一種從麻花艽中制備龍膽苦苷化學對照品的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種龍膽苦苷(Gent1picroside)化學對照品的制備方法，尤其涉及一種從麻花艽中制備龍膽苦苷化學對照品的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]麻花充(Gentianastraminea Maxim.)系屬龍膽科(Gentianaceae)龍膽屬{ Gentiana (Tourn.) Z)草本植物，麻花充具有散風祛濕、清熱利膽及舒筋止痛等功效。龍膽苦苷是麻花艽全草中含量約為8%的環(huán)烯醚萜苷類化合物，2010版中國藥典已將龍膽苦苷作為麻花艽的質(zhì)控指標成分之一，并規(guī)定龍膽苦苷與馬錢苷酸總量在麻花艽藥材中的含量應(yīng)達2.5%以上。
[0003]目前龍膽苦苷的提取方法主要采用如下步驟:藥材提取-柱層析富集-結(jié)晶。不同提取分離過程的區(qū)別在于提取所用方法及柱層析所用分離材料不同。劉東鋒等(中國專利CN101704865A)采用超臨界流體提取，大孔樹脂分離，結(jié)晶的方法獲得純度約98%的龍膽苦苷標準品；朱吉滿等(中國專利103848875A)采用水提取、大孔樹脂，硅膠柱分離，結(jié)晶的方法獲得純度99%的龍膽苦苷及馬錢酸的混合物；段文錄等(中國專利CN 102675386A)采用硅膠柱選擇性的收集餾分得到純度98%以上的龍膽苦苷化合物。
[0004]以上方法均在不同程度上應(yīng)用了硅膠柱層析及結(jié)晶的方法，雖然能獲得純度較高的龍膽苦苷純品，但是分離過程中損失非常大；同時缺少高效的柱分離方法及相應(yīng)檢測方法，不能穩(wěn)定、高效地獲得純度98%以上的龍膽苦苷化學對照品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種分離時間短、分離效果好、產(chǎn)品純度高的從麻花艽中制備龍膽苦苷化學對照品的方法。
[0006]為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種從麻花艽中制備龍膽苦苷化學對照品的方法，包括以下步驟:
⑴95%乙醇溶液提取:
麻花艽全草陰干、粉碎后加入其質(zhì)量4~10倍的體積濃度為80~95%的乙醇溶液，在60~95°C下提取1~3次，每次1~3 h，過濾、合并濾液A，該濾液A經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得麻花艽醇提物；
⑵樹脂柱富集:
將所述麻花艽醇提物用體積分數(shù)5~30%的甲醇溶液溶解后經(jīng)MCI或HP20SS樹脂柱分離，先以2~5倍柱體積的水溶液洗脫去除大極性雜質(zhì)，然后用2~5倍柱體積且體積分數(shù)30%的甲醇溶液、50%甲醇溶液進行臺階梯度洗脫，收集50%洗脫物，該50%洗脫物經(jīng)減壓干燥即得麻花充粗品；
⑶反相液相制備色譜精制:
所述麻花艽粗品用其質(zhì)量5~10倍的體積分數(shù)為40~80%的甲醇溶液溶解，然后配制樣品濃度為30~100 mg/mL，經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，得到濾液B，該濾液B經(jīng)反相液相制備色譜分離，經(jīng)檢測波長為285 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中主要的色譜峰餾分，該色譜峰餾分經(jīng)減壓干燥即得純度大于98%的白色粉末狀的對照品。
[0007]所述步驟(I)、所述步驟⑵和所述步驟⑶中減壓干燥的條件均是指真空度為0.06-0.09 MPa,溫度為 50-70 °C。
[0008]所述步驟⑶中反相液相制備色譜分離的工作參數(shù)是指色譜柱柱長250 mm、直徑20-50 mm，反相液相制備柱固定相為10 μπι Megress C18，流動相為體積分數(shù)40%~50%的甲醇-水溶液，進樣體積為2~10mL，流速為20~60 mL/min。
[0009]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點:
1、本發(fā)明工藝簡單、回收率高。
[0010]第一步醇提取，龍膽苦苷屬醇溶性化合物，采用95%的乙醇熱回流提??；提取充分；第二步采用樹脂柱富集，可獲取高含量的龍膽苦苷粗品(參見圖1)，同時樹脂具有脫色的功效。第三步采用反相高效液相制備，可獲取高純度對照品，且回收率高(90%)(參見圖2)0
[0011]2、本發(fā)明采用的技術(shù)手段非常適宜放大進行規(guī)?；a(chǎn)。
[0012]原料要求不高，麻花艽全草，易于批量備料；第一步醇提取，簡單、易行；第二步采用樹脂柱富集，樹脂柱可以再生循環(huán)使用，易于規(guī)?；坏谌骄浦胁捎梅聪喔咝б合嘀苽?，為快速的等度方法，也非常適宜放大規(guī)模生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0013]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細的說明。
[0014]圖1為本發(fā)明經(jīng)樹脂柱富集后龍膽苦苷的HPLC分析圖譜(285 nm)。
[0015]圖2為本發(fā)明高純度龍膽苦苷的HPLC分析圖譜(285 nm)。
【具體實施方式】
[0016]實施例1 一種從麻花艽中制備龍膽苦苷化學對照品的方法，包括以下步驟:
⑴95%乙醇溶液提取:
I Kg麻花艽全草陰干、粉碎后加入其質(zhì)量10倍的體積濃度為95%的乙醇溶液，在60°C下提取I次，每次3 h，過濾、合并濾液A，該濾液A經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得麻花艽醇提物。
[0017]其中:減壓干燥的條件是指真空度為0.09 MPa，溫度為50 °C。
[0018]⑵樹脂柱富集:
將麻花艽醇提物用體積分數(shù)30%的甲醇溶液溶解后經(jīng)MCI樹脂柱分離，先以2倍柱體積的水溶液洗脫去除大極性雜質(zhì)，然后用2倍柱體積且體積分數(shù)30%的甲醇溶液、50%甲醇溶液進行臺階梯度洗脫，收集50%洗脫物，該50%洗脫物經(jīng)減壓干燥即得麻花艽粗品114.3g°
[0019]其中:減壓干燥的條件是指真空度為0.09 MPa，溫度為50 °C。
[0020]⑶反相液相制備色譜精制:
麻花艽粗品用其質(zhì)量10倍的體積分數(shù)為40%的甲醇溶液溶解，然后配制樣品濃度為30mg/mL,經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾，得到濾液B，該濾液B經(jīng)反相液相制備色譜分離，經(jīng)檢測波長為285 nm的紫外檢測器檢測，收集制備色譜圖中主要的色譜峰餾分，該色譜峰餾分經(jīng)減壓干燥即得純度大于98%的白色粉末狀的對照品98.3 go
[0021]其中:減壓干燥的條件是指真空度為0.09 MPa，溫度為50 °C。
[0022]反相液相制備色譜分離的工作參數(shù)是指色譜柱柱長250 mm、直徑20 mm，反相液相制備柱固定相為10 μ?? Megress C18，流動相為體積分數(shù)40%的甲醇-水溶液，進樣體積為2mL，流速為 20 mL/min ο
[0023]