專利名稱:一種抗體親和層析純化溶葡萄球菌酶的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酶的純化方法，具體的說涉及溶葡萄球菌酶的層析純化方法。
技術(shù)背景
溶葡萄球菌酶(Lysostaphin)是Staphylococus Simulans葡萄球菌分泌于胞外的蛋白產(chǎn)物，分子量為27kDa，含246個氨基酸，是一種肽鏈內(nèi)切酶。該酶可切斷葡萄球菌細胞壁肽聚糖中的五甘氨酸肽鍵橋結(jié)構(gòu)，從而達到迅速溶解并殺死細菌的目的。即使是耐藥性金黃色葡萄球菌，MRSA及“超級細菌”，溶葡萄球菌酶也同樣有很強的殺菌作用，而且不容易誘導產(chǎn)生耐藥菌株，有望成為治療耐藥性細菌感染的新型生物制劑。
1987年復旦大學在球形芽孢桿菌中表達溶葡萄球菌酶獲得成功，并建立了該酶的分離純化方法，該方法包括使用DEAE纖維素的陰離子層析以及CM纖維素的陽離子層析，由于層析介質(zhì)剛性弱、蛋白載量低，導致層析過程流速不能太快、只能處理小體積樣品，處理 10升樣品需要4天的時間，而且在得率、純度等方面都不理想。
申請人:構(gòu)建了一種從含溶葡萄球菌酶基因的球形芽孢桿菌培養(yǎng)上清中純化溶葡萄球菌酶的技術(shù)(專利公開號CN1743453 ；
公開日2006. 3. 8)，該方法包括離子交換和疏水層析，處理45升樣品只需2個工作日，總回收率為50%，比活性達到1000U/mg蛋白質(zhì)，但此方法只適用于工業(yè)化的大生產(chǎn)，生產(chǎn)所得的溶葡萄球菌酶純度達到90%左右，尚不能滿足藥用的純度要求。
另外，申請人構(gòu)建了一種用大腸桿菌高效外分泌表達溶葡萄球菌酶的工藝(專利公開號CN190(^90 ；
公開日2007. 1. ，符合新藥申報的藥用工程菌的要求，表達產(chǎn)物以最終的成熟溶葡萄球菌酶活性形式存在于培養(yǎng)基中，無包涵體復性等步驟；純化較簡單，宿主菌蛋白污染少；回收率高，表達量可以達到200-400mg/L，回收率大于60 %，但所得的溶葡萄球菌酶純度也無法達到藥用的要求，需要更進一步的純化。
親和層析法是依據(jù)生物大分子能夠與配體特異、可逆地結(jié)合在一起的特性，從復雜的生物樣品中分離得到所需目標產(chǎn)物的分離純化方法。它基于生物大分子與配體之間的生物學特異性，具有選擇性強、純化效率高、步驟簡單，為近年來各類蛋白純化的主要研究方向，部分研究者也嘗試用親和層析法純化溶葡萄球菌酶如用kphar0Se4B作為親和吸附劑，用金黃色葡萄球菌的死菌體細胞和細胞壁肽聚糖作為配體進行的親和層析(張培德，馬力，陳石根.葡萄球菌酶的親和層析.工業(yè)微生物，1992，21 (5) 1-5) 0有采用殼聚糖作為載體，與酶作用的特異底物(細菌菌體細胞)固定化，作為吸附介質(zhì)純化溶葡萄球酶 (周毅彬，張培德.工業(yè)微生物.2002，332(1) :19-22).也有以金黃色葡萄球菌細胞壁肽聚糖(PG)偶聯(lián)于BrCN活化的kphar0Se4B為親和吸附介質(zhì)用以純化溶葡萄球菌酶(張培德， 馬力.工業(yè)微生物.1992，5 1-5)。但以菌體細胞或細胞壁肽聚糖作為配體制得的親和吸附柱柱效很短，使用2—3次后就基本喪失親和作用，且吸附量較低，無法應用于工業(yè)化生產(chǎn)。
因此尋找一種專一性好、產(chǎn)品純度高、樣品吸附量大的溶葡萄球菌酶純化工藝是有關(guān)領(lǐng)域十分迫切需要解決的難題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種抗體親和層析純化溶葡萄球菌酶的方法， 以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
本發(fā)明的方法包括如下步驟
(1)溶葡萄球菌酶抗體的處理
將含有溶葡萄球菌酶抗體的樣品通過預先用0. 05 0. 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液A平衡好的裝有protein A樹脂的層析柱，然后用0. 05 0. 2mol/LpH7. 0-9. 0的緩沖液 A清洗上樣后的protein A層析柱；再用0. 05 0. 2mol/LpH2. 0 4. 0的緩沖液B以每分鐘1 的流速，將溶葡萄球菌酶抗體從層析柱上洗脫并收集洗脫峰，凍干，獲得溶葡萄球菌酶抗體凍干產(chǎn)物；
含有溶葡萄球菌酶抗體的樣品中，溶葡萄球菌酶抗體的含量為0. 1 3%，每ml的 protein A樹脂可以純化l_50mg的溶葡萄球菌酶抗體樣品。
所說的溶葡萄球菌酶抗體樣品的制備方法參照公開出版物[(美)J.薩姆布魯克， E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯.分子克隆實驗指南(第二版).第十八章，第一節(jié)，PP853-858. 科學出版社.1992]；
抗體制備過程中所用的溶葡萄球菌酶可采用專利文獻(專利公開號CN190(^90 ；
公開日2007. 1.24)公開的方法進行制備，或采用市售產(chǎn)品，如SIGMA公司生產(chǎn)的溶葡萄球菌酶標準品；
所說的裝有protein A樹脂的層析柱購自Pharmacia公司Hightrap ProteinA預裝柱；
所說的緩沖液平衡裝有protein A樹脂的層析柱的方法，包括如下步驟
用0. 05 0. 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液A以每分鐘1 4ml的流速，通過層析柱，用量為層析柱體積的3 10倍，通過紫外檢測保證層析柱已平衡至基線；
所說的緩沖液清洗上樣后的protein A樹脂層析柱的方法，包括如下步驟
用0. 05 0. 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液A以每分鐘1 4ml的流速，清洗上樣后的protein A樹脂層析柱，用量為protein A樹脂層析柱體積的3 10倍，通過紫外檢測保證層析柱已清洗至基線；
所說的pH7. 0-9. 0的緩沖液A可選自PBS、Tris_HCl、硼酸緩沖液中的一種或一種以上；
所說的pH2. 0 4. 0的緩沖液B可選自Na2HPO4-檸檬酸、Gly-HCl、鄰苯二甲酸-HCl 緩沖液中的一種或一種以上，緩沖液B的用量為protein A樹脂層析柱體積的3 10倍；
(2)免疫親和層析介質(zhì)的制備
參照Wiarmacia公司出版的CNBr活化kphar0Se4B的使用說明書，進行免疫親和層析介質(zhì)的制備。具體步驟如下
將親和層析介質(zhì)用pH為2. 0-3. 0的HCl溶液進行溶脹、清洗，HCl溶液的用量為親和層析介質(zhì)的30-80倍體積量，然后用親和層析介質(zhì)的10-20倍體積量的偶聯(lián)液進行清洗，使親和層析介質(zhì)的PH達到8. 0-10. 0。
所用的偶聯(lián)液為含有0. 2-0. 6M NaCl的pH為8. 0-10. 0的NaHCO3溶液。[0026]將步驟(1)收集的溶葡萄球菌酶抗體凍干產(chǎn)物以重量比1:200-400溶解在偶聯(lián)液中，然后與上步用偶聯(lián)液清洗過的親和層析介質(zhì)混合，在室溫條件振蕩0. 5-1. 5小時，或于 4°C條件下放置12-36小時，使抗體與親和層析介質(zhì)偶聯(lián)充分；然后用偶聯(lián)液清洗制得的免疫親和層析介質(zhì)，偶聯(lián)液用量為制得的免疫親和層析介質(zhì)體積的5-20倍；再用免疫親和層析介質(zhì)體積1-5倍的0. 05-0. IM的1Tris-HCl或IM的乙醇胺溶液浸泡放置2_4小時，用于封閉免疫親和層析介質(zhì)中未結(jié)合抗體的活性位點。
溶葡萄球菌酶抗體與親和層析介質(zhì)的重量比為1 :25-150 ；
所說的親和層析介質(zhì)選自交聯(lián)瓊脂糖、纖維素、硝化纖維素、丙烯酰胺聚合物、共聚物及其衍生物、聚甲基丙烯酸酯衍生物、聚醚砜或脫乙酰殼多糖中的一種或一種以上；
(3)溶葡萄球菌酶用免疫親和層析介質(zhì)進行純化
將溶葡萄球菌酶樣品以每分鐘1 細1的流速通過預先用0. 05 0. 2mol/ LpH7. 0-9.0的緩沖液A平衡好的裝有步驟O)的免疫親和層析介質(zhì)的層析柱；溶葡萄球菌酶樣品中，溶葡萄球菌酶的含量為70-7000μ g/ml，基于溶葡萄球菌酶的重量，上樣量為 1-1000 μ g的溶葡萄球菌酶/ml免疫親和層析介質(zhì)；
然后用0. 05 0. 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱；
再用0. 1 0. 5mol/L pH為2. 5 4. 5的緩沖液C以每分鐘1 的流速將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫并收集洗脫峰；緩沖液C的用量為層析柱體積的3 10倍；洗脫液收集在裝有0. 5 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液中。
所說的溶葡萄球菌酶樣品為依照中國專利CN190(^90制備或依照中國專利 CN1743453的純化方法將含溶葡萄球菌酶基因的大腸桿菌培養(yǎng)上清經(jīng)過離子交換步驟純化后的粗品，用含0. 05 0. 35mol/L NaCl的pH7. 0 9. 0的緩沖液稀釋，其中，溶葡萄球菌酶含量為 70-7000 μ g/ml ；
所說的緩沖液平衡免疫親和層析介質(zhì)的層析柱包括如下步驟
將0. 05 0. 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液A以每分鐘1 4ml的流速通過裝有免疫親和層析介質(zhì)的層析柱，用量為層析柱體積的3 10倍，通過紫外檢測保證層析柱已平衡至基線；
所說的緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱包括如下步驟
用0. 05 0. 2mol/L pH7. 0-9. 0的緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱，流速為每分鐘1 細1，用量為層析柱體積的3 10倍，通過紫外檢測保證層析柱已清洗至基線。
所說的pH7. 0-9. 0的緩沖液A選自PBS、Tris_HCl、硼酸緩沖液中的一種或一種以上；
所說的pH為2. 5 4. 5的緩沖液C選自醋酸-醋酸鈉、Na2HPO4-檸檬酸、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中的一種或一種以上。
所說的各種緩沖液的配制方法參考《中草藥有效成分提取與分離》附錄十常用緩沖液的配制；上?？茖W技術(shù)出版社，1983。
上述步驟的活性蛋白回收率為85 95%，比活性大于1000U/mg，蛋白純化倍數(shù)為 3-5以上，純度可達到95-98%，處理速度快、回收率高及重復性好、柱效長；按照本發(fā)明制得的免疫親和層析介質(zhì)的吸附柱不僅柱效長度下20%乙醇保存柱效大于一年)且結(jié)合效率基本不變(1000 μ g/mlmedium)。


圖1為抗體純化層析譜圖。
圖2為單克隆、多克隆抗體SDS-PAGE。
圖3為單克隆抗體親和介質(zhì)純化溶葡萄球菌酶層析譜圖。
圖4為多克隆抗體親和介質(zhì)純化溶葡萄球菌酶層析譜圖。
圖5為溶葡萄球菌酶SDS-PAGE。
具體實施方式
實施例1
溶葡萄球菌酶單克隆抗體的純化
層析介質(zhì)5ml protein A hightrap預裝柱，購自pharmacia生物技術(shù)有限公司。
單克隆抗體樣品以溶葡萄球菌酶作為抗原，按照常規(guī)的單克隆抗體制備方法免疫BalB/c小鼠，制得含有溶葡萄球菌酶單克隆抗體的小鼠腹水15ml。其中，溶葡萄球菌酶
單克隆抗體的含量為U.limu/ml·
層析設備AKTA explorer 100蛋白純化開拓系統(tǒng)，購自Wiarmacia生物技術(shù)有限公司。
平衡、清洗緩沖液pH8. 0的PBS緩沖液。
洗脫緩沖液含有0. lmol/L甘氨酸的pH2. 8的Gly-HCl緩沖液。
平衡過程用pH為8. 0的PBS緩沖液平衡5ml proteinA預裝柱，以每分鐘3ml的流速，通入預裝柱，用量為預裝柱體積的6倍，通過紫外檢測(A28tl)保證層析柱已平衡至基線。
上樣以每分鐘2ml的流速使15ml單克隆抗體樣品通過上步平衡好的層析柱。
清洗上樣完，用pH為8. 0的PBS緩沖液，以每分鐘2ml的流速清洗層析柱，用量為預裝柱體積的8倍，通過紫外檢測(A^O)保證層析柱已清洗至基線。
洗脫清洗至基線后，用含有0. lmol/L甘氨酸的pH2. 8的Gly-HCl緩沖液，以每分鐘2ml的流速將溶葡萄球菌酶單克隆抗體從層析柱上洗脫下來，緩沖液用量為層析柱體積的4倍。在收集管中預先加有含有l(wèi)mol/L Tris的pH8. 0的Tris-HCl緩沖液，用以中和洗脫液，收集洗脫峰11毫升，凍干后制得溶葡萄球菌酶單克隆抗體凍干產(chǎn)物42. 575mg (其中包含有溶葡萄球菌酶單克隆抗體和緩沖液中的鹽成分)。
結(jié)果層析過程參見圖1。圖中，峰1代表抗體純化清洗峰，峰2代表抗體純化洗脫峰。
洗脫峰經(jīng)單克隆抗體含量測定(lowry法)為1. 905mg/ml，共計20. 955mg，單克隆抗體純度經(jīng)SDS*PAGE分析>90%，單克隆抗體電泳圖見圖2，圖中，泳道1為低分子量標準蛋白，泳道2為protein A純化的單克隆抗體(經(jīng)二硫蘇糖醇處理)，泳道3為proteinA純化的多克隆抗體(經(jīng)二硫蘇糖醇處理)。
實施例2
溶葡萄球菌酶多克隆抗體的純化[0062]層析介質(zhì)5ml protein A hightrap預裝柱，購自pharmacia生物技術(shù)有限公司。
多克隆抗體樣品以溶葡萄球菌酶作為抗原，按照常規(guī)的多克隆抗體制備方法免疫新西蘭兔，制得含有溶葡萄球菌酶多克隆抗體的兔抗血清8ml。其中，溶葡萄球菌酶多克
隆抗體的含量為2.75imi_
層析設備AKTA explorer 100蛋白純化開拓系統(tǒng)，購自Wiarmacia生物技術(shù)有限公司。
平衡、清洗緩沖液含有0. Imol/LTris的pH8. 0的1Tris-HCl緩沖液。
洗脫緩沖液含有0. lmol/L甘氨酸的pH2. 8的Gly-HCl緩沖液。
平衡過程用含有0. lmol/L Tris的pH為8. 0的Tris-HCl緩沖液平衡5mlprotein A預裝柱，流速為每分鐘細1，用量為柱體積的6倍，通過紫外檢測(A28tl)保證層析柱已平衡至基線；
上樣將8ml的多克隆抗體樣品以每分鐘3ml的流速使樣品通過上步平衡好的層析柱。
清洗上樣完，用含有0. lmol/L Tris的pH為8. 0的Tris-HCl緩沖液，以每分鐘 4ml的流速清洗層析柱，通過紫外檢測(A28tl)保證層析柱已清洗至基線。
洗脫清洗至基線后，用含有0. lmol/L甘氨酸的pH2. 8的Gly-HCl緩沖液，以每分鐘細1的流速將溶葡萄球菌酶多克隆抗體從層析柱上洗脫下來，緩沖液用量為層析柱體積的5倍。在收集管中預先加有含有l(wèi)mol/LTris的pH8. 0的Tris-HCl緩沖液，用以中和洗脫液，收集洗脫峰10毫升，凍干后制得溶葡萄球菌酶多克隆抗體凍干產(chǎn)物342. 395mg (其中包含有溶葡萄球菌酶單克隆抗體和緩沖液中的鹽成分)。
結(jié)果層析過程參見圖1。洗脫峰經(jīng)多克隆抗體含量測定(lowry法)為22mg/ml， 共計220mg，多克隆抗體純度經(jīng)SDS*PAGE分析>90%。
實施例3
親和層析純化溶葡萄球菌酶
親和介質(zhì)裝有3毫升偶聯(lián)有實施例1制得的單克隆抗體的kphar0Se4B凝膠(購自Wiarmacia生物技術(shù)有限公司，經(jīng)CNBr活化)介質(zhì)的層析柱。
樣品依照中國專利CN1900290制備的含溶葡萄球菌酶基因的大腸桿菌培養(yǎng)上清10ml，含964單位溶葡萄球菌酶，加入等體積含0. 15mol/L NaCl的0. lmol/L pH8. 0的 Tris-HCl緩沖液，制得上樣液20ml。
層析設備AKTA explorer 100蛋白純化開拓系統(tǒng)，購自Wiarmacia生物技術(shù)有限公司。
平衡、清洗緩沖液含有0. lmol/L NaCl的pH為8. 0的Tris-HCl緩沖液；
洗脫緩沖液含有0. lmol/L醋酸鈉的pH4. 3的醋酸緩沖液。
中和緩沖液含有l(wèi)mol/LTris的pH8. 0的iTris-HCl緩沖液。
免疫親和層析介質(zhì)偶聯(lián)過程
將Ig Sepharose4B干粉(購自Pharmacia生物技術(shù)有限公司，經(jīng)CNBr活化)用 200ml pH2. 0的HCl溶液進行溶脹、清洗，然后用50ml偶聯(lián)液進行清洗，使kphar0Se4B凝膠的PH達到8. 3 (lg Sepharose4B干粉可溶脹成3. 5ml凝膠。所用的偶聯(lián)液為含有0. 2M NaCl 的 pH 為 8. 3 的 NaHCO3 溶液。
7[0082]將實施例1制得的溶葡萄球菌酶抗體IOmg溶解在偶聯(lián)液中，然后與上步用偶聯(lián)液清洗過的kphar0Se4B凝膠混合，在室溫條件振蕩1小時，使抗體與親和層析介質(zhì)偶聯(lián)充分；然后用35ml偶聯(lián)液清洗制得的免疫親和層析介質(zhì)；再用12ml0. lmol/L的Tris-HCl 溶液浸泡放置2小時，用于封閉免疫親和層析介質(zhì)中未結(jié)合抗體的活性位點。
平衡用平衡緩沖液平衡裝有3毫升偶聯(lián)有實施例1制得的單克隆抗體的 kphar0Se4B凝膠介質(zhì)的層析柱，以每分鐘2ml的流速平衡5個柱體積，通過紫外檢測(A28tl) 保證層析柱已平衡至基線。
上樣將上樣液20ml以每分鐘Iml的流速使溶葡萄球菌酶樣品通過預先用緩沖液平衡好的層析柱。
清洗上樣完，用清洗緩沖液以每分鐘2ml的流速清洗層析柱，用量為層析柱體積的8倍；通過紫外檢測(A28tl)保證層析柱已清洗至基線。
洗脫清洗至基線后，用洗脫緩沖液以每分鐘Iml的流速將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫下來，緩沖液用量為層析柱體積的4倍。在收集管中預先加有含有l(wèi)mol/LTris的 PH8. 0的Tris-HCl緩沖液，用以中和洗脫液，收集洗脫峰6毫升。試驗結(jié)果如圖3和表1。 圖3中，峰1為溶葡萄球菌酶清洗峰，峰2為溶葡萄球菌酶洗脫峰。
表1溶葡萄球菌酶回收率測定
權(quán)利要求
1.一種抗體親和層析純化溶葡萄球菌酶的方法，其特征在于，包括如下步驟(1)溶葡萄球菌酶抗體的處理將含有溶葡萄球菌酶抗體的樣品通過預先用緩沖液A平衡好的裝有proteinA樹脂的層析柱，然后用緩沖液A清洗上樣后的proteinA層析柱；再用pH2. 0 4. 0的緩沖液B將溶葡萄球菌酶抗體從層析柱上洗脫，并收集洗脫峰，凍干；(2)免疫親和層析介質(zhì)的制備將步驟(1)收集的凍干產(chǎn)物與親和層析介質(zhì)混合，偶聯(lián)反應，制得免疫親和層析介質(zhì)；(3)溶葡萄球菌酶用免疫親和層析介質(zhì)進行純化將溶葡萄球菌酶樣品通過預先用緩沖液A平衡好的裝有步驟( 的免疫親和層析介質(zhì)的層析柱；然后用緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱；再用pH2. 5 4. 5的緩沖液C將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫，并收集洗脫峰；所述緩沖液A選自PBS、Tris-HCl或硼酸緩沖液中的一種以上，緩沖液A的pH為 7. 0-9. 0 ；所述緩沖液B選自Na2HPO4-檸檬酸、Gly-HCl或鄰苯二甲酸-HCl緩沖液中的一種以上；所述緩沖液C選自醋酸-醋酸鈉、Na2HPO4-檸檬酸或檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中的一種以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液A平衡裝有proteinA樹脂的層析柱的方法，包括如下步驟用PH7. 0-9. 0的緩沖液A通過層析柱，用量為層析柱體積的3 10倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液A清洗上樣后的proteinA 樹脂層析柱的方法，包括如下步驟用PH7. 0-9.0的緩沖液A清洗上樣后的protein A樹脂層析柱，用量為protein A樹脂層析柱體積的3 10倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，所說的親和層析介質(zhì)選自交聯(lián)瓊脂糖、纖維素、硝化纖維素、丙烯酰胺聚合物、聚醚砜或脫乙酰殼多糖中的一種以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液平衡免疫親和層析介質(zhì)的層析柱包括如下步驟將PH7. 0-9. 0的緩沖液A通過裝有免疫親和層析介質(zhì)的層析柱，用量為層析柱體積的3 10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，所說的緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱包括如下步驟用PH7. 0-9. 0的緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱，用量為層析柱體積的3 10倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，緩沖液B的用量為protein A樹脂層析柱體積的3 10倍，步驟(3)中，緩沖液C的用量為層析柱體積的3 10倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，緩沖液C以每分鐘1 細1 的流速將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫。
專利摘要
本發(fā)明公開了一種抗體親和層析純化溶葡萄球菌酶的方法，包括如下步驟(1)將含有溶葡萄球菌酶抗體樣品通過用緩沖液A平衡好的裝有protein A樹脂的層析柱，清洗，洗脫，收集洗脫峰凍干；(2)將凍干產(chǎn)物與親和層析介質(zhì)混合，制得免疫親和層析介質(zhì)；(3)將溶葡萄球菌酶樣品通過預先用緩沖液A平衡好的裝有免疫親和層析介質(zhì)的層析柱；然后用緩沖液A清洗上樣后的免疫親和層析柱；再用緩沖液C將溶葡萄球菌酶從層析柱上洗脫，收集洗脫峰。本發(fā)明的方法，活性蛋白回收率為85～95％，比活性大于1000U/mg，蛋白純化倍數(shù)為3-5以上，純度可達到95-98％，處理速度快、回收率高及重復性好、柱效長且結(jié)合效率基本不變。
文檔編號C12N9/36GKCN101302504 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200710040561
公開日2011年12月21日 申請日期2007年5月11日
發(fā)明者張繼恩, 黃晉江, 黃青山 申請人:上海高科聯(lián)合生物技術(shù)研發(fā)有限公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (2),