專利名稱：：專性細(xì)胞內(nèi)病原體的治療和診斷的制作方法專性細(xì)胞內(nèi)病原體的治療和診斷本發(fā)明涉及檢測(cè)專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原體，例如衣嚴(yán)沐fC77/amyAa9、支嚴(yán)沐^^ycop/wmay>和厭嚴(yán)沐(77/^ap/asmaj禾中類。這可以用于，例如診斷和治療病原體感染和病原體感染相關(guān)的疾病。目前，病原性微生物診斷的常規(guī)檢測(cè)是基于宿主細(xì)胞的樣本，例如從拭子中獲得的。這些檢測(cè)獲得的結(jié)果可變性很高，改進(jìn)檢測(cè)病原體的方法是人們所期待的。本申請(qǐng)的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原體細(xì)胞可以在血液的非細(xì)胞成分例如血漿和血清中靈敏而可靠地檢測(cè)到。這些細(xì)胞，可以是原生小體，或者其他細(xì)胞形式，呈現(xiàn)出一種不能被常規(guī)檢測(cè)可靠檢出的獨(dú)特病原體持久形式。在患者血漿和血清中檢測(cè)這些病原體細(xì)胞可用于發(fā)現(xiàn)病原體感染和評(píng)估病原體相關(guān)疾病病況。本發(fā)明的一些方面涉及評(píng)估個(gè)體遭受病原體感染的方法，其包括測(cè)定從個(gè)體獲得的血液樣本中病原體細(xì)胞的存在。病原體細(xì)胞的存在可以指示病原體感染。病原體細(xì)胞可以包括專性細(xì)胞內(nèi)病原性微生物持久形式的原生小體。優(yōu)選的，細(xì)胞的存在通過測(cè)定血液樣本中病原性微生物中核酸的存在而被測(cè)定。一種方法可進(jìn)一步包括濃縮或富集樣本中的病原體細(xì)胞，例如原生小體，例如采用特異性結(jié)合元件以產(chǎn)生富集或濃縮的部分。一種評(píng)估個(gè)體感染專性細(xì)胞內(nèi)病原性微生物持久形式的方法可以，例如，包括使來自個(gè)體的血液樣本與特異性結(jié)合元件接觸，以分離或純化所述樣本的部分，并且；在所述部分中測(cè)定病原性微生物核酸的存在。分離和/或純化的部分可包括提高了濃度的與血液樣本有關(guān)的病原性微生物的原生小體或其他持久形式的細(xì)胞。樣本或分離部分中病原性微生物核酸的存在指示樣本或分離和/或純化的部分包括病原性微生物的原生小體或其他持久形式的細(xì)胞，并且個(gè)體被一種專性細(xì)胞內(nèi)病原性微生物的持久形式感染。優(yōu)選的用于本發(fā)明這些方面的特異結(jié)合分子包括抗體和片段或者其衍生物('抗體分子')。采用特異結(jié)合元件例如抗體分離和/或純化樣本的部分和成分可以通過任何合適的技術(shù)實(shí)現(xiàn)并且本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)他們的偏愛和公知常識(shí)而選擇合適的方式。在一些優(yōu)選實(shí)施方式中，原生小體或其他病原體細(xì)胞的存在可以在血液樣本(即在血漿或血清中)的非細(xì)胞部分中檢測(cè)到。非細(xì)胞部分可被包含在全血樣本中或者在檢測(cè)之前從全血樣本中分離以產(chǎn)生非細(xì)胞血液樣本(S卩一種血漿或血清樣本)。這里所描述的方法包含從個(gè)體獲得的血液中提供一個(gè)非細(xì)胞樣本(即一種非細(xì)胞血液樣本)。一種非細(xì)胞血液樣本是一種來自個(gè)體的血液樣本，其不含有個(gè)體的血細(xì)胞，即其它沒有紅血細(xì)胞，白血細(xì)胞，血小板和在血液中發(fā)現(xiàn)的其他宿主細(xì)胞。一種非細(xì)胞血液樣本可以，例如，是一個(gè)包含凝血因子的血漿樣本，或者一個(gè)缺少凝結(jié)因子的血清樣本。一種非細(xì)胞血液樣本可以通過從來自個(gè)體的血液樣本中去除血細(xì)胞而產(chǎn)生。血細(xì)胞可通過任何常規(guī)方法從血液樣本或制品中去除。例如，細(xì)胞可以通過離心去除，通常在2,000gIO分鐘，或通過過濾，例如通過柱、膜、濾器或其他分離裝置。病原體細(xì)胞是病原性微生物的單個(gè)單位并且包括原生小體，網(wǎng)狀小體和其它形式的微生物。持久感染是指其中病原體沒有被宿主應(yīng)答或藥物治療清除，而仍然存在于被感染個(gè)體的特異細(xì)胞中或結(jié)合在膜上的感染。這里所述的評(píng)價(jià)個(gè)體可以是哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類。個(gè)體可以是健康的，即沒有表現(xiàn)出病原體感染或者病原體相關(guān)疾病的癥狀(即無癥狀的)，或者可以顯示一種或多種與病原體感染或者病原體相關(guān)疾病有關(guān)的癥狀。在一些實(shí)施方式中，個(gè)體被懷疑患有或者有風(fēng)險(xiǎn)患上某種病原體感染或者相關(guān)疾病。樣本可以與特異結(jié)合元件接觸，其結(jié)合到包含一個(gè)或多個(gè)血漿/血清分子的復(fù)合物以分離和/或純化包含一個(gè)或多個(gè)所述復(fù)合物的部分。一個(gè)或多個(gè)血漿/血清分子可以是抗體，而復(fù)合物可以是一種免疫復(fù)合物。特異結(jié)合元件可以結(jié)合到免疫球蛋白上，并因此結(jié)合樣本中的免疫復(fù)合物。合適的特異結(jié)合元件包括蛋白A，或抗-Ig、抗-IgA、抗-IgM抗體，或其他免疫球蛋白或免疫復(fù)合物結(jié)合/捕獲分子。一個(gè)或更多血漿/血清分子可以是血清脂蛋白或脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)。特異結(jié)合元件與這些血清脂蛋白或脂多糖結(jié)合蛋白結(jié)合，例如抗-脂蛋白或抗-LBP抗體。病原體細(xì)胞優(yōu)選一種專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物，特別是專性細(xì)胞內(nèi)病原性細(xì)菌的持久形式。例子包括衣原體中類的細(xì)菌，例如^^炎衣/資'沐pwewmom'aeJ或^、/^^"嚴(yán)沐frac/zowa&J，或支原體科種類，例如一種支原體例如生^"支嚴(yán)沐^^co;/asmage""a//ww」，或者一種脲原體例如》,^^^辰沐ft/rea//<xsm<afwea(y"cwmJ。細(xì)胞可以是，例如，一種呼吸道病原體，例如^敲炎衣嚴(yán)沐p"ewmom'aeJ或者一種生殖或尿道病原體，例如汐^衣嚴(yán)沐fC.Zrac/2。顧toJ、生遭支嚴(yán)沐(M戸//as腸gem'to//—或,,,嚴(yán)沐例如，一種評(píng)估個(gè)體衣原體感染的方法可以包括測(cè)定從個(gè)體獲得的血液樣本中衣原體細(xì)胞的存在。衣原體可以是,，炎衣嚴(yán)體戶wmom'G"或^、淑衣嚴(yán)沐frac/wm"toJ細(xì)胞。在病原體是/《炎^"嚴(yán)沐;"^mom'ad的實(shí)施方式中，血液樣本優(yōu)選這里所描述的非細(xì)胞血液樣本。一種評(píng)估個(gè)體支原體科感染的方法可以包括測(cè)定從個(gè)體獲得的血液樣本中支原體細(xì)胞的存在。支原體科細(xì)胞可以包括支原體或脲原體細(xì)胞。支原體細(xì)胞可以是f遭:^嚴(yán)沐fMycop/aswagem'to//w—細(xì)胞。脲原體細(xì)胞可以是嚴(yán)嚴(yán)沐ft/rea//a環(huán)aMrea(y"cwmJ細(xì)胞。這里所描述的方法可用于評(píng)估病原體相關(guān)疾病或病況。一種評(píng)估個(gè)體病原體相關(guān)疾病的方法可以包括測(cè)定從個(gè)體獲得的血液樣本中病原體細(xì)胞的存在。病原體細(xì)胞的存在指示病原體相關(guān)疾病或病況的存在。評(píng)估個(gè)體病原體相關(guān)疾病可以包括在個(gè)體中診斷病原體相關(guān)疾病；在個(gè)體中測(cè)定病原體相關(guān)疾病的存在；或在個(gè)體中檢測(cè)病原體相關(guān)疾病。在其他實(shí)施方式中，可以評(píng)估個(gè)體中病原體相關(guān)疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后或者可以確定個(gè)體在未來患上病原體疾病的風(fēng)險(xiǎn)。與,炎衣嚴(yán)^(T.，ewmom'a"相關(guān)的疾病可以包括呼吸、關(guān)節(jié)、大腦或血管疾病，包括，例如，動(dòng)脈粥樣硬化的病況。一種動(dòng)脈粥樣硬化的病況可以包括心血管疾病，例如動(dòng)脈粥樣硬化、缺血性心臟病(冠心病)、心肌缺血(心絞痛)、心肌梗塞、動(dòng)脈瘤疾病、外周血管粉瘤病、主動(dòng)脈骼動(dòng)脈疾病、慢性臨界下肢缺血、內(nèi)臟缺血、腎動(dòng)脈疾病、腦血管疾病、中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化視網(wǎng)膜病、血栓癥和異常血凝，以及高血壓。這些病況可以是醫(yī)學(xué)或者獸醫(yī)學(xué)的病況。與^、^T衣嚴(yán)沐^Wrac/zom油'W相關(guān)的疾病包括例如陰道、宮頸、子宮內(nèi)膜、輸卵管、前列腺、膀胱、尿道的慢性炎癥和生殖功能紊亂，或關(guān)節(jié)病。與支原體和脲原體相關(guān)的疾病包括肺炎或其他呼吸疾病，子宮、陰道、宮頸、子宮內(nèi)膜、輸卵管、前列腺、膀胱、尿道的慢性炎癥和生殖功能紊亂。適合采用本方法檢測(cè)的個(gè)體可以顯示急性生殖器感染癥狀。本方法可以在常規(guī)PCR拭子或尿檢中被診斷為陽性的患者確認(rèn)病原體感染的存在，嚴(yán)沐0#^^,嚴(yán)沐r^rea;/^ma)f^p.)，或者在常規(guī)PCR拭子或尿檢中被診斷為陰性的患者中確定感染的存在。其它適合于這里所描述的檢測(cè)的個(gè)體可以不顯示急性生殖器感染癥狀，但是可以顯示子宮、輸卵管、前列腺、膀胱、尿道等的慢性炎癥癥狀。這些患者通常在常規(guī)PCR拭子或尿檢中被診斷為陰性。采用本方法對(duì)病原體例如^、/^凌嚴(yán)沐fC7z/am_y<i/"frac/zcwa^、J、主M"^"嚴(yán)沐("Afyco//(a^wagemW,—、ifi厥嚴(yán)沐WWi嚴(yán)沐ft/層//(xy腸w層/,.c謂JJ>的陽性檢測(cè)將確認(rèn)慢性感染的存在。其它適合于這里所描述的檢測(cè)的個(gè)體可以是有不孕不育問題而不能排除生殖系統(tǒng)存在慢性無癥狀炎癥的人。病原體例如沙淑衣嚴(yán)體fC7/函—,afrac/zo扁"d、-生遭支嚴(yán)沐(71^0//<3纖0g簡(jiǎn)W/畫J、i乂桑沐n,/^l^嚴(yán)沐wrea(y"cwmJJ(^7p.)與f荒產(chǎn)有關(guān)，因lt匕用本方法檢測(cè)出感染可用于治療不孕不育問題。這里所描述的方法還可以用于監(jiān)控和檢驗(yàn)治療后病原體感染的消除和防止病原體感染的傳播，例如源自常規(guī)檢測(cè)為陰性而本方法檢測(cè)為陽性的個(gè)體的輸血或其血液制品的使用。優(yōu)選的，病原體細(xì)胞在樣本中的存在，例如一種原生小體，通過濃縮、分離和/或純化樣本中的病原體細(xì)胞而被評(píng)估，例如在檢測(cè)之前產(chǎn)生一種富集原生小體或其他病原體細(xì)胞的分離和/或純化的部分。在某些實(shí)施方式中，樣本通過分離、純化和/或濃縮包含原生小體和其它病原體細(xì)胞的樣本中的復(fù)合物，或者包含這樣復(fù)合物的樣本部分而被濃縮。在分離的、純化和/或濃縮的復(fù)合物中的病原體細(xì)胞于是可以被測(cè)定。包含病原體細(xì)胞，例如原生小體或其他形式病原體細(xì)胞的復(fù)合物可進(jìn)--步包含一種或多種血漿/血清分子，例如免疫球蛋白分子、血清脂蛋白、脂多糖結(jié)合蛋白或其他存在于血清和/或血漿中的細(xì)菌結(jié)合分子。例如，原生小體或其他病原體細(xì)胞可以被包含在具有一種或更多抗體的免疫復(fù)合物中。細(xì)胞可以通過分離、純化和/或濃縮來自所述樣本的免疫復(fù)合物而被濃縮，例如利用一種免疫球蛋白結(jié)合試劑。在本領(lǐng)域中有很多技術(shù)用于分離和/或純化復(fù)合物并且可以用于濃縮原生小體或其它病原體細(xì)胞。這些包括物理和化學(xué)/生物技術(shù)和其組合。例如，樣本可以和免疫球蛋白結(jié)合試劑，例如蛋白A或一種抗Ig抗體相接觸，未結(jié)合的材料被清除或洗掉。結(jié)合到試劑的免疫復(fù)合物可采用常規(guī)技術(shù)洗提或直接檢測(cè)病原體細(xì)胞的存在?；蛘?，樣本可以通過過濾，例如采用硅凝膠柱。或其他具有合適的孔徑尺寸適合于保留病原體細(xì)胞和/或其復(fù)合物的合適的濾器。在樣本或其濃縮部分中的原生小體或其它病原體細(xì)胞可通過任何常規(guī)方法測(cè)定。例如，免疫化學(xué)檢測(cè)(例如，ELISA)，或核酸檢測(cè)(例如，PCR)，細(xì)胞培養(yǎng)方法，或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。在某些實(shí)施方式中，細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)可用于檢測(cè)樣本中病原體細(xì)胞的存在。樣本可以，例如，在適合于被檢測(cè)樣品中的病原體和病原體細(xì)胞生長的條件下培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定病原性微生物，例如,炎玄嚴(yán)沐fC戸e^7。m'a"、#、/^衣屑-沐(TC.frac/zo附a"sJ、生^"支嚴(yán)沐(^fyco//os附age""a/Zwmj禾口角軍脲脲原體(J^^厭嚴(yán)體a/"a;/a^^wea/;;"CMm"的技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。在其他實(shí)施方式中，一種非人動(dòng)物模型可以被用于檢測(cè)樣本中病原體細(xì)胞的存在。一種動(dòng)物模型，例如一種嚙齒類，可以被灌輸所述樣本并且在所述動(dòng)物模型中測(cè)定病原體感染的存在。動(dòng)物中感染的存在指示樣本中病原體細(xì)胞的存在。在其他實(shí)施方式中，一種免疫化學(xué)檢測(cè)(例如，ELISA)可以用于檢測(cè)樣本中病原體細(xì)胞抗原的存在。例如，一種在血液樣本中測(cè)定病原體細(xì)胞存在的方法可以包括使樣本與一種特異結(jié)合病原體細(xì)胞的抗體接觸；以及，測(cè)定所述抗體的結(jié)合。特異性結(jié)合病原體細(xì)胞的抗體可以與病原體細(xì)胞的特征性抗原結(jié)合并且不會(huì)顯示與其他病原體種類細(xì)胞的明顯結(jié)合。特異性結(jié)合病原體，例如#炎衣辰沐/we謂謹(jǐn)'aeJ、沙淑衣嚴(yán)沐Zrac/70謹(jǐn)"sJ>、主遭支抗體是本領(lǐng)域公知的?？贵w分子的結(jié)合可以通過任何合適的方法測(cè)定。標(biāo)記各個(gè)報(bào)道分子是一個(gè)可行的方法。報(bào)道分子可以直接或間接產(chǎn)生可檢測(cè)，優(yōu)選可測(cè)量的信號(hào)。報(bào)道分子的連接可以是直接或間接的，共價(jià)的，例如通過肽鍵，或者非共價(jià)的。經(jīng)過肽鍵的連接可以是編碼抗體和報(bào)道分子的基因融合重組表達(dá)的結(jié)果。例如，抗體可采用熒光團(tuán)標(biāo)記，例如FITC或若丹明，一種放射性同位素，或一種非同位素標(biāo)記試劑，例如生物素或地高辛；含有生物素的抗體可以通過"檢測(cè)試劑"，例如共扼在預(yù)定標(biāo)記例如熒光染料上的抗生物素蛋白來檢測(cè)。在某些實(shí)施方式中，另一種抗體可以被加入來檢測(cè)第一抗體的結(jié)合。測(cè)定結(jié)合的模式不是本發(fā)明的特征，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)他們的偏愛和公知常識(shí)選擇合適的模式。合適的方法包括免疫組化染色、免疫細(xì)胞化學(xué)染色、蛋白印跡(WesternBlotting)、免疫熒光/酶聯(lián)免疫吸收檢測(cè)(ELISA)/放射免疫檢測(cè)(RIA)、免疫放射檢測(cè)(IRMA)和免疫酶檢測(cè)(IEMA)，包括釆用單克隆和/或多克隆抗體的夾心檢測(cè)。所有這些方法是本領(lǐng)域公知的。用于這里所描述的方法中的抗體可以是固定或非固定的，即在溶液中游離的。在優(yōu)選實(shí)施方式中，一種核酸檢測(cè)被用于檢測(cè)核酸的存在，例如來自樣本中的病原體的DNA或RNA。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，核酸可以是分離或提取自樣本的。優(yōu)選地，核酸被非特異的分離或提取，即樣本中所有的核酸被從樣本的其它成分，例如蛋白質(zhì)中純化和/或去除。在分離或提取的核酸中病原體核酸的存在隨一種方法可以，例如，包括從個(gè)體中獲得的血液樣本中分離和/或純化復(fù)合物，例如免疫復(fù)合物，從復(fù)合物中分離和/或提取DNA，并且；在提取的核酸中檢測(cè)病原體核酸的存在。從樣本中提取核酸的很多合適方法是本領(lǐng)域公知的并且被采用，包括硅凝膠膜柱，例如QIAampDNA血液袖珍試劑盒(QIAGen)、Chelex螯合樹脂(Chelex100，Sigma)、或者高純度PCR模板制備試劑盒(BMkit，Boehringer)等。DNA還可以通過常規(guī)的蛋白酶K苯酚氯仿方法提取。RNA可以，例如，采用Trizol方法(Invitrogen)常規(guī)分離。用于處理核酸的技術(shù)和方法，包括提取，分離和純化核酸在以下文獻(xiàn)中被詳細(xì)公開CurrentprotocolsinMolecularBiology，Ausubel等，eds.JohnWiley&Sons,1992，禾口MolecularCloning:aLaboratoryManual:3rdedition,Russell等.，2001，ColdSpringHarborLaboratoryPress。樣本中病原體核酸的存在可以核酸提取后隨意被測(cè)定，可采用任何合適的技術(shù)，包括核酸擴(kuò)增(NAA)技術(shù)和非核酸擴(kuò)增技術(shù)，包括DNA探針雜交技術(shù)例如Northern禾PSouthern印跡。在一些優(yōu)選實(shí)施方式中，病原體核酸的存在通過核酸擴(kuò)增技術(shù)，例如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)而被測(cè)定。PCR包括模板核酸的變性，引物和模板的退火，以及引物隨模板的延伸這些重復(fù)的循環(huán)過程。PCR是本領(lǐng)域公知的，并且在例如"PCR方案；AGuidetoMethodsandApplications",Eds.Innis等，1990，AcademicPress,NewYork,Mullis等，ColdSpringHarborSymp.Quant.Biol.，51:263，(1987)，Ehrlich(ed)，PCRtechnology,StocktonPress,NY，1989，和Ehrlich等，Science,252:1643-1650，(1991))中被公開。循環(huán)的數(shù)量，每一步的具體條件，反應(yīng)管中試劑的組成，或任何其他反應(yīng)的參數(shù)可以由本領(lǐng)域人員根據(jù)情況作出變化或調(diào)節(jié)。附加的步驟(例如初始變性，熱啟動(dòng)，觸地，酶延吋釋放PCR，重復(fù)PCR)也可以被采用。PCR的變種包括嵌套PCR，其中第二次擴(kuò)增采用來自第一次擴(kuò)增產(chǎn)品之內(nèi)的第二對(duì)引物，和RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄酶PCR)，在其中RNA被逆轉(zhuǎn)錄成cDNA并隨后采用PCR擴(kuò)增。實(shí)時(shí)PCR(或者實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄酶PCR)是一種高靈敏度檢測(cè)方法，其定量校板的起始數(shù)量(Arya等，2005，ExpertRevMolDiagn.5:209-219;Klein，2002，TrendsMolMed8:257-260)。在某些實(shí)施例中，可以采用實(shí)時(shí)PCR。PCR和RT-PCR的眾多變種和修飾種是本領(lǐng)域已知的，并且可以由本領(lǐng)域人員在實(shí)現(xiàn)本方法時(shí)采用。進(jìn)行PCR或RT-PCR反應(yīng)的化學(xué)藥品、試劑盒、原料和試劑是可商購的。其他特異的核酸擴(kuò)增技術(shù)包括鏈置換激活、QB復(fù)制酶系統(tǒng)、修復(fù)鏈反應(yīng)、連接酶連鎖反應(yīng)、結(jié)扎活化的轉(zhuǎn)錄、SDA(鏈置換擴(kuò)增)和TMA(轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增)。為了方便，并且因?yàn)樗ǔＪ莾?yōu)選的，這里上下文所用的術(shù)語PCR涵蓋了本領(lǐng)域技術(shù)人員所用的其他核酸擴(kuò)增技術(shù)。除非上下文中另有所指，PCR應(yīng)該覆蓋本領(lǐng)域可得到的任何合適的核酸擴(kuò)增反應(yīng)。病原體核酸的存在可以通過病原體特異擴(kuò)增而被測(cè)定。病原體特異擴(kuò)增僅僅發(fā)生在病原體核酸存在于樣本中時(shí)。隨著病原體特異擴(kuò)增產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物指示樣本中存在病原體細(xì)胞。病原體特異擴(kuò)增通常采用一種或更多病原體特異引物來實(shí)現(xiàn)，例如，在PCR中，一個(gè)或兩個(gè)引物可以與病原體核酸特異地雜交，這樣擴(kuò)增產(chǎn)物僅僅在樣本中存在病原體核酸時(shí)通過引物產(chǎn)生。利用PCR特異檢測(cè)樣本中病原體是本領(lǐng)域公知的并且本領(lǐng)域人員精通于設(shè)計(jì)合適的引物，反應(yīng)條件等。合適的引物包括具有10或更少密碼子的寡核苷酸(例如6、7或8)，即長度為大約30或更少核苷酸(例如18、21或24)。通常，特異引物的長度在14核苷酸以上，但是不需要多于18-20。各種軟件適合于設(shè)計(jì)引物，包括PrimerExpressTM、PrimerPremier5TM、FastPCRTM、Primo丁M和01igoTM。合成寡核苷酸引物的各種技術(shù)是本領(lǐng)域公知的，包括磷酸三酯和磷酸二酯合成方法。定制的寡核苷酸引物可以從各種商業(yè)來源獲得?；诂F(xiàn)有的序列信息，對(duì)于本領(lǐng)域人員來說設(shè)計(jì)僅僅擴(kuò)增來自特異病原體的核酸的合適引物是常規(guī)的，例如一種衣原體，例如#，炎衣嚴(yán)沐廣C.J或^、淑衣嚴(yán)沐rC.frac/zoma"d。對(duì)應(yīng)于來自特異病原體的核酸序列的引物特異性可以通過將引物序列與來自其他病原體的基因組核酸序列相比較而確定，例如，在序列數(shù)據(jù)庫中的基因組核酸序列。優(yōu)選地，來自系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)病原體的基因組核酸序列拿來與引物序列相比較。與來自系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)病原體的基因組核酸序列相比顯示出很少或者無序列相同的引物在針對(duì)這樣序列的擴(kuò)增條件下被預(yù)知是很少或不會(huì)雜交的，并且被認(rèn)為是對(duì)具體病原體特異的。例如，針對(duì)來自^^"炎衣嚴(yán)體^7z/w>y^/7"ewwom'ad核酸引物的特異性，可以通過將引物序列與來自衣原體科其它成員的基因組核酸序列相比較而確定。例如，引物的特異性可以通過將引物的靶DNA序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中其它細(xì)菌和真核有機(jī)體的DNA序列相對(duì)比而確認(rèn)。序列比較可以采用常規(guī)序列分析軟件進(jìn)行，例如BLAST,TBLASTN(其采用Altschul等人，(1990)/Mo/.腸/.215:405-410的方法)，psi-Blast(Nucl.AcidsRes.(1997)253389-3402)或者FASTA(其采用Pearson禾卩Lipman，(1988)/WASOS^85:2444-2448的方法)?；蛘?，針對(duì)特異病原體核酸序列的引物特異性，例如一種衣原體細(xì)胞，例如,，炎衣嚴(yán)沐rC7z/aw;^'a/3"ewwom'aeJ,可以通過采用引物在來自微生物平板的基因組核酸上進(jìn)行核酸擴(kuò)增而被測(cè)定。僅僅擴(kuò)增目標(biāo)病原體的基因組核酸的引物對(duì)于該病原體可能是特異的。許多種類的基因組序列是可獲得的并且可以被用于鑒別對(duì)于特異病原體獨(dú)一無二的核酸序列和可以用作設(shè)計(jì)病原體特異擴(kuò)增引物的靶標(biāo)。例如，,*炎衣嚴(yán)體rC/z/aw;^/a/wewwom'ae^的基因組，例如，具有數(shù)據(jù)庫參考值gil5835535，NC—002491.1;gil5617929，NC—000922.1;gi33241335，NC一005043.1;和gi58021288和NC—002179.2。其它病原體的基因組也可以從公共數(shù)據(jù)庫中獲得。針對(duì)一種病原體特異的引物在擴(kuò)增條件下與該病原體基因組內(nèi)的靶核酸序列雜交，該靶序列對(duì)于該病原體是獨(dú)一無二的并且在其他病原體中沒有發(fā)現(xiàn)，特別是在系統(tǒng)發(fā)育相關(guān)的病原體中，即引物在擴(kuò)增條件下除了靶病原體之外不會(huì)與其他病原體的基因組內(nèi)的核酸序列雜交。例如，/，炎衣嚴(yán)沐化.戸ewmm'ad特異引物在擴(kuò)增條件下不會(huì)與沙淤衣嚴(yán)體Zrac/wJ基因組中的序列雜交并且反之亦然，以及Mgem'to//ww特異引物在擴(kuò)增條件下不會(huì)與f/."r^/;^cMm基因組中的序列雜交。例如，fC77/am_yc//a/wewmom'aeJ牛寺異弓l物可以，例如，擴(kuò)增部分16SrRNA基因(數(shù)據(jù)庫登記號(hào)L06108.1GI:174111)或者/，炎衣嚴(yán)沐fC/wewmom'aeJ的om;^4基因的可變區(qū)域IV(VDIV)。針對(duì)厥炎衣嚴(yán)沐rr.戶ewwow'ad的16SrRNA基因的引物可以選自以下組成的組CPN90:5，GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG3'CPN91:5'TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT3'(Madico等，JClinMicrobiol.2000Mar;38(3):1085-93.)探針553:5'-CAAGTCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGC-3'探針557:5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'5，TTACAAGCCTTGCCTGTAGG3'5'GCGATCCCAAATGTTTAAGGC3'5,TTATTAATTGATGGTACAATA3'5'ATCTACGGCAGTAGTATAGTT3'CpnA5'TGACAACTGTAGAAATACAGC3'CpnB5'CGCCTCTCTCCTATAAAT3'針對(duì)/*炎衣/f#TC./"ewwom'ae9的om/」基因的可變區(qū)域IV(VDIV)的引物可以選自以下組成的組Cpn5P:5'CCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAA3'Cpn3P:5'CTAGATTTAAACTTGTTGATCTGACAG3'Cpn5N5'CTCTGTAAACAAACCGGGC3'Cpn3N5'GATCTGACAGGAAACAATTTGCAT3'克隆的HL15'GTTGTTCATGAAGGCCTACT3'HR15'TGCATAACCTACGGTGTGTT3'(Nested)CP15'TTACAAGCCTTGCCTGTAGG3'CP25'GCGATCCCAAATGTTTAAGGC3'CPC5'TTATTAATTGATGGTACAATA3'CPD5'ATCTACGGCAGTAGTATAGTT3'#、淑衣嚴(yán)體fC7z/a^yAafrac/wwafeJ特異引物可以，例如，擴(kuò)增該病原體的部分隱蔽性質(zhì)粒(參見，例如，X06707.2GI:4691224)。合適的沙源衣辰沐fC7z/"w;^'a/rac/zow^/W特異引物包括.-CP24-5，GGGATTCCTGTAACAACAAGTCAGG3'CP27-5'CCTCTTCCCCAGAACAATAAGAAC3，.生遭支嚴(yán)沐(^>^^/"^^<^""0//^^特異引物可以，例如，擴(kuò)增全部或部分的140kDa粘著蛋白基因，MgPa(JensenJS等，J.Clin.Microbiol.1991Jan;29(1):46-50;M31431.1GI:150157)。合適的.生遭支嚴(yán)沐卩i^co//o纖agem'a"ww戶寺異引物包括MgPa-1-5'AGTTGATGAAACCTTAACCCCTTGG3'MgPa-3-5，CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3't/rea//a;wrea(y〃ca特異引物可以，例如，擴(kuò)增t/reflp/asma脲酶基因的全部或部分(BlanchardA等，ClinInfectDis.1993Aug;17Suppll:S148-53;AF085724.2GI:9967025)。合適的i>ea//asmawrea(y"ca特異引物包括Ul-5，GATGGTAAGTTAGTTGCTGAC3'U2-5,ACGACGTCCATAAGCAACT3，.隨著樣本病原體特異擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的存在可以被檢測(cè)。在病原體特異擴(kuò)增后擴(kuò)增產(chǎn)物的存在指示樣本中病原體細(xì)胞的存在。檢測(cè)核酸擴(kuò)增產(chǎn)物的多種技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。合適的技術(shù)，例如，包括凝膠或毛細(xì)管電泳、色譜、陣列雜交、鏈置換擴(kuò)增(SDA)或測(cè)序。擴(kuò)增的核酸產(chǎn)物的檢測(cè)和/或分離可以需要標(biāo)記核酸片段，在擴(kuò)增反應(yīng)的同時(shí)或隨后進(jìn)行。本發(fā)明的其他方面涉及提供用于在細(xì)胞或非細(xì)胞血液樣本中檢測(cè)病原體細(xì)胞的試劑盒，例如檢測(cè)病原體感染或評(píng)估與病原體相關(guān)的疾病。上面所描述的病原體特異引物可形成試劑盒的一部分，例如在一個(gè)合適的容器中，例如一個(gè)小瓶，在其中的內(nèi)容物被保護(hù)不受外界環(huán)境的干擾。用于檢測(cè)病原體感染或評(píng)估個(gè)體患有病原體感染相關(guān)疾病的試劑盒可以包括一個(gè)或多個(gè)病原體特異引物采用引物擴(kuò)增來自血清樣本中的病原體特異核酸所用的試劑，和；檢測(cè)采用引物擴(kuò)增的血清樣本的產(chǎn)物所用的檢測(cè)試劑。檢測(cè)試劑可包括緩沖溶液，清洗液等。試劑盒可進(jìn)一步包括用于轉(zhuǎn)移，處理和儲(chǔ)藏血液樣本的裝置和/或用于從血液樣本中轉(zhuǎn)移血細(xì)胞的工具。合適的的工具可以包括過濾裝置。試劑盒可進(jìn)一步包括用于分離和/或純化含有所述持久病原體感染的原生小體的血液樣本的部分的特異結(jié)合元件。合適的特異結(jié)合元件包括用于分離和/或純化血液樣本中中免疫復(fù)合物的免疫球蛋白結(jié)合試劑。免疫球蛋白結(jié)合試劑包括蛋白A和抗Ig抗體。免疫球蛋白結(jié)合試劑可以被固定在固相支持物或基質(zhì)上。試劑盒可進(jìn)一步包括用于分離和/或純化要采用所述引物擴(kuò)增的DNA的裝置。合適的裝置是本領(lǐng)域公知的，在這里不作描述。試劑盒還可以包括在血清樣本上使用病原體特異引物的說明，例如這里所述的檢測(cè)病原體感染或與病原體相關(guān)的疾病的方法。本發(fā)明的另一方面提供了一種分離專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式的細(xì)胞的方法，包括分離和/或純化從包含所述持久形式細(xì)胞的個(gè)體獲得的血液樣本的部分，分離和/或純化來自所述部分的所述細(xì)胞。細(xì)胞可以是微生物持久形式的原生小體。分離的原生小體或者其他細(xì)胞可以來自專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的持久形式，選自以下組成的組,，炎衣嚴(yán)沐fC.p"wmom^"、沙源衣嚴(yán)沐frflc/oma"s,、生M^嚴(yán)銜M戸p/as麵爐"a"—或,厥l屑沐fLVe"http://(xy附"wrea/_y〃cMmJ。分離的原生小體或持久形式微生物的其它細(xì)胞可能感染細(xì)胞以產(chǎn)生LPS缺陷和抗生素敏感的網(wǎng)狀小體，相對(duì)于所述微生物的參照菌株。分離的原生小體或其他細(xì)胞還可以具有非典型形態(tài)的小細(xì)胞內(nèi)含物。合適的專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的參照菌株包括^銀炎衣嚴(yán)沐pwewwom'aeJTW-183、AR-39、Kajaani6、沙凝衣嚴(yán)體frac/zomfl/^,Bu434、—生^"支嚴(yán)沐f^^co/7/asmagem'to"w附9G37禾口M30禾口Jf^",嚴(yán)沐0/reap/氾maweafy"ciw^血清型1至10。這些可以從商業(yè)培養(yǎng)收集中心中得至U(例如歐洲細(xì)胞培養(yǎng)收集中心(ECACC)，SalisburyUK)持久形式微生物的原生小體或其它細(xì)胞可采用常規(guī)濃縮技術(shù)分離和/或純化，例如吸附，過濾或超速離心法。在某些實(shí)施方式中，分離的原生小體或其他細(xì)胞可以來自^^炎衣嚴(yán)/,fC/z/amj^z'ap"ewwm'ae9的持久形式，其能感染細(xì)胞以產(chǎn)生不表達(dá)Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD，并且表達(dá)高水平Hsp60的網(wǎng)狀小體；并且相對(duì)于沙淑衣嚴(yán)沐fC7z/am;^afrac/zowa"J的參照菌株MOMP水平降低。在某些實(shí)施方式中，分離的原生小體或其他細(xì)胞可以來自^，炎玄嚴(yán)沐^^/fl^>^'p"wmom'ad的持久形式，其能感染細(xì)胞以產(chǎn)生不表達(dá)LPS的網(wǎng)狀小體并包含相對(duì)于/，炎^"屑'沐fC77/aw>^/ap"eMwom'aeJ參照菌株尺寸減小了的內(nèi)含物。本發(fā)明的另一方面提供了產(chǎn)生被專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式感染的宿主細(xì)胞的的方法，包括分離和/或純化來自包含所述持久形式的原生小體的個(gè)體的血液樣本部分，使一定種群的宿主細(xì)胞與部分接觸，并且鑒定在所述種群中的宿主細(xì)胞，其包含微生物的持久形式。專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的合適宿主細(xì)胞包括培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞例如McCoy、HL、Hep-2或HeLa細(xì)胞。鑒定后含有微生物持久形式，例如含有細(xì)胞內(nèi)網(wǎng)狀小體的形式的宿主細(xì)胞可以被分離和/或純化。鑒定后的宿主細(xì)胞可以被進(jìn)一步培養(yǎng)。培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法和技術(shù)是本領(lǐng)域公知的(參見，例如，BasicCellCultureProtocols'C.Helgason，H應(yīng)anaPressInc.U.S.(15Oct2004)ISBN:1588295451;HumanCellCultureProtocols(MethodsinMolecularMedicineS.)HumanaPressInc.,U.S.(9Dec2004)ISBN:1588292223;CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechnique,R.Freshney，JohnWiley&SonsInc(2Aug2005)ISBN:0471453293，HoWY等，JImmunolMethods.(2006)310:40-52)?？刹捎脴?biāo)準(zhǔn)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件，例如37。C、21%氧、5%二氧化碳。培養(yǎng)基優(yōu)選每?jī)商旄鼡Q并且細(xì)胞在重力作用下可以貼附。專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物可選自如下組成的組^"炎衣嚴(yán)沐戶e謂函.ae入沙淑波嚴(yán)沐fC.加c/z謹(jǐn)(3^y入主遭支屑浙Myc。//o顧gew/to/Zww」禾口i^^,嚴(yán)沐rt/reap/wwafwea(y"cwwJ，其在上文中更力口詳細(xì)描述過。本發(fā)明的另一方面提供了一種含有專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式的宿主細(xì)胞，其可通過上述的方法獲得。宿主細(xì)胞可包含一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞，以專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式的網(wǎng)狀小體形式，其與微生物的參照菌株相比抗生素敏感降低。專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式的網(wǎng)狀小體與所述微生物的參照菌株相比脂多糖可減少的或沒有。專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式的網(wǎng)狀小體與所述微生物的參照菌株相比可能基因表達(dá)有改變。在某些實(shí)施方式中，網(wǎng)狀小體可以不表達(dá)特定的基因，該基因通常被參照菌株表達(dá)，例如在一種急性形式的感染中，并且可以表達(dá)參照菌株不表達(dá)的基因。網(wǎng)狀小體還可以與參照菌株相比過表達(dá)、低表達(dá)或其他非正常表達(dá)其它的基因。例如，沙^在—嚴(yán)沐0^/"mj^7arac/20wa&9持久形式的網(wǎng)狀小體不表達(dá)Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD;并且，與^、^f衣嚴(yán)沐fCWamj^/afrac/wma"、J的參照菌株相比，表達(dá)Hsp60的水平提髙；而MOMP的水平降低。本發(fā)明的其他方面涉及篩選化合物的方法，這些化合物可用于治療這里所述的病原體感染相關(guān)的病況。一種篩選抗菌化合物的方法，可包含使感染了這里所述的專性細(xì)胞內(nèi)病原性微生物持久形式的宿主細(xì)胞與待測(cè)化合物接觸；并且測(cè)定所述化合物對(duì)所述宿主細(xì)胞中病原性微生物的作用，其中與對(duì)照相比所述宿主細(xì)胞中所述病原性微生物數(shù)量的減少指示待測(cè)化合物是一種抗菌化合物。優(yōu)選地，待測(cè)化合物對(duì)宿主細(xì)胞無毒。待測(cè)化合物的濃度范圍或制備可以首先認(rèn)定其對(duì)宿主細(xì)胞無毒。宿主細(xì)胞隨后與濃度范圍內(nèi)的待測(cè)化合物接觸以測(cè)定其對(duì)病原性微生物的作用。實(shí)現(xiàn)這里所述的方法的精確模式可以被那些本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)常規(guī)技術(shù)和知識(shí)作出改變。采用這里所述的方法篩選的化合物可以是天然的或用于藥物篩選程序化學(xué)合成的化合物。也可以采用含有幾種特征性或非特征性成分的植物、微生物或其他微生物的提取物。組合庫技術(shù)提供了有效的方法，其能夠檢測(cè)潛在的巨大數(shù)量的能夠調(diào)節(jié)一種相互作用的化合物。對(duì)于所有形式的天然產(chǎn)物，小分子和肽，及其他，這樣的庫及其用途是本領(lǐng)域公知的。在特定的情況下優(yōu)選肽庫。待測(cè)化合物數(shù)量或可被加入本發(fā)明方法中的化合物通常通過系列稀釋試驗(yàn)而確定。通常，可采用從大約0.001nM至1mM或更多假定的抑制劑化合物，例如從0.01nM至100pM，例如0.1至50pM，例如大約10(xM。一種方法可以包括鑒別待測(cè)化合物為一種抗菌化合物。這樣的化合物可以，例如，用于減少或消除這里所述微生物的感染，例如可用于如這里所述的治療感染或感染相關(guān)病況。一種采用一個(gè)或多個(gè)初步篩選鑒別出來的具有在所述宿主細(xì)胞中與對(duì)照相比能減少所述病原性微生物數(shù)量的能力的待測(cè)化合物，可以采用一個(gè)或多個(gè)二次篩選進(jìn)行進(jìn)一步的評(píng)估。二次篩選可以，例如，涉及在動(dòng)物模型中檢測(cè)其對(duì)微生物感染或?qū)εc微生物感染相關(guān)的疾病的作用。待測(cè)化合物可以被分離/或純化或者，它可以采用重組表達(dá)或化學(xué)合成的常規(guī)技術(shù)而合成。而且，它可以制造和/或用于制備，即，制造或配制一種組合物，例如藥劑、藥物組合物或藥物。這些可以給予個(gè)體用于治療微生物感染或與微生物感染相關(guān)的疾病。本發(fā)明的方法因此包含將待測(cè)化合物與藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或載體一起配制成藥物組合物用于治療用途，如下進(jìn)一步所述。在鑒定一種化合物具有抗菌活性之后，方法可進(jìn)一步包括修飾該化合物以優(yōu)化其藥物特性。對(duì)于鑒定為具有生物活性的"先導(dǎo)"化合物進(jìn)行修飾是藥物研發(fā)領(lǐng)域公知的方法并且對(duì)于很難合成或合成很昂貴的活性化合物或?qū)τ诓贿m于特定給藥方法的化合物來說是非常有用的，例如肽由于很容易被消化道中蛋白酶快速降解而不適合于制備口服組合物活性劑。對(duì)一種已知活性化合物的修飾(例如，產(chǎn)生擬似物)可以用于避免盲目篩選對(duì)應(yīng)于目標(biāo)特性的大量分子。對(duì)"先導(dǎo)"化合物修飾以優(yōu)化其藥學(xué)特性包括幾個(gè)步驟，首先，化合物對(duì)于確定目標(biāo)特性關(guān)鍵和/或重要的特有部分被測(cè)定。在肽的情況下，這可以通過系統(tǒng)改變肽中的氨基酸殘基而進(jìn)行，例如通過依次取代每個(gè)殘基。這些組成化合物活性區(qū)域的部分或殘基被稱為"藥效團(tuán)"。一旦藥效團(tuán)被發(fā)現(xiàn)，它的結(jié)構(gòu)根據(jù)其物理特性而被模型化，例如，立體化學(xué)、鍵、大小和/或電荷，采用多種來源的數(shù)據(jù)，例如分光鏡技術(shù)、X射線衍射數(shù)據(jù)和NMR。計(jì)算分析、相似性圖譜(其模擬藥效團(tuán)的電荷和/或體積，而不是原子之間的鍵)以及其它技術(shù)可以用于這種模擬過程。在這種方法的變體中，抗菌化合物的三維結(jié)構(gòu)被模擬。這特別適用于化合物改變構(gòu)象，允許模型在優(yōu)化先導(dǎo)化合物時(shí)考慮這一點(diǎn)。模板分子隨后被選擇，在其上嫁接模擬藥效團(tuán)的化學(xué)基團(tuán)。模板分子和嫁接在其上的化學(xué)基團(tuán)可被常規(guī)選擇以便修飾的化合物容易地合成，藥理學(xué)上能夠被接受，并且不在體內(nèi)降解，同時(shí)保持先導(dǎo)化合物的生物活性。通過這種方法發(fā)現(xiàn)的修飾化合物可以隨后進(jìn)行篩選以觀察它們是否具有目標(biāo)特性，或顯示目標(biāo)特性的程度。修飾的化合物包括先導(dǎo)化合物的擬似進(jìn)一步的優(yōu)化或修飾可以隨后進(jìn)行以獲得一種或多種最終化合物用于體內(nèi)或臨床試驗(yàn)。如上所述，鑒定的和/或采用本方法獲得的化合物可以配制在藥物組合雖然對(duì)于一種活性抗菌化合物有可能單獨(dú)給藥，優(yōu)選的是將其作為藥物組合物(例如制劑)呈現(xiàn)，其包含至少一種如上所限定的活性化合物，和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、佐劑、賦形劑、稀釋劑、填充劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、潤滑劑，或其他那些本領(lǐng)域公知的材料和任選的治療或預(yù)防劑。藥物組合物包含如上限定的抗菌化合物，例如，一種抑制劑與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、緩沖劑、佐劑、穩(wěn)定劑，或其他如這里所述的原料，相混合或配制在一起，可以被用于這里所描述的方法。術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"這里用于指化合物、原料、組合物和/或藥劑形式，其在合理的藥物判斷范圍之內(nèi)，適合于與主體(例如人)的組織接觸而沒有過多的毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)，或其他問題或并發(fā)癥，有相稱的合理益處/風(fēng)險(xiǎn)比例。每個(gè)載體、賦形劑等，在與其它組合物成分相一致的意義上，也必須是"可接受的"。合適的載體、賦形劑等可以在標(biāo)準(zhǔn)制藥手冊(cè)中找到，例如，Remington'sPharmaceuticalSciences,18thedition,MackPublishingCompany，Easton，Pa.，19卯。制劑可以常規(guī)地存在于單位藥劑形式中并且可以被制藥領(lǐng)域公知的任何方法制備。這樣的方法包括將活性化合物加入到載體中的步驟，載體組成了一種或更多必需的成分。通常，制劑通過將活性化合物均勻而密集的加入液體載體中或者充分分散入固體載體中或兩者均采用而被制備，然后如果需要該產(chǎn)物成形。制劑可以是如下形式液體、溶液、懸浮液、乳劑、酏劑、糖槳、片劑、錠劑、顆粒劑、粉劑、膠囊劑、扁囊劑、丸劑、針劑、栓劑、陰道栓劑、軟膏劑、凝膠劑、貼劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、合劑，泡沫劑、洗劑、油、大藥丸、干藥糖劑或氣霧劑。本發(fā)明的其他方面涉及采用這里所述的方法來治療和監(jiān)控與病原體相關(guān)的病況。一種治療病原體感染相關(guān)病況的方法可以包括給個(gè)體施用一種抗菌化合物；以及，在給藥之后在來自個(gè)體的血液樣本的非細(xì)胞部分中測(cè)定病原體細(xì)胞的存在。給予個(gè)體抗菌化合物可以重復(fù)進(jìn)行直到在血液樣本的非細(xì)胞部分中找不到病原體細(xì)胞。在血液樣本的非細(xì)胞部分中檢測(cè)病原體細(xì)胞的存在的方法在以上已經(jīng)詳細(xì)描述過了。病原體可以是專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的持久形式。一種治療專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久感染的方法可以包括i)給個(gè)體施用抗菌化合物；ii)在給藥之后從個(gè)體獲得血液樣本；iii)采用特異結(jié)合元件與所述血液樣本接觸以分離和/或純化所述樣本的部分，以及；(iii)在所述樣本的所述部分中測(cè)定病原性微生物核酸的存在；iv)重復(fù)步驟i)至iii)直到在來自樣本的部分中檢測(cè)不到來自病原性微生物的核酸。用于在樣本的所述部分中檢測(cè)病原性微生物中核酸存在的方法在以上已經(jīng)詳細(xì)描述過了。一種抗菌化合物殺死或抑制微生物的生長，特別是病原性細(xì)菌，例如C7z/謹(jǐn)—J7;.或A^yco//a扁齒ce"spp.。合適的抗菌化合物包括紅霉素、利福拉齊、羅紅霉素、氧氟沙星、克林沙星、環(huán)丙沙星、氯林可霉素、阿奇霉素、強(qiáng)力霉素、美滿霉素、四環(huán)素、莫昔沙星、利福平、coarithromycin、grepafoaxcin、左氟沙星、曲伐沙星、特利霉素、克拉霉素、喹諾酮類和/或其他氟喹諾酮、大環(huán)內(nèi)酯類、酮內(nèi)酯類，或來自其他組的抗菌藥物。病原體可以包括C7z/aw^/z'a例如^、;W^"嚴(yán)沐frac/zowm^J或#，炎^"嚴(yán)沐<TC./"e"wom'ae^，或者腳co/Axwatoce"spp.，例如一禾中支原體，例如—生/fj^嚴(yán)沐(^^co;/a^7a或脲原體，例如》f^,與這些病原體相關(guān)的疾病在以上已經(jīng)詳細(xì)描述過。例如，一種治療與病原體感染相關(guān)的性傳播感染或一種炎癥疾病，例如盆腔炎的方法可包括給予體一種抗菌化合物；并且，檢測(cè)在給藥之后從個(gè)體中獲得的血液樣本非細(xì)胞部分中病原體細(xì)胞的存在。性傳播的感染包括沙#,衣屑'沐fC.frac/zowa"s9或Mycop/aswafacec！spp.的感染。炎癥疾病，例如盆腔炎，可能與病原體，例如#、殿衣嚴(yán)沐《./rac/zoma/^J或aiVfycop/asAwafaceaspp.的感染相關(guān)。這里所述的方法可用于減少病原體例如沙淑波嚴(yán)沐fmc/zom油'd的假陰性診斷情況，通過提高其完成的概率來提高抗菌治療的效果和確保通過根除病原體例如C^Y7C/70WW^來防止感染慢性持久形式的發(fā)展。本發(fā)明的其他方面具體涉及采用這里所述的方法治療和監(jiān)控動(dòng)脈粥樣硬化的病況。動(dòng)脈粥樣硬化的病況與,炎衣嚴(yán)沐fC戶wmom'G"感染相關(guān)，并且，特別是，催化抗體，被稱為'抗體酶，，它氧化脂質(zhì)并且與7，炎衣嚴(yán)體;^e,wm^d反應(yīng)。動(dòng)脈粥樣硬化病況的有效治療還可以包括降低抗體酶水平的治療和減少或根除潛在的^，炎衣辰沐;7恥"wom'a"感染的治療。這里所述的對(duì)血液中厥炎衣嚴(yán)沐fC.戸ewwom'ad的檢測(cè)可用于鑒別適合于抗菌治療的個(gè)體，通過提高其完成的概率來提高抗菌治療的效果和通過確保根除^炎衣嚴(yán)沐rC./7"wmom'""以防止抗衣原體脂質(zhì)氧化抗體酶重現(xiàn)和動(dòng)脈粥樣硬化病況的發(fā)展。一種在個(gè)體中治療動(dòng)脈粥樣硬化病況的方法包括i)給予個(gè)體一種抗體酶抑制劑和一種抗菌化合物；ii)在施藥后從個(gè)體獲得一個(gè)血液樣本；iii)在血液樣本的非細(xì)胞部分中檢測(cè)抗體酶活性的水平；其中所述的給予個(gè)體抗體酶抑制劑被重復(fù)直至抗體酶的活性在非細(xì)胞部分中基本上沒有，并且iv)采用如上所述的方法檢測(cè)血液樣本非細(xì)胞部分中i^炎衣辰體/wewmo9原生小體或其他細(xì)胞的存在與否，其中所述的給予個(gè)體抗菌化合物被重復(fù)直至血液樣本非細(xì)胞部分中沒有#*炎衣嚴(yán)沐fC.pwewmom'aeJ原生小體或其他細(xì)胞?？贵w酶抑制劑是一種抑制催化抗體的脂質(zhì)氧化活性的化合物，例如在血清或血漿中的IgG分子。顯示脂質(zhì)氧化活性的催化抗體可以是抗-衣原體抗體。合適的抗體酶抑制劑包括阿齊霉素、lactolycopene、胡蘿卜素、a-生育酚、甲磺酰基去鐵敏、兒茶酚，例如EGCG、血紅素衍生物、青霉胺、硫普羅寧、曲恩汀二鹽酸鹽、二乙基二硫氨基甲酸酯、依地酸氫二鈉/三鈉、乙酰水楊酸、依地酸、酮內(nèi)酯類、二巰基丙醇磺酸鈉、a-生育酚、甘露醇、水飛薊寧、抗壞血酸和其他在低pH起作用的抗氧化劑。合適的抗菌化合物如上所述。在某些實(shí)施方式中，可以采用一種單一化合物，其既具有抗菌活性又具有抗體酶抑制劑活性。合適的化合物包括阿奇霉素和特利霉素(ketek)。例如，一種在個(gè)體中治療動(dòng)脈粥樣硬化病況的方法可以包括i)給予個(gè)體阿奇霉素；ii)在所述給藥后從個(gè)體獲得血液樣本；iii)在血液樣本的非細(xì)胞部分中檢測(cè)抗體酶活性水平，并且；iv)采用上述方法在血液樣本的非細(xì)胞部分中檢測(cè)/，炎衣嚴(yán)沐;9wewwom'fle;>細(xì)胞的存在與否，其中所述給予個(gè)體阿奇霉素被重復(fù)直至在來自個(gè)體的血液樣本非細(xì)胞部分中沒有抗體酶活性和i^炎^r嚴(yán)沐pwewmom'ad細(xì)胞?？贵w酶抑制劑和抗菌化合物可以作為藥物組合物給藥。除了活性的抗體酶抑制劑或抗菌化合物之外，一種藥物組合物可以包括，藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體、緩沖劑、穩(wěn)定劑或本領(lǐng)域公知的其他材料。這樣的材料應(yīng)該是無毒的并且應(yīng)該不干擾活性成分的效果。載體或其它材料的準(zhǔn)確特性應(yīng)該取決于給藥方式，其可以是口服，或者是注射，例如經(jīng)皮膚，皮下或靜脈。用于口服的藥物組合物可以是片劑、膠囊、粉末或液體形式。片劑可以包括一種固相載體，例如凝膠，或者一種佐劑。液體藥物組合物通常包括一種液體載體，例如水、石油、動(dòng)物或植物油、礦物油或合成油?？梢园ㄉ睇}溶液，葡萄糖或其他糖溶液或乙二醇例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。對(duì)于靜脈、皮膚或皮下注射，活性成分將處于注射藥物可接受的水溶液形式，其為無熱原質(zhì)的并且具有合適的pH、等滲并且穩(wěn)定。那些相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員利用，例如等壓媒介例如氯化鈉注射液、Ringer's注射液或LactatedRinger's注射液能夠制備合適的溶液。如果需要，可以包括防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/添加劑?？贵w酶抑制劑和/或抗菌化合物的給藥優(yōu)選"預(yù)防有效劑量"或者"治療有效劑量"(根據(jù)具體情況而定，雖然預(yù)防也可能被認(rèn)為是治療)，這對(duì)于個(gè)體足夠顯示益處。實(shí)際的給藥量，以及給藥的速度和時(shí)間安排將取決于所治療情況的性質(zhì)和嚴(yán)重性。治療的處方，例如劑量等的決定，是一般醫(yī)學(xué)從業(yè)者和其他醫(yī)生的職責(zé)范圍內(nèi)。在一些優(yōu)選實(shí)施方式中，抗體酶抑制劑和/或抗菌化合物周期性地給予體，例如，每小時(shí)、每天、每周、每?jī)芍芑蛎總€(gè)月。周期性給藥將持續(xù)直至發(fā)現(xiàn)抗體酶活性和/或病原體細(xì)胞在來自個(gè)體的血液樣本中減少或者消失。血液樣本可以從個(gè)體中周期性地獲得，例如每天、每周、每?jī)芍芑蛎總€(gè)月，當(dāng)個(gè)體正在進(jìn)行抗體酶抑制劑和/或抗菌化合物治療時(shí)，并且樣本中的抗體酶活性水平和/或病原體細(xì)胞的存在被測(cè)定。來自個(gè)體的血液樣本非細(xì)胞部分中抗體酶的活性水平可以通過檢測(cè)部分中抗體介導(dǎo)的脂質(zhì)氧化活性而被測(cè)定，特別是部分中由抗衣原體抗體介導(dǎo)的脂質(zhì)氧化活性。例如，一種抗體，優(yōu)選一種來自樣本的血清或血漿部分衣原體結(jié)合抗體，可以被檢測(cè)其氧化脂質(zhì)的能力。脂質(zhì)氧化活性，包括脂質(zhì)過氧化活性，可以通過檢測(cè)(例如通過檢測(cè)或測(cè)量)宿主脂質(zhì)(即來自樣本的脂質(zhì))的氧化而測(cè)定，來自外源抗原例如一種衣原體細(xì)胞的脂質(zhì)，例如一種衣原體細(xì)胞，或者來自另一種來源的脂質(zhì)，例如可作為檢測(cè)方法的部分加入。脂質(zhì)氧化可以通過檢測(cè)產(chǎn)物或副產(chǎn)物的堆積而被測(cè)定，例如共氧化的偶聯(lián)報(bào)道分子或者底物的消失或消耗例，如非修飾的脂質(zhì)或共同底物，例如氧。測(cè)定脂質(zhì)過氧化的很多方法是本領(lǐng)域公知的并且適合用于本發(fā)明。測(cè)定脂質(zhì)氧化的精確模式并非本發(fā)明的特征，并且本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠根據(jù)他們的偏愛和公知常識(shí)選擇合適的模式。合適的方法是，例如，公開于如下文獻(xiàn)CRCHandbookofMethodsforOxygenRadicalResearch,CRCPress,BocaRaton，F(xiàn)lorida(1985)，OxygenRadicalsinBiologicalSystems。MethodsinEnzymology，v.186，AcademicPress,London(1990);OxygenRadicalsinBiologicalSystems。MethodsinEnzymology,v.234，AcademicPress,SanDiego，NewYork,Boston,London(1994);以及FreeRadicals.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996)。在優(yōu)選實(shí)施方式中，氧化通過檢測(cè)脂質(zhì)氧化產(chǎn)生的產(chǎn)物(即存在或數(shù)量)而測(cè)定。在其中氧化起始的氧化產(chǎn)物和/或脂質(zhì)媒介可以被測(cè)定或者在其中氧化被傳播的氧化產(chǎn)物和/或脂質(zhì)媒介可以被測(cè)定。一種合適的脂質(zhì)氧化產(chǎn)物可以包括醛例如丙二醛(MDA)、(脂質(zhì))過氧化物、二烯烴交聯(lián)物或碳?xì)錃怏w。脂質(zhì)氧化產(chǎn)物可采用合適的方法測(cè)定。例如，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物可采用HPLC測(cè)定(Brown，R.K.，禾口Kelly，F(xiàn).JIn:FreeRadicalss.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996)，119-131)，UV光譜(Kinter，M.Quantitativeanalysisof4-hydroxy-2-nonenal.Ibid.，133-145)，或者氣相色譜質(zhì)譜(Morrow，J.D.，andRoberts，L.J.F2-Isoprostanes:prostaglandin-likeproductsoflipidoreoxidation.Ibid.，147-157)。脂質(zhì)的過氧化可導(dǎo)致蛋白、糖類、核酸和其它類型分子的氧化。這樣的氧化產(chǎn)物也可以被用于直接檢測(cè)抗體酶的活性。此外，過氧化可導(dǎo)致與傳播脂質(zhì)氧化相關(guān)的報(bào)道分子特性的改變。如下所述，報(bào)道分子可以在這些脂質(zhì)中被包封，例如成脂質(zhì)體，而報(bào)道分子從脂質(zhì)體中的釋放指示氧化。合適的報(bào)道物質(zhì)和分子可以包括完整的發(fā)光細(xì)菌、發(fā)光氨、光澤精、穿石貝素和蟲熒光素。這樣的物質(zhì)可以，例如，被偶聯(lián)至H202/02'—/02-利用分子，例如過氧化物酶、酯酶、氧化酶、熒光素酶、過氧化氫酶、超氧化物酶歧化酶、二萘嵌苯、NAD+以及丫啶酯雙(三氯苯基)草酸酯(CampbellA.K.Chemiluminescence.VCH，EllisHorwoodLtd.,England,1988)。其它易受自由基鏈反應(yīng)影響的材料也可以用于檢測(cè)脂質(zhì)氧化。例如，脂質(zhì)過氧化，作為一個(gè)鏈過程，起始和增強(qiáng)丙烯酰胺的聚合。脂質(zhì)氧化因而可以通過檢測(cè)"C-丙稀酰胺的共聚合而被測(cè)定(KozlovYuP.(1968)RoleofFreeRadicalsinnormalandpathologicalprocesses.Doctoratethesis-MGUMoscow1968)。由于脂質(zhì)和脂蛋白過氧化是一種自由基介導(dǎo)的過程，脂質(zhì)氧化抗體酶可以通過檢測(cè)這些自由基而被檢測(cè)。自由基可以采用如下技術(shù)而被檢測(cè)或測(cè)量?jī)?nèi)在低水平化學(xué)發(fā)光(具有或沒有致敏劑)(Vladimirov，Y.A.，和Archakov，A丄LipidpreoxidationinBiologicalmembranes.Nauka，Moscow(1972》Vladimirov，Y.A.Intrinsiclow-levelchemiluminescence.In:FreeRadicals.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996)，65-82)，順磁共振(帶有旋轉(zhuǎn)捕獲(Mason，R.P./"Wfraandv/vodetectionofFreeRadicalmetaboliteswithelectronspinresonance.In:FreeRadicals.Apracticalapproach.IRLPress,Oxford,NewYork,Tokyo(1996》11-24)或不帶方定車專捕獲(Petyaev，M.M.Biophysicalapproachesinthediagnosisofcancer.Medicina，Moscow(1972))或其他本領(lǐng)域公知的技術(shù)。脂質(zhì)氧化還可以通過測(cè)定在反應(yīng)中脂肪酸或其它基質(zhì)的消耗而被測(cè)定。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，在與2-硫巴比妥酸(通常lmM)反應(yīng)之后，通過測(cè)量在合適波長例如525nm的吸收值，丙二醛(MDA)的產(chǎn)物被測(cè)定。在某些實(shí)施例中，來自樣本血清或血漿部分的抗體結(jié)合衣原體細(xì)胞，例如一種i^"炎衣嚴(yán)沐/"wwom'aeJ、C.pw'"ac/或^、/W衣嚴(yán)沐/rac/wwa^J細(xì)胞的能力可以被測(cè)定?？贵w酶活性的測(cè)定在以下文獻(xiàn)中詳細(xì)描述WO03/019196、WO03/019198和WO03/017992。采用抗體酶抑制劑對(duì)個(gè)體的治療可以持續(xù)直至在來自個(gè)體的血液樣本非細(xì)胞部分中抗體酶活性被測(cè)定為零或基本上為零。在來自個(gè)體的血液樣本非細(xì)胞部分中抗體酶活性被降低為零或基本上為零之后，可以停止用抗體酶抑制劑的治療。/，炎在7,沐peMmom'd細(xì)胞在血液樣本非細(xì)胞片斷中的存在與否可采用上述方法檢測(cè)。采用抗菌化合物的治療可以持續(xù)直至在來自個(gè)體的血液樣本非細(xì)胞片斷中被檢測(cè)不到^"炎衣嚴(yán)沐".戶e應(yīng)om'ad細(xì)胞。嚴(yán)炎衣嚴(yán)沐p"ewmmhd細(xì)胞在血液樣本非細(xì)胞片斷中清除之后，抗菌化合物的治療可以停止。在某些實(shí)施方式中，可以檢測(cè)一種抗菌化合物在治療個(gè)體中專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持續(xù)感染的效果。一種方可以包括i)在給予抗菌化合物之前和之后從個(gè)體中獲得血液樣本；(ii)使所述血液樣本與一種特異結(jié)合元件接觸以分離和/或純化所述樣本的部分；并且，(iii)在所述樣本的所述部分中檢測(cè)病原性微生物核酸的存在，其中在給藥之后所獲得的樣本的所述部分中病原性微生物核酸數(shù)量與給藥之前獲得的樣本相比較降低指示抗菌制劑在治療持久感染中是有效的。通過本說明書，那些本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)了解本發(fā)明更多的方面和實(shí)施方式。所有在本說明書中提到的文獻(xiàn)全文在此引入作為參考。本發(fā)明包括上述特征的每種組合及其亞組合。本發(fā)明的特定的方面和實(shí)施方式現(xiàn)在通過例子并結(jié)合以下附圖及表格而加以說明。圖1顯示在CHD患者中檢測(cè),，炎衣嚴(yán)沐fC77/aw>^'ap"wmom'aeJDNA。泳道3和4和泳道7以及8是采用蛋白A濃度梯度，而泳道5和6沒有采用蛋白A濃度梯度。圖2顯示采用這里所述的方法在CHD患者中檢測(cè)^銀炎衣嚴(yán)沐^C/z/aw少Wa;weMmom'fle9DNA。泳道1、2禾口6顯示CHD患者的結(jié)果，而泳道7顯示健康對(duì)照的結(jié)果。圖3顯示采用熒光團(tuán)FAM-490的實(shí)時(shí)PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖4顯示FAM-4卯的實(shí)時(shí)PCRAmp/Cycle圖。圖5顯示采用嵌套式PCR檢測(cè)樣本中的^^衣嚴(yán)體H^/薩;^'a;wewmom'aeJDNA。泳道6禾卩7顯示PCR陰性樣本P084禾卩P094，而泳道8顯示PCR陽性樣本P078。圖6顯示C./wezw20"/"e的16SrRNA基因中引物對(duì)CPN90/91的靶序列與其他病原體中16SrRNA基因的序列對(duì)比。原點(diǎn)顯示相同的堿基，而字母指示與,炎沈疑體《.戶e畫om'a"不同的堿基。短條指示缺失。圖7顯示在采用抗菌治療之前或期間采用本方法檢測(cè)到患者中衣原體抗原的水平。圖8顯示采用小孔徑柱作為細(xì)菌保留濾器，在人類血清中濃縮沙凝^嚴(yán)體(X7z/謂j^iZa加c/70應(yīng)"、J后檢領(lǐng)lj沙淑衣嚴(yán)體rC77/畫j^'a加c/zo顧/7WDNA。泳道如下編號(hào)1，新方案，從200|il的血清濃縮*;2，新方案，從200^1的血清濃縮，1:10*;3，新方案，從200(^1的血清濃縮，1:100*;4，QIAGEN方案，從200(^1的血清濃縮；5，QIAGEN方案，從200|il的血清濃縮，1:10;6，QIAGEN方案，200^1的血清，1:100;7，新方案，從500|11濃縮*;8，新方案，從500^1濃縮，1:10*;9，新方案，從500|il濃縮，1:100*;10，QIAGEN方案，500W的血清；11，QIAGEN方案，500(il的血清，1:10;12，QIAGEN方案，500^1的血清，1:100;13、14—陽性對(duì)照；15-陰性對(duì)照。*在血清樣本細(xì)菌濃縮之后，不考慮所釆用的從200|11至3,000(il體積，采用標(biāo)準(zhǔn)的QIAGEN方案處理200ul樣本。表1顯示基于這里所述的血液血清的PCRDNA檢測(cè)與對(duì)全血進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)的比較。患者組包括通過外科確診為CHD的人和患有呼吸疾病懷疑有嚴(yán)炎衣嚴(yán)沐fC7z/amyJ/a/"g畫om'fleJ涉及的人。表2顯示基于這里所述的血液血清的PCRDNA檢測(cè)與對(duì)全血進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)的比較?；颊呓M包括患有CHD/無癥狀局部缺血的人。對(duì)照組包括健康個(gè)體。表3顯示常規(guī)和實(shí)時(shí)PCR之間核酸檢測(cè)的相互關(guān)系。表4顯示在血液樣本中檢測(cè)#、#羅衣嚴(yán)沐rr/z/amj^/afrac/zoma^J。表5顯示在血液樣本中檢測(cè)主^"支嚴(yán)沐〈Mycop/owagem'to/Ziw^。表6顯示在血液樣本中檢測(cè)嚴(yán)厭i嚴(yán)沐C^i厥嚴(yán)沐ft/"，/a扁a表7顯示在治療沙yW衣嚴(yán)沐《.frac/2om油'"生殖器感染中血清DNA檢測(cè)和拭子診斷的診斷值的比較。表8顯示在診斷急性汐凝衣嚴(yán)沐fC.加c/^m油、J感染(rag/m力VcerWc&VMreAW"力中血清DNA檢測(cè)和拭子診斷的診斷值的比;丄較。表9顯示在關(guān)節(jié)炎(Reiter's疾病)中診斷^、^衣嚴(yán)沐frac/zoma/d感染的血清DNA檢測(cè)和拭子診斷的診斷值的比較。表10顯示在慢性盆腔炎中診斷汐^衣/#沐《.加c/z函油'W感染的血清DNA檢測(cè)和拭子診斷的診斷值的比較。表11顯示在無癥狀患者中診斷沙殿衣嚴(yán)沐"./rac/7ow加'"感染的血清DNA檢測(cè)和拭子診斷的診斷值的比較。表12顯示#、>^衣嚴(yán)沐^rac/wm""d中基因表達(dá)的分析。表13顯示沙嫩衣嚴(yán)釘C.frac/7o顧""禾口廁炎^"嚴(yán)沐rC.戸調(diào)固'aeJ的參照和持久菌株對(duì)阿奇霉素的易感性。表14顯示在血液中炎在"/費(fèi)'沐fC/z/flwyc/z'a/"ewm(m'ae)DNA陽性檢測(cè)采用PCR與標(biāo)準(zhǔn)方案的比較，對(duì)于對(duì)照，CHD/無癥狀的局部缺血，以及外周閉塞疾病患者。表15顯示對(duì)照和CHD患者在血液中/*炎衣嚴(yán)沐f02/"^)^'"戸e應(yīng)om'agJ感染的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)材料和方法樣本靜脈血液樣本從三組不同的臨床患者中獲得外科確診為CHD的患者；患有呼吸疾病懷疑涉及廁炎《嚴(yán)沐^7z/am;^a戶eMWom'fleJ的患者；以及臨床健康個(gè)體作為對(duì)照。45靜脈血液樣本也從帶有或不帶有生殖器/尿道感染癥狀的患者中收集以及從臨床健康個(gè)體中收集作為對(duì)照。收集后一些樣本在檢測(cè)前在-2(TC冰凍和保藏，一些保持在+4。C，而一些在收集后立即檢測(cè)。血清采用離心2,000g10分鐘而從全血中分離。采用蛋白A濃縮細(xì)胞蛋白-A-瓊脂糖與血清樣本在37°C共孵育30-60分鐘。帶有固定免疫球蛋白(游離的和在免疫復(fù)合物中的)的吸附劑在3,000-5,000g離心10分鐘并且上清液被棄去。吸附劑小球隨后在PBS中再懸浮并重復(fù)離心過程。該清洗步驟重復(fù)兩次以上。之后，再懸浮小球被用于DNA檢測(cè)。通過過濾濃縮細(xì)胞1,000|il、200(^1-2,000|il血清樣本，被填充在QIAGEN硅凝膠柱中并且在l,OOOg離心5分鐘或在8,000g離心1分鐘。200^1的QIAGEN緩沖劑AL和20^1蛋白酶被填充在柱中并且在56°C孵育10分鐘。加入200^1乙醇并且在8,000g離心柱1分鐘。之后按照柱制造者提供的方案進(jìn)行。簡(jiǎn)言之，500^1的AW1緩沖劑被加入并且在8，000g離心1分鐘。500|il的AW2緩沖劑被加入并且在12,000g離心3分鐘。100(il的AE緩沖劑被加入并且孵育1分鐘和在8,000g離心1分鐘。一個(gè)5-10pl的樣本隨后被取出用于PCR。PCR從1ml血清樣本中采用QIAampDNABloodMiniKit(QIAGen)提取DNA并且再懸浮于100|ul的AE(QIAGen)緩沖劑中。提取的DNA采用如下對(duì)應(yīng)于16SrRNA基因可變片段的引物通過PCR進(jìn)行擴(kuò)增，其特異針對(duì)/，炎衣嚴(yán)沐0:/z/am;^'ap"e"mom'aeJ:CPN90一5'GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG3'nCPN91-5，TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT3'(MadicoG.等，J.Clin.Microbiol.2000，38:1085-1093)。擴(kuò)增片段的長度是197個(gè)堿基對(duì)。擴(kuò)增反應(yīng)在25pi的PCR溶液中進(jìn)行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200的每種dNTP、15pmol的每個(gè)引物、1UTaq-DNA-聚合酶(Promega)和5pi的樣本。采用如下PCR方案45s在94。C，45s在60。C，和45s在72°C在DNA熱循環(huán)儀Perkin-ElmerCetus上進(jìn)行45次循環(huán)。檢測(cè)分析靈敏度為每PCR100基因組等價(jià)物(GE)。PCR產(chǎn)物在1，2%瓊脂糖凝膠中電泳分離之后通過溴化乙錠染色顯現(xiàn)。實(shí)時(shí)PCR引物和探針的設(shè)計(jì)基于/，炎衣嚴(yán)沐fC/7/aw_yA"/wewwom'aeJ的16SrRNA基因，采用用于"Taqman探針"的設(shè)計(jì)程序"引物表達(dá)"(AppliedBiosystems)。所用的引物和探針探針553:5'-CAAGTCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGC-3'，探針557:5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'，引物CPN90:5'-GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG陽3'，引物CPN91:5'-TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT-3'。BLAST程序被用于確定所選擇的引物對(duì)其它衣原體科種類的16SrRNA基因的特異性?；?6SrRNA的定量實(shí)時(shí)PCR。PCR引物和探針的^^炎衣嚴(yán)/,《.，e訓(xùn)om'ad-特異序列，采用引物表達(dá)軟件(AppliedBiosystems，F(xiàn)osterCity，Calif.)從/，炎衣嚴(yán)銀/7麼Mmom'aeJ的16SrRNA中選擇(GenBank登錄號(hào)AF131889.1GI:4545320或AE009440.1GI:33236960)，并通過AppliedBiosystems合成。產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為197bp;且引物和T叫Man探針的序列如下正向引物CPN卯，5'-GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG-3';反向引物CPN91，5'-TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT-3';以及TaqMan探針557，5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'。TaqMan探針在5，端采用6-羧基熒光素進(jìn)行熒光標(biāo)記作為報(bào)道染料，而在3'端采用6-羧基四甲基若丹明作為淬滅劑。采用BLAST程序進(jìn)行檢索以檢查引物和探針的特異性。在PCR延伸階段當(dāng)探針被DNA聚合酶的5'核酸外切酶活性裂解時(shí)PCR產(chǎn)物由于熒光提高而被檢測(cè)到。這種裂解打斷了熒光能量共振轉(zhuǎn)移而報(bào)道染料開始發(fā)出熒光，其與所產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物水平成正比。循環(huán)閾值(C》，定義為循環(huán)數(shù)量其中報(bào)道染料的熒光首次超出計(jì)算的背景水平，該值通過儀器對(duì)每次反應(yīng)自動(dòng)被評(píng)價(jià)。Cr值的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖來自純化的^^炎衣嚴(yán)沐《.p"ewwom'"dDNA的連續(xù)稀釋。未知的臨床血清樣本的CV值根據(jù)純化的廁炎衣嚴(yán)沐fC.戶ewwom'adDNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定。具有己知濃度的培養(yǎng)的/，炎衣嚴(yán)沐《./"ewwom'"d的DNA作為稀釋液中的標(biāo)準(zhǔn)物介于1fg至10pg。實(shí)時(shí)PCR采用iCyclerIQsystem(BIO-RAD)進(jìn)行。5pl提取的DNA被分析而采用的PCR混合物總體積為50pl。PCR混合物由10mMTris(pH8.3)、50mMKC1、1.5mMMgCl2、200|iM的每種dNTP、5U的Termostarr呵DNA聚合酶(Sintol);200nM探針；禾P300nM正向和反向引物組成。實(shí)時(shí)PCR為10分鐘在95°C，和50個(gè)循環(huán)，其中1分鐘在94。C，1.5分鐘在63。C。所有的樣本分成三份重復(fù)本進(jìn)行分析。如果在三份重復(fù)本中的檢測(cè)都為陽性，并且如果PCR的平均值大于或等于1.0，則樣本被認(rèn)為是陽性。常規(guī)嚴(yán)炎*嚴(yán)沐廣C.p"g畫o"/agJ檢測(cè)循環(huán)PBMC通過靜脈穿刺獲得而進(jìn)入一個(gè)8-mlVacutainerCPT細(xì)胞制備管中(BDVacutainerSystems,FranklinLakes,N丄)。CPT管包含一種血液分離介質(zhì)，其包括觸變聚酯凝膠和密度梯度液體溶液。簡(jiǎn)言之，CPT管在BeckmanGPR離心機(jī)中1,500xg離心30分鐘并冷凍。運(yùn)送到研究實(shí)驗(yàn)室之后，樣本通過倒置和再次離心混合，單核細(xì)胞層或直接位于凝膠上的1ml血漿被吸出并在-70。C冷凍。單核細(xì)胞制劑被成批地解凍并且采用QIAampDNAminikits(Qiagen，Mississauga，Ontario,Canada)提取200-|iil整數(shù)倍于100^的洗提緩沖劑中。嵌套式PCR檢測(cè)^^炎衣嚴(yán)沐p"ewmom'aeJ采用嵌套式PCR，其靶為基因的可變區(qū)域IV(VDIV)(外引物Cpn5P[5'CCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAA3']和Cpn3P[5'CTAGATTTAAACTTGTTGATCTGACAG3'];嵌套引物-Cpn5N[5'CTCTGTAAACAAACCGGGC3']和Cpn3N[5'GATCTGACAGGAAACAATTTGCAT3'])。擴(kuò)增反應(yīng)在25(al的PCR溶液中進(jìn)行，其由10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200的每dNTP、15pmol的每種引物、1UTaq-DNA-聚合酶(Promega)和5|ul的樣本組成。循環(huán)條件包括在95°C進(jìn)行5分鐘的起始變性，隨后是95°C變性30秒，在60。C退火30秒，在72。C延伸30秒，進(jìn)行45次循環(huán)。在第二圈PCR，2nl的第一圈產(chǎn)物與25nl上述擴(kuò)增混合物混合，采用引物Cpn5N和Cpn3N，并在相同的循環(huán)條件下擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物在1.2%瓊脂糖凝膠電泳分離之后用溴化乙錠染色顯現(xiàn)。沙淤衣嚴(yán)體fC^flc/7om^m'd的檢測(cè)一種沙^衣嚴(yán)沐fC/z/aw;^'afrac/zow加'd隱蔽性質(zhì)粒的特異DNA片端被用來檢測(cè)該病原體。產(chǎn)生210-bp片段的如下引物是CP24-5'GGGATTCCTGTAACAACAAGTCAGG3'CP27-5'CCTCTTCCCCAGAACAATAAGAAC3，。擴(kuò)增反應(yīng)在25pl的PCR溶液中進(jìn)行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200(iM的每禾中dNTP、15pmol的每個(gè)引物、1UT叫-DNA-聚合酶(Promega)和5pi的樣本。采用一臺(tái)PCRThermocyclerPerkinElmer進(jìn)行45次循環(huán)擴(kuò)增。每次循環(huán)包括在94。C變性45秒，在55°C引物退火45秒，在72°C引物延伸45秒。擴(kuò)增產(chǎn)物(IOpl)通過在1.5%瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色而顯現(xiàn)。MgemW/M附的檢領(lǐng)ljPCR特異針對(duì)生M"支嚴(yán)沐fM;;co;/wwagem'to/^附j(luò)140kDa粘附蛋白基因的革巴區(qū)域，MgPa(JensenJS等，J.Clin.Microbiol.1991Jan;29(l):46-50)。采用如下產(chǎn)生一個(gè)281-bp片段引物對(duì)MgPa-1-5,AGTTGATGAAACCTTAACCCCTTGG3'MgPa-3-5，CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3，。擴(kuò)增反應(yīng)在25pi的PCR溶液中進(jìn)行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200|iM的每種dNTP、15pmol的每種引物、1UT叫-DNA-聚合酶(Promega)和5pi的樣本。采用一臺(tái)PCRThermocyclerPerkinElmer進(jìn)行45次循環(huán)擴(kuò)增。每次循環(huán)包括在94°C變性45秒，在55°C引物退火45秒，在72°C引物延伸45秒。擴(kuò)增產(chǎn)物(IOfd)通過在1.5%瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色而顯現(xiàn)。^^^^^嚴(yán),r6Vgflp/(^yma^gfl/^7'cww^的檢觀!l采用對(duì)t/"，/a扁a^,脲酶基因中高度保守區(qū)域特異的引物進(jìn)行PCR(BlanchardA等，ClinInfectDis.1993Aug;17Suppll:S148-53.)。采用產(chǎn)生一個(gè)429-bp片段的如下引物對(duì)Ul—5'GATGGTAAGTTAGTTGCTGAC3'U2-5，ACGACGTCCATAAGCAACT3，。擴(kuò)增反應(yīng)在25^的PCR溶液中進(jìn)行，其包括10mMTris/HCl(pH8.3)、50mMKCl、1.5mMMgCl2、200的每種dNTP、15pmol的每個(gè)引物、1UTaq-DNA-聚合酶(Promega)和5的樣本。采用一臺(tái)PCRThermocycler(PerkinElmer)進(jìn)行45次循環(huán)擴(kuò)增。每次循環(huán)包括在94°C變性45秒，在55°C引物退火45秒，在72°C引物延伸45秒。擴(kuò)增產(chǎn)物(IOpl)通過在1.5%瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色而顯現(xiàn)。細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)于沙#/^衣/,沐(C7z/aw;^afrac/7owa^9分離采用McCoy細(xì)胞，而對(duì)于/，炎衣'/f沐rC/z/awj^/a;"eMmom'ae9采用HL細(xì)胞。每種細(xì)胞系的細(xì)胞被接種在帶有蓋玻片的24-孔細(xì)胞培養(yǎng)板上(大約2xl05細(xì)胞每孔)，并在37。C孵育24小時(shí)以獲得單層匯合。lml的血清在4°C14,000xg離心1小時(shí)以沉淀細(xì)菌細(xì)胞。棄去上清液并且在0.5ml的GM(培養(yǎng)基RPMI，5%[vol/vol]胎牛血清，2.0mML畫谷氨酸鹽，8.8%[vol/vol]葡萄糖，每毫升4.0pg的慶大霉素和5.0的amfotherycinB/ml)中懸浮沉積物。細(xì)胞單層被懸浮接種并且在20°C2,500xg離心l小時(shí)。感染的細(xì)胞在37。C孵育2小時(shí)；之后，去除培養(yǎng)基并且更換帶有放線菌酮(l.O(ig/ml)的GM。細(xì)胞在37。C在4。/。032中孵育72小時(shí)。蓋玻片上的細(xì)胞采用丙酮固定并采用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的衣原體種屬特異(抗-LPS)和沙淑衣嚴(yán)沐fC77/am;^a^flc/wwa""-特異(抗-MOMP)抗體染色。衣原體內(nèi)含物通過熒光顯微鏡檢測(cè)。衣原體和細(xì)胞DNAs混合物的分離采用QIAGENMiniKit根據(jù)制造商的說明書來進(jìn)行。DNA采用lOOiil的TE緩沖劑洗提。PCR可采用商業(yè)可獲得的PCR試劑盒用于沙淑衣嚴(yán)沐fC/7/am;^/a加c/70wa",d禾口廁炎衣嚴(yán)沐(X7/am_yci/a戸ewwom,aeJ。RNA分離總RNA采用SVTotalRNAIsolationSystem(Promega)根據(jù)制造者的說明書而被分離。RNA通過無核糖核酸酶的脫氧核糖核酸酶I處理并且采用100^的無核酸酶水從SpinBasket中洗提。RNA樣本被檢測(cè)基因組DNA污染。RT-PCRC.frac/7omato的16SrRNA、HSP60、MOMP和其他外膜蛋白的基因表達(dá)采用RT-PCR分析。用于RT-PCR引物的核苷酸序列如下16srRNACTR705'-GGCGTATTTGGGCATCCGAGTAACG3'CTR715'-TCAAATCCAGCGGGTATTAACCGCCT3'MOMP-L5，CGTTCGTTGCAGACTTACCAMOMP-R5'GTTCCTCGCATACCGAATGTOMCB-L5，-CTGCAACAGTATGCGCTTGTOMCB-R5，-CACGCTGTCCAGAAGAATGAOMCA-L5，-GTTGCTTCGAAGATCCATGCOMCA-R5'-GGGCCATGTTTAGCATCTTGPMPA-L5，-GCATTTAGCGGCAATACCATPMPA-R5,-TGACAATGCCATGACAGGATPMPB-L5，-GAAGGCGGTGCTATCTTCTCTCPMPB-R5,-TCGCTTGCTGTTTGAGCTTTAGPMPC-L5，-CACCTACGACAACACCAACGPMPC-R5，-GGAGCAATATCACCCGTCAGPMPD-L5，-GTTAGACCAAATTCGAGATCPMPD-R5，-AAGATTCTCCGTCACGAGGAPMPE-L5，-CTAACTGCTATCTCGATAACCPMPE-R5，-TCACGAATCTCCACGGTAGGHSP60GroEL-L5，-TCTGCGAACGAAGGATATGAGroEL-R5，-ATAGTCCATTCCTGCGCCAGG抗生素敏感檢測(cè)McCoy和HL細(xì)胞被接種和輸入上述的血清樣本，但是在2,500xg離心1小時(shí)和在37°C孵育2小時(shí)之后，感染的細(xì)胞被含有連續(xù)二倍稀釋濃度范圍從0.05至0.8(ig/ml的抗生素(阿奇霉素，Pliva)的培養(yǎng)基覆蓋并且在37°C在4%C02中孵育72小時(shí)。沙凝衣嚴(yán)沐fC7z/awyAafrac/wwa"dL-2禾口//^炎衣/窮沐〔C7z/am;^/a/7"ew附om'aeJKajaani6菌株l皮用i"乍參照菌株。MIC被定義為最低濃度，其中沒有內(nèi)含物被檢測(cè)到。結(jié)果來自所有患者組60份樣本的血清中^，炎衣嚴(yán)沐p"ewwom'fl"DNA的PCR檢測(cè)被進(jìn)行，并且與來自相同患者的全血樣本中通過常規(guī)酚提取基于PCR的檢測(cè)的DNA檢測(cè)比例相比較。采用這里所描述的基于血液血清的檢測(cè)廁炎衣嚴(yán)體《.，ewmo"/a"DNA的擴(kuò)增和檢出率為患者庫中的38%(60名患者中有23名)。與之對(duì)照的是，基于從循環(huán)PBMC分離的DNA進(jìn)行的常規(guī)PCRDNA檢測(cè)，所檢測(cè)出的^^衣嚴(yán)沐《.戸ewwom'a"DNA在相同患者庫僅僅為1.7%(60名患者中有1名)(見表1)。新技術(shù)提高了在患者中檢測(cè)細(xì)菌DNA感染的靈敏度至22倍。來自CHD/無癥狀局部缺血患者血清中,，炎衣嚴(yán)沐fCp"eMmom'fldDNA的PCR檢測(cè)被進(jìn)行，并且與采用從循環(huán)PBMC分離的DNA的常規(guī)基于PCR的檢測(cè)以及與健康個(gè)體的對(duì)照組相比較?；谌某Ｒ?guī)PCRDNA檢測(cè)中J，炎衣嚴(yán)沐O:.p"ewwom'adDNA檢出率僅僅為CHD/無癥狀局部缺血患者的3.9X(102名患者中有4名)(見表2)。這樣低水平的DNA發(fā)現(xiàn)率使得PCR不能成為在患有CDH的患者中檢測(cè)厲「炎^"嚴(yán)體p"wwom'ad感染的有意義的診斷方法。相反，當(dāng)采用所述的基于血液血清的PCRDNA檢測(cè)方法時(shí)，/》炎衣嚴(yán)沐/7"ewwm'aeJDNA在CHD/無癥狀局部缺血患者中的被擴(kuò)增和檢出率為58%(24名患者中有14名)。新技術(shù)提高了在患者中檢測(cè)細(xì)菌DNA感染的靈敏度至15倍。在健康個(gè)體的對(duì)照組中，相同技術(shù)檢測(cè)的,炎fC.p"e謂om'aeJDNA僅僅為案例中的4.8%(22名對(duì)照個(gè)體中有1名)。在患有CHD/無癥狀局部缺血的患者血清中^^炎衣嚴(yán)謬/"ewwom'ae9DNA的實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)被進(jìn)行，并與相同血清樣本的常規(guī)基于PCR的檢測(cè)相比較。其中常規(guī)PCR方法僅僅能以定性的方式確定#^衣嚴(yán)一沐^7z/"m;^'a/wewmom'ad的存在，基于本方法的實(shí)時(shí)PCR可以定量存在于樣本中的DNA。在lml血液中i^炎衣嚴(yán)沐fC/z/awj^Za/wewmom'ae9基因組等價(jià)物的數(shù)量變化從20-180/*炎衣嚴(yán)沐fC7z/aw;^/a/"ewwom'aeJ基因組，指示在受感染的個(gè)體中細(xì)菌負(fù)載量的變化(表3)。在血液血清樣本中采用嵌套式PCR在ow/J基因上(圖7)檢測(cè)/，炎衣嚴(yán)沐rC/z/a^ycfe/"ewwom'ae;>DNA。在患有急性生殖器感染和慢性生殖系統(tǒng)感染和/或不孕不育問題的患者中，在血清中沙淑^"嚴(yán)沐fC/^w少Wafrac/7owWd的檢測(cè)被拿來與在尿液和拭子中的檢測(cè)相比較。這些結(jié)果見表4。在5名患有急性生殖器感染而采用尿液和拭子檢測(cè)為陰性的患者中通過PCR或MIF在血清中檢測(cè)到了沙淤衣嚴(yán)體rCWa^^afrac/20w油'd。在6名患有慢性生殖系統(tǒng)感染和/或不孕不育問題而采用尿液和拭子檢測(cè)為陰性的患者中通過PCR或MIF在血清中檢測(cè)到了沙凝衣嚴(yán)沐fC/z/a^y^afrac/zcwa^y>。在血清樣本中C化ac/KW7G^的濃縮在蛋白A不存在時(shí)，采用具有低孔徑的硅凝膠柱(Qiagen)作為細(xì)菌保持濾器而實(shí)現(xiàn)。采用這些柱，觀察到Cfrac/wmafe細(xì)胞成功地從血清樣本中而濃縮(圖8)。在患有急性生殖器和/或尿道感染和慢性生殖系統(tǒng)感染和/或不孕不育問題的患者中，在血清中生遭—支嚴(yán)沐rM;;c印/wwagem'to"ww)的檢測(cè)被拿來與在尿液和拭子中的檢測(cè)相比較。這些結(jié)果見表5。有2名患有急性生殖器和/或尿道感染而采用尿液和拭子檢測(cè)為陰性的患者通過PCR或MIF在血清中檢測(cè)到了生遭支嚴(yán)沐fMycop/氾附agem'to"w—。有3名患有慢性生殖系統(tǒng)感染和/或不孕不育問題而采用尿液和拭子檢測(cè)為陰性的患者通過PCR或MIF在血清中檢測(cè)到了主;^支嚴(yán)沐fMjco//asmagem'to/Zw^)。在血清中i^^^^沐fL^"p/wmaJ的檢測(cè)被拿來與患者中尿液和拭子中的檢測(cè)相比較。結(jié)果見表6。采用PCR或MIF在3名患者的血清中檢測(cè)到y(tǒng)^^^,嚴(yán)沐a/""http://osmawreo(y"cwmJ,其采用尿液和拭子檢測(cè)也是陽性。對(duì)被診斷為患有^^^衣嚴(yán)體fCWa^y&fl^ac/7owa";^感染的患者進(jìn)行抗菌治療的效果被調(diào)查。兩名被診斷患有fC/2/函;^'afrac/zo麵toJ感染的患者每天兩次采用400mgAvelox(moxifoxacinhydrochloride)治療并且沙殿衣嚴(yán),O^/awj^Z/a/rac/zoma"W感染的存在采用常規(guī)拭子檢測(cè)和這里所描述的血液檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行。結(jié)果見表7。在兩個(gè)案例中，這里所描述的血液檢測(cè)連續(xù)檢測(cè)到了沙^衣嚴(yán)沐rC7z/a^^'"/rac/wm^"J的存在而常規(guī)檢測(cè)為陰性。這顯示這里所描述的血液檢測(cè)減少了沙^衣嚴(yán)沐fC72/am>^afrac/zo/^m;^假陰性診斷的病例。而且顯示抗菌治療的效果通過采用目前的血液檢測(cè)而提高，因?yàn)橥耆腥镜臋C(jī)會(huì)提高了。這還可以用于防止感染的慢性持久形式的發(fā)展。患有急性陰道炎/子宮頸炎/尿道炎的患者中#、凝衣嚴(yán)沐(T/7/am;^'afrac/wmato)的血清DNA檢測(cè)被拿來與標(biāo)準(zhǔn)DNA拭子檢測(cè)相比較，結(jié)果見于表8。在總共13名患者中，11名(85%)被拭子檢測(cè)檢測(cè)為陽性而12名(92%)被血液檢測(cè)檢測(cè)為陽性。表9顯示在反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(Reiter's疾病)患者中沙^衣嚴(yán)沐(T/z/aw少^7^ac/7oma^9血清DNA檢測(cè)的臨床確認(rèn)結(jié)果與DNA拭子檢測(cè)相比較。在總共15名患者中，8名(53%)被拭子檢測(cè)檢測(cè)為陽性而12名(80%)被血液檢測(cè)檢測(cè)為陽性。表IO顯示在慢性盆腔炎癥疾病(陰道炎、子宮頸炎、子宮內(nèi)膜異位、尿道炎、附睪炎和前列腺炎)患者中/，、凝衣)貨銀fC77/fl"y^"rac^wm//J血清DNA檢測(cè)的臨床確認(rèn)結(jié)果與DNA拭子檢測(cè)相比較。在總共215名患者中，17名(8%)被拭子檢測(cè)檢測(cè)為陽性，而57名(26.5%)被血液檢測(cè)檢測(cè)為陽性。表11顯示在無癥狀患者中#、/^*嚴(yán)沐rT7z/a^^/a/rac/zoma"、J血清DNA檢測(cè)的臨床確認(rèn)結(jié)果與DNA拭子檢測(cè)相比較。在總共124名患者中，3名(2.4%)被拭子檢測(cè)檢測(cè)為陽性，而24名(19%)被血液檢測(cè)檢測(cè)為陽性。在反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎患者中，發(fā)現(xiàn)針對(duì)沙淑衣嚴(yán)沐fC7z/fl^yc^^"domfltoJ的本血液檢測(cè)能降低50%假陰性診斷，在慢性盆腔炎癥患者中為335%，而在無癥狀的感染患者中為800%。要注意的是通過血清檢測(cè)隨機(jī)檢查捐贈(zèng)人的樣本顯示出11人中有2人，或者18%，是汐淑衣嚴(yán)沐^V7/"w;^"/mc/w附"/^JDNA陽性的。對(duì)基因表達(dá)的分析見表12。沙^衣—嚴(yán)沐fC7z/am>^'flfrac/wwatoJ血清分離物的免疫化學(xué)檢測(cè)通過用抗-LPS(屬-特異)和抗-MOMP(種-特異)單克隆抗體染色顯示細(xì)胞膜中LPS和MOMP的降低。血清分離物的LPS在細(xì)胞培養(yǎng)的第一代和第二代中明顯恢復(fù)。3代之后，MOMP在相同的降低水平被檢測(cè)到。阿奇霉素敏感性見表13。在患有冠心病和外周閉塞疾病的患者血液中炎衣嚴(yán)沐fC7z/wj^'a的新PCR檢測(cè)結(jié)果見表14。在對(duì)照和CHD患者血液中診斷/-炎衣嚴(yán)沐fC/z/am;^'a;"ewwo"/ad的直接和細(xì)胞培養(yǎng)PCR檢測(cè)結(jié)果見表15。以上所列數(shù)據(jù)顯示本方法可用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的病原體感染，例如沙淑玄嚴(yán)沐"ac/z畫a"W、厥炎衣嚴(yán)沐;"e畫歸'aeJ、f潛支嚴(yán)沐fMyo//os腸gem'to/^m^y^^^^^fL^efl//ay顧wrea/,'c訓(xùn)J。重要的是注意到目前沒有其他能用于血液庫篩選的用于這四種感染的血液檢這里所公開的方法和試劑盒可用于治療和防止這些持久血液感染的傳播以及相關(guān)的疾病情況。參考文獻(xiàn)1.FabricantCG等，J五x;A/ed1978，148(1):335-340.2.FongIW:CM^/2000，163(1):49-563.MattilaKJ等，C//"/"/ecf1998，26(3):719-7344.CampbellLA等，E醇g/"/ec/■1998，4(4):571-5795.SaikkuP等，丄cmcen988，2(8618):983-9866.DaneshJ等，1997，350(9075):430-4367.DaneshJ等，6M/2000,321(7255):208-2138.BomanJ等，M〖cra&WWev2002，15(1):1-209.ShorA等，JX/z'wiWzo/1998，51(11):812-81710.CampbellLA等，J/"/eW1995，172(2):585-58811.DechendR等，C7簡(jiǎn)/加.ow1999，100(13):1369-137312.CoombesBK等，1999，67(6):2909-291513.JacksonLA等，」wJ尸a/1/70/1997，150(5):1785-179014.ApfalterP等，JC7z'w7Wcrc^/o/2001，39(2):519-52415.BlasiF等，//"/e"2000,181(Suppl3):S444-S44616.RamirezJA，爿""/"&r"Medl996，125(12):979-98217.JacksonLA等，//"/e"Dz、1997，176(1):292-29518.ApfalterP等，五w〃C7/wMcra&W/"/e"D/52000，19(4):305-30819.KarlssonL等，￡wr/F羅五油雨cig2000，19(6):630-63520.BattelsC等，C/腦/油'o"2000，101(2):137-14121.BergerM等，JZa6C7/"Afed2000，136(3):194-20022.BomanJ等，J7"/e"1998，178(1):274-27723.FreidankHM等，￡wrJC//"M,.cro^'o〃"/e"2002，21(1):60-6224.KaulR等，C/rcw/a"o"2000，102(19):2341-234625.MarahaB等，￡wr/C//wMc威o〃"/e"ZXs2001，20(2):111-11626.SessaR等，A/7e簡(jiǎn)c/e畫^2001，159(2):521-52527.SmiejaM等，JC//wMcra&o/2001，39(2):596-60028.WongYK等，J」mCo〃CaW/o/1999，34(5):1435-143929.MaassM等，2000，181CSuppl3):S449-S45130.BlasiF等，J/"/ecf1999，180(6):2074-207631.Taylor-Robi謂nD等，Co〃CWz'o/2000，36(2):657誦65832.SmiejaM等，餅C/"/e"2002，2(1):1233.11iescuEA等，尸er"飽〃"/2000，20(6》722-72634.BodettiTJ等，/"/e"/mw麗2000，68(5):2744-2747Med臉油W/薩畫/2001，190:139-144,，7V謹(jǐn)/脂.o"2001，41(9):1114-1119J他r/騰/w7V蘭Z)1992，12(8):945-947等，J她dMcra&o/1998，47(5):441-446/C//"iW2o/1993，46(4):313-317服J1997，315(7109):629-634/C/^她油'o/1999，37(12):3791-3799J/"/e"i^2000，181(Suppl3):S452-S454/C//"2001，39(5):1796-1801等，Af/cra&o/2002，40(7):2357-2362"JC7/wM,cra^/2000，38(7):2622-2627C7聰/a"o"2001，103(3):351-35647.Smieja等，SMC/w/ec"owsD/seayes2002，2:2148.MadicoG.等，/C7,nM/③&o/2000，38:1085-109349.AryaM.等，ExpertRevMolDiagn2005，5:209-21950.KleinD，TrendsMolMed2002，8:257-26051.Ausuble等，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,199252.Russell等，MolecularCloning:aLaboratoryManual,3rdedition,2001，ColdSpringHarborLaboratoryPress35.RassuM等，36.HaranagaS等37.HahnDL等，38.VonHertzen39.TongCY等，40.EggerM等，41.BomanJ等，42.BomanJ等，43.SmiejaM等，44.CherneskyM45.MahonyJB,46.GieffersJ等，臨床組厥i^^"嚴(yán)沐fC7z/謹(jǐn)-.a戸e謹(jǐn)om'aeJDNA檢測(cè)陽性的案例，用于PCR的樣本獲得自常規(guī)制備CTL所有的制備樣本板來自所有的患者組60名患者中有1名(+)，或?yàn)?.7%60名患者中有23名(+)，或?yàn)?8%表1臨床組,炎衣嚴(yán)沐fC7z/a附;/(^戶ewmom.aeJDNA檢測(cè)陽性的案例，用于PCR的樣本獲得自常規(guī)制備CTL所有的制備對(duì)照n/a21名患者中有1名(+)，或?yàn)?.8%CHD/無癥狀局部缺血102名患者中有4名(+)，或?yàn)?.9%24名患者中有14名(+)，或?yàn)?8%表2<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>*在細(xì)胞培養(yǎng)中通過營養(yǎng)剝奪表12<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>表14<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>權(quán)利要求1.一種評(píng)估個(gè)體遭受專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式感染的方法，其包括在從個(gè)體獲得的血液樣本中測(cè)定所述持久形式細(xì)胞的存在。2.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中細(xì)胞的存在通過以下測(cè)定使來自個(gè)體的血液樣本與一種特異結(jié)合元件相接觸以分離和/或純化所述樣本的部分，以及；在所述部分中測(cè)定來自病原性微生物核酸的存在。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中細(xì)胞的存在通過以下測(cè)定從血液樣本或分離和/或純化的部分中濃縮和/或提取DNA，以及；在濃縮的和/或提取的核酸中測(cè)定病原體核酸的存在。4.根據(jù)權(quán)利要求l-3任何一項(xiàng)的方法，其中病原體細(xì)胞的存在在血液樣本的非細(xì)胞部分中被測(cè)定。5.根據(jù)權(quán)利要求l-3任何一項(xiàng)的方法，包括從所述血液樣本中去除宿主細(xì)胞以產(chǎn)生一種非細(xì)胞血液樣本，并且在非細(xì)胞血液樣本中測(cè)定病原體細(xì)胞的存在。6.根據(jù)權(quán)利要求l-3任何一項(xiàng)的方法，其中血液樣本是一種非細(xì)胞血液樣本。7.根據(jù)權(quán)利要求l-6任何一項(xiàng)的方法，其中特異結(jié)合元件結(jié)合到包括一種或多種血漿/血清分子的復(fù)合物上，并且分離和/或純化的部分包括一種或多種所述的復(fù)合物。8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中一種或更多血漿/血清分子是抗體，并且復(fù)合物是一種免疫復(fù)合物。9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中特異結(jié)合元件結(jié)合至免疫球蛋白。10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中特異結(jié)合元件是蛋白A。11.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中血漿/血清分子是血清脂蛋白或脂多糖結(jié)合蛋白。12.根據(jù)權(quán)利要求ll的方法，其中特異結(jié)合元件結(jié)合至所述血清脂蛋白或脂多糖結(jié)合蛋白。13.根據(jù)權(quán)利要求1-12任何一項(xiàng)的方法，其中分離和/或純化的部分包括-種濃度提高了的所述病原性微生物的持久形式的細(xì)胞。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中分離和/或純化的部分包括一種濃度提高了的所述病原性微生物的持久形式的原生小體。15.根據(jù)前述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的方法，其中在所述部分中病原體核酸的存在指示個(gè)體中病原體感染的存在。16.根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其中在所述部分中病原體核酸的存在指示與病原體感染相關(guān)疾病的的存在。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中,炎衣嚴(yán)沐rc，e謂om'""核酸的存在指示個(gè)體中動(dòng)脈粥樣硬化的病況的存在。18.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中沙凝衣嚴(yán)體frac/wwa""核酸的存在指示個(gè)體中生殖功能紊亂的存在。19.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中沙凝衣嚴(yán)沐fmc/7oma&)核酸的存在指示個(gè)體中選自如下組的感染的存在陰道炎、子宮頸炎和尿道炎。20.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中沙^，嚴(yán)沐frac/2ow^/W核酸的存在指示個(gè)體中反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎(Reiter's疾病)的存在。21.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中汐^《嚴(yán)沐《.？rac/2w^"W核酸的存在指示個(gè)體中慢性盆腔炎癥疾病的存在。22.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中沙淤衣嚴(yán)沐rC.^ac/2ow油'd核酸的存在指示個(gè)體中無癥狀感染的存在。23.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中A^co;/wmaface"e核酸的存在指示個(gè)體中呼吸疾病、盆腔炎癥疾病或生殖功能紊亂的存在。24.根據(jù)前述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的方法，其中在分離和/或純化的部分中病原體核酸的存在通過采用病原體特異引物擴(kuò)增而測(cè)定，擴(kuò)增產(chǎn)物的存在指示病原體核酸的存在。25.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中樣本中病原體核酸的存在采用病原體特異引物通過PCR進(jìn)行測(cè)定。26.根據(jù)前述權(quán)利要求任何一項(xiàng)的方法，其中病原體是一種C7i/am3^^27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中C/7/aw;^'a^.是廁炎衣嚴(yán)沐《.戸ewmom.o!eJ或C加c/zo附a^。28.根據(jù)權(quán)利要求26或27的方法，其中衣原體細(xì)胞的存在通過采用衣原體特異引物測(cè)定衣原體核酸的存在而被測(cè)定。29.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中衣原體是/，炎衣嚴(yán)沐fC7z/"mj^"30.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中衣原體特異引物擴(kuò)增i^炎衣嚴(yán)沐J16SRNA基因的全部或部分。31.根據(jù)權(quán)利要求30的方法，其中引物選自如下組成的組5,GGTCTCAACCCCATCT3'5'-GGTCTCAACCCCATCCGTGTCGG-3'5，TGCGGAAAGCTGTATTTCTACAGTT3'5'-CAAGTCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGC-3'以及，5'-TCCAGGTAAGGTCCTTCGCGTTGCATCG-3'。32.根據(jù)權(quán)利要求29的方法，其中衣原體特異引物擴(kuò)增/*炎衣嚴(yán)沐fC/z/aw少J/(2/3"ewmom'ae)OmpA基因的全咅卩或部分。33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法，其中引物選自如下組成的組5'CCAATATGCACAGTCCAAACCTAAAA3'5'CTAGATTTAAACTTGTTGATCTGACAG3'5'CTCTGTAAACAAACCGGGC3'5'GATCTGACAGGAAACAATTTGCAT3'。34.根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中病原體是沙勰衣嚴(yán)沐^Tz/am;^'a35.根據(jù)權(quán)利要求34的方法，其中#、/^衣嚴(yán)沐fC/z/awyAafrac/zoma^9特異引物擴(kuò)增沙殿衣嚴(yán)體《.加c/z函油W隱蔽性質(zhì)粒的全部或部分。36.根據(jù)權(quán)利要求35的方法，其中引物是CP24-5'GGGATTCCTGTAACAACAAGTCAGG3'CP27-5'CCTCTTCCCCAGAACAATAAGAAC3,。37.根據(jù)權(quán)利要求l-25任何一項(xiàng)的方法，其中病原體是一種支原體科種類。38.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中病原體是一種支原體。39.根據(jù)權(quán)利要求38的方法，其中支原體是L生遭支嚴(yán)沐fMgemY^畫)。40.根據(jù)權(quán)利要求39的方法，其中生^"^7^銀(^^0//"1^"^"^//"^)的存在通過采用生遭支嚴(yán)沐fMyco//"纖agem'to"w一特異引物測(cè)定生遭支沐(7l^cop/twmagemYa"wmy)核酸的存在而被領(lǐng)!l定。41.根據(jù)權(quán)利要求40的方法，其中全^"^"嚴(yán)^/Mj^o//oywagew'to//wm)特異引物擴(kuò)增MgPa基因的全部或部分。42.根據(jù)權(quán)利要求41的方法，其中引物是MgPa-1-5,AGTTGATGAAACCTTAACCCCTTGG3'MgPa-3-5'CCGTTGAGGGGTTTTCCATTTTTGC3'。43.根據(jù)權(quán)利要求37的方法，其中病原體是一種脲原體。44.根據(jù)權(quán)利要求43的方法，其中脲原體是t/.wea(y"CMW。45.根據(jù)權(quán)利要求44的方法，其中Oeap/wwawefl/"/cflf的存在通過采用L^ea//oy畫wrea/，/ca特異弓l物觀!j定tA"ea/7/a膽awea(y"ca核酸的存在而46.根據(jù)權(quán)利要求45的方法，其中L^ea;/wmawea(y"ca特異引物擴(kuò)增脲酶基因的全部或部分。47.根據(jù)權(quán)利要求46法，其中引物是Ul-5'GATGGTAAGTTAGTTGCTGAC3'U2-5'ACGACGTCCATAAGCAACT3，。48.—種檢測(cè)原體感染的試劑盒，包括一種或多種病原體特異引物，采用病原體特異引物從血液樣本中擴(kuò)增病原體特異核酸的試劑和；采用引物從血清樣本中檢測(cè)擴(kuò)增的產(chǎn)物的檢測(cè)試劑。49.根據(jù)權(quán)利要求48的試劑盒，包括一種特異結(jié)合元件，其用于分離和/或純化一種包含持久形式病原體細(xì)胞的血液樣本的部分。50.根據(jù)權(quán)利要求49的試劑盒，其中特異結(jié)合元件是一種免疫球蛋白結(jié)合試劑，用于分離和/或純化血液樣本中的免疫復(fù)合物。51.根據(jù)權(quán)利要求48-50任何一項(xiàng)的的試劑盒，進(jìn)一步包括用于轉(zhuǎn)移、處理和儲(chǔ)藏血液樣本的儀器。52.根據(jù)權(quán)利要求48-51任何一項(xiàng)的的試劑盒，進(jìn)一步包括用于從血液樣本中去除血細(xì)胞的裝置。53.根據(jù)權(quán)利要求48-52任何一項(xiàng)的的試劑盒，包括用于分離和/或純化用于通過所述引物擴(kuò)增的DNA的儀器。54.—種持久專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的分離的原生小體，選自以下組成的組厥炎^"嚴(yán)體匸C.戶e"wom'a"、沙淑衣嚴(yán)伴f廠ac/7o附a"sJ>、生遭支嚴(yán))^YA^co;/(Xs附flgemYa/Zw^)或,厥嚴(yán)沐55.—種根據(jù)權(quán)利要求54的原生小體，其中原生小體感染一種細(xì)胞以產(chǎn)生一種網(wǎng)狀小體，其相對(duì)于所述微生物的參照菌株，為LPS缺陷和抗生素不敏感的。56.—種根據(jù)權(quán)利要求55的分離的原生小體，其中病原性微生物是沙殿衣'扇'沐fC/7/am;^arac/wwa"J;所述網(wǎng)狀小體不表達(dá)Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD，并且；相對(duì)于沙淑衣嚴(yán)沐0:/z/aw;^'a,rac/zow油;^的參照菌株，所述網(wǎng)狀小體表達(dá)水平提高了的Hsp60;和水平降低了的MOMP。57.—種產(chǎn)生被專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式感染的宿主細(xì)胞的方法，包括分離和/或純化來自含有所述持久形式細(xì)胞的個(gè)體血液樣本的部分，使一群宿主細(xì)胞與所述部分接觸，并且在所述群中鑒別含有微生物持久形式的宿主細(xì)胞。58.根據(jù)權(quán)利要求57的方法，包括分離或純化所述鑒別的宿主細(xì)胞。59.根據(jù)權(quán)利要求57或58的方法，包括培養(yǎng)所述鑒別的宿主細(xì)胞。60.根據(jù)權(quán)利要求57-59任何一項(xiàng)的方法，其中專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物選自如下組成的組廁炎衣嚴(yán)體O:.戶e蘭om'a"、沙凝衣嚴(yán)沐frac/z謹(jǐn)a"d、^T遭支嚴(yán)浙M戸;/a纖age""a/Z—或,嚴(yán)嚴(yán)嚴(yán)體61.—種包含專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久形式的宿主細(xì)胞，其采用根據(jù)權(quán)利要求57-60任何一項(xiàng)的方法獲得。62.—種根據(jù)權(quán)利要求61的宿主細(xì)胞，其中所述的專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的持久形式與所述微生物參照菌株相比具有降低了的抗生素敏感。抗生素敏感63.—種根據(jù)權(quán)利要求61或62的宿主細(xì)胞，其中所述的專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物的持久形式與所述微生物參照菌株相比具有降低了的LPS或LPS缺陷。64.—種根據(jù)權(quán)利要求61-63任何一項(xiàng)的宿主細(xì)胞，其中專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物選自如下組成的組,炎衣嚴(yán)沐fC.戶e畫om'fl"、#、凝衣扇沐(TC.rac/z畫""sJ、生遭支嚴(yán)沐(^c。/7/ay歸gem.m/Z麵y)或J^屑沐Wm2/7/a扁awre—"cwwJ。65.—種根據(jù)權(quán)利要求64的分離的宿主細(xì)胞，其中病原性微生物是沙源衣扇""沐fC7z/flmyAa^ac/zoma"d;所述持久形式細(xì)胞不表達(dá)Omp2(60kDa)、Omp3(9kDa)或PmpD，并且；相對(duì)于沙淑衣嚴(yán)沐fCWawyAafrac/wwa&9的參照菌株，所述持久形式細(xì)胞表達(dá)水平提高了的Hsp60;和水平降低了的MOMP。66.—種篩選抗菌化合物的方法，可以包括使根據(jù)權(quán)利要求57-65任何一項(xiàng)的宿主細(xì)胞與一種待測(cè)化合物接觸；并且測(cè)定所述化合物對(duì)所述宿主細(xì)胞中病原性微生物的作用，其中在所述宿主細(xì)胞中所述病原性微生物與對(duì)照相比數(shù)量的減少的指示待測(cè)化合物為一種抗菌化合物。67.—種測(cè)定抗菌化合物在治療個(gè)體中專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物持久感染的效果的方法，其包括i)在施用抗菌化合物之前和之后從個(gè)體中獲得血液樣本；(ii)測(cè)定在所述樣本中病原體細(xì)胞的數(shù)量或濃度；其中在給藥之后獲得的樣本與給藥之前相比病原性微生物細(xì)胞數(shù)量的降低指示該抗菌制劑對(duì)于治療持久感染是有效的。68.根據(jù)權(quán)利要求67的方法，其中在所述樣本中病原體細(xì)胞數(shù)量或濃s、(i)使所述血液樣本與一種特異結(jié)合元件相接觸以分離和/或純化所述樣本的部分，并且；(ii)在所述樣本的所述部分中測(cè)定病原性微生物核酸的存在，其中在給藥之后獲得的樣本部分與給藥之前相比其中病原性微生物核酸數(shù)量的降低指示該抗菌制劑對(duì)于治療持久感染是有效的。69.—種在個(gè)體中治療專性細(xì)胞內(nèi)病原性微生物持久感染的方法，包括i)給予個(gè)體一種抗菌化合物；ii)在給藥之后從個(gè)體獲得血液樣本，iii)采用根據(jù)權(quán)利要求1-16任何一項(xiàng)的方法在血液樣本中測(cè)定所述專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物細(xì)胞的存在與否，iv)重復(fù)步驟i)至iii)直至從樣本部分中找不到來自病原性微生物的細(xì)胞。70.根據(jù)權(quán)利要求68或69的方法，其中細(xì)胞的存在被如下測(cè)定使來自個(gè)體的血液樣本與一種特異結(jié)合元件相接觸以分離和/或純化所述樣本的部分，并且；在所述部分中測(cè)定來自病原性微生物核酸的存在。71，根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中所述特異結(jié)合元件結(jié)合至免疫球蛋白，并且所述的分離和/或純化的部分包括免疫復(fù)合物。72.根據(jù)權(quán)利要求70的方法，其中所述特異結(jié)合元件結(jié)合至脂蛋白，并且所述的分離和/或純化的部分包括脂蛋白復(fù)合物。73.根據(jù)權(quán)利要求70-72任何一項(xiàng)的方法，其中分離和/或純化部分包括所述持久形式的原生小體。74.根據(jù)權(quán)利要求67-73任何一項(xiàng)的方法，其中專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)病原性微生物選自如下組成的組廁炎沈辰沐fC戶e謂om'^;、沙淑衣嚴(yán)沐rac/zo聽"^J、主遭支嚴(yán)沐("Mycop/a^歸ge""a"ww,或,厭,嚴(yán)沐75.—種在個(gè)體中治療動(dòng)脈粥樣硬化病況的方法，包括i)給予個(gè)體一種抗體酶抑制劑和一種抗菌化合物；ii)給藥之后從個(gè)體獲得血液樣本，iii)在血液樣本的非細(xì)胞部分中測(cè)定抗體酶活性水平，其中給予個(gè)體抗體酶抑制劑被重復(fù)直至抗體酶活性從非細(xì)胞部分中基本消失，并且iv)在血液樣本非細(xì)胞部分中采用根據(jù)權(quán)利要求1-16任何一項(xiàng)的方法測(cè)定^炎衣嚴(yán)沐(T.戶ew附om'a"細(xì)胞的存在與否，其中給予個(gè)體抗菌化合物被重復(fù)直至/，炎衣嚴(yán)沐/wewmom'a"細(xì)胞從血液樣本的非細(xì)胞部分中消失。76.—種在個(gè)體中治療動(dòng)脈粥樣硬化病況的方法，包括i)給予個(gè)體阿奇霉素；ii)在所述給藥之后從個(gè)體獲得血液樣本；iii)在血液樣本的非細(xì)胞部分中測(cè)定抗體酶活性水平，并且；h0釆用根據(jù)權(quán)利要求1-16任何一項(xiàng)的方法在血液樣本的非細(xì)胞部分中測(cè)定i^炎衣i資-沐rC.，eMmom'ad細(xì)胞的存在與否；其中給予個(gè)體阿奇霉素被重復(fù)直至抗體酶活性和^^衣嚴(yán)沐a:.p"ewmom'a"細(xì)胞均從來自個(gè)體的血液樣本的非細(xì)胞部分中消失。77.根據(jù)權(quán)利要求75或76的方法，其中抗體酶活性水平通過測(cè)定部分中抗體介導(dǎo)的脂質(zhì)氧化活性領(lǐng)'J定。78.根據(jù)權(quán)利要求77的方法，其中抗體酶活性水平通過測(cè)定部分中抗衣原體抗體介導(dǎo)的脂質(zhì)氧化活性而被測(cè)定。全文摘要本發(fā)明涉及在血液樣本中，特別是在血漿和血清樣本中檢測(cè)病原體，特別是專性細(xì)胞內(nèi)或膜相關(guān)微生物的持久形式例如衣原體、支原體和脲原體種類。本發(fā)明的方法和試劑盒可用于檢測(cè)病原體感染和評(píng)估病原體相關(guān)疾病病況，并且還可以用于研發(fā)和篩選新的抗菌藥物，產(chǎn)品和治療手段。文檔編號(hào)A61K39/02GK101356436SQ200680045150公開日2009年1月28日申請(qǐng)日期2006年10月13日優(yōu)先權(quán)日2005年10月14日發(fā)明者伊萬·派特伊夫,奈利亞·阿哈托夫娜·西格加吉羅瓦申請(qǐng)人:伊萬·派特伊夫