長鏈非編碼rna及在制備抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，具體涉及一種與人結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的長鏈非編碼 RNA(S卩IncRNA-DRIC)及其在制備抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 根據(jù)資料顯示，2014年全球結(jié)直腸癌（colorectalcancer，CRC)新發(fā)病例占全部 癌癥的8%，發(fā)病率和死亡率均排第3位。在中國，結(jié)直腸癌已成為最常見的十大惡性腫瘤 之一，近年來發(fā)病率持續(xù)上升。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國2010年大腸癌的發(fā)生率為20. 9/105,死亡率為 10. 05/105,分別位居我國腫瘤發(fā)生率的第6位和死亡率的第5位。因此，闡明大腸癌的發(fā) 生、發(fā)展的分子機(jī)制，尋找新的診斷和治療靶點(diǎn)，將有助于其早期診斷、預(yù)后預(yù)測及提高治 療效果。
[0003] 長鏈非編碼RNA(longnon-codingRNAs，IncRNA)是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200nt 的RNA分子，它們幾乎不編碼蛋白，由RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄并經(jīng)可變剪切形成，轉(zhuǎn)錄水平低于 蛋白質(zhì)編碼基因，曾一度被認(rèn)為是基因組轉(zhuǎn)錄的"噪音"。近來研宄證實(shí)，IncRNA能在表觀 遺傳學(xué)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多種層面上調(diào)控基因的表達(dá)水平，參與生物體的發(fā)育、分 化等基本生命過程，其表達(dá)或功能異常與人類心血管疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腫瘤等疾病的發(fā) 生發(fā)展密切相關(guān)。IncRNA有望成為腫瘤診斷、預(yù)測預(yù)后的標(biāo)志物，同時(shí)也為腫瘤的治療提供 了新的靶點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的首要目的在于提供一種與人結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的長鏈非編碼RNA-一 IncRNA-DRIC，IncRNA-DRIC有可能成為結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物。
[0005] 本發(fā)明的另一目的在于提供IncRNA-DRIC在制備抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物中 的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] 一種與人結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的長鏈非編碼RNA，是IncRNA-DRIC，其轉(zhuǎn)錄本序列如 SEQ ID N0:1所示。
[0008] IncRNA-DRIC在結(jié)直腸癌中的表達(dá)水平明顯低于正常腸上皮。進(jìn)一步構(gòu)建其表達(dá) 載體plNCX2-lncRNA-DRIC，轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞HCT116后，發(fā)現(xiàn)相較于對照組，IncRNA-DRIC 過表達(dá)可以抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的迀移。因此，IncRNA-DRIC可以用于制備抑制結(jié)直腸癌細(xì) 胞轉(zhuǎn)移的藥物。
[0009] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：
[0010] 本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)一個(gè)長鏈非編碼RNAIncRNA-DRIC在結(jié)直腸癌組織中的特異性表 達(dá)，并證明其抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的迀移，為結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的輔助診斷提供了新的有力工具， 也提供了一個(gè)具有基因治療潛力的RNA過表達(dá)載體，具有重要的意義和極大的應(yīng)用價(jià)值。
【附圖說明】
[0011] 圖1是IncRNA-DRIC在79例結(jié)直腸癌組織及配對的正常腸上皮組織的表達(dá)量示 意圖（N代表正常組織，T代表肝癌組織）。
[0012] 圖2是過表達(dá)IncRNA-DRIC的HCT116細(xì)胞及對照細(xì)胞的迀移實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0013] 下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限 于此。
[0014] 實(shí)施例1
[0015] IncRNA-DRIC的克隆，包括以下步驟：
[0016] 1.臨床組織樣本收集
[0017] 收集中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2004-2009年期間存檔的結(jié)直腸癌冰凍新鮮組織標(biāo) 本及其配對正常腸上皮組織共79對。以上標(biāo)本用于科學(xué)研宄均獲得患者的知情同意。
[0018] 2.IncRNA定量PCR實(shí)驗(yàn)：
[0019] (l)RNA抽提
[0020] 利用Trizol從冰凍組織中抽提總RNA，用紫外分光光度計(jì)測定RNA的濃度和純度。
[0021] (2)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
[0022] ①在PCR管中加入以下試劑：
[0023]總RNA 2ug
[0024]隨機(jī)引物（〇? 5ug/ul) lul
[0025] 無RNA酶雙蒸滅菌水補(bǔ)至10ul
[0026] ②置PCR儀中70°C、5min，立即放入冰中靜置至少2min ;
[0027] ③再在上述PCR管中依次加入以下試劑：
[0028]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種與人結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的長鏈非編碼RNA，是IncRNA-DRIC，其轉(zhuǎn)錄本序列如 SEQ ID NO: 1 所示。
2. -種重組質(zhì)粒，其特征在于：含有權(quán)利要求1所述的IncRNA-DRIC的序列，并且能在 哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)IncRNA-DRIC。
3. 權(quán)利要求1所述的IncRNA-DRIC在制備抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的IncRNA-DRIC在制備抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用， 其特征在于：所述的藥物中含有權(quán)利要求1所述的IncRNA-DRIC的序列和/或含有權(quán)利要 求2所述的重組質(zhì)粒。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種與人結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的長鏈非編碼RNA(即lncRNA-DRIC)及其在制備抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。lncRNA-DRIC的轉(zhuǎn)錄本序列如SEQ ID NO:1所示。實(shí)驗(yàn)表明，lncRNA-DRIC在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)下調(diào)，過表達(dá)lncRNA-DRIC可以抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)一個(gè)長鏈非編碼RNA lncRNA-DRIC在結(jié)直腸癌組織中的特異性表達(dá)，并證明其抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移，為結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的輔助診斷提供了新的有力工具，也提供了一個(gè)具有基因治療潛力的RNA過表達(dá)載體，具有重要的意義和極大的應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類】C12N15-113, C12N15-85, A61K31-7105, A61K48-00, A61K35-04
【公開號(hào)】CN104830865
【申請?zhí)枴緾N201510304553
【發(fā)明人】黃文林, 林嘉欣, 陳帥, 吳江雪
【申請人】黃文林
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年6月5日