專利名稱：一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法，本發(fā)明還涉及木犀草素-7-龍膽二糖苷在苦碟子和苦碟子制劑質(zhì)量控制方面的應(yīng)用，屬于藥學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
抱莖苦荬菜，俗稱苦碟子、滿天星等，為菊科苦荬菜屬抱莖苦荬菜[Ixeris sonchifolia (Bge)Hance]的兩年生干燥地上部分，具有清熱解毒，化瘀止痛的功效，臨床應(yīng)用以苦碟子注射液較為廣泛，主要用于治療冠心病、心絞痛及心肌梗死等缺血性心腦血管疾病。藥理研究表明，苦碟子的主要藥效成分為黃酮類化合物和腺苷等。目前國家藥品標準中苦碟子的含量測定指標為腺苷，但腺苷含量極低，每毫升僅含幾微克，對黃酮類化合物則僅有總黃酮的紫外測定法，方法專屬性差，準確度低。為此我們做了以下工作，以尋找一種新的黃酮類成分作為苦碟子含量測定的指標。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法。本發(fā)明的另一目的是提供該木犀草素-7-龍膽二糖苷在苦碟子藥材、苦碟子制劑質(zhì)量控制方面的應(yīng)用。采用的技術(shù)方案是
一、木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法，包括下述工藝步驟 1.取苦碟子藥材，加水煎煮二次，第一次1小時，第二次0. 5小時，合并煎液，濃縮至每Iml相當(dāng)于原生藥0. 5g，放冷至40°C以下，在攪拌下加2、倍量95%乙醇，使含醇量達 50 70%，放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味。2.回收液通過大孔樹脂柱，用水洗脫廣5BV，棄去水洗液，再用30%乙醇洗脫 5^10BV,收集洗脫液減壓濃縮，濃縮液干法上聚酰胺柱，先用水洗脫5 10BV，棄去水洗液，再用30%乙醇洗脫5BV，收集2飛BV洗脫液，減壓濃縮。3.經(jīng)甲醇溶解，應(yīng)用250 X IOmm的半制備柱，以15:85的乙腈與1%冰醋酸為流動相進行HPLC分離制備，得黃色無定形粉末。經(jīng)HPLC鑒定，純度可達98%以上。該黃色無定形粉末可溶于甲醇、乙醇，易溶于50%乙醇，Mg-HCl反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陽性，說明該化合物為黃酮苷類化合物。酸水解檢出葡萄糖。在1H-NMR譜中，較低場的 ABX 系統(tǒng)中的 3 個質(zhì)子 7. 44 (1H，dd，J=8. 4，1. 8Hz)，7. 41 (1H，d，J=L 8Hz)和 6.89 (1H，d，J=8.4Hz)說明B環(huán)為3' ,4' - 二取代，較高場的兩個質(zhì)子6. 50 (1H，d， J=1.8Hz)和 6. 80 (1H，d，J=I. 8Hz)分別為 A 環(huán)的 6，8 位質(zhì)子。6. 70 (1扎8)為(>3為氧信號。與文獻木犀草素的碳譜數(shù)據(jù)比較(Ternai B, Markham KR. Carbon-13 NMR studies of flavonoids- I flabones and flavonols. Tetrahedron, 1976, 32:565-569),石角定苷元為木犀草素。而苷元的C-7為向高場位移0. 7，而C-6，C-8和C-10分別向低場位移0. 8，1. 0，1. 6，從而說明糖鏈連接在C-7位上。13C-NMR譜在anomeric譜區(qū)給出兩個葡萄糖端基碳信號103. 6和99. 9.將糖部分數(shù)據(jù)與文獻報道的龍膽二糖基數(shù)據(jù)比較基本一致(Kikuchi M, Matsuda N. Flavone glycosides from Lonicera gracilipes. Journal of Natural Product, 1996，59 (3) : 314-315)，因此，糖部分的組成為 β-D-吡喃葡萄糖-(1 — 6)-β -D-吡喃葡萄糖基。綜上所述，鑒定該化合物為木犀草素-7-龍膽二糖苷。
化合物結(jié)構(gòu)式
采用該法制得的木犀草素-7-龍膽二糖苷純度可達98%以上，且為苦碟子中的主要活性成分之一，可作為苦碟子藥材與制劑的定量指標，采用HPLC法測定方法重現(xiàn)性好，靈敏度高，專屬性強。二、木犀草素-7-龍膽二糖苷用于苦碟子制劑的質(zhì)量控制，具體辦法如下 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0. 4%磷酸溶
液，乙腈與0. 4%磷酸溶液配比為10 :90，為流動相；檢測波長為330nm ；理論板數(shù)以木犀草素-7-龍膽二糖苷峰計算應(yīng)不低于3000 ；
對照品溶液的制備精密稱取木犀草素-7-龍膽二糖苷對照品適量，加甲醇制成每 Iml含0. 02mg的溶液，搖勻，即得；
供試品溶液制備取苦碟子注射液適量，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。方法學(xué)考察實驗如下
1線性關(guān)系考察分別精密吸取對照品儲備液(0. 20mg/ml) 0. 5ml、lml、1. 5ml、2ml、 2. 5ml、3ml置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成濃度分別為4. 0,8. 0,12. 0、 16. 0,20. 0,24.0 μ g/ml的對照品溶液，按擬定的色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標，木犀草素-7-龍膽二糖苷濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程 Υ=1· 8903X-104667 r2=0. 9995 (表 1)
表1線性關(guān)系考察
權(quán)利要求
1.一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法，其特征在于包括下述工藝步驟取苦碟子藥材，加水煎煮二次，第一次1小時，第二次0. 5小時，合并煎液，濃縮至每Iml 相當(dāng)于原生藥0. 5g，放冷至40°C以下，在攪拌下加2、倍量95%乙醇，使含醇量達50 70%， 放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過大孔樹脂柱，用水洗脫廣5BV，棄去水洗液，再用30%乙醇洗脫5 10BV，收集洗脫液減壓濃縮，濃縮液干法上聚酰胺柱，先用水洗脫5 10BV，棄去水洗液，再用30%乙醇洗脫5BV，收集2飛BV洗脫液，減壓濃縮，經(jīng)甲醇溶解，應(yīng)用250 X IOmm的半制備柱，以乙腈與1%冰醋酸混合液為流動相進行HPLC分離制備， 得黃色無定形粉末，即得；上述乙腈與1%冰醋酸混合液的配制比例為15% :85%，上述百分比為質(zhì)量百分比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法，其特征在于采用該方法制得的木犀草素-7-龍膽二糖苷用于苦碟子藥材質(zhì)量控制方法為色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈與0. 4%磷酸溶液為流動相，乙腈與0. 4%磷酸溶液配比為8 :92，為流動相；檢測波長為330nm ；理論板數(shù)以木犀草素-7-龍膽二糖苷峰計算應(yīng)不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取木犀草素-7-龍膽二糖苷對照品適量，加甲醇制成每 Iml含0. 2mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液制備取苦碟子藥材30g，碎斷，混勻，取5g，精密稱定，精密加入甲醇 50ml，超聲處理30分鐘，微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法，其特征在于采用該方法制得的木犀草-7-龍膽二糖苷用于苦碟子制劑質(zhì)量控制方法為色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈與0. 4%磷酸溶液為流動相，乙腈與0. 4%磷酸溶液配比為10 :90，為流動相；檢測波長為330nm ；理論板數(shù)以木犀草素-7-龍膽二糖苷峰計算應(yīng)不低于3000 ；對照品溶液的制備精密稱取木犀草素-7-龍膽二糖苷對照品適量，加甲醇制成每 Iml含0. 2mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液制備取苦碟子注射液適量，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
全文摘要
一種木犀草素-7-龍膽二糖苷的制備方法，包括下述工藝步驟取苦碟子藥材，加水煎煮二次，第一次1小時，第二次0.5小時，合并煎液，濃縮至每1ml相當(dāng)于原生藥0.5g，放冷至40℃以下，在攪拌下加2~4倍量95%乙醇，使含醇量達50~70%，放置24小時，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過大孔樹脂柱，用水洗脫1~5BV，棄去水洗液，再用30%乙醇洗脫5~10BV，收集洗脫液減壓濃縮，濃縮液干法上聚酰胺柱，先用水洗脫5~10BV，棄去水洗液，再用30%乙醇洗脫5BV，收集2~5BV洗脫液，減壓濃縮至干，經(jīng)甲醇溶解，應(yīng)用250×10mm的半制備柱，以15:85的乙腈與1%冰醋酸為流動相進行HPLC分離制備，得黃色無定形粉末。本發(fā)明工藝簡單，純度可達98%以上。
文檔編號A61P9/10GK102304160SQ20111003147
公開日2012年1月4日 申請日期2011年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月29日
發(fā)明者于玲玲, 宋少江, 王學(xué)東, 生可心, 馬占芝 申請人:沈陽雙鼎制藥有限公司