PRP)上清液，并且將完全體積(約100mL)的AS-3添加溶液加入分離的RBC用于 貯存。血小板濃縮物由PRP制備，并且在取樣前在Helmer培養(yǎng)箱中在22°C下貯存1天和5 天，用于第1天和第5天的血小板品質(zhì)測量。其余血漿冷凍貯存28天，并且評估第0天和 第28天的樣品的蛋白質(zhì)品質(zhì)。用于對照的血漿、血小板濃縮物和RBC經(jīng)歷與處理單元相同 的測試。對于處理單元，將35ml核黃素加入在1L ELP袋中的470士 10mL全血中，并且在 照明器(Mi ra sol Whole Blood IlluminatorR5. 0. wb. 12，可從 CaridianBCT，Inc.， Lakewood，CO獲得)中在22、33、44、80和llOJ/mLg下進行照射。在照射前取出樣品以測 量體外血漿品質(zhì)。在照射后，將全血轉(zhuǎn)移至UBB袋，使用柔和旋轉(zhuǎn)離心，壓榨PRP/核黃素上 清液，并且將完全體積的一袋AS-3添加溶液(約100mL)加入RBC用于貯存。血小板組分 和血漿組分如上所述由PRP制備。血小板組分在取樣前在Helmer培養(yǎng)箱中在22°C下貯存， 用于第1天和第5天的血小板品質(zhì)測量。在第1和5天用pH、卷曲(swirl)、乳酸鹽生產(chǎn)率和葡萄糖消耗率的測量值評估血 小板品質(zhì)。在冷凍貯存的第0天和第28天，用纖維蛋白原，總蛋白質(zhì)以及因子V、VIII和XI 的測量值評估血漿品質(zhì)。監(jiān)控RBC品質(zhì)直到在4°C下貯存的第42天，以評估溶血、滲透脆性和ATP釋放。取 出樣品用于第0天取樣，且后續(xù)取樣在第28、35和42天發(fā)生。也在未將紅細胞從全血中 分離的情況下，評估紅細胞品質(zhì)。處理的全血貯存在室溫下并且測量溶血百分比和鉀濃度([K'])。 實施例1輸注包含白細胞(WBC)的血液制品可以導(dǎo)致免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)，所述免疫應(yīng)答可以 負面影響輸血接受者。這些免疫學(xué)后果可包括輸血相關(guān)的移植物抗宿主病(TA-GvHD)以及 細胞因子和同種抗體的產(chǎn)生。TA-GvHD，一種供體抗接受者應(yīng)答，幾乎總是致命的，并且由供 體的增殖T淋巴細胞介導(dǎo)。滅活白細胞且預(yù)防TA-GvHD的標(biāo)準(zhǔn)方法是使血液制品暴露于、 放射。在下述測定法中，非去白細胞單元的新鮮(從收集起<8小時)全血在22、33和 44X^1^。的能量下進行處理。對于處理的細胞，在照射前將核黃素加入全血中。在照射后， 從全血單元中分離白細胞并且就下述評估白細胞(WBC)的功能性(1)顯示響應(yīng)PMA(佛波 醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯)的細胞激活(⑶69表達)，(2)響應(yīng)PHA (植物血凝素)、同 種異基因刺激細胞和CD3/CD28刺激的WBC增殖，(3)對同種異基因應(yīng)答細胞的抗原呈遞， 和(4)WBC響應(yīng)LPS (脂多糖)或⑶3/⑶28抗體產(chǎn)生細胞因子的能力。1. )WBC由PMA激活且表達CD69的能力⑶69是T細胞上的早期激活標(biāo)記，并且可以通過流式細胞術(shù)使用抗⑶69抗體顯 現(xiàn)。在T細胞活化的4小時內(nèi)，CD69是可檢測的并且保持上調(diào)，只要細胞處于激活狀態(tài)。如 圖1中所示，在測試的所有能量下，用核黃素和光進行的處理在PMA激活后抑制CD69在T 細胞上的表達。 圖1 在全血處理后PMA在T細胞上誘導(dǎo)⑶69上調(diào)2.)響應(yīng) PHA 和抗 CD3/CD28 的 WBC 增殖在3天的溫育后通過胸苷摻入分析處理的WBC增殖的能力。如圖2中所示，暴露 于PHA(A)或血小板結(jié)合的抗⑶3加抗⑶28抗體(B)在未處理的WBC中誘導(dǎo)增殖。當(dāng)暴露 于這些絲裂原時，處理的WBC在33J/mlKBe和更高的能量下未顯示可檢測的誘導(dǎo)增殖。 圖2 處理對響應(yīng)PHA (圖A)或抗⑶8/⑶29 (圖B)的增殖應(yīng)答的作用3.)響應(yīng)同種異基因刺激物的WBC增殖和對同種異基因應(yīng)答細胞的抗原呈遞血液制品中的WBC能夠?qū)⒖乖蔬f給接受者的細胞并且誘導(dǎo)增殖和同種抗體形 成。處理的WBC在混合淋巴細胞培養(yǎng)(MLC)中作為應(yīng)答細胞(響應(yīng)刺激而增殖)和作為刺 激物(促進應(yīng)答WBC的增殖)進行評估。在MLC中作為應(yīng)答細胞進行測試的處理的WBC無 法響應(yīng)同種異基因刺激細胞而增殖(圖3A)，但未處理的WBC則可以。在MLC中檢測到的增 殖量依賴于刺激者_應(yīng)答者組合，并且因此是供體依賴性的。同種異基因刺激細胞用絲裂 霉素C(有絲分裂紡錘體毒劑)進行處理，以防止與未處理和處理的應(yīng)答細胞一起培養(yǎng)的刺 激細胞的增殖。就其在MLC中誘導(dǎo)同種異基因應(yīng)答細胞的增殖(圖3B)的能力分析處理的WBC (刺 激者)。未能檢測到同種異基因應(yīng)答細胞的增殖，表明用核黃素和光進行的處理抑制WBC的 抗原呈遞?？傊?，未處理的WBC響應(yīng)絲裂原(PHA)、經(jīng)由抗體(抗⑶3/⑶28)交聯(lián)的表面受體 和同種異基因刺激細胞而增殖。相比之下，用核黃素+UV光(在所有測試能量下)處理WBC 抑制響應(yīng)任何這些刺激的增殖，表明增殖的抗原特異性以及非特異性誘導(dǎo)由于處理而被阻 斷。處理的WBC不呈遞抗原或誘導(dǎo)同種異基因應(yīng)答細胞的增殖，而未處理的WBC則可以。 圖3 與未處理的相比較，處理對同種異基因刺激或應(yīng)答細胞的作用。虛線表示在 不存在刺激細胞的情況下的細胞增殖率。處理對增殖的抑制水平顯示于表1中，其中將刺激的對照細胞與刺激的處理的細 胞比較。增殖應(yīng)答減少93-99%。處理的細胞的增殖降至測定法的檢測極限，因為刺激的處 理的細胞的增殖水平與在PBS中培養(yǎng)的細胞中檢測到的增殖水平一樣低。刺激的對照細胞 與PBS培養(yǎng)的對照細胞的比較顯示增殖減少99% (數(shù)據(jù)未顯示)。 表1:抑制水平4. )WBC響應(yīng)抗⑶3/⑶28或LPS產(chǎn)生細胞因子的能力。WBC功能性的另一個量度是測量響應(yīng)LPS(脂多糖)或抗CD3/CD28抗體的細胞因 子產(chǎn)生。用抗CD3/28進行的刺激誘導(dǎo)T細胞中的細胞因子產(chǎn)生(TH1/TH2細胞因子)。LPS 激活單核細胞和巨噬細胞，導(dǎo)致炎癥細胞因子的釋放。使用CBA(Cytometric Bead Assay) (購自BDBiosciences，PharMingen的試劑盒)檢測細胞因子。試劑盒中提供含標(biāo)準(zhǔn)品的 溶液?；趯τ跇?biāo)準(zhǔn)曲線獲得的值，計算機程序測定線性回歸和單獨樣品的結(jié)果。這些CBA 測定法的檢測極限是約5-10pg/ml。如表2A中所示，用抗CD3/28刺激(表2A)誘導(dǎo)的TH1/TH2細胞因子比用LPS (表 2B)誘導(dǎo)的更高。在測試的所有能量下，處理使抗CD3/28刺激誘導(dǎo)的TH1/TH2細胞因子產(chǎn) 生顯著減少至與處理或未處理的細胞的培養(yǎng)基對照相當(dāng)?shù)乃?。?dāng)暴露于抗CD3/28抗體 時，在33J/ml■和更高的能量下，IL-2、TNF-a和IFN-Y產(chǎn)生未減少至培養(yǎng)基對照水平， 但與未處理的細胞產(chǎn)生的細胞因子水平相比，細胞因子產(chǎn)生水平被抑制> 90%。LPS誘導(dǎo) 的TH1/TH2細胞因子水平在44J/mlKBe下的處理后減少至培養(yǎng)基對照水平。炎癥細胞因子由LPS以及抗⑶3/28刺激誘導(dǎo)。處理顯著減少響應(yīng)抗⑶3/28抗體 的炎癥細胞因子產(chǎn)生。培養(yǎng)基對照中的高水平的IL-8表示貯存的細胞因子，而不是產(chǎn)生的 細胞因子。處理還減少培養(yǎng)基對照細胞中的IL-8的水平。響應(yīng)LPS的炎癥細胞因子產(chǎn)生 由于處理而減少，但未減少至培養(yǎng)基對照水平(如用抗CD3/28刺激可觀察到的)。在測試的所有能量下，響應(yīng)抗⑶3/抗⑶28抗體的細胞因子產(chǎn)生被阻斷> 90 %，除 了在22J/mlKBC下的IL-4和IL-8外(參見表2A)。響應(yīng)LPS的細胞因子產(chǎn)生的抑制在33J/ kiIkb。下對于下述細胞因子低于90% :IL-5和IL-2。IL-5和IL-2在響應(yīng)LPS的未處理的 細胞中以極低水平產(chǎn)生，并且在處理后減少至檢測水平。TNF-a和IL-10使用用于炎癥和 TH1/TH2細胞因子的CBA試劑盒進行測量。與在抗CD3/28刺激后獲得的值相比，標(biāo)準(zhǔn)差值在LPS刺激后在樣品中很高?？?⑶3/28刺激通過T細胞受體特異性激活T淋巴細胞。相比之下，LPS是革蘭氏陰性細菌外 膜的主要組分，并且在許多細胞類型(主要是巨噬細胞)中促進細胞因子的分泌。LPS觸發(fā) 多克隆應(yīng)答的這種內(nèi)毒素功能可解釋在供體之間觀察到的變異性。
表2 處理后的細胞因子產(chǎn)生的抑制總之，在測試的所有能量下，響應(yīng)所有測試刺激的WBC增殖和對同種異基因應(yīng)答 細胞的抗原呈遞被抑制>90%。在測試的所有能量下，響應(yīng)抗CD 3/抗CD28抗體的細胞因 子產(chǎn)生被阻斷> 90%，除在22J/mlKBe下分別被抑制84%和89%的IL-4和IL-8外。實施例2為了測試全血的病原體滅活在滅活全血中可能存在的病毒中是否有效，測試了無 包膜和有包膜模型病毒。甲型肝炎病毒(HAV)、犬細小病毒(CPV)、水皰性口炎病毒(VSV) 和感染性牛鼻氣管炎病毒(IBR)是使用的病毒。如在圖10中可觀察到的，無包膜(圖10A)和有包膜(圖10B)病毒的對數(shù)減少相 對于能量線性增加。實施例3為了測試全血的病原體滅活在滅活全血中可能存在的臨床相關(guān)水平的細菌中是 否有效，進行低滴度細菌研究。在全血的病原體滅活后，將全血分離為紅細胞(RBC)組分和 富含血小板的血漿(PRP)組分。結(jié)果顯示于下表3中。+符號意指該組中的培養(yǎng)物的某些 平行測定(replicate)在5天中生長。-符號意指該組中的培養(yǎng)物的平行測定無一在5天 中生長。 a2次平行測定中1次陰性b3次平行測定中2次陰性cS次平行測定中7次陰性dS次平行測定中3次陰性eS次平行測定中1次陰性表3:低細菌滴度研究如在表3中觀察到的，僅表皮葡萄球菌在IIOJAiLek下照射的紅細胞中生長。實施例4全血在20、33、44、60、80和110J/mLKBe下進行照射。分離的紅細胞組分在AS-3中 貯存于4°C直至42天。在貯存28、35和42天后測量貯存過程中的紅細胞溶血百分比。如圖11中所示，在110J/mL·下照射的全血在貯存42天時具有最大量的溶血。其 他能量下的照射在42天的貯存期間在溶血方面不產(chǎn)生顯著差異。實施例5在從病原體滅活的全血中分離的紅細胞中測量ATP水平或濃度。ATP濃度是在給 定時間時存在于細胞中的ATP量的量度。如圖12中所示，增加的能量水平減少細胞中的總ATP濃度。實施例6測量在從病原體滅活的全血中分離的紅細胞的貯存過程中的滲透脆性。正常紅細 胞是相對不透性雙凹形盤，其與周圍介質(zhì)維持滲透平衡。隨著周圍介質(zhì)變得低滲，流體將被攝取到細胞內(nèi)以維持穩(wěn)定性。最終在非常低滲的條件下，細胞將充滿至最大限度且破裂。 具有受損的膜的紅細胞具有減少的擴張能力，并且將在無法裂解正常紅細胞的輕度低滲條 件下破裂。它們因此顯示增加的滲透脆性。平均滲透脆性(MOF)是紅細胞膜脆性的量度。 MOF越高，紅細胞越脆弱。MOF是50%的紅細胞發(fā)生溶血時的NaCl濃度。如在圖13中可觀察到的，從照射的全血中分離且隨后貯存42天的處理的紅細胞 平均略微比未處理的細胞更脆弱。實施例7貯存的紅細胞中的鉀濃度的測量值是紅細胞活力(viability)的另一個量度。當(dāng) 紅細胞膜中的鉀泵無法正常工作時，鉀泄漏至紅細胞外。對鉀泵的損害可能在病原體滅活 操作過程中發(fā)生。測量在室溫下貯存5天期間的全血(并非分離的血液組分)的鉀濃度。如圖14 中所示，能量對紅細胞完整性的影響隨著能量增加而增加。實施例8從病原體滅活的全血中分離血漿并且在第0天和第28天時測量血漿蛋白質(zhì)品質(zhì)。如在圖15A和15B中觀察到的，與未處理的血漿和在較低能量下處理的血漿相比， 血漿蛋白質(zhì)的百分比活性或濃度顯示在于IIOJAiLebc下處理的血漿中減少。這在第O天和 第28天時都發(fā)生。實施例9 從病原體滅活的全血中分離血小板并且測量血小板品質(zhì)標(biāo)志。結(jié)果顯示于圖16 中。盡管對于處理的和未處理的細胞，PH在5天貯存期間保持相同，但氧消耗顯示在5天 貯存期間在于較高能量水平下處理的血小板中增加，乳酸鹽產(chǎn)生也一樣，而二氧化碳產(chǎn)生 和葡萄糖消耗顯示在5天貯存期間在較高能量水平的情況下減少。根據(jù)以上結(jié)果，從病原體滅活的全血中分離的血液組分顯示即使在各種能量水平 下照射時也是存活的。
權(quán)利要求
滅活全血的病原體的方法，其包括步驟將來自供體的全血收集到袋內(nèi)；用足夠能量的光照射所述全血，從而使得所述全血中存在的咯嗪光敏劑能夠光解以滅活全血中可能存在的任何病原體；和貯存所述病原體滅活的全血。
2.權(quán)利要求1的方法，其進一步包括在收集所述全血前將咯嗪光敏劑加入袋中。
3.權(quán)利要求1的方法，其進一步包括在收集所述全血后將咯嗪光敏劑加入袋中。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述咯嗪光敏劑是核黃素。
5.權(quán)利要求1的方法，其中足以光解所述全血中的咯嗪光敏劑的能量是約22-110J/mLrbc o
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述全血在所述收集袋中進行照射。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述全血在與所述收集袋分開的袋中進行照射。
8.權(quán)利要求1的方法，其進一步包括將貯存的病原體滅活的全血分離為分開的血液組 分的步驟。
9.權(quán)利要求8的方法，其中所述全血在所述收集袋中分離為組分。
10.權(quán)利要求8的方法，其中所述全血在與所述收集袋分開的袋中分離為組分。
11.權(quán)利要求8的方法，其中所述分離的血液組分進一步包括紅細胞。
12.權(quán)利要求8的方法，其中所述分離的血液組分進一步包括血小板。
13.權(quán)利要求8的方法，其中所述分離的血液組分進一步包括血漿。
14.收集全血、滅活全血的病原體且將全血分離為至少一種病原體減少的血液組分的 方法，其包括步驟將全血收集在袋中；照射所述全血和咯嗪光敏劑，持續(xù)足以滅活全血中可能存在的任何病原體的時間，以 產(chǎn)生病原體滅活的全血；將所述病原體滅活的全血分離為至少一種血液組分和 壓榨所述至少一種血液組分。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述咯嗪光敏劑是核黃素。
16.權(quán)利要求14的方法，其中所述至少一種血液組分是紅細胞。
17.權(quán)利要求14的方法，其中所述至少一種血液組分是血小板。
18.權(quán)利要求14的方法，其中所述至少一種血液組分是血漿。
19.權(quán)利要求14的方法，其中所述光敏劑在收集所述全血前加入所述袋中。
20.權(quán)利要求14的方法，其中所述光敏劑在收集所述全血后加入所述袋中。
21.權(quán)利要求14的方法，其中所述分離步驟是離心步驟。
22.權(quán)利要求14的方法，其中所述收集、照射、分離和壓榨步驟在相同的袋中發(fā)生。
23.權(quán)利要求14的方法，其中所述收集、照射、分離和壓榨步驟在分開的袋中發(fā)生。
24.權(quán)利要求16的方法，其中所述紅細胞在將其施用于患者前未去白細胞。
25.用于將病原體滅活的全血分離為組分的方法，其包括步驟 將包含病原體滅活的全血的袋裝載到轉(zhuǎn)子上；使所述轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)以將所述病原體滅活的全血分離為至少第一組分和第二組分；和擠壓所述袋以將所述第一組分轉(zhuǎn)移到第一個附屬袋內(nèi)。
26.權(quán)利要求25的方法，其進一步包括擠壓所述袋以將所述第二組分轉(zhuǎn)移到第二個附 屬袋內(nèi)的步驟。
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述第二組分保留在所述袋中。
28.權(quán)利要求25的方法，其進一步包括使所述轉(zhuǎn)子旋轉(zhuǎn)以將所述病原體滅活的全血進 一步分離為第三組分的步驟。
29.權(quán)利要求25的方法，其中所述擠壓袋的步驟在所述轉(zhuǎn)子上發(fā)生。
30.預(yù)連接的袋和溶液組，其包括 用于收集全血的收集袋；經(jīng)由轉(zhuǎn)移管道與所述收集袋預(yù)連接的照射袋；和 經(jīng)由轉(zhuǎn)移管道與所述照射袋預(yù)連接的貯存袋。
31.權(quán)利要求28的預(yù)連接的袋和收集組，其進一步包括經(jīng)由轉(zhuǎn)移管道與所述照射袋預(yù) 連接的包含光敏劑的光敏劑袋。
全文摘要
本發(fā)明涉及滅活全血的病原體的方法。步驟包括將來自供體的全血收集到袋內(nèi)；用足夠能量的光照射全血，從而使得全血中存在的咯嗪光敏劑可以光解以滅活全血中可能存在的任何病原體；和貯存病原體滅活的全血。本發(fā)明還包括將病原體滅活的全血分離為組分的方法。
文檔編號A61L2/00GK101868255SQ200880101393
公開日2010年10月20日 申請日期2008年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月1日
發(fā)明者D·J·拉文卡, H·L·瑞蒂, R·P·古德瑞奇 申請人:科安比司特生物技術(shù)有限責(zé)任公司