專利名稱：甘油一酯和甘油二酯糖苷作為抗炎藥物的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甘油一酯或甘油二酯的糖苷，例如3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯(玫瑰果(Rosa canina L.的果實(shí))的一種成分)，用于治療炎癥疾病，例如通過(guò)減輕白細(xì)胞的趨化性和氧化爆發(fā)應(yīng)答(oxidative burst response)治療炎癥疾病的用途。
背景技術(shù)：
已有文獻(xiàn)記載，玫瑰果的水提取物具有抗炎特性(Winther，Rein，和Kharazmi，Inflammopharmacology，第7卷，pp 63-68(1999))。還有文獻(xiàn)記載，玫瑰果提取物能夠在體外抑制人外周血嗜中性粒細(xì)胞的趨化性和化學(xué)發(fā)光，并可在體內(nèi)降低某些炎癥參數(shù)(Kharazmi和Winther，Inflammopharmacology，第7卷，pp 377-386(1999))。
美國(guó)專利6,024,960記載，維生素C含量較高的玫瑰果濃縮物能夠減輕炎癥癥狀。具體地講，該濃縮物是通過(guò)能夠保留相對(duì)高含量維生素C和其他維生素的方法制備的。據(jù)申請(qǐng)人的相關(guān)美國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)?9/694,764，申請(qǐng)日2000年10月23日)記載，口服給予玫瑰果濃縮物和魚油組合物，能夠減輕關(guān)節(jié)疼痛和僵硬，特別是與關(guān)節(jié)炎有關(guān)的疼痛和僵硬。然而，這些專利申請(qǐng)中所記載的用于產(chǎn)生有益療效的玫瑰果濃縮物的用量均相對(duì)較高，有些不適于每日服用。
據(jù)美國(guó)專利5,620,962和5,767,095記載，從海藻中獲得的單半乳糖雙二十碳五烯酸甘油(MGDG-EPA)用于局部制劑中時(shí)具有抗炎活性。這些專利申請(qǐng)記載了只有經(jīng)至少一個(gè)二十碳五烯酸酯化的半乳糖甘油才具有局部抗炎活性。
據(jù)稱β-D-吡喃半乳糖甘油經(jīng)1∶10∶10的肉豆蔻酸、棕櫚酸和棕櫚油酸混合物酯化后，能夠適度地抑制過(guò)氧化物自由基的生成(Kikuchi，H.，Tsukitani，Y.，Shimizu，I.，Kobayashi，M.，Kitagawa，IChem.Pharm.Bull.第31卷，552-556頁(yè)(1983))，但是沒(méi)有對(duì)這些化合物的混合物的抗炎活性和潛在的醫(yī)藥用途作深入研究。
發(fā)明概述申請(qǐng)人在對(duì)玫瑰果濃縮物的繼續(xù)研究中驚奇地發(fā)現(xiàn)，玫瑰果中一種特有的成分是一種具有高度抗炎活性的藥物。既然口服玫瑰果可以有效緩解炎癥疼痛，例如由關(guān)節(jié)炎引起的疼痛，我們相信，所述抗炎劑的制劑可用于治療與炎癥疾病相關(guān)的一些癥狀。該被提取分離的物質(zhì)已確定為是半乳糖脂3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯(1，2-雙-O-α-亞麻?；?3-O-β-D-吡喃半乳糖基-甘油)，對(duì)其將在下文作進(jìn)一步描述。令人驚奇的是，我們發(fā)現(xiàn)該化合物能夠有效地抑制多形核白細(xì)胞的趨化性和化學(xué)發(fā)光。
因此，本發(fā)明的一個(gè)目的就是提供一種治療、緩解或預(yù)防炎癥疾病的方法，該方法使用包含甘油一酯或甘油二酯(不包括二十碳五烯酸酯)的糖苷，特別是3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯(簡(jiǎn)稱“GOPO”)或相關(guān)化合物的藥物。在本發(fā)明的一個(gè)特定的方面，所述藥物適合口服給藥，并能減輕炎癥疾病，例如關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎(即，引起關(guān)節(jié)疼痛或關(guān)節(jié)僵硬的疾病)的癥狀，包括緩解疼痛、減輕炎癥以及提高活動(dòng)能力。
通過(guò)使用甘油一酯或甘油二酯(或醚，不包括二十碳五烯酸酯)的糖苷，特別是權(quán)利要求1所定義的物質(zhì)，能夠成功地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的以及其它目的。
附圖簡(jiǎn)述

圖1以圖解的方式說(shuō)明了為從Rosa canina L.玫瑰果中分離抗炎藥物所進(jìn)行的初始分離過(guò)程的第一步。
圖2顯示了干燥、粉碎的犬薔薇果實(shí)(Rosa canina L)的皮的THF提取物的典型分析HPLC色譜圖，其中犬薔薇果實(shí)得自Hyben VitalInternational ApS。此外還顯示了活性化合物(GOPO)的保留時(shí)間。
發(fā)明詳述術(shù)語(yǔ)“單或二酯化甘油的糖苷”、“甘油單酯或甘油二酯的糖苷”以及類似的表述是指一類甘油單酯或甘油二酯(以及醚)的糖苷，例如通過(guò)本文記載的各種方法從植物中提取分離的那些物質(zhì)，但不包括二十碳五烯酸的酯。有代表性的“糖苷”部分有戊糖、己糖或庚糖，特別是己糖如半乳糖和葡萄糖，例如半乳糖，但也可以是包含兩個(gè)或多個(gè)組合的糖部分的二糖和寡糖，特別是二糖苷例如二半乳糖苷和二葡糖苷，例如6-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖。
因此，本發(fā)明提供了式I化合物在制備用于治療、緩解或預(yù)防哺乳動(dòng)物炎癥疾病的藥物中的用途 其中R和R′獨(dú)立地選自氫、C10-24烷基和C10-24-?；?，所述的烷基和?；哂?到5個(gè)不飽和鍵，R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫和糖苷；其中第一個(gè)附加條件是R和R′不同時(shí)為氫，第二個(gè)附加條件是R和R′均不是二十碳五烯酰基。
分子式中的“波浪鍵”是指被所述取代基取代的碳原子可以呈(R)構(gòu)型或(S)構(gòu)型。就“糖”部分(糖苷)而言，其兩種不同的構(gòu)型有時(shí)被稱為α和β構(gòu)型。特別令人關(guān)注的組合是其中的葡萄糖或半乳糖為β-吡喃糖構(gòu)型。
盡管本文的結(jié)構(gòu)式中的“糖”部分是以吡喃糖構(gòu)型畫出的，但應(yīng)當(dāng)理解，抗炎藥物也可以為呋喃糖構(gòu)型(或是吡喃糖和呋喃糖的混合形式)，以固體或溶液的形式存在。
本申請(qǐng)中的術(shù)語(yǔ)“C10-24烷基”是指具有10到24個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴基，例如癸基、十一烷基、十二烷基、十四烷基、十六烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基(eicodecyl)等。
本申請(qǐng)中的術(shù)語(yǔ)“C10-24?；笔侵妇哂?0到24個(gè)碳原子，其中第一個(gè)碳原子為羰基碳的直鏈或支鏈烴基(C9-23烷基-C(＝O)-)，例如具有10到24個(gè)碳原子的脂肪酸殘基。例如月桂酸(C12)殘基、肉豆蔻酸(C14)殘基、棕櫚酸(C16)殘基、硬脂酸(C18)殘基等。
烷基和?；鶊F(tuán)可以具有0到5個(gè)不飽和鍵，例如雙鍵或三鍵，特別是雙鍵。具有一個(gè)或多個(gè)不飽和雙鍵的?；鶎?shí)例有棕櫚油酸(C161)殘基、油酸(C181)殘基、亞油酸(C182)殘基、亞麻酸(C183)殘基、花生四烯酸(C203)殘基、視黃酸(C205)殘基等。
更具體地講，甘油單酯或二酯(或醚)的糖苷是二酯、二醚或單醚-單酯糖苷，即R和R′獨(dú)立地選自C10-24烷基和C10-24?；?。目前最優(yōu)選的是二酯糖苷，即R和R′獨(dú)立地選自C10-24?；?。在所有情況下，烷基和酰基均具有0到5個(gè)不飽和鍵。
就烷基和?；牟伙柡投榷?，目前我們認(rèn)為任何一種具有0到4個(gè)不飽和鍵，例如1-3個(gè)不飽和鍵，例如2或3個(gè)不飽和鍵，特別是3個(gè)不飽和鍵的烷基和酰基是最適合的R和R′基團(tuán)。
同樣，目前我們認(rèn)為任意不飽和鍵中最適宜的是雙鍵。
也就是說(shuō)，我們?cè)O(shè)想特別令人感興趣的抗炎藥物是那些R和R′均為具有1到3個(gè)雙鍵的C16-24酰基基團(tuán)(例如具有3個(gè)雙鍵的C18?；?的化合物，特別是糖部分為葡萄糖或半乳糖，尤其是半乳糖的化合物。
如上所述，R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫和糖苷部分，優(yōu)選R1、R2、R3和R4中至多一個(gè)為糖苷。后面的實(shí)施方案中涉及的是那些通常存在于植物中的化合物以及R1、R2、R3和R4均為氫的化合物。在一些令人關(guān)注的實(shí)施方案中，R1、R2、R3和R4均為氫。
術(shù)語(yǔ)“糖苷部分”是指單糖或二糖部分，例如來(lái)自O(shè)-吡喃半乳糖、O-吡喃葡糖糖、O-吡喃半乳糖基吡喃半乳糖、O-吡喃葡萄糖基吡喃半乳糖、O-吡喃半乳糖基吡喃葡萄糖和O-吡喃葡萄糖基吡喃葡萄糖的部分。
此外，我們?cè)O(shè)想化合物(抗炎藥物)優(yōu)選具有式II所示的結(jié)構(gòu) 其中R、R′、R1、R2、R3和R4如上所定義。
特別令人感興趣的更具體的抗炎藥物實(shí)例有，例如選自β-D-吡喃半乳糖基衍生物、α-D-吡喃半乳糖基衍生物、β-D-吡喃葡萄糖基衍生物、α-D-吡喃葡萄糖基衍生物的物質(zhì)，例如β-D-吡喃半乳糖基和6-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-β-D-吡喃半乳糖基衍生物。
值得關(guān)注的更加具體的抗炎藥物實(shí)施例有，3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-β-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-α-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-α-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、6-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯，以及6-O-(α-D-吡喃半乳糖基)-3-α-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯，例如3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯或3-β-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯，例如從玫瑰果中提取分離的3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯。
如上所述，抗炎藥物可以按照本領(lǐng)域已知的方法經(jīng)全部或部分合成制備(例如參見(jiàn)Nagatsu等，Bioorg.and Medicinal Chem.第4卷，1619-1622，1994；Ohta等，Chem.Pharm.，第39卷，1337-1339，1991；Shibuya等，Chem.Pharm.，第40卷，1166-1169，1992)，或是分離自玫瑰果或其它植物中?；蛘撸寡姿幬锟梢源嬖谟谥参锾崛∥锘蛑参镌现?，優(yōu)選富含抗炎藥物或用抗炎藥物標(biāo)準(zhǔn)化的(standardised)的植物提取物或植物原料。
當(dāng)從玫瑰果分離時(shí)，通過(guò)已知的常規(guī)方法采摘完全成熟的玫瑰果。玫瑰果取自野生薔薇灌木，例如，優(yōu)選取自Rosa canina(″犬薔薇果″)、法國(guó)薔薇(Rosa gallica)、Rosa condita、玫瑰(Rosa rugosa)、黃薔薇(Rosahugonis)、Rosa nitida、Rosa pendulina、Rosa pimpinellifolia和絹毛薔薇(Rosa sericea)。優(yōu)選通過(guò)溶劑提取，用無(wú)機(jī)或有機(jī)溶劑例如己烷、二氯甲烷、乙醇或水從干燥、粉碎的玫瑰果中提取抗炎藥物，但也可以使用其它溶劑。提取后，將得到的提取物蒸發(fā)至干獲得包含抗炎藥物的提取物，或者，取決于提取的步驟，分離得到抗炎藥物本身，對(duì)此將在下文作進(jìn)一步討論。
例如，3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯(式III)可從犬薔薇果的干燥粉末中提取。該分離得到的化合物不僅能夠有效地抑制白細(xì)胞的氧化爆發(fā)應(yīng)答，而且還能夠抑制人白細(xì)胞的趨化性。
式III 盡管可以使用經(jīng)提取分離得到的化合物，但在完全分離過(guò)程中得到的富集的或標(biāo)準(zhǔn)化的植物提取物或標(biāo)準(zhǔn)化的植物原料也可用于本發(fā)明，特別是，獲得提取或標(biāo)準(zhǔn)化的產(chǎn)物的費(fèi)用要比分離化合物低廉。此外，提取物或植物原料中的其它成分，例如在部分提取后保留下來(lái)的維生素(其中一些具有抗氧化作用)，能夠維持或增強(qiáng)抗炎藥物的作用。選擇以富集或標(biāo)準(zhǔn)化的提取物或標(biāo)準(zhǔn)化的植物原料來(lái)治療炎癥，還是選擇分離或合成得到的產(chǎn)物進(jìn)行治療，這在很大程度上取決于炎癥疾病的程度。例如，就關(guān)節(jié)炎而言，若只感到輕微不適則最好使用富集或標(biāo)準(zhǔn)化的提取物或標(biāo)準(zhǔn)化的植物原料，而對(duì)那些嚴(yán)重的不堪忍受的情況而言，可以使用分離或合成的化合物。
本申請(qǐng)的發(fā)明人注意到，本文所述的式III化合物能夠抑制氧化爆發(fā)應(yīng)答和趨化性，這使得人們有理由相信它是干燥的玫瑰果粉末中發(fā)揮抗炎作用的活性物質(zhì)。因此，本發(fā)明人認(rèn)為，該發(fā)現(xiàn)表明本文所述的抗炎藥物，不論是分離得到的化合物，還是富集或標(biāo)準(zhǔn)化的提取物或是富集的植物原料，都能夠用于治療炎癥疾病，例如與關(guān)節(jié)炎有關(guān)的炎癥疾病。
包含抗炎藥的藥物(藥物組合物)可以用于預(yù)防、治療或緩解炎癥，不論是由疾病還是醫(yī)學(xué)情況引起的炎癥，例如病毒或細(xì)菌性疾病(通常稱為“炎癥疾病”)。Stedman醫(yī)學(xué)詞典第26版對(duì)“炎癥”作了如下定義“一種基礎(chǔ)病理學(xué)過(guò)程，出現(xiàn)在遭受疾病侵襲的血管和臨近組織中，是物理、化學(xué)或生物試劑、包括局部反應(yīng)所致的損傷或異常刺激產(chǎn)生的細(xì)胞和化學(xué)反應(yīng)的動(dòng)態(tài)集合體，并引起形態(tài)學(xué)改變、有害物質(zhì)去除的破壞，以及導(dǎo)致修復(fù)和愈合的反應(yīng)”。相應(yīng)的炎癥疾病的實(shí)例有肝炎、腦膜炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病例如節(jié)段性回腸炎、過(guò)敏綜合癥、糖尿病、充血性心臟病、銀屑病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎或其它關(guān)節(jié)炎例如骨關(guān)節(jié)病、多發(fā)性硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、敗血癥/膿毒性休克、皮炎、移植排斥以及由腫瘤疾病的化學(xué)治療或放射治療導(dǎo)致的繼發(fā)炎癥。
據(jù)信本發(fā)明尤其適合于治療關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎。
制劑如上所述，可直接使用抗炎藥物的純化合物，或使用包含抗炎藥物的富集或標(biāo)準(zhǔn)化的植物提取物或標(biāo)準(zhǔn)化的干燥植物原料。
因此，藥物可以是植物提取物的形式，特別是其中的抗炎藥物的濃度是已知的從而可以控制哺乳動(dòng)物給藥劑量的提取物。
盡管不考慮藥物制劑的形式，但特別指出的是，當(dāng)使用純化合物時(shí)，為了便于哺乳動(dòng)物給藥以及確保適宜的生物利用度，通常有必要將其制成藥物制劑。
最好將抗炎藥物用可藥用的載體(或賦形劑)制成藥物制劑，并任選地與抗氧劑聯(lián)用。也可將抗炎藥物與其它活性成分聯(lián)用以增強(qiáng)抗炎效果，或帶給使用者其它的有益效果。
因此，可將抗炎藥物或包含抗炎藥物的富集或標(biāo)準(zhǔn)化的提取物或標(biāo)準(zhǔn)化的植物原料，單獨(dú)或與其它成分，以及本領(lǐng)域已知的用于制備所述制劑的成分聯(lián)合制成粉劑、顆粒劑、片劑、混懸液、溶液劑或乳劑，并包裝成每日單劑量或多劑量的形式。
具體地講，藥物組合物(藥物)通常包含在可藥用載體中的約0.1到約50％重量的抗炎藥物，優(yōu)選與抗氧化劑聯(lián)用。
給藥方式可以為口服給藥、口腔給藥、非胃腸道給藥、局部給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥或鼻內(nèi)給藥，優(yōu)選口服給藥。
本文所述的“可藥用載體”是指那些就對(duì)哺乳動(dòng)物、包括人的給藥而言通?？梢越邮艿拿浇槲?。
術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”包括大型哺乳動(dòng)物例如人，以及家畜或畜養(yǎng)動(dòng)物例如馬、狗、綿羊、豬、牛等。在這些哺乳動(dòng)物中，人類是特別值得關(guān)注的可以從本發(fā)明受益的對(duì)象。
藥物組合物通常是按照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的一些需要考慮的因素來(lái)制備的，其包括但不限于特定的抗炎藥物、藥物濃度、穩(wěn)定性以及預(yù)期的生物利用度；應(yīng)用藥物所治療的具體炎癥疾病、障礙或病癥(統(tǒng)稱為“疾病”)；受治對(duì)象、其年齡、體重以及一般狀況；以及組合物的給藥方式，例如口服給藥、口腔給藥、非胃腸道給藥、局部給藥、直腸給藥、經(jīng)皮給藥或鼻內(nèi)給藥。用于非胃腸道給藥的典型的可藥用載體包括，例如D5W，一種含5％(重量/體積)葡萄糖的水溶液，以及生理鹽水?？伤幱玫妮d體還可以包含其它成分，例如能增加活性成分穩(wěn)定性的物質(zhì)，例如防腐劑和抗氧化劑。
在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物含有與本文定義的化合物聯(lián)用的抗氧化劑，以及可藥用的載體?？寡趸瘎├邕x自維生素C及其衍生物、維生素E、類黃酮、酚酸例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯或正丙酯、胡蘿卜素、丁基化的羥基苯甲醚、丁基化的羥基甲苯、去甲二氫愈創(chuàng)木酸等。該實(shí)施方案特別涉及包含一個(gè)或多個(gè)不飽和鍵例如雙鍵的抗炎藥物，這些不飽和鍵使得化合物易被氧化降解。
藥物組合物中可包含常規(guī)、無(wú)毒的可藥用載體和賦形劑，以劑量形式、制劑或例如適宜的給藥裝置或植入物的形式，經(jīng)注射、輸注或植入等非胃腸道方式給藥。
所述組合物的配方和制備均是藥物制劑領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的內(nèi)容。具體的配方可在Remington藥學(xué)領(lǐng)域的科學(xué)與實(shí)踐，Alfonso RGennaro(主編)，第20版(2000)，Lippincott，Williams & Wilkins；ISBN0683306472中找到。
抗炎藥物通常在可藥用的水性介質(zhì)中配制。
因此，藥物組合物可以是包含抗炎藥物的滅菌注射劑。為了制備這樣的組合物，將適宜的抗炎藥物分散在合適的注射用液體載體中，所述載體還可包含助懸劑、助溶劑、穩(wěn)定劑、pH-調(diào)節(jié)劑和/或分散劑。在這些適宜的載體中，可以使用的是水、通過(guò)加入適量的鹽酸、氫氧化鈉或合適的緩沖劑而調(diào)至適宜pH值的水、1，3-丁二醇、Ringer溶液以及等滲的氯化鈉溶液。
抗炎藥物能夠被制成通過(guò)不同方式給藥的制劑。優(yōu)選方便易行的口服給藥。一單位劑量中包含適于每日單次給藥(例如，經(jīng)口服或飼管進(jìn)入腸道)的治療有效量的抗炎藥物，或?qū)⑵渲瞥擅咳斩鄤┝康男问?。一單位劑量取決于多種因素，其中包括患者年齡、身體狀態(tài)以及疾病狀況，但無(wú)論如何，整個(gè)日劑量都應(yīng)是個(gè)體生理上所能接受的，并能在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)持續(xù)每日給藥。
盡管仍在研究中，但我們確信，抗炎藥物的劑量為每天0.001-50mg/kg體重，例如每天0.005-20mg/kg體重(mg/kg/天)，能夠有效地治療炎癥疾病，特別是關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎，并減輕炎癥的相關(guān)癥狀?？梢悦咳战o予類似的至較少劑量的藥物來(lái)預(yù)防疾病。一個(gè)優(yōu)選的單位劑量是約0.001到約50，例如0.001-20mg/kg/天。每日總劑量可以是約0.1到約5000mg/天，例如0.5-500mg/天。例如，可將單位劑量的藥物制成片劑或膠囊劑給予患者服用，每種劑型中均含有0.01-500mg的3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯，患者每日服用一到四粒膠囊。
雖然本申請(qǐng)主要討論的是抗炎藥物對(duì)人類的治療，但我們同樣可以預(yù)見(jiàn)，其也能夠治療或預(yù)防除人類之外的哺乳動(dòng)物(包括家畜或畜養(yǎng)動(dòng)物)的炎癥疾病，例如由關(guān)節(jié)炎引起的炎癥疾病。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠輕而易舉地獲知對(duì)動(dòng)物進(jìn)行治療的方式和方法。例如，可將組合物放入動(dòng)物的飲水或飲食中，或像其它藥物一樣，以片劑、膠囊劑、溶液、乳液或類似的形式給予動(dòng)物。
由于管理上的原因，通常需要對(duì)用作用于人類的天然藥物的植物提取物或原料進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，因此，本申請(qǐng)的另一個(gè)方面涉及針對(duì)作為活性成分的式I化合物之一標(biāo)準(zhǔn)化天然藥物產(chǎn)物的方法 其中R和R′獨(dú)立地選自氫、C10-24烷基和C10-24-?；龅耐榛王；鶊F(tuán)具有0到5個(gè)不飽和鍵，R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫和糖苷部分，附加條件為R和R′不同時(shí)為氫，所述的天然藥物產(chǎn)物預(yù)期能夠用于治療、緩解或預(yù)防哺乳動(dòng)物的炎癥疾病，所述方法包括
(a)提供一批含有式I化合物的植物提取物或原料；(b)確定該批中式I化合物的濃度；(c)將天然藥物產(chǎn)物制成單位劑量形式，每一劑量中均包含預(yù)定量的活性成分，其中活性成分的預(yù)定量由一定量的所述批提供，所述批的量通過(guò)將活性成分的預(yù)定量除以所述批的活性成分的濃度來(lái)確定。優(yōu)選的式I化合物為3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯。這方面的內(nèi)容將在實(shí)施例4中作進(jìn)一步說(shuō)明。
盡管我們已經(jīng)給出并描述了本申請(qǐng)的一些優(yōu)選實(shí)施方案，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，可以進(jìn)行各種改變或修飾而不超出本申請(qǐng)的主旨和范圍，同時(shí)本申請(qǐng)并不限于給定的實(shí)施例。
實(shí)施例1本實(shí)施例說(shuō)明了如何通過(guò)活性導(dǎo)引分離法(activity guidedfractionation)從玫瑰果提取物中分離其活性成分，以及用于鑒定活性化合物(GOPO)的方法。本實(shí)施例還說(shuō)明了通過(guò)分析HPLC定量活性化合物例如玫瑰果提取物中的活性化合物的方法。
活性導(dǎo)引分離法以及活性化合物的鑒定犬薔薇果實(shí)中的活性化合物由活性導(dǎo)引分離法測(cè)定。因此，我們?nèi)?000克干燥、粉碎的果實(shí)，然后依次用己烷、二氯甲烷、甲醇和水提取，蒸干提取物。殘余物用于在體外檢測(cè)其對(duì)人外周血嗜中性粒細(xì)胞趨化性的抑制作用。從這些結(jié)果中我們可以確定，活性化合物存在于二氯甲烷提取物中(圖1)。該提取物通過(guò)硅膠色譜分離，用二氯甲烷和甲醇進(jìn)行梯度洗脫(開始僅用二氯甲烷洗脫，最后僅用甲醇洗脫)，分離成幾組物質(zhì)，然后在體外檢測(cè)各種級(jí)分對(duì)人外周血嗜中性粒細(xì)胞趨化性的抑制作用。從這些結(jié)果中我們推斷出，在這些實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生活性的即使不完全是，但也主要是局限于單一的化合物。該化合物經(jīng)制備型HPLC進(jìn)行純化，并通過(guò)1H-、13C-、NOESY-、COSY-和HETCOR-NMR實(shí)驗(yàn)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，確定其結(jié)構(gòu)為3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯(GOPO)。該化學(xué)結(jié)構(gòu)在甲醇?jí)A水解(甲醇解)和酸水解中得到進(jìn)一步確認(rèn)。經(jīng)GC-MS分析證實(shí)，堿水解生成了亞麻酸甲酯作為唯一的甲酯，而分析HPLC表明，酸水解生成了D-半乳糖和甘油。
表1和表2顯示了分離得到的活性化合物(GOPO)的NMR數(shù)據(jù)。GOPO的NMR數(shù)據(jù)(CD3OD)與Wegner等人在Wegner，C.，M.Hamburger，O.Kunert，和E.Haslinger.2000.Tensioactive Compounds from the AquaticPlant Ranunculus fluitans L.(Ranunculaceae).Helv.Chim.Acta 831454-1464(參考文獻(xiàn)1)中發(fā)現(xiàn)的完全一致。
表1GOPO的13C-NMR譜數(shù)據(jù)(75MHz，CDCl3或CD3OD，δ-值單位為ppm)歸屬 峰型*δC(CDCl3)δCδC(CD3OD)(CD3OD)參考文獻(xiàn)1的數(shù)據(jù)C-1d 104.3 106.3 105.4C-2d 71.6 73.3 72.4C-3d 73.7 75.7 74.9C-4d 69.5 71.1 70.2C-5d 74.8 77.7 76.8C-6t 62.4 63.3 62.5C-1′ t 63.1 64.9 64.0C-2′ d 70.4 72.7 71.8C-3′ t 68.4 69.6 68.7C-1″，C-1 s 174.1，173.7 176.1，175.8 175.0，174.7C-2″，C-2 t 34.5，34.336.0，35.835.1，35.0C-3″，C-3 t 25.1a26.8a26.6aC-4″，C-4 t 29.8b31.6b30.8bC-5″，C-5 t 29.5b31.2b30.4bC-6″，C-6 t 29.4b31.1b30.3bC-7″，C-7 t 29.3b31.0b30.2bC-8″，C-8 t 27.4 29.0 28.2C-9″，C-9 d 132.2c133.8c132.7cC-10″，C-10 d 130.4c132.1c131.1cC-11″，C-11 t 25.9a27.4a26.4aC-12″，C-12 d 128.6c130.2c129.2cC-13″，C-13 d 128.5c130.2c129.2cC-14″，C-14 t 25.8a27.3a26.0C-15″，C-15 d 128.0c129.9c128.9cC-16″，C-16 d 127.3c129.2c128.3cC-17″，C-17 t 20.8 22.3 21.5C-18″，C-18 q 14.5 15.5 14.7*峰型由DEPT和HETCOR-NMR實(shí)驗(yàn)確定。峰型縮寫說(shuō)明s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，q＝四重峰。在同一欄中的a，b，c這些歸屬可以互換。
表2GOPO的1H-NMR譜數(shù)據(jù)(300MHZ，CD3OD，δ-值單位為ppm)H δH(峰型，J為Hz) δH(峰型，J為Hz)，CD3ODCD3OD(參考文獻(xiàn)1)1 4.23(d，6.6) 4.23(d，7.3)2 3.51(dd，6.6，9.7)3.52(dd，7.4，9.8)3 3.45(dd，2.1，9.7)3.45(dd，3.3，1 0.3)4 3.84(dd，0.5，2.1)3.83(dd，1.0，2.5)5 3.48(m) 3.48(m)6a 3.73(dd，6.6，12.0) 3.71(m)6b 3.75(dd，4.4，12.0) 3.76(m)1′a4.22(dd，6.9，12.0) 4.23(dd，7.3，13.6)1′b4.43(br d，12.0) 4.44(dd，3.0，12.1)2′ 5.27(m) 5.26(m)3′a3.71(dd，5.4，11.0) 3.70(dd，5.4，11.2)3′b3.98(dd，5.4，10.8) 3.97(dd，5.4，10.9)2″，22.32(br t，7.0) 2.32(m)3″，31.60(m) 1.59(m)4″-7″，4-71.35(m) 1.32(m)8″，17″，8，172.08(m) 2.08(m)9″，10″，12″，13″，15″，16″ 5.35(m) 5.33(m)9，10，12，13，15，16，11″，14″，11，142.82(br t，6.8) 2.80(m)18″，18 0.98(t，7.5) 0.97(t，7.5)峰型縮寫說(shuō)明d＝雙峰，dd＝兩個(gè)雙峰，m＝多重峰，t＝三重峰，br＝寬峰原料和方法干燥、粉碎的犬薔薇果實(shí)(Rosa canina L.)得自Hyben VitalInternational ApS(Tulloblle，丹麥)。HPLC級(jí)己烷、甲醇(CH3OH)、乙腈(CH3CN)、二氯甲烷(CH2Cl2)和四氫呋喃(THF)得自Merck(達(dá)姆斯塔特，德國(guó))。硅膠60(0.063-0.200mm)和分析用(0.1mm)硅膠60 F254板(TLC板)也同樣得自Merck。用10％的H2SO4CH3OH溶液展開分析TLC板，然后加熱。
提取步驟將犬薔薇粉末(1000g)在己烷(2L)中浸泡24小時(shí)，過(guò)濾，用己烷(2×500mL)洗滌粉末。合并己烷溶液，減壓蒸發(fā)至干燥。然后將粉末在CH2Cl2(2L)中浸泡24小時(shí)，過(guò)濾，殘余粉末用CH2Cl2(2×500mL)洗滌。合并CH2Cl2溶液，減壓蒸發(fā)至干燥。然后將粉末在CH3OH(2L)中浸泡24小時(shí)，過(guò)濾，用CH3OH(2×500mL)洗滌粉末。合并CH3OH溶液，減壓蒸發(fā)至干燥。最后將粉末在水(2L)中浸泡24小時(shí)，過(guò)濾，用水(2×500mL)洗滌粉末。合并水溶液，減壓蒸發(fā)至干燥(圖1)。
色譜條件將從CH2Cl2溶液蒸發(fā)得到的殘余物溶于100mL CH2Cl2中，然后置于用己烷潤(rùn)濕的硅膠柱(500×40mm內(nèi)徑)上。用CH3OH和CH2Cl2(CH3OH在CH2Cl2中的含量依次為0、1、2、5、10、20和100％)進(jìn)行梯度洗脫(1L)。用分析TLC對(duì)洗脫得到的每一級(jí)分進(jìn)行分析，如果檢測(cè)到相關(guān)物質(zhì)，則進(jìn)行減壓蒸發(fā)至干燥。
制備型HPLC條件為配合制備型HPLC，我們使用Merck L-6200智能泵和Merck L-4200UV-VIS檢測(cè)器。分離在35℃下、在帶有保護(hù)濾柱(50×20mm內(nèi)徑)的Develosil ODS-HG-5色譜柱(RP-18，粒徑5μm；250×20mm內(nèi)徑，NomuraChemical Co.日本)上進(jìn)行，保護(hù)濾柱的填料與色譜柱相同，洗脫梯度為150mL 25％ CH3CN(水溶液)；150mL 50％ CH3CN(水溶液)；150mL 60％CH3CN(水溶液)；150mL 70％ CH3CN(水溶液)；150mL 80％ CH3CN(水溶液)；150mL 90％ CH3CN(水溶液)和300mL 100％ CH3CN。在203nm處檢測(cè)化合物。流速5mL/分鐘，注射體積5mL。
分析HPLC條件分析HPLC在帶有光電二級(jí)管陣列檢測(cè)器(波長(zhǎng)范圍195-700nm)的SUMMIT/Dionex HPLC系統(tǒng)中進(jìn)行。在35℃下使用帶有LiChrospher 100RP-18色譜柱(粒徑5μm；244×4mm內(nèi)徑，Merck)的反相分析HPLC檢測(cè)分離化合物的純度，洗脫梯度如下0-10分鐘(100％溶劑B)；10-25分鐘(100-50％溶劑B，0-50％溶劑A)；25-55分鐘(50-0％溶劑B，50-100％溶劑A)；55-64分鐘(100％溶劑A)；64-74分鐘(100-80％溶劑A，0-20％溶劑C)；74-85分鐘(80％溶劑A，20％溶劑C)；85-95分鐘(80-100％溶劑A，20-0％溶劑C)；95-105分鐘(100-0％溶劑A，0-100％溶劑B)；以及105-110分鐘(100％溶劑B)。所有的梯度變化均呈線性。溶劑A100％ CH3CN。溶劑B20％ CH3CN(水溶液)。容劑C100％ THF。在203nm處檢測(cè)化合物。數(shù)據(jù)采集時(shí)間0-75分鐘。流速1mL/分鐘。注射體積20μL。GOPO的保留時(shí)間約54分鐘(圖2)。
在這些檢測(cè)中，我們確定了獲取半乳糖脂組份的提取過(guò)程，包括取植物原料例如玫瑰果，將干燥、粉碎的植物原料(玫瑰果)磨成粉末，將粉末用半乳糖脂不溶于其中的第一有機(jī)溶劑處理，除去有機(jī)溶劑得到第一種殘余物，該殘余部分中含有半乳糖脂。最初使用有機(jī)溶劑提取可以除去非活性成分，以利于得到高濃度的活性提取物。半乳糖脂的分離過(guò)程包括以下幾個(gè)步驟用有機(jī)/含氯溶劑從第一殘余物中提取半乳糖脂，除去有機(jī)/含氯溶劑，得到富含半乳糖脂的沉淀物。
也可以使用有機(jī)/含氯溶劑直接從玫瑰果粉末中提取半乳糖脂抗炎提取物級(jí)分，然后除去有機(jī)/含氯溶劑，得到富含半乳糖脂的沉淀物。
實(shí)施例2本實(shí)施例說(shuō)明了實(shí)施例1的活性化合物在不同的細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)中呈現(xiàn)的生物活性。
GOPO的生物學(xué)數(shù)據(jù)按照上文記載的步驟制備濃度為20mg/ml的GOPO二甲亞砜(DMSO)溶液，于最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MEM)中稀釋，得到濃度為100μg/ml、50μg/ml、10μg/ml、1μg/ml和0.1μg/ml的溶液，用于細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。
多形核白細(xì)胞多形核白細(xì)胞(PMN)是在檸檬酸化的玻璃容器中從健康個(gè)體的外周血中分離得到的。用不同密度梯度的右旋糖酐和Lymphoprep分離細(xì)胞。PMN的純度大于98％，由臺(tái)盼藍(lán)染料測(cè)定的細(xì)胞活力大于98％。
趨化性用改進(jìn)的博伊登室技術(shù)進(jìn)行趨化性實(shí)驗(yàn)，如Jensen，P.和Kharazmi，A.，體外人嗜中性粒細(xì)胞的計(jì)算機(jī)輔助圖像分析實(shí)驗(yàn)，J.Immunol.Methods，144，43-48.1991所述。在37℃下用不同稀釋度的提取半乳糖脂對(duì)純化的PMN預(yù)培養(yǎng)30分鐘。隨后就可以檢測(cè)細(xì)胞對(duì)含有生物活性化學(xué)誘導(dǎo)物C5a的趨化因子酵母聚糖活性血清(ZAS)的趨化性。用計(jì)算機(jī)輔助圖像分析系統(tǒng)計(jì)算遷移細(xì)胞的數(shù)量。
化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)由活性PMN產(chǎn)生的氧基團(tuán)。用Kharazmi，A.，Hoiby，N.，Doring，G.，和Valerius，N.H.，銅氯假單胞菌外蛋白酶抑制人嗜中性粒細(xì)胞的化學(xué)發(fā)光，Infect.Immun.44，587，1984中記載的方法進(jìn)行測(cè)定。以不同濃度的提取半乳糖脂對(duì)PMN進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，然后用調(diào)理酵母聚糖進(jìn)行刺激?；钚约?xì)胞的氧化爆發(fā)應(yīng)答由發(fā)光計(jì)(1250-LKB Wallace)測(cè)定。
結(jié)果趨化性表3顯示了GOPO(100μg/ml和50μg/ml的稀釋液)對(duì)人外周血多形核白細(xì)胞趨化性的活性的測(cè)定結(jié)果。結(jié)果用細(xì)胞遷移數(shù)和抑制率表示。
表3制劑 細(xì)胞遷移數(shù)抑制率GOPO(100μg/ml) 8 86GOPO(50μg/ml) 5 92DMSO對(duì)照59 0表3顯示的是用一批新的活性化合物(GOPO)進(jìn)行同樣的試驗(yàn)所得的結(jié)果。表4顯示了GOPO(100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml和0.1μg/ml稀釋液)對(duì)人外周血多形核白細(xì)胞趨化性的活性的測(cè)定結(jié)果。結(jié)果用細(xì)胞遷移數(shù)和抑制率表示。
表4制劑 細(xì)胞遷移數(shù)抑制率GOPO(100μg/ml)12 71GOPO(10μg/ml) 16 62GOPO(1μg/ml) 15 64GOPO(0.1μg/ml)39 7DMSO對(duì)照 42 0
表5顯示了人外周血多形核白細(xì)胞的化學(xué)發(fā)光結(jié)果。結(jié)果用毫伏表示。
表5制劑 毫伏GOPO(100μg/ml)339GOPO(50μg/ml) 520DMSO對(duì)照 664表6顯示了細(xì)胞活力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。細(xì)胞活力由臺(tái)盼藍(lán)染料排斥法測(cè)定。用臺(tái)盼藍(lán)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行孵育。死亡的細(xì)胞將會(huì)被染色，在顯微鏡下呈現(xiàn)藍(lán)色。結(jié)果用存活細(xì)胞百分比表示。
表6制劑存活百分比GOPO(100μg/ml) 99GOPO(50μg/ml) 100DMSO對(duì)照100結(jié)論如表3和表4所示，分離得到的化合物(GOPO)在相當(dāng)?shù)偷臐舛认戮涂梢砸种迫送庵苎准?xì)胞向含有C5a的生物活性化學(xué)誘導(dǎo)物酵母聚糖活性血清的遷移。
如表5所示，分離得到的化合物(GOPO)在相當(dāng)?shù)偷臐舛认戮涂梢砸种迫送庵苎准?xì)胞的化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光是對(duì)氧化爆發(fā)應(yīng)答的衡量。這表明分離得到的化合物具有抗氧化活性。由于實(shí)際的組織損傷是由炎癥細(xì)胞例如PMN和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞通過(guò)釋放蛋白水解酶和水解酶以及激活組織和關(guān)節(jié)中的毒性活潑氧基團(tuán)而引起的，因此分離得到的化合物應(yīng)該是人外周血多形核白細(xì)胞(最重要和數(shù)量最多的炎癥細(xì)胞)氧化爆發(fā)應(yīng)答的有效抑制劑。
如表6所示，細(xì)胞在各濃度的能夠抑制細(xì)胞趨化性和化學(xué)發(fā)光的化合物的溶液中均能存活，這說(shuō)明對(duì)細(xì)胞遷移以及氧化爆發(fā)的抑制與毒性無(wú)關(guān)。換句話說(shuō)，活性化合物在被測(cè)濃度下均是無(wú)毒的。
實(shí)施例3本實(shí)施例說(shuō)明了實(shí)施例1和2的活性成分在市售玫瑰果產(chǎn)物中的濃度(mg/kg)。
通過(guò)分析HPLC分析市售犬薔薇產(chǎn)品中的GOPO。
在“分析HPLC條件”部分所述的分析HPLC方法就特異性、可重復(fù)性、中等精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍以及穩(wěn)定性方面符合歐洲委員會(huì)ICH-指南(指南3A卷；用于人類的醫(yī)藥產(chǎn)品；質(zhì)量和生物技術(shù)，1998年版)的規(guī)定，并使用該方法來(lái)定量測(cè)定市售犬薔薇產(chǎn)品中GOPO的含量。表7顯示了10種犬薔薇產(chǎn)品中GOPO的分析結(jié)果。
表7市售產(chǎn)品GOPO(mg/kg犬薔薇產(chǎn)品)Hyben Vital 303.0CP1 75.8CP2 72.7CP3 62.1CP4 51.5CP5 40.9CP6 18.2CP7 15.2CP8 6.1CP9 6.1CP＝匿名的市售產(chǎn)品。
實(shí)施例4使用本發(fā)明的方法制備標(biāo)準(zhǔn)化制劑。
依據(jù)丹麥醫(yī)學(xué)公司出版的指南(Lagemiddelstyrelsen)，天然藥物必須要標(biāo)準(zhǔn)化以包含特定量的化合物，其對(duì)于制得所述化合物的植物或動(dòng)物材料來(lái)說(shuō)是一定的。如果一個(gè)化合物被認(rèn)為是藥物產(chǎn)生臨床效應(yīng)的原因，那么其就被定義為活性化合物，也就必須標(biāo)準(zhǔn)化。如果沒(méi)有已知的活性化合物，則生產(chǎn)人員可以選擇其它特征性的化合物作為標(biāo)準(zhǔn)化的標(biāo)記化合物。由于本發(fā)明闡明了GOPO是玫瑰果制劑中能夠減輕關(guān)節(jié)炎疼痛的活性化合物，它就必需用于被注冊(cè)為天然藥物的玫瑰果制劑的標(biāo)準(zhǔn)化。其它國(guó)家的中藥產(chǎn)品等也有類似的制劑標(biāo)準(zhǔn)化注冊(cè)規(guī)定。
如果根據(jù)一種化合物例如GOPO對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，那么就意味著每一個(gè)單元，例如片劑或膠囊劑均要含有足夠量的植物原料以便提供確定量的GOPO。例如，如果單位劑量被認(rèn)定為0.1mg，并且產(chǎn)品中的濃度為303mg/kg(如實(shí)施例3表7所述)，則由該批原料制備的每一單位均必須包含0.330g的粗產(chǎn)物。
鑒于實(shí)際原因，我們沒(méi)有調(diào)整各個(gè)片劑或膠囊劑中所用原料的含量，而是根據(jù)需要盡可能的稀釋粗產(chǎn)品，以便獲得所需濃度的產(chǎn)品，然后在各個(gè)片劑或膠囊劑中使用具有固定含量的稀釋產(chǎn)品。例如，預(yù)從含量為303mg/kg的一批植物原料制備包含500mg物質(zhì)和0.1mg單位劑量的GOPO的膠囊劑，就必須將濃度稀釋到200mg/kg。這可以通過(guò)在粗產(chǎn)品中加入相當(dāng)于粗產(chǎn)物重量的51.1％的碳酸鈣或其它惰性物質(zhì)來(lái)完成。這樣，包含500mg稀釋物質(zhì)的每一個(gè)膠囊劑中均含有0.1mg的GOPO，因此也就符合了標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)品的要求。
或者，一批高品質(zhì)的原料(例如包含303mg/kg的原料(如上所述))可以與一批低品質(zhì)的原料(例如包含75.8mg/kg的原料)混合。
在這個(gè)例子中，混合物中含有54.6％的高品質(zhì)原料(其提供165.6mg/kg的GOPO)和45.4％低品質(zhì)的原料(其提供34.4mg/kg的GOPO)，以獲得所需的200mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)化濃度。
在任何情況下，當(dāng)活性化合物用于標(biāo)準(zhǔn)化時(shí)，則必須選擇標(biāo)準(zhǔn)濃度以保證終產(chǎn)物與原材料的最佳部分相比含有較低濃度的活性化合物。此處概括的一般規(guī)則適用于正文中記載的任何類型的化合物以及任何原材料。
權(quán)利要求
1.式I化合物在制備用于治療、緩解或預(yù)防哺乳動(dòng)物炎癥疾病的藥物中的用途， 其中R和R′獨(dú)立地選自氫、C10-24烷基和C10-24-?；龅耐榛王；哂?到5個(gè)不飽和鍵，R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫和糖苷；其中第一個(gè)附加條件是R和R′不同時(shí)為氫，第二個(gè)附加條件是R和R′均不是二十碳五烯酰基。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其中R和R′獨(dú)立地選自C10-24烷基和C10-24-?；?，例如C10-24-?；?，所述的烷基和?；哂?到5個(gè)不飽和鍵。
3.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中任何烷基和?；哂?到4個(gè)不飽和鍵，例如1-3個(gè)不飽和鍵，例如2或3個(gè)不飽和鍵，尤其是3個(gè)不飽和鍵。
4.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中不飽和鍵為雙鍵。
5.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中R和R′均為具有1到3個(gè)雙鍵的C16-20-酰基，例如具有3個(gè)雙鍵的C18?；?br> 6.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的化合物具有如式II所示的結(jié)構(gòu) 其中R、R′、R1、R2、R3和R4如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所定義。
7.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的化合物選自β-D-吡喃半乳糖基衍生物、α-D-吡喃半乳糖基衍生物、β-D-吡喃葡萄糖基衍生物以及α-D-吡喃葡萄糖基衍生物。
8.如權(quán)利要求1所述的用途，其中的化合物選自3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-β-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-α-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯和3-α-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯。
9.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的藥物適于口服、口腔、非胃腸道、局部、直腸、經(jīng)皮或鼻內(nèi)給藥。
10.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的藥物為適于以約0.005-50mg/kg體重/天的量以單劑量或多劑量的形式給藥的日劑量形式。
11.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的炎癥疾病選自肝炎、腦膜炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、過(guò)敏綜合癥、糖尿病、充血性心臟病、銀屑病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎或其它關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、敗血癥/膿毒性休克、皮炎、移植排斥以及由腫瘤疾病的化學(xué)治療或放射治療導(dǎo)致的繼發(fā)炎癥。
12.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的炎癥疾病是關(guān)節(jié)炎。
13.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的炎癥疾病是骨關(guān)節(jié)炎。
14.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的藥物包含一種或多種上式化合物，其總濃度為藥物總重量的0.1-50％。
15.如前述任一權(quán)利要求所述的用途，其中的藥物還包含抗氧化劑。
16.包含一種或多種如權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述的化合物、抗氧化劑以及可藥用載體的藥物組合物。
17.如權(quán)利要求16所述的組合物，其中一種或多種化合物的重量含量為0.1-50％。
18.一種治療、緩解或預(yù)防哺乳動(dòng)物炎癥疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動(dòng)物包含式I化合物的藥物的步驟， 其中R和R′獨(dú)立地選自氫、C10-24烷基和C10-24-?；?，所述的烷基和?；哂?到5個(gè)不飽和鍵，R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫和糖苷；其中第一個(gè)附加條件是R和R′不同時(shí)為氫，第二個(gè)附加條件是R和R′均不是二十碳五烯?；?。
19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中R和R′獨(dú)立地選自C10-24烷基和C10-24-?；?，例如C10-24-?；龅耐榛王；哂?到5個(gè)不飽和鍵。
20.如權(quán)利要求18-19之一所述的方法，其中的烷基和?；哂?到4個(gè)不飽和鍵，例如1-3個(gè)不飽和鍵，如2或3個(gè)不飽和鍵，尤其是3個(gè)不飽和鍵。
21.如權(quán)利要求18-20任意一項(xiàng)所述的方法，其中不飽和鍵是雙鍵。
22.如權(quán)利要求18-21任意一項(xiàng)所述的方法，其中R和R′均為具有1到3個(gè)雙鍵的C16-20-?；缇哂?個(gè)雙鍵的C18?；?。
23.如權(quán)利要求18-22任意一項(xiàng)所述的方法，其中的化合物具有如式II所示的結(jié)構(gòu) 其中R、R′、R1、R2、R3和R4如權(quán)利要求18-22任意一項(xiàng)所定義。
24.如權(quán)利要求18-23任意一項(xiàng)所述的方法，其中的化合物選自β-D-吡喃半乳糖基衍生物、α-D-吡喃半乳糖基衍生物、β-D-吡喃葡萄糖基衍生物以及α-D-吡喃葡萄糖基衍生物。
25.如權(quán)利要求18所述的方法，其中的化合物選自3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-β-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯、3-α-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯和3-α-D-吡喃葡萄糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯。
26.如權(quán)利要求18-25任意一項(xiàng)所述的方法，其中的炎癥疾病選自肝炎、腦膜炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、過(guò)敏綜合癥、糖尿病、充血性心臟病、銀屑病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎或其它關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、敗血癥/膿毒性休克、皮炎、移植排斥以及由腫瘤疾病的化學(xué)治療或放射治療導(dǎo)致的繼發(fā)炎癥。
27.如權(quán)利要求18-26任意一項(xiàng)所述的方法，其中的炎癥疾病是關(guān)節(jié)炎。
28.如權(quán)利要求18-26任意一項(xiàng)所述的方法，其中的炎癥疾病是骨關(guān)節(jié)炎。
29.如權(quán)利要求18-28任意一項(xiàng)所述的方法，其中的藥物包含一種或多種上式化合物，其總濃度為藥物總重量的0.1-50％。
30.如權(quán)利要求18-29任意一項(xiàng)所述的方法，其中的藥物還包含抗氧化劑。
31.如權(quán)利要求18-30任意一項(xiàng)所述的方法，其中每日給予哺乳動(dòng)物的化合物的劑量為0.005-50mg/kg。
32.如權(quán)利要求18-31任意一項(xiàng)所述的方法，其中的藥物通過(guò)口服、口腔、非胃腸道、局部、直腸、經(jīng)皮或鼻內(nèi)給藥的方式給予哺乳動(dòng)物。
33.一種針對(duì)作為活性成分的式I化合物之一標(biāo)準(zhǔn)化天然藥物產(chǎn)物的方法 其中R和R′獨(dú)立地選自氫、C10-24烷基和C10-24-?；?，所述的烷基和酰基基團(tuán)具有0到5個(gè)不飽和鍵，R1、R2、R3和R4獨(dú)立地選自氫和糖苷部分，附加條件為R和R′不同時(shí)為氫，所述的天然藥物產(chǎn)物預(yù)期能夠用于治療、緩解或預(yù)防哺乳動(dòng)物的炎癥疾病，所述方法包括(a)提供一批含有式I化合物的植物提取物或原料；(b)確定該批中式I化合物的濃度；(c)將天然藥物產(chǎn)物制成單位劑量形式，每一劑量中均包含預(yù)定量的活性成分，其中活性成分的預(yù)定量由一定量的所述批提供，所述批的量通過(guò)將活性成分的預(yù)定量除以所述批的活性成分的濃度來(lái)確定。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中的炎癥疾病選自肝炎、腦膜炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病、過(guò)敏綜合癥、糖尿病、充血性心臟病、銀屑病、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎或其它關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、敗血癥/膿毒性休克、皮炎、移植排斥以及由腫瘤疾病的化學(xué)治療或放射治療導(dǎo)致的繼發(fā)炎癥。
35.如權(quán)利要求33-34任意一項(xiàng)所述的方法，其中的炎癥疾病為關(guān)節(jié)炎。
36.如權(quán)利要求33-34任意一項(xiàng)所述的方法，其中的炎癥疾病為骨關(guān)節(jié)炎。
37.如權(quán)利要求33-36任意一項(xiàng)所述的方法，其中的化合物為3-β-D-吡喃半乳糖基氧基-2-(十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酰氧基)丙基十八碳-9Z，12Z，15Z-三烯酸酯。
38.如權(quán)利要求33-37任意一項(xiàng)所述的方法，其中活性成分的預(yù)定量范圍是0.01-500mg。
全文摘要
甘油二酯的糖苷，例如經(jīng)活性導(dǎo)引分離法由玫瑰果提取物中分離得到的3－β－D－吡喃半乳糖基氧基－2－(十八碳－9Z，12Z，15Z－三烯酰氧基)丙基十八碳－9Z，12Z，15Z－三烯酸酯(GOPO)(A)，可作為治療炎癥疾病例如關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎的口服抗炎藥物。
文檔編號(hào)A61K31/7012GK1606563SQ02825816
公開日2005年4月13日 申請(qǐng)日期2002年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月21日
發(fā)明者E·拉爾森, A·哈拉茨米, S·B·克里斯滕森, L·P·克里斯滕森, K·勃蘭特 申請(qǐng)人:丹麥農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)院, 丹麥國(guó)家醫(yī)院, 丹麥醫(yī)藥大學(xué)