專(zhuān)利名稱(chēng):4－甲基環(huán)十五烷酮及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有治療腦缺血性腦血管病、風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病、抗腫瘤、治療和改善癡呆癥功效的4-甲基環(huán)十五烷酮及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
麝香是麝科麝屬雄性麝下腹部香囊中的分泌物，是世界名貴藥材，也是我國(guó)的四大名貴藥材之一，在我國(guó)醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域有悠久的藥用歷史，《神農(nóng)本草》將麝香列為上品。在現(xiàn)有的全國(guó)中成藥處方集載有的2621種處方中，含麝香的就達(dá)295種之多。麝香開(kāi)竅醒神，活血止痛主要用于心腦血管、中風(fēng)偏癱、神志昏迷、跌打損傷、風(fēng)濕病、婦科病、癌癥等。國(guó)家在2003年將麝科麝屬所有種由國(guó)家二級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物調(diào)整為一級(jí)保護(hù)野生動(dòng)物，全面加強(qiáng)麝資源的保護(hù)，麝香的采收受到嚴(yán)格限制。麝香這一稀缺資源替代品的研究已成為中藥現(xiàn)代化發(fā)展綱要的重要任務(wù)。
自20世紀(jì)70年代國(guó)內(nèi)就開(kāi)始人工麝香的研究，人工麝香的主要原料——麝香酮作為重點(diǎn)課題進(jìn)行研發(fā)。經(jīng)過(guò)幾代人的心血，完成了從實(shí)驗(yàn)室小試到工業(yè)化生產(chǎn)。濟(jì)南宏濟(jì)堂制藥有限責(zé)任公司于1994年2月25日獲得衛(wèi)生部的新藥證書(shū)。人工麝香同年獲得國(guó)家一類(lèi)新藥證書(shū)。麝香酮是國(guó)家一類(lèi)中藥新藥人工麝香的重要組份之一。人工麝香近三年內(nèi)的市場(chǎng)需求每年就高達(dá)3000公斤，每年向國(guó)家上繳稅金3831.62萬(wàn)元，創(chuàng)凈利潤(rùn)3574.6萬(wàn)元。人工麝香中的主要原料麝香酮，是3-甲基環(huán)十五烷酮，而于其并存的4-甲基環(huán)十五烷酮?jiǎng)t作為人工麝香合成的副產(chǎn)物，過(guò)去由于沒(méi)有進(jìn)行完善的基礎(chǔ)研究，在成產(chǎn)過(guò)程中被廢棄，現(xiàn)在經(jīng)藥理研究顯示4-甲基環(huán)十五烷酮與麝香酮(3-甲基環(huán)十五烷酮)具有相同的作用，完全可以與麝香酮一起作為人工麝香的代用品。

發(fā)明內(nèi)容 本發(fā)明的目的是提供4-甲基環(huán)十五烷酮及用于作為制備治療腦缺血性腦血管病、風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病、抗腫瘤、治療和改善癡呆癥的藥物中的應(yīng)用。用4-甲基環(huán)十五烷酮制備治療腦缺血性腦血管病、風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病、抗腫瘤、治療和改善癡呆癥的藥物效果確切，副作用少。
本發(fā)明4-甲基環(huán)十五烷酮，結(jié)構(gòu)式如下

本發(fā)明4-甲基環(huán)十五烷酮制備工藝是
1、電解
把原料十二烷二酸單甲酯β-甲級(jí)戊二酸單甲酯稱(chēng)重混合后加入甲醇鈉為介質(zhì)的電解槽中進(jìn)行kolbe電解，得半成品1混合物；電解反應(yīng)完成后的液體料轉(zhuǎn)移至降溫罐中進(jìn)行降溫；待溫度降到工藝要求的范圍內(nèi)后進(jìn)行離心分離，液體物料用石油醚、蒸餾水、堿液和鹽水在萃取罐內(nèi)進(jìn)行萃??；萃取后含半成品1的油層液體經(jīng)過(guò)濃縮、分餾后的半成品1；
2、環(huán)合
二甲苯、金屬鈉、半成品1經(jīng)過(guò)計(jì)量后加入環(huán)合罐、然后滴加甲醇、硫酸進(jìn)行stoll醇酮縮和環(huán)化得半成品2混合物，環(huán)合過(guò)程中通氮?dú)獗Ｗo(hù)。環(huán)合完成后得液體轉(zhuǎn)移至萃取罐中用二甲苯、蒸餾水、堿液和鹽水進(jìn)行萃?。惠腿『蠛氤善?的油層液體干燥后，經(jīng)蒸餾、精餾的半成品2；
3、還原
乙醇、鋅粉、半成品2經(jīng)過(guò)計(jì)量后加入還原罐，滴加鹽酸進(jìn)行還原，得合成麝香酮及其同分異構(gòu)體的混合物，還原反應(yīng)后的液體料轉(zhuǎn)移至提取罐中用石油醚堿液和飽和食鹽水進(jìn)行萃??；萃取后對(duì)油層液體進(jìn)行干燥，然后經(jīng)蒸餾、精餾的半成品3；
4、柱層析
在層析柱中加入活化硅膠以及乙醚、石油醚，利用硅膠對(duì)麝香酮及其同分異構(gòu)體4-甲基環(huán)十五烷酮吸附能力的不同，使麝香酮與4-甲基環(huán)十五烷酮分離，再經(jīng)濃縮、蒸餾、精餾后得到純品4-甲基環(huán)十五烷酮。
本發(fā)明4-甲基環(huán)十五烷酮具有治療腦缺血性腦血管病、風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病、抗腫瘤、治療和改善癡呆癥的功效。
本發(fā)明4-甲基環(huán)十五烷酮用于作為制備治療腦缺血性腦血管病的藥物中的應(yīng)用；用于作為制備治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病藥物中的應(yīng)用；用于作為制備治療抗腫瘤藥物中的應(yīng)用；用于作為制備治療和改善癡呆癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明具有的優(yōu)勢(shì)是
1、完全符合國(guó)家科技部等部門(mén)提出的中藥現(xiàn)代化發(fā)展綱要的要求；
2、有利于加強(qiáng)生態(tài)環(huán)境建設(shè)，保護(hù)瀕危動(dòng)物和藥用資源，提高人類(lèi)生命質(zhì)量和健康水平；
3、市場(chǎng)需求廣闊，經(jīng)濟(jì)效益顯著，特別是國(guó)家將麝類(lèi)動(dòng)物由二級(jí)保護(hù)提高為一級(jí)保護(hù)后，天然麝香將被禁用，取而代之的人工麝香用量將迅速增長(zhǎng)，現(xiàn)全國(guó)天然麝香供應(yīng)量?jī)H10公斤左右，加之中藥現(xiàn)代化的發(fā)展和新劑型的不斷推出，人工麝香近三年內(nèi)的市場(chǎng)需求每年就高達(dá)3000公斤，每年向國(guó)家上繳稅金3831.62萬(wàn)元，創(chuàng)凈利潤(rùn)3574.6萬(wàn)元。
4、4-甲基環(huán)十五烷酮作為人工麝香合成的副產(chǎn)物，它的收率是麝香酮(3-甲基環(huán)十五烷酮)的30％-50％，過(guò)去由于沒(méi)有進(jìn)行完善的基礎(chǔ)研究，而在成產(chǎn)過(guò)程中被廢棄，造成極大的浪費(fèi)，現(xiàn)在經(jīng)藥理研究顯示與麝香酮(3-甲基環(huán)十五烷酮)具有相同的作用，完全可以與麝香酮(3-甲基環(huán)十五烷酮)一起作為人工麝香的代用品。
麝香酮已有的研究證明對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、抗癌、抗炎、鎮(zhèn)痛和增強(qiáng)免疫、抗變態(tài)反應(yīng)、抗早孕等方面有藥理活性
1、用于治療癌癥，對(duì)腫瘤模型小鼠具有較好的治療效果
通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麝香酮具有延長(zhǎng)腫瘤模型小鼠存活期、降低瘤/體比值、改善免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)的作用。①生存期給藥組平均每只鼠比對(duì)照組延長(zhǎng)6.9天，當(dāng)對(duì)照組全部死亡時(shí)，給藥組尚有11只存活，其中麝香同位組有9只，說(shuō)明同位組更有效；②瘤重對(duì)照組瘤重為(1.61±0.51)g，給藥組平均為(1.14±0.42)g(P＜0.05)；③免疫學(xué)檢測(cè)NK細(xì)胞活性對(duì)照組為20％，給藥組平均為28.3％，麝香組平均為21.5％；IR-2R對(duì)照組平均為29.3％，給藥組平均為41.6％，麝香組為32.4％；T-TR對(duì)照組為37.4％，給藥組平均為58.3％，麝香組為34.5％。給藥組與其他兩個(gè)組比較，均有明顯的提高作用(P＜0.01)，說(shuō)明麝香用于治療腫瘤不僅有延長(zhǎng)生命、縮小腫瘤的作用，而且還可提高機(jī)體的免疫功能。
2、用于治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕有良好的治療效果
通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)風(fēng)濕模型小鼠有改善癥狀、抗炎、調(diào)節(jié)免疫、消腫止痛等作用。
3、用于改善腦損傷方面疾病
研究表明本品對(duì)幾種低、無(wú)氧性腦損傷和缺血性腦障礙組織有保護(hù)作用。主要表現(xiàn)在①麝香能明顯縮短KCN誘發(fā)的動(dòng)物昏睡時(shí)間，且呈劑量依賴(lài)關(guān)系；能明顯縮短正向反射恢復(fù)時(shí)間。②KCN誘發(fā)生存時(shí)間的影響，對(duì)照組為(47.0±3.9)s后死亡，而麝香組均未死亡。③麝香能延長(zhǎng)動(dòng)物斷頭后的呼吸時(shí)間，但量效關(guān)系不顯著。④能明顯延長(zhǎng)頸動(dòng)脈結(jié)扎后的生存時(shí)間，且呈劑量依賴(lài)關(guān)系。⑤能明顯延長(zhǎng)常壓無(wú)氧負(fù)荷條件下動(dòng)物的生存時(shí)間。⑥能明顯延長(zhǎng)減壓性無(wú)氧負(fù)荷條件下動(dòng)物的生存時(shí)間。由此，認(rèn)為麝香對(duì)腦缺血引起的腦損傷有保護(hù)作用，其醒腦開(kāi)竅作用可能與改善腦血流作用有關(guān)。
4、對(duì)小鼠擬癡呆模型具有良好的改善作用
觀察麝香酮對(duì)D-半乳糖所致擬癡呆小鼠學(xué)習(xí)記憶能力以及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、腦組織丙二醛(MDA)含量及單胺氧化酶(MAO)活力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)麝香酮可明顯拮抗癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能減退(水迷宮法)，并可升高其血清SOD活力，降低腦組織中升高的MDA含量，抑制MAO活力，從而顯示其一定的抗癡呆作用。
5、觀察麝香酮透皮吸收效果
采用Franze擴(kuò)散池進(jìn)行小鼠離體皮膚滲透擴(kuò)散試驗(yàn)比較麝香酮的透皮擴(kuò)散特征。結(jié)果表明麝香酮HP-β-環(huán)糊精分子包合物以及脂質(zhì)體后的經(jīng)皮滲透速率明顯大于麝香酮，麝香酮β-環(huán)糊精包合物則較低。結(jié)論麝香酮HP-β-環(huán)糊精包合或脂質(zhì)體化后能夠促進(jìn)麝香酮的經(jīng)皮滲透。

具體實(shí)施方式 實(shí)施例1
本發(fā)明4-甲基環(huán)十五烷酮，結(jié)構(gòu)式如下

本發(fā)明4-甲基環(huán)十五烷酮制備工藝是
(1)電解
把原料十二烷二酸單甲酯900gβ-甲級(jí)戊二酸單甲酯900g稱(chēng)重混合后加入甲醇鈉為介質(zhì)的電解槽中進(jìn)行kolbe電解，得半成品1混合物；電解反應(yīng)完成后的液體料轉(zhuǎn)移至降溫罐中進(jìn)行降溫；待溫度降到工藝要求的范圍內(nèi)后進(jìn)行離心分離，液體物料用石油醚、蒸餾水、堿液和鹽水在萃取罐內(nèi)進(jìn)行萃取；萃取后含半成品1的油層液體經(jīng)過(guò)濃縮、分餾后的半成品1；
(2)環(huán)合
二甲苯、金屬鈉、半成品1經(jīng)過(guò)計(jì)量后加入環(huán)合罐、然后滴加甲醇、硫酸進(jìn)行stoll醇酮縮和環(huán)化得半成品2混合物，環(huán)合過(guò)程中通氮?dú)獗Ｗo(hù)。環(huán)合完成后得液體轉(zhuǎn)移至萃取罐中用二甲苯、蒸餾水、堿液和鹽水進(jìn)行萃??；萃取后含半成品2的油層液體干燥后，經(jīng)蒸餾、精餾的半成品2；
(3)還原
乙醇、鋅粉、半成品2經(jīng)過(guò)計(jì)量后加入還原罐，滴加鹽酸進(jìn)行還原，得合成麝香酮及其同分異構(gòu)體的混合物，還原反應(yīng)后的液體料轉(zhuǎn)移至提取罐中用石油醚堿液和飽和食鹽水進(jìn)行萃?。惠腿『髮?duì)油層液體進(jìn)行干燥，然后經(jīng)蒸餾、精餾的半成品3；
(4)柱層析
在層析柱中加入活化硅膠以及乙醚、石油醚，利用硅膠對(duì)麝香酮及其同分異構(gòu)體4-甲基環(huán)十五烷酮吸附能力的不同，使麝香酮與4-甲基環(huán)十五烷酮分離，再經(jīng)濃縮、蒸餾、精餾后得到純品4-甲基環(huán)十五烷酮。
得到純品4-甲基環(huán)十五烷酮36g，收率為2％。
實(shí)施例2(應(yīng)用實(shí)施例)
本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明4-甲基環(huán)十五烷酮抗腦缺血的活性。
4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)魚(yú)線(xiàn)法造成的大鼠局灶性腦缺血模型神經(jīng)行為學(xué)、全腦組織重量、右側(cè)腦組織重量、全腦/體比值、右腦/體比值均有不同程度的改善作用，對(duì)梗塞區(qū)域TTC染色檢查，4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量組均能改善大鼠腦組織的缺血和缺氧損傷程度，高劑量組作用強(qiáng)度與尼莫地平組相當(dāng)，但不及假手術(shù)組。提示給大鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕局灶性腦缺血模型水腫作用，對(duì)局灶性腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)大鼠凝血時(shí)間影響不明顯，但4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)魚(yú)線(xiàn)法造成的大鼠局灶性腦缺血模型的凝血時(shí)間有顯著的延長(zhǎng)作用。4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)雙側(cè)頸總A結(jié)扎法造成的小鼠全腦缺血模型全腦組織重量、全腦/體比值均有不同程度的改善作用，對(duì)梗塞區(qū)域TTC染色檢查，4-甲基環(huán)十五烷酮高、中、低劑量組均能改善小鼠全腦組織的缺血和缺氧損傷程度，高劑量組作用強(qiáng)度與尼莫地平組相當(dāng)，但不及假手術(shù)組。提示給小鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕全腦缺血模型水腫作用，對(duì)雙側(cè)頸總A結(jié)扎法全腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。
試驗(yàn)?zāi)康挠^察4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)不同腦與功能主治有關(guān)的主要藥效學(xué)指標(biāo)。
受試藥物
品名與廠家批號(hào)4-甲基環(huán)十五烷酮由濟(jì)南宏濟(jì)堂制藥有限責(zé)任公司提供。
用法用量麝香酮藥典規(guī)定用量5-10mg，一般不超過(guò)30mg。
陽(yáng)性藥尼莫地平片，20mg/片，人日用量30-120mg。
劑量設(shè)置
臨床成人日服用量為10.0mg。按體表面積比值折算，大鼠高、低劑量分別為3.6mg/kg和0.9mg/kg，相當(dāng)于臨床人日服量的25.2倍和6.3倍，按1ml/100g體重的體積灌胃給藥。小鼠高、中、低劑量分別為5.2mg/kg2.6mg/kg、1.3mg/kg，相當(dāng)于70kg人日服量的37.6、18.3、9.2倍，按0.2ml/10g體重的體積灌胃給藥。尼莫地平片臨床成人日服用量為120.0mg。按體表面積比值折算，大鼠等效劑量為10.8mg/kg，小鼠等效劑量為15.6mg/kg。假手術(shù)對(duì)照組和模型對(duì)照組均按同上體積給蒸餾水灌胃。
受試動(dòng)物
Wister大鼠，雌雄不拘，體重140-190g，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK(魯)20030004號(hào)。
昆明種小鼠，雌雄不拘，體重18-22g，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)SCXK(魯)20030004號(hào)。
試驗(yàn)儀器塞多利斯有限公司產(chǎn)萬(wàn)級(jí)電子天平。
試驗(yàn)方法和結(jié)果
1.4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用
取雄性Wistar大鼠90只，按體重隨機(jī)分為六組假手術(shù)對(duì)照組、模型對(duì)照組、4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量組、尼莫地平組。大鼠藥物高、低劑量分別為4-甲基環(huán)十五烷酮3.6mg/kg、0.9mg/kg，陽(yáng)性對(duì)照組給10.8mg/kg的尼莫地平片，均按1ml/100g體積灌胃給藥，每日一次，連續(xù)給藥8天。給藥的第5天禁食不禁水12小時(shí)，所有大鼠腹腔注射水合氯醛10ml/kg實(shí)施麻醉，仰位固定，頸部正中切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈及其頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，結(jié)扎頸外動(dòng)脈的分支枕動(dòng)脈、甲狀腺上動(dòng)脈及頸外動(dòng)脈終末支，分離頸內(nèi)動(dòng)脈的顱外分支翼突腭動(dòng)脈，用絲線(xiàn)結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈。缺血模型對(duì)照組、藥物高、低劑量組、尼莫地平組的大鼠均自頸外動(dòng)脈插入魚(yú)線(xiàn)(0.3mm)，仔細(xì)導(dǎo)入頸內(nèi)動(dòng)脈后，魚(yú)線(xiàn)繼續(xù)插入其顱內(nèi)段，當(dāng)感到有明顯阻力時(shí)，插入的魚(yú)線(xiàn)約長(zhǎng)19mm，手術(shù)局部用溫生理鹽水紗布覆蓋。假手術(shù)對(duì)照組的大鼠，不插入魚(yú)線(xiàn)，其余操作相同。魚(yú)線(xiàn)插入術(shù)后1小時(shí)，小心抽出魚(yú)線(xiàn)復(fù)灌，假手術(shù)分離術(shù)后1小時(shí)，逐層縫合局部組織、肌肉、皮下筋膜及皮膚，手術(shù)后24-72小時(shí)，繼續(xù)再給3次藥。分別于復(fù)灌24、48、72小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，72小時(shí)后進(jìn)行下列各項(xiàng)檢查。
1.1動(dòng)物的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分
手術(shù)結(jié)束動(dòng)物完全清醒后，立即進(jìn)行第1次行為學(xué)評(píng)分，手術(shù)24、48、72小時(shí)后再評(píng)分1次，按照文獻(xiàn)報(bào)道的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表1，分別進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)。
分級(jí)數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行Raddit分析，見(jiàn)橫表2。
行為學(xué)積分結(jié)果進(jìn)行組間t檢驗(yàn)處理，見(jiàn)橫表3。
表2結(jié)果表明局灶性腦缺血模型對(duì)照組大鼠完全清醒后即刻的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，說(shuō)明造模成功。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠完全清醒后即刻的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與造模對(duì)照組比較均有顯著性差異。尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠完全清醒后即刻的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)的影響與造模對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。
模型對(duì)照組對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，進(jìn)一步說(shuō)明造模成功。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與造模對(duì)照組比較均有非常顯著性差異。尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與造模對(duì)照組比較有顯著性差異。
模型對(duì)照組對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后48和72小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，說(shuō)明造模成功。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后48小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較分別有非常顯著性差異和顯著性差異。尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后48小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較有顯著性差異。
表3結(jié)果表明局灶性腦缺血模型對(duì)照組大鼠完全清醒后即刻的神經(jīng)行為學(xué)積分與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，說(shuō)明造模成功。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠完全清醒后即刻的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較均有顯著性差異。尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠完全清醒后即刻的神經(jīng)行為學(xué)積分的影響與造模對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。
模型對(duì)照組對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，進(jìn)一步說(shuō)明造模成功。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較均有非常顯著性差異。尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較有顯著性差異。
模型對(duì)照組對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后48和72小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，說(shuō)明造模成功。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后48小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較分別有非常顯著性差異和顯著性差異。尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠手術(shù)后48小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)積分與造模對(duì)照組比較有顯著性差異。
表4結(jié)果表明局灶性腦缺血模型對(duì)照組大鼠全腦組織重量、右腦組織重量均因在造模后發(fā)生腦細(xì)胞變性、水腫及間質(zhì)組織炎癥反應(yīng)而使其重量增加，與假手術(shù)對(duì)照組比較均有極顯著性差異，說(shuō)明造模成功。
4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠全腦組織重量增加的影響與造模對(duì)照組比較分別有非常顯著性差異和顯著性差異。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠右腦組織重量增加的影響與造模對(duì)照組比較分別有非常顯著性差異和顯著性差異。
尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠全腦組織重量增加的影響與造模對(duì)照組比較有非常顯著性差異，尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠右腦組織重量增加的影響與造模對(duì)照組比較有非常顯著性差異。
提示給大鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕腦缺血模型水腫作用，對(duì)腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。
表5結(jié)果表明局灶性腦缺血模型對(duì)照組大鼠全腦/體比值明顯增加，與假手術(shù)對(duì)照組比較有顯著性差異；局灶性腦缺血模型對(duì)照組大鼠右腦/體比值明顯增加，與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，上述指標(biāo)均說(shuō)明造模成功。
4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠全腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，僅呈現(xiàn)一定的作用趨勢(shì)。4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠右腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組比較有顯著性差異，4-甲基環(huán)十五烷酮低劑量對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠右腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，也僅呈現(xiàn)一定的作用趨勢(shì)。
尼莫地平片對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠全腦/體比值和右腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，僅呈現(xiàn)一定的作用趨勢(shì)。
提示給大鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕腦缺血模型水腫作用，對(duì)腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。
表2.4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)腦缺血模型大鼠不同時(shí)間的神經(jīng)行為學(xué)分級(jí)與Ridit分析
注與假手術(shù)對(duì)照組比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與模型對(duì)照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；
表3.4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)腦缺血模型大鼠行為學(xué)評(píng)分的影響(
，n＝10)
注與假手術(shù)對(duì)照組比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001，與模型對(duì)照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；
表44-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠腦組織重量的影響(
，n＝10)
注與假手術(shù)對(duì)照組比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。與模型對(duì)照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表54-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)局灶性腦缺血模型大鼠腦/體比值的影響(
，n＝10)
注與假手術(shù)對(duì)照組比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001，與模型對(duì)照組比*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；
1.2.腦組織重量
試驗(yàn)結(jié)束后，各實(shí)驗(yàn)組大鼠開(kāi)顱后，仔細(xì)分離大腦、行縱向切開(kāi)，分為左右大腦，用電子天平精蜜稱(chēng)量全腦重量、左腦重量、右腦重量，計(jì)算各大鼠的全腦體比值(mg/100g)和左、右腦體比值(mg/100g)，結(jié)果進(jìn)行組間t檢驗(yàn)處理，見(jiàn)橫表4和表5。
1.3.對(duì)凝血時(shí)間的影響
在上述各組大鼠做魚(yú)線(xiàn)栓塞時(shí)，測(cè)定其凝血時(shí)間；然后在復(fù)灌72小時(shí)后，復(fù)測(cè)其凝血時(shí)間，所有數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)處理，見(jiàn)表6。
表6.4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)局灶性腦缺血大鼠凝血時(shí)間的影響(
，n＝10)
注與假手術(shù)對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；
與模型水對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
表6結(jié)果表明4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)栓塞前大鼠的凝血時(shí)間影響不明顯，與假手術(shù)對(duì)照組和模型對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異。魚(yú)線(xiàn)法所致大鼠局灶性腦缺血模型對(duì)照組大鼠凝血時(shí)間明顯縮短，與假手術(shù)對(duì)照組比較有顯著性差異；4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)魚(yú)線(xiàn)法造成的大鼠局灶性腦缺血模型的凝血時(shí)間有顯著的延長(zhǎng)作用，與模型對(duì)照組比較有顯著性差異。4-甲基環(huán)十五烷酮低劑量和尼莫地平片對(duì)魚(yú)線(xiàn)法造成的大鼠局灶性腦缺血模型的凝血時(shí)間延長(zhǎng)作用不明顯，與模型對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異，僅呈現(xiàn)一定的作用趨勢(shì)。
1.4.TTC染色及大體病理觀察
腦缺血再灌注后，斷頭處死動(dòng)物，取右半腦將腦取出稱(chēng)重后，從前向后作2mm厚冠狀切片共6片，放入2％TTC的生理鹽水中，37℃避光孵育30min，TTC染色標(biāo)本，觀察梗塞情況。
大體改變TTC染色結(jié)果顯示模型對(duì)照組大鼠右側(cè)大腦半球皮層、基底節(jié)大片壞死灶。4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量組壞死灶有不同程度地減少。
2.4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)小鼠全腦缺血的保護(hù)作用
取昆明種小鼠94只，體重18-22g，稱(chēng)重后隨機(jī)分為6組，假手術(shù)對(duì)照組、模型對(duì)照組、4-甲基環(huán)十五烷酮高、中、低劑量組、尼莫地平片組，按前述劑量灌胃，連續(xù)給藥5天，10％水合氯醛腹腔注射麻醉，小鼠仰臥固定，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，穿線(xiàn)備用，在兩側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、氣管、迷走和交感神經(jīng)下穿線(xiàn)，環(huán)繞至頸后，繞頸一周打活結(jié)備用。造成全腦缺血30min，然后解除結(jié)扎恢復(fù)灌流60min。假手術(shù)對(duì)照組小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈，穿線(xiàn)不結(jié)扎；分離頸部血管、神經(jīng)和氣管，在其下穿線(xiàn)繞頸一周打活結(jié)，但不結(jié)扎加壓，觀察90min。
觀察各組小鼠的表現(xiàn)，處死后，剖取大腦，稱(chēng)重，計(jì)算全腦/體重比值，部分標(biāo)本做TTC染色觀察。
所有數(shù)據(jù)進(jìn)行細(xì)間t檢驗(yàn)處理，見(jiàn)表7。
表7.4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)全腦缺血小鼠腦重量和腦/體比值的影響(
，n＝10)
注與假手術(shù)對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001；與高劑量組比較，@P＜0.05，
與模型水對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與尼莫地平片比較，$P＜0.05。
表7結(jié)果表明全腦缺血模型對(duì)照組小鼠全腦組織重量在造模后發(fā)生腦細(xì)胞變性、水腫及間質(zhì)組織炎癥反應(yīng)而使其重量增加，與假手術(shù)對(duì)照組比較均有極顯著性差異；全腦缺血模型對(duì)照組小鼠全腦/體比值明顯增加，與假手術(shù)對(duì)照組比較有極顯著性差異，上述指標(biāo)均說(shuō)明造模成功。
4-甲基環(huán)十五烷酮高、中、低劑量對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦組織重量增加的影響與造模對(duì)照組比較分別有非常顯著性差異、非常顯著性差異和顯著性差異。4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組比較有顯著性差異；4-甲基環(huán)十五烷酮中、低劑量對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組無(wú)顯著性差異，僅呈現(xiàn)一定的作用趨勢(shì)。4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦/體比值增加的影響與4-甲基環(huán)十五烷酮低劑量比較有顯著性差異，呈現(xiàn)一定的劑量依賴(lài)關(guān)系。4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦/體比值增加的影響與尼莫地平片比較無(wú)顯著性差異，提示作用強(qiáng)度相當(dāng)。4-甲基環(huán)十五烷酮低劑量對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦/體比值增加的影響與尼莫地平片比較有顯著性差異，說(shuō)明其作用強(qiáng)度不及尼莫地平片。
尼莫地平片對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦組織重量增加的影響與造模對(duì)照組比較有顯著性差異。尼莫地平片對(duì)全腦缺血模型小鼠全腦/體比值增加的影響與造模對(duì)照組比較有顯著性差異。
提示給小鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕雙側(cè)頸總A結(jié)扎法導(dǎo)致全腦缺血模型水腫作用，對(duì)全腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。
TTC染色觀察
對(duì)梗塞區(qū)域TTC染色檢查，4-甲基環(huán)十五烷酮高、中、低劑量組均能改善小鼠全腦組織的缺血和缺氧損傷程度。
試驗(yàn)結(jié)論與討論
1、4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)魚(yú)線(xiàn)法造成的大鼠局灶性腦缺血模型神經(jīng)行為學(xué)、全腦組織重量、右側(cè)腦組織重量、全腦/體比值、右腦/體比值均有不同程度的改善作用，對(duì)梗塞區(qū)域TTC染色檢查，4-甲基環(huán)十五烷酮高、低劑量組均能改善大鼠腦組織的缺血和缺氧損傷程度，高劑量組作用強(qiáng)度與尼莫地平組相當(dāng)，但不及假手術(shù)組。提示給大鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕局灶性腦缺血模型水腫作用，對(duì)局灶性腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。
2、4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)大鼠凝血時(shí)間影響不明顯，但4-甲基環(huán)十五烷酮高劑量對(duì)魚(yú)線(xiàn)法造成的大鼠局灶性腦缺血模型的凝血時(shí)間有顯著的延長(zhǎng)作用。
3、4-甲基環(huán)十五烷酮對(duì)雙側(cè)頸總A結(jié)扎法造成的小鼠全腦缺血模型全腦組織重量、全腦/體比值均有不同程度的改善作用，對(duì)梗塞區(qū)域TTC染色檢查，4-甲基環(huán)十五烷酮高、中、低劑量組均能改善小鼠全腦組織的缺血和缺氧損傷程度，高劑量組作用強(qiáng)度與尼莫地平組相當(dāng)，但不及假手術(shù)組。提示給小鼠灌胃4-甲基環(huán)十五烷酮后，能夠減輕全腦缺血模型水腫作用，對(duì)雙側(cè)頸總A結(jié)扎法全腦缺血模型有明顯的保護(hù)作用。
權(quán)利要求
1、4-甲基環(huán)十五烷酮，其特征在于結(jié)構(gòu)式如下
2、根據(jù)權(quán)利要求
1所述的4-甲基環(huán)十五烷酮，其特征在于制備方法如下
(1)電解
把原料十二烷二酸單甲酯β-甲級(jí)戊二酸單甲酯稱(chēng)重混合后加入甲醇鈉為介質(zhì)的電解槽中進(jìn)行kolbe電解，得半成品1混合物；電解反應(yīng)完成后的液體料轉(zhuǎn)移至降溫罐中進(jìn)行降溫；待溫度降到工藝要求的范圍內(nèi)后進(jìn)行離心分離，液體物料用石油醚、蒸餾水、堿液和鹽水在萃取罐內(nèi)進(jìn)行萃?。惠腿『蠛氤善?的油層液體經(jīng)過(guò)濃縮、分餾后的半成品1。
(2)環(huán)合
二甲苯、金屬鈉、半成品1經(jīng)過(guò)計(jì)量后加入環(huán)合罐、然后滴加甲醇、硫酸進(jìn)行stoll醇酮縮和環(huán)化得半成品2混合物，環(huán)合過(guò)程中通氮?dú)獗Ｗo(hù)。環(huán)合完成后得液體轉(zhuǎn)移至萃取罐中用二甲苯、蒸餾水、堿液和鹽水進(jìn)行萃??；萃取后含半成品2的油層液體干燥后，經(jīng)蒸餾、精餾的半成品2。
(3)還原
乙醇、鋅粉、半成品2經(jīng)過(guò)計(jì)量后加入還原罐，滴加鹽酸進(jìn)行還原，得合成麝香酮及其同分異構(gòu)體的混合物，還原反應(yīng)后的液體料轉(zhuǎn)移至提取罐中用石油醚堿液和飽和食鹽水進(jìn)行萃?。惠腿『髮?duì)油層液體進(jìn)行干燥，然后經(jīng)蒸餾、精餾的半成品3。
(4)柱層析
在層析柱中加入活化硅膠以及乙醚、石油醚，利用硅膠對(duì)麝香酮及其同分異構(gòu)體4-甲基環(huán)十五烷酮吸附能力的不同，使麝香酮與4-甲基環(huán)十五烷酮分離，再經(jīng)濃縮、蒸餾、精餾后得到純品4-甲基環(huán)十五烷酮。
3、4-甲基環(huán)十五烷酮用于作為制備治療腦缺血性腦血管病的藥物中的應(yīng)用。
4、4-甲基環(huán)十五烷酮用于作為制備治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病的藥物中的應(yīng)用。
5、4-甲基環(huán)十五烷酮用于作為制備治療抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
6、4-甲基環(huán)十五烷酮用于作為制備治療和改善癡呆癥的藥物中的應(yīng)用。
專(zhuān)利摘要
4－甲基環(huán)十五烷酮，其特征在于其結(jié)構(gòu)式如下本發(fā)明4－甲基環(huán)十五烷酮用于作為制備治療腦缺血性腦血管病的藥物中的應(yīng)用；用于作為制備治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病的藥物中的應(yīng)用；用于作為制備治療抗腫瘤的藥物中的應(yīng)用；用于作為制備治療和改善癡呆癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明有利于加強(qiáng)生態(tài)環(huán)境建設(shè)，保護(hù)瀕危動(dòng)物和藥用資源，提高人類(lèi)生命質(zhì)量和健康水平。
文檔編號(hào)C25B3/10GK1994998SQ200610068879
公開(kāi)日2007年7月11日 申請(qǐng)日期2006年9月15日
發(fā)明者宋進(jìn)軍, 周愛(ài)敏 申請(qǐng)人:濟(jì)南宏濟(jì)堂制藥有限責(zé)任公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan