病原體和物質(zhì)陷阱的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種物質(zhì)組合物作為藥物組合物及其使用方法。所述物質(zhì)組合物包括：由一個(gè)支架包圍的至少一個(gè)活性部分，所述支架用于對(duì)象的選擇性流入，所述對(duì)象能夠與所述至少一個(gè)活性部分相互作用。
【專利說(shuō)明】病原體和物質(zhì)陷阱
[0001] 技太領(lǐng)域和背景持太
[0002]本發(fā)明涉及一種用于阻斷、結(jié)合或處理底物和病原體的復(fù)合物。
[0003] 病毒性感染的有效治療仍是現(xiàn)今生物醫(yī)藥的一大挑戰(zhàn)。當(dāng)今的豬流感和HIV大流 行表明現(xiàn)在的科學(xué)技術(shù)仍不能有效克制和治療病毒爆發(fā)。
[0004]盡管病毒性疾病的數(shù)目巨大，但僅有少數(shù)特定可用的抗病毒療法。迄今為止，疫苗 被當(dāng)做治療病毒最有效的形式。但是，疫苗可能沒(méi)有效用或產(chǎn)生可能致命的副作用的危險(xiǎn)。 除了疫苗，也有少量藥物被設(shè)計(jì)通過(guò)抑制病毒或宿主酶來(lái)減輕病毒感染。這些小分子抑制 劑可能產(chǎn)生毒性副作用的風(fēng)險(xiǎn)，或由于病毒種群的突變導(dǎo)致耐藥菌株的形成。
[0005] 所以，抗病毒療法通常包括感染之前免疫系統(tǒng)的預(yù)防活化，或經(jīng)小分子抑制劑的 病毒感染細(xì)胞的靶向。對(duì)于病毒在宿主細(xì)胞感染之前失活的關(guān)注太少。
[0006] 一種上述方法，包括：通過(guò)使用攜帶有膜結(jié)合病毒受體的脂質(zhì)體、細(xì)胞或原型細(xì)胞 的，在宿主細(xì)胞模擬中病毒的失活。所述方法依靠病毒-宿主相互作用，其在進(jìn)化上是保守 的，甚至面臨快速的病毒適應(yīng)性。
[0007] 含有受體的脂質(zhì)體(蛋白-脂質(zhì)體）是潛在的病毒靶標(biāo)，還是進(jìn)化的陷阱。因?yàn)?病毒不能夠在它們里面復(fù)制并失活。脂質(zhì)體陷阱的概念最初在DE3711724所述，其中，脂 質(zhì)體陷阱作為HIV的抑制劑。類似的描述見(jiàn)于公開(kāi)文件ES2088752和W01996/022763中。 US571S915描述了添加催化酶到脂質(zhì)體膜以誘導(dǎo)損害結(jié)合的病毒。使用蛋白脂質(zhì)體作為 藥物傳輸系統(tǒng)的其它類似的抗病毒體系也已經(jīng)被Bronshtein等描述（2011，Journal of Controlled Release, Vol· 51，Issue2，p_ 139-148)，也被 US5, 773,027、US2008/0138351、 US6, 544, 958、Tuthill 等（2006doi:10. 1128/JVI. 80. 1. 172-180.2006)、Zhukovsky 等 (2010PLoS0ne，5(10) el3249)描述。
[0008] 含有受體的非宿主細(xì)胞(典型的RBCs)作為病毒陷阱的使用被EP0298280所描述。 在這種方法中，缺少核的RBCs作為一種陷阱,在所述陷阱內(nèi)，感染病毒顆粒不能復(fù)制。類似 的方法也已經(jīng)在出版物 US5677176、US7462485 和《0penWetWare20. 380HIV Project》中描 述。
[0009] 定義為原型細(xì)胞的仿造細(xì)胞的顆粒也能夠用作呈現(xiàn)病毒專一性的受體（Porotto et al. (2011)PLoS0ne, 6(3) :el6874)〇
[0010] 使用抗病毒樹(shù)狀分子（Reuter et al. (1999)Bioconjugate Chem. 10(2) :271_8) 和蛋白質(zhì)納米管（Komatsu et al. (2011)J Amer Chem Soc. 133(10) :3246-8)的其它外部 多孔的病毒失活方法也已經(jīng)進(jìn)行了研究。
[0011] 盡管上述方法能夠有效的治療特定的病毒，都不能夠提供一種對(duì)于廣譜的病毒疾 病的方案。此外，上述方法由于不希望的體內(nèi)細(xì)胞/分子的相互作用會(huì)受到限定。所述相 互作用導(dǎo)致不利的毒性效應(yīng)、差的藥物代謝和抗病毒藥物的不穩(wěn)定性、和抗病毒藥物在體 內(nèi)被免疫系統(tǒng)和其它器官快速的清除。
[0012]因此，這里仍然需要一種方法，所述方法能夠用于治療廣泛的病原體感染而不受 到現(xiàn)有技術(shù)方法的上述限制。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 根據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供了一種物質(zhì)組合物，所述物質(zhì)組合物包含由支 架包圍的至少一種活性部分，所述支架用于因子的選擇性流入，所述因子能夠與所述至少 一種活性部分相互作用。 t〇〇i 4] 根據(jù)本發(fā)明如下所述優(yōu)選實(shí)施例中的進(jìn)一步特征，所述支架包括核酸結(jié)構(gòu)、聚合 物結(jié)構(gòu)、和/或硅結(jié)構(gòu)。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述核酸結(jié)構(gòu)為DNA折紙結(jié) 構(gòu)。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述結(jié)構(gòu)為微機(jī)電系統(tǒng)(Micro Electro Mechanical System，MEMS)結(jié)構(gòu)。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述因子為物質(zhì)、微生物或細(xì) 胞。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述微生物選自含有病毒、細(xì) 菌、真菌、寄生蟲(chóng)、古菌、海藻和原生生物的群。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述物質(zhì)選自含有肽、多肽、朊 病毒、油脂、油脂復(fù)合物、核酸、糖、過(guò)敏原、毒素、激素、抗體、藥物、小分子、污染物和礦物質(zhì) 的群。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述支架用于允許直徑為 0· 01-50 μ m的因子選擇性的流入。
[0021]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述支架用于允許直徑為 0· 01-0· 08 μ m的因子選擇性的流入。
[0022] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述活性部分能夠結(jié)合所述因 子藥物。
[0023] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述活性部分選自包含抗體、 適體、受體、螯合劑、配體、脂質(zhì)體、納米管、樹(shù)狀分子、原細(xì)胞、細(xì)胞、肽、蛋白質(zhì)、酶、化學(xué)品、 清潔劑、毒素、藥物和藥物前體的群。
[0024] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述活性部分能夠裂解所述因 子或使所述因子變形。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述活性部分選自包含酶、核 糖酶、化學(xué)品、酸、堿和清潔劑的群。
[0026] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述活性部分能夠通過(guò)對(duì)微生 物非內(nèi)源性的部分來(lái)結(jié)合所述微生物。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)活性部分連接基團(tuán)所 述支架。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)活性部分通過(guò)連接體 連接所述支架。
[0029] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)免疫調(diào)整部分連接到 所述支架上。
[0030]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述支架為非脂質(zhì)支架。
[0031]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述支架包括PEG或PEG衍生 物、或透明質(zhì)酸。
[0032]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述支架形成一個(gè)具有內(nèi)部腔 體的顆粒。
[0033]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)活性部分置于所述腔 體內(nèi)。
[0034]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)活性部分在所述空腔 內(nèi)連接所述支架。
[0035]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)活性部分在所述空腔 內(nèi)連接載體，所述空腔依靠空腔尺寸結(jié)合到所述支架。
[0036]根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，至少一個(gè)活性部分在與所述因 子的相互作用后能夠釋放分子。
[0037] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述分子選自包含標(biāo)志物、毒 素、激素、藥物、核酸、蛋白質(zhì)和佐劑的群。
[0038] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述支架進(jìn)一步包含靶向部 分。
[0039] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述靶向部分選自包含受體、 抗體、適配子、組織特異性部分、微生物特異性部分、配體和磁體的群。
[0040] 根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了藥物組合物，包含所述物質(zhì)組合物和藥學(xué) 上可接受的載體。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述藥學(xué)上可接受的載體被挑 選出來(lái)以適合口服、粘膜、外用或全身給藥。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了一種從流體中分離所述因子的方法，包含： 將所述流體暴露在物質(zhì)組合物下,所述物質(zhì)組合物包括由支架包圍的至少一種活性部分， 所述支架用于因子的選擇性流入，所述因子能夠與所述至少一種活性部分相互作用，從而 從所述流體中分離所述因子。
[0043] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述流體為生物流體。
[0044] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述將生物流體暴露在物質(zhì)組 合物下是通過(guò)給受試者服用所述物質(zhì)組合物來(lái)受到影響。
[0045] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述流體為水流體。
[0046] 根據(jù)本發(fā)明所述優(yōu)選實(shí)施例中的更進(jìn)一步的特征，所述物質(zhì)組合物為過(guò)濾器的一 部分，所述過(guò)濾器位于一個(gè)容器的內(nèi)部或表面上。
[0047] 根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一方面，本發(fā)明提供了一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸包含 SEQ ID NO :209-476中提出的序列。
[0048] 根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一方面，本發(fā)明提供了一種包含本發(fā)明所述分離的多核苷酸的微 粒。
[0049] 根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一方面，本發(fā)明提供了一種分離的多肽，所述多肽包含SEQ ID NO :477-485中提出的序列。
[0050] 根據(jù)本發(fā)明的進(jìn)一方面，本發(fā)明提供了一種微粒，所述微粒包括本發(fā)明所述分離 的多肽。
[0051] 本發(fā)明通過(guò)提供一種用于預(yù)防或治療病原體感染和從生物和非生物的流體中純 化物質(zhì)的物質(zhì)組合物及其使用方法，成功地克服了現(xiàn)有己知組合物的缺點(diǎn)。
[0052] 除非另有限定，正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的，所有在此使用的技術(shù)和 科學(xué)上的術(shù)語(yǔ)具有相同的意思，盡管類似或等同的在此描述的方法和物質(zhì)能夠用于實(shí)踐或 本發(fā)明的測(cè)試,合適的方法和物質(zhì)如下所述。在沖突的情況下，包括定義在內(nèi)的專利說(shuō)明書(shū) 將得到控制。另外，所述物質(zhì)、方法和實(shí)施例僅用來(lái)說(shuō)明本發(fā)明而不用于限定本發(fā)明。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0053] 本發(fā)明在此只通過(guò)實(shí)施例參考相應(yīng)的附圖來(lái)進(jìn)行描述?，F(xiàn)在具體詳細(xì)地參考附 圖，所需要強(qiáng)調(diào)的是，所示的細(xì)節(jié)以實(shí)施例為準(zhǔn)并只用于對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例說(shuō)明性討論 的目的，并認(rèn)為所示的細(xì)節(jié)是最有效和容易理解本發(fā)明原理和概念方面的描述的原因。在 這方面，任何沒(méi)有嘗試顯示本發(fā)明結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)更詳細(xì)地比本發(fā)明的基本理解是必要的，對(duì)于 本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，所述附圖的描述使本發(fā)明的多種形式可能應(yīng)用于實(shí)踐中，這是很明 顯的。
[0054] 在附圖中：
[0055] 圖la-b簡(jiǎn)要描述了一種用于捕獲實(shí)體物的組合物的實(shí)施例，參照本發(fā)明的指導(dǎo) 來(lái)構(gòu)造。
[0056]圖lc簡(jiǎn)要描述了一種用于捕獲實(shí)體物的組合物的另一實(shí)施例，參照本發(fā)明的指 導(dǎo)來(lái)構(gòu)造。
[0057]圖2簡(jiǎn)要描述了一種用于捕獲實(shí)體物的組合物的另一實(shí)施例，參照本發(fā)明的指導(dǎo) 來(lái)構(gòu)造。
[0058] 圖3a-c簡(jiǎn)要描述了使用圖lc所示組合物的病毒捕獲，紅細(xì)胞如右側(cè)所述的大小 來(lái)表示。
[0059] 圖4a顯示的是無(wú)孔聚苯乙烯微球的光學(xué)顯微鏡圖。
[0060] 圖4b-c顯示的是無(wú)孔聚苯乙烯微球的掃描電子顯微鏡（SEM)圖。
[0061] 圖5a-b顯示的是無(wú)孔和多孔聚苯乙烯微球的掃描電子顯微鏡（SEM)圖。
[0062] 圖5c-f顯示的是多孔聚苯乙烯微球的掃描電子顯微鏡（SEM)圖。
[0063] 圖6a-b顯示的是多孔聚苯乙烯微球的流式細(xì)胞儀讀數(shù)，F(xiàn)L2-A讀數(shù)（圖6a)反映 在黃橙色光譜處的發(fā)射，而FL4-A讀數(shù)（圖6b)反映在遠(yuǎn)紅外光譜處的發(fā)射。
[0064]圖7a-b描述了未感染的SF9細(xì)胞結(jié)構(gòu)，放大倍數(shù)：xl〇〇-圖7a ;x400圖幾。
[0065] 圖8a-b描述了感染桿狀病毒的SF9細(xì)胞結(jié)構(gòu)，放大倍數(shù)：xl〇〇-圖8a ;x40〇圖8b。
[0066] 圖9a-b描述了經(jīng)桿狀病毒和抗病毒的聚苯乙烯微球處理的SF9細(xì)胞結(jié)構(gòu)，放大倍 數(shù)：χ100-圖 8a ;x400 圖 8b。
[0067] 圖9c顯示的是通過(guò)本發(fā)明所述病毒陷阱，感染SF9細(xì)胞的桿狀病毒體外脫離圖， 通過(guò)GFP相對(duì)熒光來(lái)測(cè)量。
[0068]圖9d顯示的是通過(guò)本發(fā)明所述病毒陷阱，感染SF9細(xì)胞的桿狀病毒體外脫罔圖， 通過(guò)GFP相對(duì)熒光來(lái)測(cè)量。
[0069] 圖10a描述了用本發(fā)明所述病毒陷阱對(duì)死人頭蟑螂的注射。
[0070] 圖10b顯示的是通過(guò)本發(fā)明所述病毒陷阱，感染死人頭蟑螂蟑螂的桿狀病毒體內(nèi) 脫離圖，通過(guò)GFP相對(duì)熒光來(lái)測(cè)量。
[0071] 圖11a-b顯示的是說(shuō)明桿狀病毒病毒顆粒粘附到Triton包衣的多孔聚苯乙烯微 球附著的掃描電子顯微鏡（SEM)圖。
[0072] 圖12a顯示的是根據(jù)本發(fā)明所述技術(shù)得到的DNA巴克球的透射電子顯微鏡（TEM) 圖，所述球體形狀具有估算的巴克球尺寸（500-800nm)。.
[0073] 圖12b簡(jiǎn)要描述了通過(guò)本發(fā)明所述DNA連接器自組裝形成的巴克球體形狀。
[0074] 圖13描述了 DNA折紙形成的DNA立方體的角，所示DNA立方體用于本發(fā)明所述病 毒陷阱的支架。
[0075] 圖14描述了電腦模擬生成肽與表達(dá)宿主特異性蛋白人類CD81病毒顆粒的預(yù)測(cè)相 互作用。

【具體實(shí)施方式】
[0076] 本發(fā)明的陷阱能夠用于治療或預(yù)防病原體病原體感染，同時(shí)消毒或清潔生物性流 體、水的供應(yīng)等等。尤其，本發(fā)明能夠用于誘捕和滅活病毒顆粒從而預(yù)防病毒在宿主或樣品 內(nèi)的復(fù)制和感染。
[0077] 結(jié)合附圖和相應(yīng)的描述，本發(fā)明的原理和操作可以更好的被理解。
[0078] 在具體描述本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施例之前，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明在具體應(yīng)用中 并不限定于下面描述的具體實(shí)施例。本發(fā)明能夠?yàn)閷?shí)施例或得以實(shí)現(xiàn)或在不同的方式下進(jìn) 行。而且，在此所述的措辭和術(shù)語(yǔ)是描述的目的而不應(yīng)視為對(duì)本發(fā)明的限定。
[0079] 引起慢性疾病的病原體感染，尤其是病毒感染，在病毒免疫的問(wèn)題上呈現(xiàn)出多個(gè) 前所未有的挑戰(zhàn)。
[0080] 盡管目前有一些抗病毒藥物在使用，導(dǎo)致慢性疾病的病毒仍缺少有效的預(yù)防和治 療藥物。很多抗病毒藥物正在發(fā)展以盡力給感染的個(gè)體提供有效的治療。所述藥物包括病 毒酶抑制劑、宿主細(xì)胞病毒結(jié)合抑制劑、抗轉(zhuǎn)錄和RNA干擾藥物、免疫調(diào)節(jié)藥物和病毒成熟 抑制劑。所述抗病毒藥物由于到靶細(xì)胞和組織的無(wú)效釋放和較短的治療窗口而受到限制， 所述較短的治療窗原因在于循環(huán)、毒性和免疫原性的快速清除和病毒對(duì)藥物的適應(yīng)和抗 性。
[0081] 用于從流體(如生物流體)中凈化因子的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。所述方 法能夠通過(guò)使用體積排阻或親和結(jié)合技術(shù)用于選擇性凈化或捕捉生物流體內(nèi)的病毒。
[0082] 所述能夠親和結(jié)合病毒的因子包括蛋白-脂質(zhì)體或原型細(xì)胞，所述蛋白-脂質(zhì)體 或原型細(xì)胞表現(xiàn)為結(jié)合微生物的受體、結(jié)合微生物和雜質(zhì)的樹(shù)狀分子、結(jié)合微生物和雜質(zhì) 的抗體和抗體配位物、和結(jié)合微生物和雜質(zhì)的蛋白質(zhì)納米管。
[0083] 盡管上述方法能夠潛在地用于從受試者血液中凈化不需要的因子，如病毒，所述 方法有一些弊端，包括通過(guò)吞噬細(xì)胞在血流中快速清除、由異物導(dǎo)致的潛在的毒性/免疫 原性/病理性副作用、滅活/阻斷被捕捉對(duì)象的失敗、可捕獲對(duì)象的較窄范圍(如依靠?jī)?nèi)吞 機(jī)制感染宿主細(xì)胞的病毒在現(xiàn)有技術(shù)中并不能失去活性)、和有限數(shù)量的能夠通過(guò)簡(jiǎn)單的 陷阱分子/復(fù)合物包圍的因子。
[0084] 在轉(zhuǎn)變?yōu)楸景l(fā)明以實(shí)踐的過(guò)程中，本發(fā)明人意識(shí)到因子從諸如血液的流體中穩(wěn)步 和有效的凈化，例如，使用體內(nèi)方法，需要兩步協(xié)作的方法，即首先從所述流體中分離/阻 斷所述因子然后捕獲和可選地處理所述因子。
[0085]為了實(shí)現(xiàn)上述功能，本發(fā)明人設(shè)計(jì)了一種凈化組合物(在此也定義為復(fù)合物)，所 述凈化組合物尤其被構(gòu)建用于首先從所述流體中分離/阻斷所述因子然后捕獲所述因子 和去除所述因子的活性(如，通過(guò)結(jié)合或處理所述因子)。
[0086] 所述兩步方法對(duì)于病原體感染的體內(nèi)預(yù)防或治療特別有效。在上述情況中，由于 所述復(fù)合物設(shè)計(jì)用于首先阻斷(例如，通過(guò)體積排阻流入)，然后在所述復(fù)合物的內(nèi)部，并進(jìn) 而在形成的免疫容積中處理所述病原體，能夠結(jié)合/滅活所述病原體(位于所述內(nèi)部容積） 的所述部分沒(méi)有出現(xiàn)在宿主細(xì)胞上，從而不會(huì)引起免疫或毒性反應(yīng)。
[0087] 本發(fā)明克服了當(dāng)前抗病毒治療不能充分解決病毒適應(yīng)抵抗的限制。病毒是高適應(yīng) 性和多形態(tài)的，并能夠經(jīng)歷大量引起病毒的蛋白質(zhì)域、尤其是病毒的酶活性部位的改變的 基因變化，導(dǎo)致靶向所述蛋白質(zhì)的抗病毒藥物的抵抗。此外，病毒也快速改變它們外部病毒 顆粒的形狀(例如，通過(guò)同化宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)）以逃避免疫系統(tǒng)和特定的抗體。
[0088] 例如，目前通過(guò)病毒陷阱治療的病毒不太可能產(chǎn)生適應(yīng)性抗性，所述病毒陷阱包 括宿主細(xì)胞受體部分(如，含有人類受體⑶4、CCR5和CXCR4的舟形脂質(zhì)體，用于HIV病毒的 失活)，然而，對(duì)所述受體為非反應(yīng)性的病毒選擇性地受到突變的壓力，所述突變會(huì)抑制所 述病毒與所述宿主細(xì)胞反應(yīng)和感染的能力。用陷阱治療的病毒不受到病毒的快速和適應(yīng)性 的多形態(tài)的影響，所述陷阱包括結(jié)合非內(nèi)源性蛋白質(zhì)到病毒的部分(如，宿主細(xì)胞蛋白質(zhì))。 特異地結(jié)合所述宿主細(xì)胞部分的活性部分(如四次跨膜蛋白、膜聯(lián)蛋白），能夠結(jié)合更寬范 圍的病毒。
[0089] 通過(guò)在非免疫活性支架內(nèi)阻斷所述病毒結(jié)合部分，本發(fā)明限定了與宿主細(xì)胞間不 想要的相互作用，以及從宿主細(xì)胞中分離受限的病毒顆粒進(jìn)而致使所述宿主細(xì)胞不受傳 染。
[0090] 因此，根據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供了一種物質(zhì)組合物，包括至少一個(gè)被支架 包圍的活性部分，所述支架用于因子的選擇性流入，所述因子與所述一個(gè)或多個(gè)活性部分 相互作用。
[0091] 所述物質(zhì)組合物的支架由任何能夠形成顆粒狀結(jié)構(gòu)(如，3-D模型)的物質(zhì)構(gòu)成，所 述顆粒狀結(jié)構(gòu)為一個(gè)具有內(nèi)部體積和流暢通過(guò)其中的表面多孔。正如在下面的具體描述， 所述顆粒由使用已知方法如聚合物化學(xué)、DNA納米技術(shù)(如，DNA折紙）和微機(jī)電系統(tǒng)(MEMS) 合成的或生物的聚合物、油脂、分子篩、無(wú)機(jī)材料(例如，硅)、金屬構(gòu)成。實(shí)施例部分接著描 述了幾種類型的顆粒和它們的構(gòu)成。
[0092] 所述活性部分可以為任何能夠與更廣范圍物質(zhì)或病原體(例如，在蛋白質(zhì)或細(xì)胞 膜的情況下的清潔劑)、或具體病原體或物質(zhì)(例如，抗體或抗體片段）相互作用和失活的部 分。
[0093] 所述支架包括任何數(shù)目的任何尺寸的孔，基于阻斷的被靶向的所述物質(zhì)或病原 體。優(yōu)選地，所述支架含有至少3個(gè)孔。所述孔可以設(shè)計(jì)為被動(dòng)地或主動(dòng)地阻斷所述物質(zhì) 或病原體。例如，一個(gè)具有孔直徑為17nm的支架將使如豬圓環(huán)病毒的病毒流入，同時(shí)把活 的真核細(xì)胞和細(xì)菌阻擋在外面。一個(gè)具有4〇〇nm開(kāi)口的支架能夠使大多數(shù)病毒流入，同時(shí) 把真核細(xì)胞阻擋在外面。一個(gè)具有800nm開(kāi)口的支架能夠使所有病毒和大多數(shù)支原體細(xì)菌 細(xì)胞流入，而把人類細(xì)胞阻擋在外面。一個(gè)具有4000nm開(kāi)口的支架能夠使大多數(shù)細(xì)菌流 入，并把人類細(xì)胞阻擋在所述復(fù)合物的外面。同時(shí)，一個(gè)具有孔直徑為l〇nm的支架能夠使 如PrP蛋白質(zhì)的朊病毒流入，并把大多數(shù)蛋白質(zhì)和所有病毒、活的真核細(xì)胞和細(xì)菌阻擋在 外部。
[0094] 從而，在一個(gè)具體實(shí)施例中，具有約10-800nm直徑的孔將適合用于捕獲病毒，具 有在約0. 2-5 μ m之間直徑的孔將適合用于捕獲細(xì)菌，具有在約1-20 μ m之間直徑的孔將適 合用于捕獲真菌。
[0095] 從而，本發(fā)明所述的復(fù)合物支架可能含有最小直徑為1、1.5、2、2·5、3、3·5、4、 4. 5、5、5. 5、6、6. 5、7、7. 5、8、8. 5、9、9· 5、10、10. 5、或 llnm 的孔；所述孔含有最大直徑為 5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19 或 20μηι 的孔。通常，所述支架的孔具有 50nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1U m、1. 5 U m、2 μ m、 2· 5 μ m、3 μ m、3· 5 μ m、4 μ m、4. 5 μ m、5 μ m、10 μ m、20 μ m，30 μ m、40 或 50 U m 的直徑。
[0096] 從而，所述支架的功能在于通過(guò)尺寸選擇來(lái)選擇性捕獲實(shí)體物，從而可作為一個(gè) 體積排阻的過(guò)濾器。只有足夠小以能通過(guò)所述支架孔的所述實(shí)體物被捕獲和吸收。
[0097] 一旦被支架的內(nèi)部空腔阻斷，所述物質(zhì)或病原體出現(xiàn)在活性部分以進(jìn)行處理。從 而，所述支架有兩個(gè)目的，即所述物質(zhì)或病原體的阻斷和分離，進(jìn)而屏蔽所述物質(zhì)或病原體 到身體之外，相似地，屏蔽所述活性部位到所述宿主細(xì)胞之外，以及進(jìn)而防止毒性作用，尤 其是屏蔽在免疫系統(tǒng)的細(xì)胞外，進(jìn)而防止對(duì)所述活性部分的免疫反應(yīng)。
[0098] 免疫分離所述活性部分增加了半衰期，以及因此增加了本發(fā)明所述復(fù)合物在體內(nèi) 的療效，也可以用于其它免疫原性的和可能有毒的體內(nèi)活性部分。
[0099] 所述活性部分(例如，受體、酶）為免疫原性的分子和類似物，在顆粒(脂質(zhì)體）或載 體的表面上出現(xiàn)的所述分子，通常如一些現(xiàn)有技術(shù)中的病毒陷阱，能夠增加同陷阱免疫反 應(yīng)的可能性以及其中部分或全部的滅活。
[0100] 本發(fā)明所述的兩步分離和捕獲組合物通過(guò)用中空的顆粒隔斷活性部分打破了現(xiàn) 有技術(shù)的限制。上述方法保護(hù)了活性部分不被受試者的免疫系統(tǒng)排斥并延長(zhǎng)了在體內(nèi)所述 物質(zhì)組合物的半衰期。通過(guò)從捕獲和可選的滅活步驟中分開(kāi)免疫分離的步驟，本發(fā)明的復(fù) 合物潛在地保護(hù)了免疫反應(yīng)性分子免受受試者免疫系統(tǒng)的排斥和提高了本發(fā)明所述組合 物的循環(huán)時(shí)間。
[0101] 而且，現(xiàn)有技術(shù)的病毒陷阱，例如抗體和樹(shù)狀分子、或含有受體的蛋白脂質(zhì)體，仍 然能夠感染/免疫反應(yīng)性宿主細(xì)胞，因?yàn)槭苁`的病毒仍然存在于宿主細(xì)胞中。本發(fā)明的 分離方法是雙向的，不但能使病毒或結(jié)合病毒的部分遠(yuǎn)離免疫系統(tǒng)而且能夠使未受感染的 宿主細(xì)胞遠(yuǎn)離被病毒陷阱包圍的病毒。
[0102] 本發(fā)明所述復(fù)合物能夠用于體內(nèi)或體外，以對(duì)任何流體樣品的消毒或預(yù)防感染， 所述流體包括生物流體，如血液、尿、精液、唾液、黏液、淋巴液等等，非生物流體，如飲用水、 飲料、污水等等。
[0103] 用于本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的應(yīng)用為預(yù)防或治療病原體的感染，所述病原體如像血液 等生物流體中的病毒。在一些情況下，本發(fā)明所述組合物的功能是作為一種治療藥劑。
[0104] 因此，本發(fā)明提供了一種用于從諸如血液等流體對(duì)象中消除病原體或物質(zhì)的新方 法，而不會(huì)暴露所述介質(zhì)到潛在有害或免疫的化學(xué)物質(zhì)中。
[0105] 正如上述描述的，本發(fā)明所述復(fù)合物在形狀上是三維的，并包括一個(gè)內(nèi)部腔體，在 所述腔體中包含一個(gè)或多個(gè)活性部分。 #
[0106] 提供上述"結(jié)構(gòu)"的一個(gè)具體的復(fù)合物構(gòu)造包括含有800nm孔洞的4μηι的聚苯乙 烯中空微球(所述支架）和外部PEG包衣(免疫隔離)。所述微球封裝覆蓋有triton清潔劑 的Ιμιη聚苯乙烯微球(活性部分)。另一種構(gòu)造可以包括一種在外面涂裝mPEG(免疫隔離)、 內(nèi)部涂裝表面活性蛋白-D (活性部分）的1 μ m DNA巴克球(支架)。
[0107] 本發(fā)明所述復(fù)合物支架能夠由核酸納米結(jié)構(gòu)、聚合物、或硅片來(lái)制備。
[0108] 所述核酸(DNA/RNA)納米結(jié)構(gòu)是基本成分為核酸、核苷酸、或核苷的結(jié)構(gòu)。核酸納 米技術(shù)利用了如下事實(shí)：由于沃森-克里克堿基對(duì)的專一性，只有彼此互補(bǔ)的鏈的部分能 夠結(jié)合彼此以形成雙螺旋。核酸納米結(jié)構(gòu)的構(gòu)造已經(jīng)在一些出版物中得到描述，所述出版 物包括 W02008/039254、US2010/0216978、W02010/0148085、US5468851、US7842793、Dietz 等人（2009) [Dietz 等人（2009)，Science, Vol· 325, ρρ· 725-730]、Douglas 等人（2009) [Douglas等人（2009)Nature，Vol. 459, ρρ· 414]和其他的。實(shí)施例部分的實(shí)施例6和9_11 隨后描述了用于適合于生成本發(fā)明DNA支架的序列和方法。
[0109] 實(shí)質(zhì)上，天然的或人造的DNA或RNA序列能夠控制以生成三維（3D)的結(jié)構(gòu)。通常， 以DNA為基礎(chǔ)的納米結(jié)構(gòu)利用DNA單鏈，所述DNA單鏈通過(guò)互補(bǔ)的、較短的DNA鏈的結(jié)合來(lái) 誘導(dǎo)形成3D構(gòu)造。與之相反的，基于同樣分子內(nèi)的RNA-RNA相互作用，RNA通過(guò)形成三級(jí) RNA基序以折疊成3D結(jié)構(gòu)?；谡郫B的單鏈DNA的納米結(jié)構(gòu)也是可行的。RNA雙螺旋也可 以用于形成RNA 3D結(jié)構(gòu)。
[0110] 因此，在本發(fā)明所述支架的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，所述核酸納米結(jié)構(gòu)為DNA折紙。 DNA折紙是一種在納米尺度上人工折疊生成DNA的方法，生成一個(gè)任意三維的可能作為誘 入或捕獲實(shí)體的支架的形狀。用于生成折紙類型的DNA納米結(jié)構(gòu)的方法已經(jīng)得到了描述， 例如，在US7842793中，DNA折紙包含(例如）在多個(gè)較小"短"鏈的幫助下的病毒DNA較長(zhǎng) 單鏈的折疊(例如)。所述較短鏈在不同位置結(jié)合到較長(zhǎng)鏈上，從而形成3D結(jié)構(gòu)。
[0111] 本發(fā)明所述核酸納米結(jié)構(gòu)可能由此為DNA折紙連接片和/或其可能有可誘 導(dǎo)的形狀。例如，所述可誘導(dǎo)的核fe納米結(jié)構(gòu)已被Andersen [Andersen等人（2009 ) Nature, vol. 459, ρρ· 73-77]、Dietz [Dietz 等人（2009) Science, Vol. 325, ρρ· 725-730]、 Voigt[Voigt 等人（2010)Nature Nanotechnology，vol_5，pp.200-203]、Han[Han 等人 (2011) Science, Vol. ：332, pp. 342_346]等報(bào)道。用于設(shè)計(jì)核酸納米結(jié)構(gòu)的軟件包可以在 www. cdna. dk/origami 獲得。
[0112] 正如在此所述的，在本發(fā)明所述復(fù)合物的核酸納米結(jié)構(gòu)中使用的核酸指的是任何 長(zhǎng)度的聚合形式的核酸，無(wú)論是核苷酸、脫氧核苷酸還是核酸肽（PNAs)，都包括嘌呤和喃P定 堿基、或其它天然的、化學(xué)或生物學(xué)修飾的、非天然的、或衍生核酸堿基。多核酸的主鏈包括 典型地出現(xiàn)在RNA或DNA上的糖和磷酸基團(tuán)，或修飾或取代的糖或磷酸基團(tuán)。多核酸可能 包括修飾的核酸，例如，甲基核酸和核酸類似物。因此，術(shù)語(yǔ)"核苷"、"核酸"、"脫氧核苷，，和 "脫氧核酸"通常包括類似物，例如，在此所述的類似物。
[0113]典型地，核酸包括磷酸二酯鍵，但是，核酸可能包括一個(gè)修飾的主鏈，例如，所述主 鏈包含磷酰胺、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯。
[0114] 0-甲基磷酸酰胺鍵和核酸肽主鏈連接。其它核酸衍生物包括含有陽(yáng)離子主鏈、非 離子主鏈和非核糖主鏈的核酸。包含一個(gè)或多個(gè)碳環(huán)糖的核酸也在所述核酸的定義內(nèi)。正 如被本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，所有上述核酸類似物可能用作生成納米結(jié)構(gòu)的多核酸的輔助 鏈或一部分。此外，天然的核酸或類似物的混合物也可以被使用。ΡΝΑ (肽核酸）包括增強(qiáng) 穩(wěn)定性的肽核酸衍生物。
[0115]因此，不同類型和構(gòu)造的核酸也被用作生成納米結(jié)構(gòu)支架，所述支架包括右旋 DNA、右旋RNA、PNA、鎖核酸（LNA)、蘇阿糖核酸（ΤΝΑ)、乙二醇核酸（GNA)、橋基核酸（ΒΝΑ)、二 胺嗎啉代寡核苷酸（ΡΜ0)以及核酸衍生物，如非沃森-克里克核酸 dX、dK、ddX、ddK、dP、dZ、 ddP、ddZ。
[0116] 在一些實(shí)施例中，本發(fā)明包括多核酸的納米結(jié)構(gòu)包括一種或多種不同的核酸結(jié)構(gòu) (如，至少20種、至少 5〇種、至少100種、或至少1000種、或更多不同的核酸分子)。所述核酸 可能為單鏈或雙鏈、或包含雙鏈或單鏈兩者序列部分的核酸。所述核酸也可能為DNA、兩個(gè) 基因組和cDNA、RNA或混合，其中，所述核酸包括任何脫氧核糖核酸和核糖核酸任意組合、 和包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘌呤、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤、肌苷、黃嘌呤、次黃嘌呤、異胞嘧啶、異鳥(niǎo) 嘌呤等等堿基的任意組合。所述核酸包括核苷酸、核苷和核苷酸衍生物、和修飾的核苷，例 如胺基修飾的核苷。
[0117] 本發(fā)明的DNA納米結(jié)構(gòu)也使用了多種較短的單鏈核酸(輔助鏈）（如，DNA)以直接 用于多核酸長(zhǎng)單鏈(在DNA納米結(jié)構(gòu)中，被叫做支架鏈)的折疊形成通常直徑在i〇〇-5〇〇〇nm 的所需模型。因此，本發(fā)明所述復(fù)合物的核酸支架可能大約為100-5000nm，但是取決于環(huán) 境，10、15或20 μ m的更大的支架也可以被使用。
[0118] 在另一實(shí)施例中，本發(fā)明所述復(fù)合物支架可能為聚合結(jié)構(gòu)，其中，基本成 分為聚合物，如聚醋酸乙烯酯（PVA)、聚乳酸（PLA)、乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA)、 甲基丙烯酸二甲胺乙酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、PAN[Xiang et al，Hazard Mater. 2010Janl5;173(1-3):243-8]、或 PM1A[Yuan et al，Langmuir. 2009Mar3;25(5):2 729-35> Zhang et al, Colloid Interface Sci. 2009Augl; 336 (1) : 235~43> Lin et al. L angmuir· 2008Dec2; 24(23) :13736-41]、聚原酸酯（卩(^)[此11紅帥&1.(2000)11.1^以1·· Sci Mater. Med· 1 1(6) :345-55]、聚磷腈[Allcock (1994) Biomaterials, 15 (8): 563-9]、聚 酸酐[Shieh et al. (1994) J.Biomed. Mater REs· 28 (12): 1465-75]、聚磷酸脂[Richards et al· (1991) J_ Biomed· Mater· Res. 25(9) : 1151-1167]、聚乙交酯（PGA)、聚三甲基碳酸酯 (PTMC)、聚（L-乳酸）和聚（羥基乙酸）（PLLG/PGA)、PGA、PLLA-PGS、1，3-丙二醇（PD0)、 聚乙烯、聚酮（PEEK)、海藻酸、含有聚L-賴氨酸的海藻酸(海藻酸/PLL)、海藻酸鈉、瓊脂 糖、透明酸、水凝膠，例如甲基丙烯酸羥乙酯（HEMA)、甲基丙烯酸羥乙酯-甲基丙烯酸甲酯 (HEMA-MMA)、甲基丙烯酸、甲基苯烯酸酯、殼聚糖、膠原、纖維素、和其他。所述聚合物的作用 是作為半透膜，并被稱為生物安全膜。
[0119] 在一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施例中，本發(fā)明所述復(fù)合物的支架為硅微觀結(jié)構(gòu)，例如形成 生物膠囊的桂片。用于制備上述娃片的方法己經(jīng)被Desai等報(bào)道[Desai et al. (1998) Biotechnology and Bioengineering, vol. 57, no. 1, pp. 118-120]"
[0120] 在另一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施例中，本發(fā)明所述復(fù)合物的支架進(jìn)一步包括用于將所述支 架靶向到體內(nèi)特定器官的靶向部分。例如，所述靶向部分為器官-特異性配體或受體、或其 他如可以結(jié)合到靶向器官細(xì)胞外基質(zhì)的器官-或細(xì)胞-特異性分子，
[0121]在另一個(gè)進(jìn)一步的實(shí)施例中，本發(fā)明所述復(fù)合物的支架進(jìn)一步包括；在復(fù)合物同 樣被吞食或吞噬的情況下，能夠同樣殺死如吞噬細(xì)胞等細(xì)胞的分子(如毒素)。
[0122]因此，本發(fā)明所述支架也可能有免疫調(diào)節(jié)劑、或誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的毒性或細(xì)胞毒性 部分，如阿侖膦酸鈉、氯膦酸二鈉、AppCCUp (氯膦酸二鈉代謝物)、DMDP (甲基-5-脫氮蝶 啶)、自殺基因的序列或產(chǎn)品等等。
[0123]本發(fā)明所述支架可以從非免疫性材料來(lái)制備。如PLGA[Lin et al. Biomaterials. 2012Jul;33 (20):5156-65]、PVA[Efthimiadou et al，Int J Pharm_2012May30;428(1-2):1 34-42]、冗聚糖[Mu et al，Mol Pharm_2012Janl; 9 (1):91-101 ;Lu et al，Biointerfaces. 2011Aprl; 83 (2) :254-9]、纖維素 [Metaxa et al，J_ Colloid Interface Sci.2012Mayl8]、 月父原蛋白[Helary et al，Acta Bio mater. 2012Junl5_Epub ahead of print]。另外，所述 支架能夠被非免疫調(diào)節(jié)劑材料覆蓋，例如，所述支架能夠被聚乙二醇（PEG)或它的衍生物所 涂裝（參考 Macromol Biosci. 2004Mayl7;4(5) :512-9)。
[0124] 所述支架能夠含有靶向部分，以靶向本發(fā)明所述復(fù)合物到特定性的器官。所述部 分可以用于靶向本發(fā)明所述復(fù)合物到受感染的器官。
[0125] 所述靶向部分為器官-特異性部分，病毒-特異性受體、抗體、配體、碳水化合物、 蛋白質(zhì)、肽、脂質(zhì)、或磁性部分。
[0126] 根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例，所述支架在它的外部含有肝臟-特異性配體，直接連接 本發(fā)明所述復(fù)合物到肝臟。類似地，其它器官可能為靶標(biāo),如胰腺、心臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié) 等等。
[0127] 所述活性部分是任何能夠特異性或非特異性結(jié)合/處理所述物質(zhì)或病原體的分 子或結(jié)構(gòu)。
[0128] 所述活性部分是脂質(zhì)體、納米管、適體、樹(shù)狀分子、蛋白質(zhì)、肽、受體、酶、配體、抗 體、螯合劑、去垢劑、毒素、藥物或藥物前體。
[0129] 脂質(zhì)體為磷脂雙分子層構(gòu)成的囊泡，并在它的表面上靶標(biāo)-特異性部分或結(jié)合實(shí) 體的部分起作用，所述部分如配體、受體、抗體、碳水化合物、蛋白質(zhì)或脂質(zhì)。所述脂質(zhì)體可 能為在受體上的病毒-特異性受體，如CD4、CCR5、CXCR4、CCR2、CCR3、跨膜四蛋白CD81、人類 清道夫受體SR-ΒΙ、密封蛋白-1、閉鎖蛋白、肝配蛋-B2、CD46、CAR、av整合蛋白、HAVCR-1、 EGFR (表皮生長(zhǎng)因子受體)、SLAM、乙酰膽堿受體、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白受體、p75NTR、唾液酸、粘多 糖、乙酰肝素、透明質(zhì)酸(透明質(zhì)酸)、膠原、明膠、聚丙烯酸、殼聚糖?？晒┻x擇地，或額外地， 脂質(zhì)體也可以在它的腔體內(nèi)攜帶另一種活性部分，如酶，比如，脫氧核糖核酸酶、核糖核酸 酶、蛋白酶、糖苷酶、或脂肪酶，以及其他；堿基、酸、抑制劑、不可逆轉(zhuǎn)的粘結(jié)劑等等。
[0130] 可能作為清除劑的其他活性部分為蛋白質(zhì)納米管(制備方法見(jiàn)于Qu and Komatsu (2010) ACS Nano, Vol. 4, No. 1，ρρ· 563-573)、樹(shù)狀分子（制備方法 US4, 289, 872、 US4, 410, 688、US4, 507, 466、4, 558, 120、US4, 568, 737、US4, 587, 329、US6, 190, 650、 W088/01178、WO88/OII79、和W〇88/01180)、適體、蛋白質(zhì)、酶、配體(如受體)、抗體、螯合劑 (例如，EDTA)、原細(xì)胞、毒素、藥物或藥物前體。
[0131] 正如在此提到的"適體"為相對(duì)短可以同很多蛋白質(zhì)的高親和性結(jié)合的核酸（DNA、 RNA或兩者的組合)序列。適體通常在場(chǎng)獨(dú)生有25-40個(gè)核苷酸并具有大約18-25kDa范圍 的分子量。對(duì)于靶標(biāo)具有較高單一性和親和性的受體能夠通過(guò)一個(gè)稱為SELEX(由指數(shù)式富 集法得到的配體系統(tǒng)演化)的體外演化過(guò)程來(lái)獲得[參考，例如Zhang et al. (2004)Arch. Immunol· Ther· Exp· 52:307-315在此包含整體上的引用]。
[0132] 正如在此提到的"抗體"涉及到自然衍生的、或自然生成的抗體，所述抗體可以是 多細(xì)胞繁殖的或單細(xì)胞繁殖的?？晒┻x擇地，抗體可以通過(guò)例如化學(xué)合成等合成制備，或通 過(guò)從典型抗體生產(chǎn)細(xì)胞或細(xì)胞株上特定mRNA的分離重組來(lái)制備。特定mRNA隨后經(jīng)歷標(biāo)準(zhǔn) 分子生物學(xué)操作(獲得cDNA、誘導(dǎo)cDNA到表達(dá)載體等等）以產(chǎn)生重組制備的抗體。該技術(shù) 是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
[0133] 對(duì)于蛋白質(zhì)的多細(xì)胞繁殖抗體的生成對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)講是一種已知的技 術(shù)，并且該技術(shù)已被描述，尤其是，在Current Protocols in Immunology的第二章 （John E. Coligan et al. (eds.), Wiley and Sons Inc)〇
[0134] 生成單細(xì)胞繁殖抗體的技術(shù)在很多文章和教材中得到描述，如上述的Current Protocols in Immunology 的第二章 （Kohler and Milstein(1975)Nature256;495_497)、 和 US4, 376, 110。
[0135] 術(shù)語(yǔ)"抗體"也可以意味著包括完整的分子以及其中的片段，如：scFv、Fv、Fab'、 Fab、雙鏈抗體、線性抗體、能夠結(jié)合抗原的抗體中的F(ab'）2抗原結(jié)合片段（Wahl et al· (1983) J. Nucl. Med. 24, 316-325)。
[0136] 本發(fā)明中使用的抗體的Fab和F(ab'）2以及其他片段可能根據(jù)預(yù)期用途通過(guò)不同 的標(biāo)記來(lái)示蹤。所述標(biāo)記可以為能夠殺死靶標(biāo)的有毒標(biāo)記。
[0137] 去垢劑可能作為細(xì)胞破碎類方法。非限定性的去垢劑的清單包括CHAPS、 TritonXIOO、SDS、吐溫、和類似物。所述去垢劑的作用并不必須是作為清潔劑，也可以是代 替嚴(yán)格意義上的"捕獲"或"捕捉"所述實(shí)體，同樣，它們可選擇地或連帶地降解實(shí)體。因此 所述清潔劑類似于酶，通過(guò)實(shí)體的裂解或降解來(lái)進(jìn)行作用。
[0138] 酶可以用于擾亂細(xì)胞壁，所述酶包括溶菌酶、溶葡球菌酶、消解酶、纖維酶、變?nèi)芫?素、聚糖酶、蛋白酶、甘露糖等等。其他的實(shí)例包括，如水解酶。正如上述的去垢劑，酶不一 定作為清潔劑，因?yàn)樗雒竾?yán)格意義上不能"捕獲"或"捕捉"所述實(shí)體，但是能分解它們。
[0139] 捕獲之后，本發(fā)明所述復(fù)合物的活性部分可能釋放一個(gè)分子，如細(xì)胞毒素、激素、 藥物、核酸、蛋白質(zhì)、輔藥或化學(xué)物質(zhì)(酸、堿)。所述分子或化學(xué)物質(zhì)用化學(xué)反復(fù)改變所述實(shí) 體(如破壞病原體的膜或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu))。
[0140] 所述活性部分固定在位于支架中或內(nèi)側(cè)的顆粒或載體上。所述固定可以是通過(guò)共 價(jià)鍵、親和相互作用，如生物素-親和素/鏈霉親和素相互作用、或通過(guò)其他固定方法。對(duì) 于可能起固定以結(jié)合其他己知特定分子的分子實(shí)例，包括、但不限定于：抗體、鐵蛋白、多組 氨酸標(biāo)記肽、原癌基因標(biāo)記肽、組氨酸標(biāo)記肽、血凝素等等。
[0141] 根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述固定分子為抗體、受體或配體(如：生物素-親和素)。
[0142] 根據(jù)一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述載體為一種聚苯乙烯納米顆粒。
[0143] 正如在此所述的，本發(fā)明能夠用于物質(zhì)或病原體的阻斷和處理。
[0144] 所述物質(zhì)可以為一種存在于生物或非生物的流體的元素、化合物或分子。例如，所 述物質(zhì)為存在于血液、水、毒素、可消費(fèi)液體產(chǎn)品如啤酒或葡萄酒等等中的雜質(zhì)或污染物。
[0145] 所述病原體可以為任何生物體，所述生物體包括朊病毒、病毒、細(xì)菌、原生生物、真 菌、古細(xì)菌或者寄生蟲(chóng)。
[o^46]、當(dāng)用于受試者時(shí)，如人類的體內(nèi)或體外治療，本發(fā)明有治療/預(yù)防的應(yīng)用，從而用 于預(yù)防或治療處于毒素、不希望的分子/化合物或感染等危險(xiǎn)中的受試者。例如，本發(fā)明能 夠用于除去毒素，如蓖麻毒素、葡萄球菌腸毒素 B (SEB)或二噁英，不需要的分子或復(fù)八物 如LDL(低密度脂蛋白)、葡糖糖、自我反應(yīng)性抗體、朊病毒、過(guò)敏原，致癌因子，如腫瘤壞 3死因 子-a (TNF-a)等，或感染原，如病毒。
[0147]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述復(fù)合物能夠用于除去、中和、或消除微牛物 如病毒、細(xì)菌、真菌、原生生物或古細(xì)菌。 '、
[0148]感染性病毒的實(shí)例包括：逆轉(zhuǎn)錄病毒科(例如，人力免疫缺陷病毒，如mu、也被 稱為HTLV-in: LAV或HTLV-III/LAV、或HIV-ΠΙ ;和其他分離株，如HIV-LP)、小核糖核酸 病母科(例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、腸道病毒、人類柯薩奇病毒、鼻病毒、艾柯 ^毒)、桿狀病毒科(例如，導(dǎo)致腸胃炎的菌株)、披膜病毒科(例如，馬腦脊髓炎^毒、風(fēng)疹病 母)、黃病母科(例如，登革病毒、腦炎病毒、黃熱病病毒)、冠狀病毒科(例如，冠狀病毒)、彈狀 病毒科j例如，皰疹性口炎病毒、狂犬病毒)、絲狀病毒科(例如，埃博拉病毒)、副黏液病毒科 (例如，副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞體病毒)、正粘病毒科(例如，流感病 毒)、亞病毒科(例如，漢坦病毒、布尼亞病毒、靜脈病毒和內(nèi)羅病毒)、沙粒病毒科(出血熱病 毒)、呼腸病毒科(例如，呼吸道腸道病毒、環(huán)狀病毒、和輪狀病毒)、雙核糖核酸病毒科、肝脫 氧核糖核酸病毒科(乙型肝炎病毒)、小DNA病毒科(細(xì)小病毒)、乳多空病毒科(乳頭瘤病毒、 多瘤病毒)、腺病毒科(多數(shù)腺病毒)、皰疹病毒科(單純性皰疹病毒 （HSV) 1和2、水痘-帶狀 皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒（CMV)、孢疹病毒)、痘病毒科(天花病毒、牛痘病毒、痘病毒)、和虹彩 病毒科(例如，非洲豬熱病)、和未分類的病毒(海綿組織腦科的病原對(duì)象)、 delta-肝炎病毒 (被認(rèn)為是一種乙型肝炎病毒的缺陷隨體)、非甲型、非乙型肝炎病毒(類型卜內(nèi)部傳輸；類 型2-表面?zhèn)鬏敚ū热纾透窝祝?；諾瓦克病毒和相關(guān)病毒、和星狀病毒)。
[0149]感染性細(xì)菌的實(shí)例包括：幽門(mén)螺旋菌、伯氏疏螺旋體、嗜肺軍團(tuán)菌、分支細(xì)菌(例 如，結(jié)核分枝桿菌、禽結(jié)核分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、戈登分枝桿菌)、金黃色釀膿葡萄球 菌、淋球菌、腦膜炎雙球菌、單核細(xì)胞增多性李斯特氏菌、釀膿鏈球菌（甲類鏈球菌)、無(wú)乳鏈 球菌（乙類鏈球菌)、鏈球菌(綠色鏈球菌)、糞鏈球菌、牛鏈球菌、鏈球菌(厭氧的 sps.)、肺 炎鏈球菌、致病性彎曲桿菌sp·、腸球菌sp.、流感嗜血桿菌、炭疽桿菌、白喉?xiàng)U菌、棒狀桿 菌SP.、豬紅斑丹毒絲菌、梭狀芽孢梭菌、破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣腸桿菌、披衣菌、克雷白氏肺炎桿 菌、多嗎桿菌、擬桿菌sp.、具核梭桿菌、念珠棘蟲(chóng)鏈桿菌、蒼白密螺旋體、雅司螺旋體、流感 嗜血桿菌、鉤端螺旋體、以色列放線菌、以及其他。
[0150]作為病原體的原生生物的實(shí)例為：引起瘧疾的惡性瘧原蟲(chóng)、剛地弓形蟲(chóng)（弓形蟲(chóng) 病)、和杜氏利什曼蟲(chóng)(利什曼病)，以及其他。
[0151] 能夠用于結(jié)合流感病毒顆粒的肽部分的實(shí)例在下面的實(shí)施例部分被提供。能夠 用于結(jié)合病毒的活性部分(諸如流感病毒蛋白神經(jīng)氨酸苷酶或結(jié)合病毒顆粒的宿主蛋白 質(zhì))、或者諸如人蛋白CDSI結(jié)合其他微生物的活性部分的配體，在Cellular proteins in influenza virus particles [Shaw et al，PLoS Pathog_2008Jun6; 4(6): el000085]中進(jìn)行 了描述。
[0152] 根據(jù)本方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述復(fù)合物能夠利用生物戰(zhàn)制劑通過(guò)除去、中和 或消除一旦受感染的微生物，用于預(yù)防由細(xì)菌戰(zhàn)物質(zhì)或流行性疾病引起的潛在感染，例如， 病毒、細(xì)菌、真菌、原生生物或古細(xì)菌。
[0153]在生物戰(zhàn)中使用的病毒的實(shí)例有痘病毒(例如，天花、猴痘)、腦炎病毒(例如，委內(nèi) 瑞拉馬腦炎病毒、西部馬腦炎病毒、東部馬腦炎病毒)、沙粒病毒(例如，拉沙病毒、阿根廷沙 粒病毒、玻利維亞沙粒病毒、巴西沙粒病毒、委內(nèi)瑞拉出血熱病毒)、布尼亞病毒(例如，茹福 利-瓦利病毒、克里米亞-戈登病毒、漢坦病毒)、和絲狀病毒(例如，馬爾堡病毒、埃博拉病 毒)、黃病毒(例如，黃熱病病毒、登革熱病毒、科薩努爾森林黃病毒、鄂木斯克HFs)、以及其 他。
[0154]類似地，受試者可能需要消除、除去或中和其他實(shí)體或物質(zhì)，而不一定為病原體， 所述實(shí)體或物質(zhì)可能導(dǎo)致病理學(xué)、生理干擾、或中毒，例如，核酸、小分子、朊病毒、蛋白質(zhì)、 碳酸酯、脂質(zhì)、毒素、毒液、藥物、毒物、過(guò)敏原、金屬、或污染物，如可能需要或希望同樣從體 系中清除或凈化的任何物質(zhì)。所述實(shí)體或物質(zhì)進(jìn)一步如下所述。
[0155] 本
【發(fā)明內(nèi)容】
中，核酸指的是多核苷酸(例如，包含連接到磷酸基和可交換的有機(jī)堿 的糖(像核糖或脫氧核糖）的分子，所述堿既可以是取代的吡啶(例如，胞嘧啶（C)、胸腺嘧啶 (T)、尿嘧啶（U))或取代的嘌呤(例如，腺嘌呤（A)或鳥(niǎo)嘌呤（G)))。在此所使用的，術(shù)語(yǔ)指的 是核苷酸以及寡脫氧核苷酸。該術(shù)語(yǔ)也包括多聚核苷糖(例如，缺少磷酸基的多聚核苷糖） 和任何包含其他有機(jī)堿的聚合物。核酸分子可能源自天然原料(例如，基因、cDNA、RNA)，或 可能源自重組或合成的原料(例如，由寡核苷酸合成制備的原料)。
[0156] 小分子為低分子量的有機(jī)化合物，所述有機(jī)化合物被定義為不是聚合物。所述術(shù) 語(yǔ)"小分子"，尤其在在藥物領(lǐng)域，通常限制為高親和性的結(jié)合生物聚合物的分子，所述生物 聚合物如蛋白質(zhì)、核酸或多糖和其他改變活性或作用的生物聚合物。對(duì)于所述小分子，最高 分子量限制大約為800道爾頓，這允許快速通過(guò)細(xì)胞膜的分散可能性從而所述小分子能夠 到達(dá)分子內(nèi)作用部位。非常小的寡聚物也可以被認(rèn)為是小分子，如二核苷酸、肽如抗氧化劑 谷胱甘肽、和二糖如蔗糖。
[0157] 所述朊病毒為感染原，其由錯(cuò)誤折疊形式的蛋白質(zhì)組成。朊病毒在多種哺乳動(dòng)物 中與傳染性海綿狀組織腦病變有關(guān)，所述腦病變包括牛的牛綿狀腦病（BSE，也被稱為瘋牛 病)、人類的克羅伊茨費(fèi)爾特-雅各布?。–JD)。所有已知的朊病毒疾病影響大腦的結(jié)構(gòu)或 其他神經(jīng)器官，并且所有通常是無(wú)法醫(yī)治的和通常致命的。
[0158] 正如在此所述的，"碳水化合物"、或"糖"，也可以為單糖、雙糖，如葡萄糖、蔗糖或 乳糖，或者多糖，例如，淀粉、纖維素、碳酸化合物絡(luò)合物如葡糖氨基葡聚糖寡糖、
[0159] 正如在此所述的，術(shù)語(yǔ)"蛋白質(zhì)"和"多個(gè)蛋白質(zhì)"將被說(shuō)明以包括所有任意長(zhǎng)度的 氨基酸殘基的聚合物，因此所述術(shù)語(yǔ)包括多肽，以及在傳統(tǒng)上定義的、為多肽的子集的蛋白 質(zhì)，和肽，肽為更短的、由氨基酸通過(guò)酰胺結(jié)合構(gòu)成的基本聚合物。蛋白質(zhì)通常包括任 何氨基酸的序列，序列的一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)足夠生成三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)的更高水平。所述 蛋白質(zhì)不同于肽，在于肽不具備形成三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)的能力。所述蛋白質(zhì)的分子量典 型地至少為15千道爾頓。在本發(fā)明說(shuō)明書(shū)中，應(yīng)當(dāng)理解的是，所述蛋白質(zhì)可能包括氨基酸 的L-光學(xué)異構(gòu)體或D-光學(xué)異構(gòu)體，以及還包括合成的氨基酸。所述蛋白質(zhì)可能進(jìn)一步通 過(guò)含有其他一些連接所述蛋白質(zhì)的鏈來(lái)修飾，例如碳水化合物(糖蛋白）、脂質(zhì)(脂蛋白）、?粦 (磷酸化蛋白）、硫等等?？赡芡ㄟ^(guò)本發(fā)明所述復(fù)合物被捕獲或捕捉的蛋白質(zhì)包括抗體、酶、 細(xì)胞因子、激素等等?？赡苄枰帽景l(fā)明所述復(fù)合物進(jìn)行捕獲的該蛋白質(zhì)的一個(gè)具體的實(shí) 施例為淀粉樣β蛋白。其他分子如非蛋白質(zhì)的細(xì)胞交流分子或神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)，例如cAMP、 多巴胺、血清素、腎上腺素等等也可能是從受試者循環(huán)中被還原或消除的靶標(biāo)。
[0160]正如在此所述的，"脂質(zhì)"包括脂肪、固醇、脂溶性維生素(例如，維生素 A、D、E和 K)、單甘脂、二甘酯、磷脂質(zhì)，和其他?？赡苄枰ㄟ^(guò)本發(fā)明所述復(fù)合物捕獲的所述脂質(zhì)的一 個(gè)具體的實(shí)施例為低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C)。
[0161]正如在此所述的，"毒素"是一種由活細(xì)胞或微生物產(chǎn)生的有毒的物質(zhì)，包括：血毒 素、光毒素、藍(lán)藻毒素、壞死毒素、神經(jīng)毒素(例如，短裸甲藻毒素)、細(xì)胞毒素、蜂毒素和真菌 毒素。毒液是常用術(shù)語(yǔ)，該術(shù)語(yǔ)指的是任何種類的某些類型的動(dòng)物通過(guò)?；虼痰姆绞阶⑸?到受害者的毒素。產(chǎn)生毒液的動(dòng)物的一個(gè)簡(jiǎn)單列表如：蜘蛛、蝎子、蛇、魚(yú)、章魚(yú)、水母、蜜蜂、 黃蜂、螞蟻、駒鼯、鼴鼠、以及其他。
[0162]正如在此所述的，"過(guò)敏原"是任何可以導(dǎo)致過(guò)敏的物質(zhì)。過(guò)敏原的典型的實(shí)施例 包括：花粉、塵螨、寵物皮屑、堅(jiān)果、香料、海產(chǎn)品、花生、木本堅(jiān)果、蛋類、牛奶、水母、魚(yú)、小麥 和它的衍生物、和大豆和它的衍生物、以及l(fā)Oppm或以上的亞硫酸鹽(基于化學(xué)的，常見(jiàn)于 食品的調(diào)料和助色劑中)、火蟻、毒葛、蜂刺、藥物(例如，盤(pán)尼西林)、和乳膠。真菌引起的過(guò) 敏原包括擔(dān)子孢子、側(cè)耳菌、枝孢菌、杯形禿馬勃、曲霉屬真菌和交鏈孢霉屬-盤(pán)尼西林家 族、fomes pectinatis。所述過(guò)敏原的列表很廣，還包括昆蟲(chóng)毒液、動(dòng)物頭屑、真菌孢子等 等。自然界的、動(dòng)物和植物過(guò)敏原的實(shí)施例包括尤其以下屬的蛋白質(zhì)：犬屬(家犬)、塵螨屬 (例如，粉塵螨)、貓屬(家貓)、豚草屬（阿葉豚草)、黑麥草屬(例如，多年生黑麥草或多花黑麥 草)、柳杉屬（圓球柳杉)、交鏈孢霉屬(互隔交鏈孢霉)、車前草屬(例如，長(zhǎng)葉車前草)、墻草屬 (例如藥用墻草、或歐蓍草)、小蠊屬(例如，德國(guó)小蠊)、蜂屬（黑麥草蜂）柏木屬(例如，意大 利柏木、亞利桑那柏木、和大果柏)、刺柏屬（Juniperus sabinoides、北美圓柏、歐洲刺桕、 杉木)、金鐘柏(例如，東方金鐘柏)、扁柏屬(例如，日本扁柏)、大蠊屬(例如，美國(guó)大蠊)、冰草 屬(例如，偃麥草)、黑麥屬(例如，黑麥)、小麥屬(例如，小麥)、鴉茅屬(例如，果園草)、羊茅屬 (例如，牛尾草)、早熟禾屬(例如，草地早熟禾或加拿大早熟禾)、燕尾屬(例如，野燕麥)、絨毛 草屬(例如，絨毛草)、黃花茅屬(例如，黃花茅)、燕麥草屬(例如，高燕麥草)、剪股穎屬(例如， 小糠草)、梯牧草屬(例如，貓尾草)、藺草屬（例如，藺草)、雀稗屬(例如，百喜草)、蜀黍?qū)伲ɡ?如，高粱)、和雀麥(例如，光雀麥)。
[0163]正如在此所述的，"藥物"涉及到一種醫(yī)用藥物或通常認(rèn)為是消遣性藥物意義的藥 物，如安眠藥、乙醇或尼古丁。
[0164]醫(yī)用藥物，也涉及到用藥或藥劑的領(lǐng)域，包括退燒藥、鎮(zhèn)痛藥(止痛藥)、抗生素、防 腐劑等等。不同類型的用藥具體到被治療的體系，用藥的簡(jiǎn)單列表包括：抗酸劑、抑制藥、 抗脹氣劑、抗多巴胺、質(zhì)子栗抑制劑（PPIs)、H 2-受體拮抗體、細(xì)胞防護(hù)劑、前列腺素類似 物、輕瀉藥、解痙劑、止瀉藥、膽酸螯合劑、類阿片、β受體阻滯劑、鈣通道阻滯劑、利尿劑、強(qiáng) 心苷、抗心律失常藥、硝酸鹽、抗心絞痛藥、血管收縮劑、血管舒張劑、外圍催化劑、抗高血壓 藥、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素受體阻滯劑、阻斷劑、抗凝血?jiǎng)?、肝素、抗血小?藥、溶纖維蛋白藥、抗血友病因子、止血?jiǎng)?dòng)脈硬化/膽固醇抑制劑、血脂調(diào)節(jié)劑、他汀類 藥物、抗精神病藥、抗抑郁藥、抗嘔劑、抗痙攣藥/抗癲癇藥、抗焦慮藥、巴比妥類藥物、運(yùn)動(dòng) 障礙藥、興奮劑、苯二氮平類藥物、環(huán)吡咯酮類、多巴胺對(duì)抗劑、抗組胺、膽堿能藥物、抗膽堿 能藥物、大麻類、NSAIDS、撲熱息痛、三環(huán)抗憂郁藥、骨骼肌松弛藥、雄激素、抗雄激素、促性 腺激素、類固醇、抗利尿激素類似物。
[0165] 因此，本發(fā)明的復(fù)合物可能用作由于用藥或消遣性藥物引起的服藥過(guò)量的治療。
[0166] 正如在此所述的，所述"藥物前體"涉及一種基于引發(fā)劑而產(chǎn)生活性作用（或更高 活性）的化合物。藥物前體為在生理學(xué)條件下容易發(fā)生化學(xué)變化以使化合物有效和活性的 化合物的結(jié)構(gòu)型改良。很多藥物前體衍生物在本領(lǐng)域是已知的，如依賴于藥物前體的水解 分裂或氧化激活的物質(zhì)。一個(gè)藥物前體的實(shí)施例，非限制地，可以為醚(藥物前體)、但然后 代謝水解為羧酸作為活性實(shí)體的化合物。其他的實(shí)施例包括化合物的肽衍生物等等。
[0167] 正如在此所述的，"毒物"可能是化學(xué)戰(zhàn)劑(例如，芥子氣)、蓖麻毒素、殺蟲(chóng)劑、除草 齊!J，或者其他。
[0168] 金屬中毒是一種嚴(yán)重的健康問(wèn)題，因而用于消除不論是受試者循環(huán)還是用于人類 消費(fèi)液體中的有害劑量的金屬得到高度的關(guān)注。
[0169] 因此，本發(fā)明所述復(fù)合物也可以用于捕捉或捕獲當(dāng)金屬攝入過(guò)量和/或在受試者 和積累導(dǎo)致中毒的金屬和污染物。所述金屬包括：例如，鉛、汞、鎘、鋁、鉍、金、鎵、鋰、銀、鋇 鹽、針、鈷、鎂、三氧化砷、鉻、鈷、銅、鐵、鎳、硒、鉈和鋅。所述污染物包括有毒污染物，例如二 噁英和它的衍生物。
[0170] 圖la-c和2解釋了本發(fā)明復(fù)合物的幾個(gè)實(shí)施例，所述復(fù)合物在此指的是復(fù)合物 10。
[0171] 復(fù)合物10包括配置是含有一個(gè)內(nèi)部腔體14的三維顆粒的多孔支架12。腔體14 包括連接位于腔體14并受它尺寸約束的載體18 (例如，顆粒）的活性部分16 (圖1)或連 接支架12的內(nèi)表面20 (圖2)。
[0172] 支架12包括具有特定直徑范圍孔22,所述直徑根據(jù)用于俘獲靶向的所述實(shí)體而 選擇。例如，支架10設(shè)計(jì)用于捕獲流感病毒，具有100-800nm直徑的孔22。
[0173] 圖1所示的支架10能夠由隨后實(shí)施例部分的實(shí)施例1-2中的聚苯乙烯微孔/納 米顆粒來(lái)構(gòu)建。圖2所示的支架10能夠使用實(shí)施例9-10所述的DNA來(lái)構(gòu)建，尤其是通過(guò) 實(shí)施例4和11所述的DNA折紙技術(shù)來(lái)構(gòu)建。
[0174] 圖3a-c說(shuō)明了使用圖lc中支架10的病毒捕獲。圖3a說(shuō)明了在復(fù)合物支架的外 部的病毒顆粒，圖3b說(shuō)明了病毒顆粒穿過(guò)復(fù)合物支架的孔的選擇性流入，以及圖3c說(shuō)明了 病毒顆粒與活性部分(例如，抗體）間的相互作用。紅血球如右邊所示以說(shuō)明比例。
[0175] 正如上文所述的，本發(fā)明所述復(fù)合物可用于生物流體的體外或體內(nèi)治療(例如，感 染的解毒或預(yù)防或治療）或非生物流體的處理(例如，水的純化)。
[0176] 因此，根據(jù)本發(fā)明另一方面，本發(fā)明提供了一種從液體中除去所述物質(zhì)或病原體 的方法。
[0177] 本發(fā)明所述方法的一個(gè)優(yōu)選應(yīng)用是對(duì)經(jīng)受或易受病原體感染的受試者的治療。
[0178] 所述治療通過(guò)給藥本發(fā)明所述能夠從受試者中捕獲病原體的復(fù)合物來(lái)實(shí)施。正如 在此使用的，術(shù)語(yǔ)"受試者"涉及到動(dòng)物、優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，如人。
[0179] 本發(fā)明所述復(fù)合物可以將其本身給藥于受試者，或在藥物組合物中與合適的載體 或輔料相混合。
[0180] 在此使用的，"藥物組合物"涉及到一種或多種在此所述的活性成分與其他化學(xué)成 分的制劑，如生理學(xué)上適宜的載體或輔料。藥物成分的目的在于促進(jìn)化合物向微生物的給 藥。
[0181] 在此使用的，術(shù)語(yǔ)"活性成分"指的是對(duì)期望的生物效應(yīng)有效的所述復(fù)合物。
[0182] 在下文中，短語(yǔ)"生理學(xué)上可接受的載體"和"藥學(xué)上可接受的載體"，可以互換 使用，涉及到不能導(dǎo)致微生物明顯刺激和取消給藥化合物的生物活性和性能的載體或稀釋 齊!J。輔藥包括在上述短句中。
[0183] 在此，術(shù)語(yǔ)"輔料"涉及到一種添加到藥物組合物中的惰性物質(zhì)以進(jìn)一步促使活性 成分的給藥。輔料的實(shí)施例，不受限制地，包括碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類和多種類型的淀 粉、纖維素衍生物、明膠、植物油、和聚乙二醇。
[0184] 用于藥物的處方和給藥的技術(shù)可能在最新出版的"Remington's Pharmaceutical Sciences"（雷明登氏藥學(xué)全書(shū)，Mack Publishing Co·,Easton，PA)中找到，其在此通過(guò)引 用的方式整體引入。
[0185] 合適的給藥途徑可能，例如，包括：口服、直腸給藥、轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)，尤其是經(jīng)鼻的、腸 內(nèi)的、或非腸胃給藥，包括肌肉內(nèi)注射、皮下注射、和髓內(nèi)注射，以及囊內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈 內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、鼻內(nèi)、或眼內(nèi)注射。
[0186] 可選地，一受試者可以是局部而不是全身的方式給藥所述藥物組合物。例如，通過(guò) 直接到病人組織部位的藥物組合物的注射。
[0187] 本發(fā)明所述藥物組合物可能通過(guò)本領(lǐng)域已知方法來(lái)制備，例如，通過(guò)傳統(tǒng)的混合、 溶解、造粒、包衣、磨細(xì)、乳化、封裝、捕捉、或凍干方法。
[0188] 與本發(fā)明相一致的供使用的藥物組合物因此可能按著傳統(tǒng)方式使用一種或多種 包含輔料或助劑的生理學(xué)上可接受的載體來(lái)制成劑型，促使活性成分到能夠用于生理學(xué)上 的制劑。合適的配方依賴于選擇的給藥途徑。
[0189] 對(duì)于注射，藥物組合物的活性成分可能在水溶液中，優(yōu)選在生理學(xué)上兼容的緩沖 液中來(lái)制成劑型，所述緩沖液如漢克溶液(Hank' s溶液)、林格溶液（Ringer' s溶液）或生 理鹽緩沖液。對(duì)于轉(zhuǎn)化粘液質(zhì)給藥，適合于載體被滲透的滲透劑用于劑型中。所述滲透劑 在本領(lǐng)域通常是己知的。
[0190] 對(duì)于口服給藥，所述藥物組合物能夠通過(guò)將活性化合物與本領(lǐng)域已知的藥學(xué)上可 接受載體的結(jié)合來(lái)制成劑型。所述載體使所述藥物組合物被制成劑型，如片劑、丸劑、包衣 丸劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、料漿、懸浮液等等，用于病人的口服給藥。對(duì)于口服使用的藥 物制劑可以使用固體輔藥來(lái)制備，可選地，在加入所期望的合適的助劑之后，研磨結(jié)果混合 物，和處理顆粒的混合物，以獲得片劑或包藥丸芯。合適的輔料，尤其是填料，如糖類，包括 乳糖、蔗糖、甘露糖、或山梨糖；纖維素制劑，如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、 明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥基丙基甲基-纖維素、和碳水甲基纖維素鈉；和/或生理學(xué)上 可接受聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮（PVP)。如果需要，崩解劑，如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、 或海藻酸或其中的鹽，如海藻酸鈉，可能被添加。
[0191] 包衣丸芯具有合適的覆層。為了這個(gè)目的，濃縮的糖溶液可能被使用，可選地 包含阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆膠、聚乙二醇、二氧化鈦、漆溶液 （lac(luer solution)和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物。染料或顏料可以添加到片劑或包衣覆層，以用 于識(shí)別或描述活性化合物劑量不同組合。
[0192]用于口服的所述藥物組合物包括由明膠、以及由明膠和塑化劑制成的柔軟、封閉 膠囊制備成的推入配合(put-fit)膠囊，所述塑化劑如甘油或山梨醇。所述推入配合膠囊可 能包含存在于與填料的混合物中的的活性成分，所述填料如乳糖、粘結(jié)劑，如淀粉、潤(rùn)滑油， 如滑石或硬脂酸鎂、和可選地穩(wěn)定劑。在軟的膠囊中，所述活性成分可能溶解或懸浮在合適 的液體中，如脂肪油、液狀石蠟、或液體聚乙二醇。另外，穩(wěn)定劑可以被添加。所有用于口服 給藥的劑型對(duì)于所選給藥流程應(yīng)該有合適的劑量。
[0193]對(duì)于口腔含化給藥法，所述組合物可能采取傳統(tǒng)方式制成制劑的片劑或含片。 [0194]對(duì)于吸入給藥，根據(jù)本發(fā)明供使用的活性成分以從受壓包裝中氣溶膠噴霧給藥或 使用適當(dāng)揮發(fā)氣的噴霧器的形式方便的送藥，揮發(fā)氣例如：二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二 氯-四氟乙烷、或二氧化碳。在加壓氣溶膠的情況下，劑量可能通過(guò)提供閥門(mén)以按計(jì)量送藥 來(lái)判定。例如，在分配器中供使用的明膠膠囊和藥筒可能制成為含有粉末混合的化合物和 合適的粉末基質(zhì)(如乳糖或淀粉）的劑型。
[0195]在此描述的所述藥物組合物可能用于腸胃外給藥。例如，通過(guò)彈丸注射或連續(xù)灌 注。用于注射的劑型可以是單位劑量形式存在，例如，在安瓿;中或者多次量容器中，可選的 添加了防腐劑。所述組合物可能為懸浮液、溶液或油乳劑或水乳劑媒介，并且可能包含賦形 劑，如懸浮劑、穩(wěn)定劑、和/或分散劑。
[0196]用于腸胃外給藥的藥物組分包括以水溶液形式的活性劑型的水溶液。另外，活性 成分的懸浮劑可以制備為合適的油或水基注射懸浮液。合適的親脂溶劑或媒介包括脂肪 油，如芝麻油、或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯、甘油三酯、或脂質(zhì)體。水注射懸浮液可能含 有增加懸浮液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇、或葡萄聚糖?？蛇x地，懸浮液可能還 包括合適的穩(wěn)定劑或增加活性成分溶解性的物質(zhì)，以允許較高濃度液體的制備。
[0197]可供選擇地，在使用前，所述活性成分可以是為粉末形式，用于與合適的媒介進(jìn)行 構(gòu)建，例如，無(wú)菌、無(wú)熱原的、水基溶液。
[0198] 持續(xù)釋放（SR)、延長(zhǎng)釋放（ER、XR、或XL)、限時(shí)釋放或定時(shí)釋放、控制釋放（CR)、或 連續(xù)釋放（CR或Contin)藥丸為制備成隨著時(shí)間緩慢溶解和釋放藥物的片劑或膠囊劑型。 持續(xù)釋放片劑被制備，從而活性成分嵌入到非溶性物質(zhì)的基質(zhì)中（例如，丙烯酸樹(shù)脂、多糖 等等)，進(jìn)而溶解的藥物通過(guò)基質(zhì)上的孔擴(kuò)散出來(lái)。在一些SR劑型中，所述基質(zhì)物理膨脹形 成凝膠，從而藥物首先溶解在基質(zhì)中，然后通過(guò)外表面離開(kāi)。
[0199] 控制釋放和持續(xù)釋放的不同在于：控制釋放完全為零階釋放，g卩，隨著時(shí)間的藥物 釋放與濃度無(wú)關(guān)；另一方面，持續(xù)釋放意味著藥物在時(shí)間周期內(nèi)緩慢的釋放。它可能是或不 是控制釋放。
[0200] 本
【發(fā)明內(nèi)容】
中適合使用的藥物組合物包括如下組合物：其中，活性成分以有效的 足以實(shí)現(xiàn)預(yù)期目標(biāo)含量存在。更具體地，"治療有效量"意味著有效用于阻止、減輕、或改善 失調(diào)癥狀或延長(zhǎng)被治療受試者存活的活性成分的數(shù)量。
[0201] 治療有效量的檢測(cè)被本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，尤其是根據(jù)在此提供的具體描述。
[0202] 對(duì)于任何用于本發(fā)明方法的制劑，劑量或治療有效量首先能夠由體外和細(xì)胞培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)來(lái)估算。例如，劑量可以在動(dòng)物模型中得到以實(shí)現(xiàn)所需的濃度或滴度。這一信息能夠 用于人體內(nèi)有效劑量的更精確的檢測(cè)。
[0203] 在此所述的活性成分的毒性和治療效果通過(guò)體外、培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)藥物規(guī) 程來(lái)測(cè)得。從體外或細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物研究獲得的數(shù)據(jù)能夠用于制定人體使用劑量的 范圍。所述劑量可能依靠使用的劑量形式和給藥流程來(lái)變化。精確的規(guī)劃、給藥流程、 和劑量可以由每個(gè)醫(yī)師針對(duì)病人的條件來(lái)選擇。（參見(jiàn)： Fingl，E.et al.(1975)，〃The Pharmacological Basis of Therapeutics, "Ch. 1，ρ·1·)。
[0204]劑量的量和給藥間隔可能單獨(dú)的調(diào)整以提供足夠的活性成分的血漿或大腦水平 以誘使或抑制生物效應(yīng)(例如，最小有效濃度，MEC)。MEC對(duì)于每種制劑來(lái)將是變化的，但可 以由體外數(shù)據(jù)估算得到。達(dá)到MEC的必須劑量依靠個(gè)人特征和給藥流程。檢測(cè)試驗(yàn)?zāi)軌蛴?于檢測(cè)血漿濃度。
[0205]基于被治療的情況的嚴(yán)重程度和響應(yīng)性,在持續(xù)幾天到幾周的療程中，或直到痊 愈或疾病狀態(tài)的減小，配藥可以為單一或多重給藥。
[0206]當(dāng)然，給藥的組合物的用量依靠于被治療的受試者、病癥的嚴(yán)重程度、給藥方式、 處方醫(yī)師的判斷等等。
[0207] 本發(fā)明所述組合物，如果需要，可以存在于包裝或配藥裝置中，如FDA批準(zhǔn)的試劑 盒，其可能包含一種或幾種含有活性成分的單位劑量。例如，所述包裝可能包含金屬或塑料 薄膜，如吸塑包裝。所述包裝或配藥裝置可以由給藥指示來(lái)配合。所述包裝或配藥裝置也 可以由調(diào)節(jié)藥物的制造、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定的形式的通知來(lái)配合。所述通知是由 機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的用于人或獸給藥的組合物的形式的反映。例如，所述通知可能包括FDA對(duì)于處 方藥批準(zhǔn)的或定制產(chǎn)品的標(biāo)簽。包括在藥物上可接受載體中制備本發(fā)明所示的劑型也可也 可以制備，位于合適的容器中，和標(biāo)上用于指示狀態(tài)的治療標(biāo)簽，進(jìn)一步如下所述。
[0208] 一旦給藥至受試者，所述支架就"過(guò)濾"生物流體，所述活性部分在支架內(nèi)以靶向 或非靶向的方式捕捉或處理實(shí)體。顯然，并非所有出現(xiàn)在生物流體中的組分通過(guò)所述支架 上的孔，例如，血紅細(xì)胞太大以致于不適合通過(guò)孔，并進(jìn)而不能經(jīng)過(guò)所述支架的孔。
[0209]當(dāng)在體內(nèi)使用時(shí)，本發(fā)明所述復(fù)合物當(dāng)然要從受試者中清除出去，例如，通過(guò)吞噬 細(xì)胞或經(jīng)過(guò)腎臟。當(dāng)本發(fā)明所述復(fù)合物用于減小免疫原性的情況下，從身體中清除有可能 會(huì)減緩。
[0210] 本發(fā)明所述復(fù)合物也可以形成可定位在身體血管內(nèi)的裝置的一部分。例如，復(fù)合 物可以并入容器內(nèi)，例如生物膠囊(例如，商標(biāo)的免疫分離裝置)。生物膠囊的進(jìn) 一步描述請(qǐng)參考 US2010/0028398 或 US2011/0092949。
[0211] 所述膠囊可以構(gòu)建成過(guò)濾裝置，并位于（固定)主要血管，或器官中。它可以像嫁接 或注入特定器官的過(guò)濾器一樣起作用，所述具體的器官如脾臟、肺臟、心臟、腎臟、淋巴結(jié)等 等。進(jìn)一步，所述容器可以在生物流體(例如，GI流體或血液循環(huán)）內(nèi)自由流動(dòng)。
[0212] 本發(fā)明所述復(fù)合物進(jìn)一步包括用于捕獲病毒的部分。所述部分為病毒-特異性受 體，如在此所述的，抗體、配體、受體等等。正如先前所述，病毒特異性作用的受體的非全部 的列表為：CD4、CCR5、CXCR4、CCR2、CCR3、跨膜四蛋白⑶81、人類清道夫受體SR-ΒΙ、封閉蛋 白-1、閉合蛋白、肝配蛋白-B2、CD46、CAR、av整合蛋白、HAVCR-1、EGFR (表皮生長(zhǎng)因子受 體)、SLAM、乙酰膽堿受體、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)受體、p75NTR、唾液酸、粘多糖和硫酸乙酰肝素。
[0213] 本發(fā)明所述復(fù)合物還可以進(jìn)一步包括用于捕獲微生物的部分。所述部分可以是被 寄生微生物結(jié)合的宿主-特異性部分，如蛋白質(zhì)、碳?xì)浠衔?、脂質(zhì)、抗體、配體和受體等。 作為被寄生微生物結(jié)合的宿主-特異性部分的蛋白質(zhì)的非全部的列表包括：膜聯(lián)蛋白（如 膜聯(lián)蛋白A1、膜聯(lián)蛋白A2、膜聯(lián)蛋白A4、膜聯(lián)蛋白A5、膜聯(lián)蛋白All)、四次穿膜蛋(如CD81、 CD9)、CD59、親環(huán)蛋白、β_微管蛋白、絲切蛋白1、烯醇1、脂肪酸合成酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 1、磷脂酰肌醇聚糖4、磷酸甘油酯激酶、丙酮酸激酶、S100鈣結(jié)合蛋白All、原肌球蛋白1、轉(zhuǎn) 凝蛋白
[0214] 本發(fā)明所述復(fù)合物也可以用于從生物樣品中除去病原體或物質(zhì)。例如，血液或組 織樣品(懸浮在緩沖液中)可以通過(guò)含有本發(fā)明所述復(fù)合物的裝置。病原體或物質(zhì)通過(guò)所述 復(fù)合物進(jìn)行"過(guò)濾"，并被活性部分捕獲和失活。
[0215] 正如在此所述的，本發(fā)明復(fù)合物也可以用于純化非生物流體去除物質(zhì)，如雜質(zhì)、毒 素等等。所述流體可以為任何來(lái)源的水、飲料、液體培養(yǎng)基、污水、血液樣品、液體污染物等 等。
[0216] 正如在此所述，術(shù)語(yǔ)"雜質(zhì)"指的是懸浮顆粒、寄生蟲(chóng)、細(xì)菌、藻類、病毒、真菌、古生 菌、原生生物、有機(jī)碎片、金屬、核酸、小分子、病毒顆粒、蛋白細(xì)胞、蛋白質(zhì)、肽、烴、脂質(zhì)、毒 素、毒液、藥物、毒物、過(guò)敏原或污染物。
[0217] 當(dāng)應(yīng)用于體外時(shí)，尤其是非活的體系時(shí)，本發(fā)明所述復(fù)合物可以可選地通過(guò)離心 分離、沉淀、通過(guò)色譜分析、由磁鐵力來(lái)推動(dòng)，或電泳分離等等進(jìn)行清理。
[0218] 為了變于磁性分離，所述支架用 Yabin等人[European Polymer Journal Volume4 3, Issue3, March2007，Pages762_772]、或 Liua 等人[Journal of Colloid and Interface Science, Volume375, Issuel, lJune2012，Pages70_77]所述的方法來(lái)改善。
[0219] 因此，本發(fā)明所述復(fù)合物進(jìn)一步包括標(biāo)記，如磁性、熒光或冷光標(biāo)記，用于從液體 中純化所述復(fù)合物，例如，通過(guò)FACS，磁性分選器等等。
[0220] 本發(fā)明所述復(fù)合物作為試劑盒來(lái)包裝，所述試劑盒包括粉末或懸浮頁(yè)形式提供的 復(fù)合物、附屬的試劑用于給藥所述復(fù)合物(例如，緩沖液等等)、給藥裝置(例如，注射器）和 供使用的說(shuō)明書(shū)。
[0221] 治療感染HIV或流感的人類受試者的典型記錄如下所述。
[0222] 用抗HIV的復(fù)合物對(duì)HIV感染夸試者的治療
[0223] 抗HIV復(fù)合物通過(guò)使用DNA折紙技術(shù)構(gòu)建中空微球模型的、直徑Ιμπι的支架 來(lái)產(chǎn)生(參加實(shí)施例部分進(jìn)一步描述)。DNA微球的外表面有300nm的孔，并聚乙二醇化 (PEGylated，PEG化)，和含有CD4和CCR5受體的500nm (內(nèi)直徑）脂質(zhì)體在微球內(nèi)被捕獲。 所述脂質(zhì)體通過(guò)抗體連接到核酸支架。
[0224] 治療方法：
[0225] 在鹽載體上含有25, 000, 000單位的抗HIV復(fù)合物的藥劑量通過(guò)緩慢滴加注入輸 送給病人（IV)，基于病毒載量，藥劑量被重復(fù)的或調(diào)整。
[0226] 感染流感夸試者的治療
[0227] 抗流感復(fù)合物通過(guò)在聚苯乙烯、晶體硅、PLGA、或殼聚糖形成的支架內(nèi)構(gòu)建抗病毒 唾液酸的樹(shù)狀分子來(lái)形成，所述支架在每側(cè)都具有400nm的孔并被PEG化。
[0228] 治療方法
[0229] 包括10, 000, 000捕獲單位/1ml的劑量的鼻用噴霧用于預(yù)防藥或感染的治療。
[0230] 應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明所述方法也能夠用于治療植物或其他多細(xì)胞生物體的病原 體感染。例如，病毒陷阱可以直接注射到樹(shù)中（通過(guò)樹(shù)干注入）以在整個(gè)樹(shù)中全身分布。所 述注射在樹(shù)的底部IS英寸、每個(gè)6英寸間隔進(jìn)行所述。注射深度在5/8〃和15/8〃之間。 10 英寸直徑的樹(shù)將用大約1. 5盎司的注射。
[0231]在此使用的術(shù)語(yǔ)"大約"指的是±10%。
[0232]本發(fā)明其它主題、優(yōu)勢(shì)、新的特征，通過(guò)下述實(shí)施例的檢查，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員 來(lái)講將變得清楚明了；所述實(shí)施例并不意味著一種限制。另外,上述描述的和后面權(quán)利要求 書(shū)部分要求保護(hù)的本發(fā)明實(shí)施例和各方面的每一種變化在下述實(shí)施例中獲得實(shí)驗(yàn)支持。 [0233] 實(shí)施例
[0234]現(xiàn)場(chǎng)，結(jié)合上述的說(shuō)明，參考下面的實(shí)施例，以不受限制的方式闡述本發(fā)明。
[0235] 實(shí)施例1
[0236] 聚苯乙烯微球陷阱
[0237] -定數(shù)量的聚苯乙烯（PS)被生產(chǎn)，并限定相關(guān)尺寸分布和孔隙大小范圍。
[0238] 材料和方法
[0239] 無(wú)孔微球
[0240] 使用一個(gè)500ml三頸圓底燒瓶溶解3. 75g的聚乙烯吡咯烷酮到150ml乙醇和 62.5ml甲氧基乙醇的混合物中，所述燒瓶上配有一個(gè)冷凝器和一個(gè)機(jī)械攪拌器。所述混合 物的溫度通過(guò)油浴緩慢上升到73°C，同時(shí)氮?dú)夤呐莸襟w系中。
[0241] 單獨(dú)地，一個(gè)l〇〇ml圓底燒瓶用來(lái)溶解1. 5g芐基過(guò)氧化到37. 5ml苯乙烯中，該溶 液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下通過(guò)磁力攪拌器來(lái)攪拌。在溫度穩(wěn)定后，100ml燒瓶的內(nèi)容物倒入到所述 500ml三頸圓底燒瓶中，并反應(yīng)過(guò)夜。
[0242] 在洗滌之前，微球在光學(xué)顯微鏡下觀察以評(píng)估它們的尺寸和同質(zhì)性。
[0243] 反應(yīng)混合物均勻分布在12個(gè)50ml小瓶中并用乙醇洗滌6次以除去苯乙烯殘留， 然后用50%乙醇水溶液洗滌1次和用水洗滌2次。洗滌通過(guò)在離心機(jī)中5500rpm下旋轉(zhuǎn)所 述小瓶8分鐘并緩慢除去上層清液來(lái)完成。經(jīng)過(guò)所述洗滌，樣品過(guò)夜凍干。
[0244] 多孔微球
[0245] 多孔微球通過(guò)改善 Omer-Mizrahi 和 Margel [Polymer Volume51, Issue6, 2010, Pa gesl222-1230]描述的過(guò)程來(lái)制備。簡(jiǎn)單地說(shuō)，lg凍干的PS微球懸浮在50ml水和lml乙 醇中，所述懸浮液然后超聲處理8分鐘（ 35%振幅)，然后在配有磁力攪拌的100ml圓底燒瓶 中臭氧分解20分鐘。
[0246] 生成的樣品用水洗滌（5500rpm下8分鐘)，直到上層清液中沒(méi)有臭氧剩下，根據(jù)添 加碘化鈉后顏色變化來(lái)測(cè)定。
[0247] 洗滌的樣品小球懸浮在9ml水中并均勻分布到9個(gè)20ml微量瓶中，每個(gè)微量瓶中 含有l(wèi)ml水，相當(dāng)于大約l〇〇mg PS。添加7ml的1. 43%十二烷基硫酸鈉（SDS),然后添加不 同體積的甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA):〇.lml x2、0.2ml x2、0_25ml、0.3ml x2、0.35ml x2。 添加14mg重亞硫酸鈉后，每個(gè)瓶在室溫下攪拌過(guò)夜。所述樣品然后用30%乙醇水洗滌2次， 乙醇洗滌2次和20%乙醇洗滌一次。所述洗滌每次在5500rpm下進(jìn)行8分鐘。
[0248] 結(jié)果
[0249] 無(wú)孔微球
[0250] 在光學(xué)顯微鏡下觀測(cè)到的聚苯乙烯微球群體，表現(xiàn)出同質(zhì)性，直徑范圍在 2. 1-2. 2 μ m(圖4a)。當(dāng)在掃描電子顯微鏡下觀測(cè)，大多數(shù)微球干燥時(shí)為大約1. 7 μ m直徑， 而含水時(shí)為2· 2 μ m (圖4b-c)。
[0251] 多孔微球
[0252] 與GMA反應(yīng)制備的均勻的多孔微球群，孔的直徑范圍在3· 5-4· 1 μ m和孔的直徑范 圍在0.3-1.(^111(圖5^)，結(jié)果是所述微球尺寸膨脹。低的0齡（0_51111)容積不影響微 球，GMA容積從0. 5增加到1. 5ml,制備中空微球和退化微球的均勻群體。增加臭氧分解時(shí) 間到40分鐘得到類似的結(jié)果。
[0253] 討論
[0254] 在此描述的方法學(xué)生成了聚苯乙烯微球的均勻群體?？咨墒褂贸粞醴纸夂途酆?反應(yīng)結(jié)合的方法，導(dǎo)致較窄的孔直徑范圍，能夠使微球的作為直徑范圍在50-250nm內(nèi)的桿 狀病毒的陷阱來(lái)應(yīng)用。
[0255] 實(shí)施例2
[0256] 聚苯乙稀納米球載體
[0257] -定數(shù)量的聚苯乙烯（PS)被生產(chǎn)，并限定相關(guān)尺寸分布和孔隙大小范圍。
[0258] 材料和方法
[0259] 600nm聚苯乙烯微球
[0260] 該方法改編自 Goodwin 等人[C0LL0ID&P0LYMER SCIENCE Volume252，Number6(1974)，464-471]所述的方法。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，lml苯乙稀添加到8. 5ml的 2· 5xl(T3M氯化鈉溶液中，然后添加〇. 5ml0. 05M的過(guò)硫酸鉀溶液。生成的混合物在20ml閃 爍計(jì)數(shù)瓶中73°C下攪拌過(guò)夜，然后用水洗滌2次，用乙醇洗滌2次和用水洗滌2次。洗滌通 過(guò)在離心機(jī)中（lOOOOrpm下12分鐘）旋轉(zhuǎn)所述小瓶并緩慢傾倒上層清液來(lái)執(zhí)行。
[0261] 25〇nm聚苯乙烯微球
[0262] 在20ml閃爍計(jì)數(shù)瓶中，5ml十二烷基硫酸鈉（SDS)與5ml的4, 4' -偶氮雙（4-氰 基戊酸)混合。用NaOH調(diào)節(jié)pH到7. 8,并添加0.75ml苯乙烯，然后在73°C下攪拌過(guò)夜。樣 品通過(guò)離心器旋轉(zhuǎn)（llOOOrpm下20分鐘）來(lái)洗滌，并緩慢傾倒上層清液。
[0263] 結(jié)果
[0264] 600nm聚苯乙烯微球
[0265] 所述聚苯乙烯微球通過(guò)使用動(dòng)態(tài)光散射（DLS/Nanophox)來(lái)分析尺寸，由此得到的 直徑為591±77nm。
[0266] 250醜聚丙乙烯微球
[0267] 所述聚苯乙烯微球通過(guò)使用動(dòng)態(tài)光散射（DLS/Nanophox)來(lái)分析尺寸，由此得到的 直徑為231±31應(yīng),苯乙烯容積減小到〇· 3ml，生成同樣尺寸的微球。
[0268] 討論
[0269] 具有590nm或230nm平均直徑的兩種納米球群體得以生成。兩種群體能夠分散到 4 μ m的如實(shí)施例i所述的聚苯乙烯微球中，所述聚苯乙烯微球有范圍在300nm-10〇〇nm范圍 的孔直徑。通過(guò)用活化劑(如病毒結(jié)合部分等等)涂裝所述納米球并在所述微球中隔離所述 納米球，這能夠生成一個(gè)免疫優(yōu)先的抗病毒陷阱。
[0270]聚苯乙烯多孔微球形成對(duì)身體免疫系統(tǒng)呈惰性的陷阱的外部表面，陷在所述微球 內(nèi)部的涂裝的納米球受到保護(hù)不受免疫系統(tǒng)傷害并能夠結(jié)合和固定通過(guò)所述微球孔進(jìn)入 所述陷阱的病毒。
[0271] 實(shí)施例3
[0272] 體外實(shí)驗(yàn)中的桿狀病毒
[0273] Sf9培養(yǎng)基體系被用來(lái)測(cè)試4 μ m涂裝有能夠結(jié)合和/或失活桿狀病毒顆粒的各種 表面活化劑的聚苯乙烯微粒的有效性。
[0274] 材料和方法
[0275] 陷阱
[0276] 為了將氫蓖麻油、多熔素、兩性霉素、吐溫、TritonlOO-X、組織蛋白酶、表面活性蛋 白D或抗-gp64 (用于桿狀病毒包膜蛋白的特異性抗體）結(jié)合到多孔聚苯乙烯微球上進(jìn)而 生成病毒陷阱，結(jié)合生物素-親和素結(jié)合劑被使用。
[0277] 若丹明B被用作對(duì)照以保證合適的結(jié)合。牛血清白蛋白（BSA)和抗-IL13被使用 作為陰性對(duì)照，因?yàn)樗鼈冾A(yù)期不會(huì)干擾病毒感染。
[0278] 生物素與活化劑的結(jié)合
[0279] 賽默飛（Thermo Scientific)的 EZ-link TFPA-PEG3 -生物素試劑盒(廣品號(hào)： 21303, Mw=664g/m)被用來(lái)共價(jià)結(jié)合。所述TFPA-生物素試劑通過(guò)UV光激活，并促進(jìn)生物 素結(jié)合到存在于活化劑化合物的C-H鍵中。每種活化劑用〇· lmg、相當(dāng)于1. 51χ ΙΟΛιι?οΙ的 生物素試劑孵育。正如試劑盒報(bào)告所述，1〇 : 1生物素和活化劑的摩爾比是生物素?；?最佳比。因此，每種活化劑的1.51xl(T5被用于生物素結(jié)合劑。
[0280] 在反應(yīng)中使用的以下每個(gè)活化劑的量：
[0281] · 0· 34mg 的多溶素：平均 Mw=22, 500g/mol。
[0282] · 0· 014mg 的兩性霉素：Mw=924g/mol。
[0283] · 0· 0185mg 的吐溫：Mw=1227. 5g/mol (密度假設(shè)為 lg/ml)。
[0284] · 9. 8 μ g 的 Tritonl00-X : Mw=647g/mol (密度假設(shè)為 lg/ml) ·
[0285] · 2 μ g的組織蛋白酶：Mw=28, 900g/m -相當(dāng)于6· 9χ10_5μ mol。為了保持生物素 試劑：活化劑比例穩(wěn)定在10 : 1，〇· 46 μ g的生物素試劑被使用。
[0286] · 0. 〇45mg的氫化蓖麻油：平均Mw=3000g/mol (密度假設(shè)為lg/ml)。
[0287] · 0· 045mg 的表面活化蛋白 D : Mw=65000g/mol -相當(dāng)于 3· 1χ1(Γ5μ mol。為了保 持生物素試劑：活化劑比例穩(wěn)定在10 : 1，0· g的生物素試劑被使用
[0288] · 7. 2 μ g 的 Pvhodamine B : Mw=479g/mol〇
[0289] 在PBS中，TFPA-生物素試劑和活化劑混合到最終15〇 4 1的量，并在黑暗下孵育2 分鐘，接著，溶液被孵育1〇分鐘，在365111111^燈（23(^,0_17六111?，391)下5。111。通過(guò)賽默飛 的EZ-link sulfo-NHS-生物素試劑盒(產(chǎn)品號(hào)21217，Mw=454_ 5g/m)，對(duì)照試劑共價(jià)結(jié)合到 生物素。試劑通過(guò)穩(wěn)定的酰胺鍵與任一含有伯胺的分子快速反應(yīng)以連接到生j 勿素標(biāo)記上。 正如試劑盒報(bào)告所述，1〇 : 1生物素和活化劑的摩爾比是用于生物素結(jié)合的最佳比。
[0290] 在反應(yīng)中使用的以下每種活化劑的量： 、
[0291] ·〇. 〇33g 的牛血清白蛋白：Mw=665〇0g/mol，Ν=0· 5μηιο1，2. 3rag 的生物素試劑被 使用。 、
[0292] · 10 μ g Wife -gp ： Mw=150, OOOg/mol, 0. 3 μ g
[0293] · l〇 μ g 的抗-IL13 抗體：Mw=150, OOOg/mol，N=6.67xl(T5m，0· 3Pg 的生物素試劑 被使用。
[0294]用多孔PS微球涂裝的別藻藍(lán)素-鏈霉親和素（APC-親和素）
[0295]總數(shù)為5000萬(wàn)的微孔聚苯乙烯微球被用于親和素涂裝。所述微球用ΡΗ=9· 6的 50mM的碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液洗滌3次，并用20 μ g的APC-親和素（Mw=60000g/m，產(chǎn)品 號(hào)4〇52〇7, BioLegend)、相當(dāng)于3. 33xl〇-4 μ m，在500 μ 1碳酸鹽/碳酸氫鹽緩沖液中，RT條 件下使用搖床孵育3〇分鐘。所述微球然后用PBS洗滌3次。所述微球的濃度通過(guò)Accuri C6流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)量，同時(shí)400萬(wàn)微球的等份被制備。
[0296] 生物素化活化劑和APC-親和素涂裝的多孔聚苯乙烯微球的結(jié)合
[0297]每等份APC-親和素涂裝的多孔聚苯乙烯微球與所述活化劑生物素反應(yīng)混合物進(jìn) 行混合，并在RT條件下使用搖床孵育30分鐘。每等份隨之用PBS洗滌4次。所述微球濃 度用Accuri C6流式細(xì)胞儀進(jìn)行測(cè)量。
[0298] 結(jié)果
[0299] 多孔聚苯乙烯微球的流式細(xì)胞儀讀數(shù)（Accuri C6)如圖6a_b所示。FL2-A讀數(shù) (圖6a)反映黃橙光譜處的發(fā)射。而FL4-A讀數(shù)（圖6b)反映遠(yuǎn)紅外光譜處的發(fā)射。若丹明 B具有一個(gè)在625nm處的最大發(fā)射，對(duì)應(yīng)于FL2-A中的讀數(shù)。別藻藍(lán)素（APC)具有在一個(gè) 在661nm處的最大發(fā)射，對(duì)應(yīng)于FL4-A中的讀數(shù)。圖6a-b顯示了聚苯乙烯微球的FL2-A和 FL4-A讀數(shù)(黑色)，涂有APC-親和素的聚苯乙烯的FL2-A和FL4-A讀數(shù)(紅色)、和包裹若丹 明B的涂有APC-親和素的聚苯乙烯的FL2-A和FL4-A讀數(shù)(藍(lán)色)。所述聚苯乙烯微球(黑 色）在FL2-A和FL4-A中都具有一低強(qiáng)度的讀數(shù)；涂有APC-親和素的聚苯乙烯微球(紅色） 在FL 2_A上具有一低強(qiáng)度的讀數(shù)，但是在FL4-A中有一高強(qiáng)度的讀數(shù)；包裹若丹明B的涂有 APC-未和素的聚本乙稀(藍(lán)色）在FL2-A和FL4-A中都具有一'尚強(qiáng)度的讀數(shù)。
[0300] 流式細(xì)胞儀讀數(shù)能夠指示多孔聚苯乙烯微球的APC-親和素涂層和活化劑的生物 素化，因?yàn)橥ㄟ^(guò)若丹明B的生物素化來(lái)指示是成功的。
[0301] 細(xì)胞
[0302] 27°C下，Sf9細(xì)胞在SFM921血清-游離昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基(表達(dá)系統(tǒng)）中繁殖。Sf9 細(xì)胞在I2孔板的單層上或在振動(dòng)為130rpm的搖瓶的懸浮液中生長(zhǎng)。
[0303] 足夠的E. coli DH10BAC細(xì)胞，包含桿粒(桿狀病毒穿梭載體質(zhì)粒）和輔助質(zhì)粒，根 據(jù)制造商（Invitrogen)的操作手冊(cè)，被用于產(chǎn)生重組桿粒?；虿迦耄℅FP)到所述桿粒由 PCR進(jìn)行驗(yàn)證。在6個(gè)孔板中，通過(guò)使用ESCORT的生物轉(zhuǎn)染試劑，Sf9細(xì)胞與重組桿粒DNA 進(jìn)行傳染。所述細(xì)胞在27°C下孵育5h，漂洗并繼續(xù)孵育72h，培養(yǎng)基被收集、離心，含有病毒 的上層清液用于2-3個(gè)連續(xù)感染，引起病毒顆粒的擴(kuò)增。
[0304] Sf9細(xì)胞（2*105cellS/ml)接種在12孔板上，其中，每孔1ml。細(xì)胞的感染在感染 復(fù)數(shù)（Μ0Ι)為10的條件下用兩種不同方法來(lái)操作：預(yù)孵育和預(yù)防。在預(yù)孵育模式中，病毒 用不同的陷阱單獨(dú)孵育30分鐘，在5000g下離心3分鐘，上層清液添加到細(xì)胞中。在預(yù)防 的模式中，陷阱添加到細(xì)胞中，然后也添加病毒顆粒。所述孔板在27?下放置在調(diào)濕器中 48小時(shí)，通過(guò)強(qiáng)力移孔里的內(nèi)容物來(lái)收集，并用FACS (C6accuri)進(jìn)行GFP熒光分析。 [0305] 結(jié)果與討談
[0306]病毒能夠損害它們引起的受感染宿主生物體是已知的。目前，沒(méi)有抗病毒試劑能 夠表現(xiàn)出抗生素的有效性或多譜適用性。
[0307]本發(fā)明提供了一種通過(guò)提供病毒陷阱來(lái)抵抗病毒感染的新方法，所述病毒陷阱能 夠物理上或化學(xué)上滅活感染原，如病毒。本發(fā)明也提供了一種用于觀察和量化各種病毒陷 阱構(gòu)造的抗病毒活度的模擬系統(tǒng)。 _
[0308] 與受感染的Sf9細(xì)胞（圖8a和8b)相比，細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示，健康的未處理的Sf9 細(xì)胞（圖7a和7b)的活力表現(xiàn)出明顯的區(qū)別。Sf 9細(xì)胞用病毒和多孔聚苯乙烯陷眺（圖9a 和9b用箭頭表示陷阱）共同處理，帶來(lái)大多數(shù)感染的Sf9細(xì)胞明顯的挽救，這些細(xì)胞，從品 質(zhì)上講，與受感染細(xì)胞相比，更相似于健康的未處理細(xì)胞。
[0309] 感染相關(guān)的桿狀病毒的挽救進(jìn)一步被定量評(píng)估。正如圖％和9d所示，感染抑制 的最高速率通過(guò)單獨(dú)PS、吐溫、聚賴氨酸、表面活化蛋白D和Triton來(lái)獲得。
[0310] 實(shí)施例4
[0311] 桿狀病毒的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
[0312] Blaberus craniifer蟑螂，別名"死人頭"蟑螂，被用作體內(nèi)模型來(lái)評(píng)估多孔聚苯 乙烯微球陷阱的有效性和毒性。
[0313] 材料和方法
[0314] 多孔聚苯乙烯微球陷阱與桿狀病毒混合并立即注射到所述蟑螂的腹部血腔，從而 探針刺入到第三和第四腹部腹片之間，接近于側(cè)邊緣（圖l〇a)。每個(gè)蟑螂中，注射總數(shù)為 10 μ 1，包含1 μ 1桿狀病毒和合適量的陷阱，對(duì)于每個(gè)蟑螂，達(dá)到總數(shù)為165000的陷阱顆 粒。在注射前，蟑螂在-20°C下放置7分鐘以使它們麻木。
[0315] 用于注射實(shí)驗(yàn)的陷阱為覆蓋有Triton、聚賴氨酸、表面活化蛋白D (簡(jiǎn)稱SFPD)、 抗-GP64抗體（gp64)或牛血清白蛋白（BSA)中任意一個(gè)的聚苯乙燦顆粒。裸露的聚苯乙搖 顆粒用來(lái)做對(duì)照。2個(gè)蟑螂被用來(lái)注射相同的陷阱作為重復(fù)，此外，作為陽(yáng)性對(duì)照，2個(gè)蟑螂 只被注射桿狀病毒，作為陰性對(duì)照，2個(gè)蟑螂沒(méi)有被注射。
[0316] 在注射5天后，通過(guò)刺穿后胸腿根部的膜并輕輕擠壓所述蟑螂以緩慢釋放血淋 巴，來(lái)收集血淋巴細(xì)胞。通過(guò)已經(jīng)含有25μ 1冰冷的抗凝劑緩沖液（30mM檸檬酸、30mM檸檬 酸鈉、0· 5MEDTA、0· 02%疊氮化鈉）的微吸管頭，25 μ 1的血淋巴被快速地收集，并懸浮到含 有50 μ 1冰冷的抗凝劑緩沖液艾本德管（印pend〇rf)中。所述細(xì)胞被計(jì)數(shù)，所述細(xì)胞的相 對(duì)GFP突光通過(guò)C6accuri流式細(xì)胞儀來(lái)被測(cè)量。
[0317]
[0318] 由于桿狀病毒在本實(shí)驗(yàn)中表達(dá)胞質(zhì)GFP標(biāo)記，血淋巴細(xì)胞的相對(duì)GFP熒光為病毒 感染的直接測(cè)量。相對(duì)GFP熒光與只注射桿狀病毒的蟑螂的相對(duì)GFP熒光做對(duì)比。
[0319] 過(guò)論
[0320]所述陷阱并不產(chǎn)生影響所述蟑螂的任何明顯的毒性。而且，注入的陷阱降低了與 感染相關(guān)的GFP熒光（圖10b)。覆蓋有Triton或聚賴氨酸的陷阱得到的結(jié)果與沒(méi)有注射的 樣品具有相比性，顯示了整個(gè)感染的完全的挽救。
[0321] 實(shí)施例5
[0322] 桿狀病毒粘附在陷阱
[0323]陷阱與病毒進(jìn)行孵育，以顯示穩(wěn)定桿狀病毒細(xì)胞顆粒的能力，從而促進(jìn)它們的抑 制能力。
[0324] 材料和方法
[0325]原子每種活化劑的400, 〇〇〇個(gè)陷阱與10 μ丨病毒輕輕地混合超過(guò)2'。每個(gè)樣品隨 后用lml PBS洗滌，并在5g下離心8分鐘。之后，除去上層清液，添加 lml PBS，樣品輕輕地 混合8分鐘，然后在5g下離心8分鐘。900 μ 1的上層清液被除去，所述微球懸浮在剩余的 100 μ 1溶液中。
[0326] 所述陷阱含有以下活化劑：吐溫、Triton、兩性霉素、表面活性蛋白D。裸露的多孔 微球和覆蓋有親和素的多孔微球都作為對(duì)照來(lái)使用。
[0327] 結(jié)果
[0328] 當(dāng)使用對(duì)照陷阱時(shí)，即，裸露的多孔微球和覆蓋有親和素的多孔微球只顯示了病 毒顆粒與所述微球表面最低結(jié)合，含有的Triton (圖11a-b)、吐溫和兩性霉素的陷阱顯示 了病毒顆粒的中度結(jié)合，如所示。
[0329] SEM通過(guò)碳素涂裝在玻璃表面來(lái)實(shí)現(xiàn)。加速電壓為3kV。工作距離為2. 6-2. 9ram。 棒如每個(gè)圖片所示。粘附到陷阱的表面的顆粒在期望的桿狀病毒顆粒尺寸范圍，50-300nm。
[0330] 實(shí)施例6
[0331] DNA折紙支架
[0332] 本發(fā)明所述的DNA折紙為基礎(chǔ)的支架的設(shè)計(jì)在caDNAno的幫助下得以發(fā)展，圖 像接口為基礎(chǔ)的計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)環(huán)境開(kāi)發(fā)用于輔助蜂窩狀褶皺折紙?jiān)O(shè)計(jì)的產(chǎn)生（Douglas etal，（2009)Nucleic Acids Research，首次網(wǎng)上發(fā)表 doi:10.1093/nar/gkp436)。
[0333] DNA折紙為基礎(chǔ)的支架通過(guò)結(jié)合20nM支架DNA、和ΙΟΟηΜ的每一種常用的寡核苷 酸、包括 5mM Tris、lmM EDTA(20°C下 pH 為 7.9)、和 22mM 或 15mM MgCl°C 的緩沖液和鹽。折 疊通過(guò)快速加熱變性、然后從80到61?緩慢冷卻超過(guò)80分鐘、再然后60到24°C冷卻超過(guò) 173h得以實(shí)現(xiàn)。為了觀察到的產(chǎn)生的產(chǎn)品，樣品在冰水浴中，2%瓊脂糖膠（0.5X TBE，llmM MgC12, 0· 5mg/ml溴化乙啶）上70V下電泳4h。
[0334] 基本上，任何純的隨意的和高復(fù)雜性(非重復(fù)）的ssDNA可作為折紙DNA的支架。 可以使用的序列的實(shí)施例為 M13mpl8 (SEQ. ID. NO. I)、p7308 (SEQ. ID. NO. 2)、p7560 (SEQ. ID_N0.3)、p7560old(SEQ_ID.N0.4)、p75601ab(SEQ.ID.N0_5)、p7560antisense(SEQ_ ID. NO. 6)、p7704(SEQ_ ID. NO· 7)、p77041ab(SEQ. ID. NO. 8)、p8064(SEQ_ ID. NO· 9)、p80641ab (SEQ· ID. NO· 10)、p8100(SEQ. ID. NO. ll)、p8100a(SEQ. ID. NO· 12)、p8100b(SEQ. ID· NO· 13)、 p8100c (SEQ.ID.N0_14)、p8634 (SEQ.ID.N0_15)、pEGFP (SEQ.ID_N0.16)。
[0335] 例如，主要使用的DNA序列，例如，可以是如caDNAno的繪圖網(wǎng)站（http: // cadnano. org. /gallery, html)所提供的，并在下表 1 中。
[0336] 表 1
[0337]

【權(quán)利要求】
1. 一種物質(zhì)組合物，包含：由一個(gè)支架包圍的至少一個(gè)活性部分，所述支架用于對(duì)象 的選擇性流入，所述對(duì)象能夠與所述至少一個(gè)活性部分相互作用。
2. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架包括核酸、聚合物、和/或娃 結(jié)構(gòu)。
3. 如權(quán)利要求2所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述核酸結(jié)構(gòu)為DNA折紙結(jié)構(gòu)。
4. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述對(duì)象為物質(zhì)、微生物或細(xì)胞。
5. 如權(quán)利要求4所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述微生物選自病毒、細(xì)菌、真菌、寄 生蟲(chóng)、古細(xì)菌、海藻和原生生物組成的組。
6. 如權(quán)利要求4所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述物質(zhì)選自肽、多肽、朊病毒、脂 質(zhì)、脂質(zhì)復(fù)合物、核酸、碳水化合物、過(guò)敏原、毒素、激素、抗體、藥物、小分子、污染物和礦物 質(zhì)組成的組。
7. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架用于允許直徑為 0. 01-50 μ m的對(duì)象選擇性的流入。
8. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架用于允許直徑為 0. 01-0. 08 μ m的對(duì)象選擇性的流入。
9. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述活性部分能夠結(jié)合所述對(duì)象。>
10. 如權(quán)利要求9所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述活性部分選自抗體、適體、受 體、螯合劑、配體、脂質(zhì)體、納米管、樹(shù)狀分子、原細(xì)胞、細(xì)胞、肽、蛋白質(zhì)、酶、化學(xué)品、清潔劑、 毒素、藥物和藥物前體組成的組。
11. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述活性部分能夠裂解所述對(duì)象或 使所述對(duì)象變形。
12. 如權(quán)利要求11所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分選自酶、核 糖酶、化學(xué)品、酸、堿和清潔劑組成的組。
13. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分連接到所述 支架。
14. 如權(quán)利要求13所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分通過(guò)連接 體連接所述支架。
15. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架在脊椎動(dòng)物中基本為非免 疫原性的。
16. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架為非脂質(zhì)支架。
17. 如權(quán)利要求I5所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架包括PEG或PEG衍生物， 或者包括透明質(zhì)酸。
18. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架形成一個(gè)具有內(nèi)部腔體的 顆粒。
19. 如權(quán)利要求18所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分設(shè)置于所 述腔體內(nèi)。
20. 如權(quán)利要求18所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分在所述腔 體內(nèi)連接所述支架。
21. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分在與所述對(duì) 象相互作用下能夠釋放分子。 >
22. 如權(quán)利要求21所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述分子選自標(biāo)志物、毒素、激素、 藥物、核酸、蛋白質(zhì)和佐劑組成的組。
23. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架進(jìn)一步包含^向部分。
24. 如權(quán)利要求23所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述靶向部分選自受體、抗體、適 體、組織特異性部分、微生物特異性部分、配體和磁體組成的組。
25. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述至少一個(gè)活性部分與位于所述 支架上的一種載體相連接。
26. 如權(quán)利要求25所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述載體陷入所述支架內(nèi)。
27. 如權(quán)利要求2所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述結(jié)構(gòu)為微電子機(jī)械系統(tǒng)(MEMS) 結(jié)構(gòu)。
28. 如權(quán)利要求4所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述結(jié)合部分能夠使配體非內(nèi)生性 結(jié)合到所述微生物。
29. 如權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物，其特征在于，所述支架進(jìn)一步包括至少一個(gè)免疫 調(diào)整部分。
30. -種藥物組合物,包含權(quán)利要求1所述的物質(zhì)組合物和藥學(xué)上可接受的載體。
31. 如權(quán)利要求30所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥學(xué)上可接受的載體被挑選 出來(lái)以適合口服、粘膜、外用或全身給藥。
32. -種從流體分離對(duì)象的方法，包括，將所述流體暴露在物質(zhì)組合物下，所述物質(zhì)組 合物包括由支架包圍的至少一種活性部分，所述支架用于對(duì)象的選擇性流入，所述對(duì)象能 夠與所述至少一種活性部分相互作用，從而從所述流體中分離所述對(duì)象。
33. 如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述液體為生物流體。 34_如權(quán)利要求33所述的方法，其特征在于，所述將生物流體暴露在物質(zhì)組合物下是 通過(guò)給受試者服用所述物質(zhì)組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)。 3δ·如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述液體為含水流體。
36. -種分離的多核苷酸，包括SEQ ID NO :209-476中提出的序列。 3L -種微粒，包含權(quán)利要求36所述的分離的多核苷酸。
38. -種分離的多肽，包括SEQ ID NO :477-485中提出的序列。
39· -種微粒，包括權(quán)利要求38所述的分離的多肽。
【文檔編號(hào)】C07K16/00GK104203092SQ201280051213
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2012年8月23日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月26日
【發(fā)明者】埃雷茲·阿哈龍·利夫內(nèi) 申請(qǐng)人:維科納米醫(yī)藥有限公司