專利名稱：:轉(zhuǎn)運(yùn)化合物穿過(guò)血腦屏障的分子的制作方法轉(zhuǎn)運(yùn)化合物穿itiL腦屏障的分子發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及藥物遞送領(lǐng)域中的改進(jìn)。更M地，本發(fā)明涉及多肽、綴合物以及含有本發(fā)明多肽或綴合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及這些多肽和綴合物在轉(zhuǎn)運(yùn)化合物或藥物穿過(guò)哺乳動(dòng)物血腦屏障中和在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療和診斷中的用途。發(fā)明背景在大腦病變新療法的M中，認(rèn)為血腦屏障(BBB)是治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病的藥物可能用途的主要障礙。CNS藥物的全球市場(chǎng)在1998年為$330億，這大約是心血管藥物全球市場(chǎng)的一半，即^A在美國(guó)，患有CNS疾病的4接近心血管疾病患者的兩倍。這種不平衡性的原因;l^過(guò)98%的所有潛在CNS藥物不能穿itA腦屏障。此外，超過(guò)99。/。的全球CNS藥物研發(fā)只是致力于CNS藥物發(fā)現(xiàn)，不到1%是針對(duì)CNS藥物遞送。該比率可解釋為什么目前對(duì)于主要的神經(jīng)系統(tǒng)疾病如腦瘤、阿爾茨海默氏病和中風(fēng)沒(méi)有有效的療法可用。大腦因兩個(gè)屏障系統(tǒng)的存在得到保護(hù)來(lái)對(duì)抗?jié)撛诘亩拘晕镔|(zhì)血腦屏障(BBB)和血-腦脊液屏障(BCSFB)。認(rèn)為BBB是血清配體吸收的主要途徑，因?yàn)槠浔砻娣e大約大于BCSFB表面積的5000倍。構(gòu)成BBB的大腦內(nèi)皮代表了對(duì)抗許多CNS障礙的潛在藥物用途的主要障礙。通常，只有小于約500道爾頓的親脂性分子可以穿過(guò)BBB，即，從血液進(jìn)入大腦中。然而，許多在動(dòng)物研究中顯示出具有治療CNS失調(diào)前景的藥物的大小明顯比較大。因此，由于大腦毛細(xì)血管內(nèi)皮壁對(duì)這些藥物可忽略的滲透性，肽和蛋白質(zhì)治療劑通常M液至大腦的轉(zhuǎn)運(yùn)中排除。與其他器官的毛細(xì)血管相比較，大腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BCEC)通過(guò)緊密連接得到密閉，具有很少的孔和很少的內(nèi)吞小泡。BCEC由胞外基質(zhì)、星形細(xì)胞、周皮細(xì)胞和小神經(jīng)月M細(xì)胞包圍。內(nèi)皮細(xì)胞與星形細(xì)胞足突的和毛細(xì)血管的基底膜的緊密關(guān)聯(lián)對(duì)于允許血腦交換嚴(yán)密控制的BBB特性的M和維持是重要的。國(guó)際公開(kāi)WO2004/060403公開(kāi)了本發(fā)明人進(jìn)行的發(fā)明，涉及轉(zhuǎn)運(yùn)藥物穿過(guò)血腦屏障的分子。另夕卜，迄今為止，對(duì)于大腦不存在有效的藥物遞送方法可用。調(diào)查研究中的用于將肽和蛋白質(zhì)藥物遞送至大腦的方法可以分成三種主要策略。第一，^/v性方法包括通過(guò)外科手術(shù)藥物的直接心室內(nèi)給藥，和通過(guò)高滲溶液頸動(dòng)脈內(nèi)輸注BBB的暫時(shí)性破壞。第二，基于藥物的策略在于通過(guò)提高肽或蛋白質(zhì)的脂溶性促進(jìn)通過(guò)BBB。第三，基于生理的策略充分利用針對(duì)BBB的各種栽體機(jī)理，在近些年其已經(jīng)得到了表征。在該方法中，使藥物附著于蛋白質(zhì)載體上，該蛋白質(zhì)載體如同靶向受體的遞送媒介物一樣對(duì)BBB執(zhí)行功能。該方法是高度特異性的并呈現(xiàn)出高效能，對(duì)于具有無(wú)PM巴標(biāo)的臨^it應(yīng)癥具有極大的靈活性。本發(fā)明人已經(jīng)并且仍然在研究后一種方美國(guó)專利US5，807，980描述了牛胰蛋白酶抑制劑衍生的抑制劑及其制備方法和治療用途。將這些肽用于治療特征在于組織因子和/或VIIIa因子異常出現(xiàn)或數(shù)量的病癥如異常的血栓形成。美國(guó)專利US5，780，265描述了能夠抑制血漿激肽^^放酶的絲氨酸蛋白酶抑制劑。美國(guó)專利US5，118，668描述了牛胰蛋白酶抑制劑變體。擁有可以作為用于轉(zhuǎn)運(yùn)化合物或藥物穿過(guò)個(gè)體BBB的載體或纟某介物的改進(jìn)分子是非常希望的。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供藥物遞送領(lǐng)域中的改進(jìn)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供用于轉(zhuǎn)運(yùn)化合物或藥物穿過(guò)個(gè)體血腦屏障的非4^v性且靈活的方法和載體。本申請(qǐng)公開(kāi)了新的分子，其能夠，例如轉(zhuǎn)運(yùn)所需的化合物穿過(guò)血腦屏障。在第一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了能夠穿過(guò)(即，通過(guò))體外測(cè)定中模仿(沖莫擬)哺乳動(dòng)物血腦屏障的細(xì)胞層的生物活性多肽，該多肽可以選自，例如-牛胰蛋白酶抑制劑(SEQIDNO.:98)，-牛胰蛋白酶抑制劑類似物-可以包括(或基本上由)SEQIDN0.:1中限定的M酸序列(構(gòu)成)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-SEQIDNO.:1的生物活性類似物，畫SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。第二個(gè)方面中，本發(fā)明提供了能夠穿過(guò)(即，通過(guò))模仿(模擬)體外測(cè)定中哺乳動(dòng)物血腦屏障的細(xì)胞層的生物活性多肽，該多肽可以選自，例如-可以包括SEQIDN0.:1中限定的tt酸序列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，—SEQIDNO.:1的生物活性類似物，一SEQIDNO.:1的生物活性片段和；-SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。根據(jù)本發(fā)明，牛胰蛋白酶抑制劑片段可以由SEQIDNO.:1中限定的序列構(gòu)成。此外根據(jù)本發(fā)明，牛胰蛋白酶抑制劑片段可以包括SEQIDNO.1并可以具有約19個(gè)氨基酸至約54個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度，例如，1G至50個(gè)M酸長(zhǎng)，10至30個(gè)氨基酸長(zhǎng)等。根據(jù)本發(fā)明，SEQIDNO.:1的生物活性類似物可以具有約19個(gè)氨基酸至約54個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度(例如，包括例如21至23、25至34、36至50和52至54個(gè))，或約19個(gè)氨基酸至約50個(gè)M酸的長(zhǎng)度，或約19個(gè)M酸至約34個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度(例如，19、20、21、22、23、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34個(gè))，或約19個(gè)氛基酸至約23個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度或約19、20、21、22、23、24、35、51個(gè)氮基酸的長(zhǎng)度。在此所述的(例如，19個(gè)氨基酸的)多肽的生物活性片段可以包括例如約7、8、9或10至18個(gè)氨基酸的多肽。因此，根據(jù)本發(fā)明，SEQIDNO.:1或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段可以具有約7至約18個(gè)氨基酸或約10至約18個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度。美國(guó)專利US5，807，980描述了在此標(biāo)識(shí)為SEQIDN0.:102的多肽。美國(guó)專利US5，780，265描述了在此標(biāo)識(shí)為SEQIDN0.:103的多肽。例如，可以在M(M年7月"日以國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO2004/060403公開(kāi)的NO.:98)、血管肽(Angiopep)-1絲醋列(SEQIDNO.:67)，以及一些生物活性類似物的序列。此外，國(guó)際/^開(kāi)WO04/060403描述了在此標(biāo)識(shí)為SEQIDNO.:104的多肽。美國(guó)專利US5，118，668描迷了具有SEQIDNO.:105中所示序列的多肽。可以通過(guò)進(jìn)行國(guó)際申請(qǐng)PCT/CA2004/000011中公開(kāi)的合成牛胰蛋白酶抑制劑序列(或其部分)的蛋白質(zhì)清除(Genebank:www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)找到牛胰蛋白酶抑制劑類似物的實(shí)例。例如，根據(jù)登錄號(hào)CAA37967(GI:58005)、1405218C(GI:3604747)等可以找到示例性牛胰蛋白酶抑制劑類似物。另一方面中，本發(fā)明提供了能夠穿過(guò)(即，通過(guò))模仿(模擬)體外測(cè)定中哺乳動(dòng)物血腦屏障的細(xì)胞層的生物活性多肽，該多肽可以選自，例如-19至54(例如，19-50)個(gè)氨基酸長(zhǎng)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1,-由SEQIDNO.:1構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-約19至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)的SEQIDNO.:1的生物活性類似物，和；-(10至18個(gè)氨基酸的)SEQIDNO.:1的生物活性片段或(約10至18個(gè)氨基酸的)SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。根據(jù)本發(fā)明，提供了SEQIDNO.:1的生物活性類似物，其可以選自，例如畫包括與SEQIDNO.:1綠餅列至少35%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1M辦列至少40%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1M酸序列至少50%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1^J^酸序列至少60%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1M絲列至少70%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1絲紗列至少80%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1tt麟列至少90%同一性的SEQIDNO.:1類似物，-包括與SEQIDNO.:1#^酸序列至少95%(即，96%、97%、98%、99%和100%)同一性的SEQIDNO.:1類似物。例如，SEQIDNO.:1的生物活性片段可以包括選自SEQIDNO.:2至SEQIDNO.:62、SEQIDNO.:68至SEQIDNO.:93和SEQIDNO.:97以及99、IOO和IOI的任一個(gè)中限定的M酸序列的^J^酸序列。當(dāng)本發(fā)明的多肽包括，例如，SEQIDNO.:99、100或101時(shí)，該多肽具有約10至50個(gè)氨基酸，例如，10至30個(gè)M酸長(zhǎng)的M酸序列。此外，根據(jù)本發(fā)明，SEQIDNO.:1的生物活性類似物可以包括SEQIDNO.:67中限定的M酸序列(即，其是SEQIDNO.:67(血管肽-1)的@5化形式的67號(hào)多肽)。本發(fā)明的多肽可以是酰胺化的，即，可以具有酰胺化的M酸序列。例如，SEQIDNO.:67的多肽可以是酰胺化的(67號(hào)多肽)。本發(fā)明的一部分可以涉及除了SEQIDNO.:102、103、104和105中限定的多肽之外的在此限定的多肽，而本發(fā)明的另一部分可以包括這些肽。例如并且不受限制，本發(fā)明包括含有這些肽的綴合物及其用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病(例如，腦瘤)的用途、治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病(例如，腦瘤)的方法、治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物組合物等。再一方面中，本發(fā)明提供了生物活性多肽，其能夠穿過(guò)(即，通過(guò))模仿(模擬)體外測(cè)定中哺乳動(dòng)物血腦屏障的細(xì)胞層，該多肽可以選自，例如-19至54個(gè)(例如，19-50個(gè))M酸長(zhǎng)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1，畫由SEQIDNO.:1構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-約19至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)的SEQIDNO.:1的生物活性類似物，只要所述類似物不包括SEQIDNO.:102、103、104或105并且只要當(dāng)所述類似物由SEQIDNO.:67構(gòu)成時(shí)，所述類似物是,化的，-10至18個(gè)M酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-約10至18個(gè)氨基酸的SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。此外，根據(jù)本發(fā)明，SEQIDNO.:1的生物活性片段或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段可以包括SEQIDNO.1或SEQIDNO.:1類似物的至少9個(gè)或至少10個(gè)(連續(xù)或鄰接的)氨基酸。本發(fā)明的多肽可以具有可以包括1至12個(gè)氨基酸置換的M酸序列(即，SEQIDNO.:91)。例如，氨基酸置換可以為1至10個(gè)氨基酸置換，或1至5個(gè)氨基酸置換。根據(jù)本發(fā)明，氨基酸置換可以是非保守氨基酸置換或保守M酸置換。例如，當(dāng)本發(fā)明的多肽包括與SEQIDNO.:1的^J^酸完全相同的M酸和不同的(非相同的)其他氨基酸時(shí)，不同的那些可以是保守氨基酸置換?？梢酝ㄟ^(guò)查看相應(yīng)位置來(lái)進(jìn)行相同和不同氨基酸的比較。可以具有至少35%同一性的SEQIDNO.:1類似物的實(shí)例包括，例如，包括(由)SEQIDNO.:91中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約36.8%同一性，即，SEQIDNO.:91的19個(gè)^J^酸中有7個(gè)^J^酸與SEQIDN0.:1的相同)，包括(由)SEQIDNO.:98中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約68.4%同一性，即，19個(gè)M酸中有13個(gè)M酸與SEQIDNO.:l的相同)，包括(由)SEQIDNO.:67中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個(gè)tt酸中有14個(gè)M酸與SEQIDN0.:l的相同)，包括(由)SEQIDNO.:76中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個(gè)氨基酸中有14個(gè)氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)和包括(由)SEQIDNO.:5中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約79%同一性，即，19個(gè)氬基酸中有15個(gè)氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)?？梢跃哂兄辽?0%同一性的SEQIDN0.:1類似物的實(shí)例包括，例如，包括(由)SEQIDNO,:98中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約68.4%同一性，即，19個(gè)氨基酸中的13個(gè)氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)，包括(由)SEQIDNO.:67中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個(gè)M酸中的14個(gè)M酸與SEQIDNO.:1的相同)，包括(由)SEQIDNO.:76中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約73.7%同一性，即，19個(gè)氨基酸中的14個(gè)氨基酸與SEQIDN0.:1的相同)和包括(由)SEQIDN0.:5中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽(約79°/。同一性，即，19個(gè)M酸中的15個(gè)M酸與SEQIDNO.:1的相同)?？梢跃哂兄辽?0%同一性的SEQIDNO.:1類似物的實(shí)例包括，例如，包括(由)SEQIDNO.:67(約73.7%同一性，即，19個(gè)M酸中的14個(gè)氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)、SEQIDNO.:76(約73.7%同一性,即，19個(gè)氨基酸中的14個(gè)氨基酸與SEQIDNO.:1的相同)和SEQIDNO.:5(約79%同一性，即，19個(gè)M酸中的15個(gè)Jl^酸與SEQIDNO.:1的相同)中限定的M酸序列(構(gòu)成)的多肽。根據(jù)本發(fā)明，載體可以更具體地選自5、67、76、91和97號(hào)肽(即，SEQIDNO.:5、67、76、91和97(血管肽-2))?？梢?吏用載體，例如，用于轉(zhuǎn)運(yùn)連于其上的物質(zhì)穿ii血腦屏障。根據(jù)本發(fā)明，所述栽體物質(zhì)連接后能夠穿過(guò)血腦屏障并因此能夠?qū)⒃撐镔|(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)穿itj6L腦屏障。根據(jù)本發(fā)明，多肽可以是分離的形式或M本上純化的形式。更具體地，本發(fā)明提供了用于轉(zhuǎn)運(yùn)連于其上的物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障的載體，其中所述載體與物質(zhì)連接后能夠穿過(guò)血腦屏障并因此將該物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障。該栽體可以包括至少一種本發(fā)明的多肽(只要當(dāng)所述多肽或栽體由SEQIDNO.:67構(gòu)成時(shí)，所述多肽^L^團(tuán)所修飾，例如，被,化)。例如，該載體可以選自一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子。通過(guò)載體實(shí)現(xiàn)的轉(zhuǎn)運(yùn)活性不影響血腦屏障完整性。物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)可以導(dǎo)致，例如，該物質(zhì)遞送至個(gè)體的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)。在此應(yīng)該理解可以化學(xué)合成(例如，固相合成)或可以通過(guò)DNA重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的多肽。編碼特定氨基酸的密碼子是本領(lǐng)域^^的并在，例如，Biochemistry(第三版；1988，LubertStryer,StanfordUniversity,W.H.FreemanandCompany,New-York)中論述。因此在此包括編碼本發(fā)明載體的核苷酸序列。更具體地，本發(fā)明包括編碼選自SEQIDNO.:1至97編碼牛胰蛋白酶抑制劑類似物的示例核苷酸序列示于SEQIDN0.:106中并可以在GeneBank中根據(jù)登錄號(hào)X04666找到。該序列編碼在位置16上具有替代見(jiàn)于SEQIDNO.:98中的纈氨酸的賴氨酸的牛胰蛋白酶抑制劑類似物(參照SEQIDNO.:106編碼的M酸序列)?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的方法引入SEQIDNO.:106的核苷酸序列中的突變以改變?cè)谖恢?6上具有纈氨酸的SEQIDNO.:98的肽?？梢约袹l本領(lǐng)域已知的技術(shù)將另外的突變引入該核苷酸序列中以編碼本發(fā)明的類似物?？梢酝ㄟ^(guò)酶消化或聚合^t^應(yīng)等從該核香^列獲得片段。另夕卜，可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)化學(xué)合成所需的核苷酸序列。另一方面中，本發(fā)明涉及綴合物，其可以包括選自本發(fā)明多肽中的任一種的載體，和選自例如藥物(例如，小分子藥物，例如，抗生素)、藥品、可檢測(cè)標(biāo)記、蛋白質(zhì)(例如，酶)、基于蛋白質(zhì)的化合物(例如，包括一條多肽鏈的蛋白質(zhì)復(fù)合物)和多肽(肽)的物質(zhì)。更具體地，該物質(zhì)可以是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)水平上具有活性的分子。該物質(zhì)可以是用于治療或檢測(cè)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的任何物質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，是綴合物一部分的栽體可以選自，例如-10至54個(gè)(例如，19-50個(gè))M酸長(zhǎng)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包4舌SEQIDNO.:1，-由SEQIDN0.:1構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-(例如，約19至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)的)SEQIDNO.:1的生物活性片段，只要當(dāng)所述類似物由SEQIDNO.:67構(gòu)成時(shí)，所述類似物是酰胺化的，-10至18個(gè)M酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-約10至18個(gè)氣基酸的SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。根據(jù)本發(fā)明，該物質(zhì)可以具有約160，000道爾頓的最大分子量。此外，根據(jù)本發(fā)明，可以通過(guò)受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)Jte作用或吸附介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)運(yùn)活性。該物質(zhì)可以是能夠通過(guò)這樣的機(jī)制轉(zhuǎn)運(yùn)的物質(zhì)。此外，根據(jù)本發(fā)明，綴合物可以是融合蛋白的形式，其可以具有基本上由本發(fā)明的載體構(gòu)成的笫一個(gè)部分和基本上由蛋白質(zhì)或基于蛋白質(zhì)的物質(zhì)構(gòu)成的第二個(gè)部分?？梢酝ㄟ^(guò)載體和/或綴合物治療或檢測(cè)的示例神經(jīng)系統(tǒng)疾病是選自例如腦瘤、腦轉(zhuǎn)移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風(fēng)和血腦屏障相關(guān)機(jī)能失常(例如，肥胖)的疾病。根據(jù)本發(fā)明，血腦屏障相關(guān)的機(jī)能失常A^巴胖。此外，根據(jù)本發(fā)明，可以與本發(fā)明載體綴合的物質(zhì)可以是瘦蛋白。包括瘦蛋白和栽體的綴合物可以用于，例如，月巴胖的治療中。根據(jù)本發(fā)明，可檢測(cè)標(biāo)記可以是放射性成像劑?？梢耘c本發(fā)明的載體綴合的并在此包括的標(biāo)記的實(shí)例包括，例如并且不受限制，同位素、熒光標(biāo)記(例如，若丹明)、受體分子(例如，生物素)等?？蓹z測(cè)標(biāo)記的其他實(shí)例包括，例如，綠色熒光蛋白、生物素、組胺酸標(biāo)記蛋白和P-半乳糖苷酶。物的實(shí)例包括，且不受限制，抗體、抗體片段(例如，抗體結(jié)合片段如Fv片段、F(ab)2、F(ab)2，和Fab等)、基于肽或蛋白質(zhì)的藥物(例如，正向藥理學(xué)調(diào)節(jié)劑(激動(dòng)劑)或藥理學(xué)抑制劑(拮抗劑))等。在此包括的物質(zhì)的其他實(shí)例包括細(xì)胞毒素(例如，單曱基auristatinE(MMAE)、選自細(xì)菌內(nèi)毒素和外毒素的毒素；白喉毒素、肉^4素、破傷風(fēng)毒素、百日咳毒素、葡萄球菌腸毒素、中毒性休克綜合征毒素TSST-1、腺苷酸環(huán)化酶毒素、Shiga毒素、霍亂腸毒素等)和抗血管生成化合物(內(nèi)皮抑制素、兒茶素、營(yíng)養(yǎng)藥、趨化因子IP-IO、基質(zhì)金屬蛋白酶的抑制劑(MMPI)、anastellin、玻連蛋白、抗凝血酶、酪氨酸激酶抑制劑、VEGF抑制劑、針對(duì)受體的抗體、赫賽汀、阿瓦斯丁(avastin)和panitumumab等)。此外，根據(jù)本發(fā)明，物質(zhì)可以是小分子藥物，如抗癌藥物(例如，用于治療腦瘤)。本發(fā)明包括的抗癌藥物可以包括，例如，具有允許其與本發(fā)明栽體綴合的基團(tuán)的藥物?？拱┧幬锏膶?shí)例包括，例如，且不受限制，可以選自紫杉醇(紅豆杉醇)、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿、依托泊苷、阿霉素、環(huán)磷酰胺、泰索帝、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥和任意組合的藥物。更具體地，本發(fā)明的綴合物可以包括式R-L-M或其藥物學(xué)上可接受的鹽，其中R是一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子(例如，牛胰蛋白酶抑制劑、牛胰蛋白酶抑制劑片段、血管肽-1、血管肽-2、類似物、衍生物或片段)。例如，R可以是選自一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子的載體，與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子與L-M連接后能夠穿過(guò)血腦屏障，并因此轉(zhuǎn)運(yùn)M穿過(guò)血腦屏障。L可以是連接物或鍵(化學(xué)鍵)。M可以是選自藥物(例如，小分子藥物，例如，抗生素)、藥品、(可檢測(cè))標(biāo)記、蛋白質(zhì)或基于蛋白質(zhì)的化合物(例如，抗體、抗體片段)、抗生素、抗癌藥、抗血管生成化合物和多肽或任何在中樞神經(jīng)系統(tǒng)水平上具有活性的分子的物質(zhì)。在此應(yīng)當(dāng)理解沒(méi)有打算將式R-L-M局限于特定的次序或特定的比率。如在此例示的，可以發(fā)現(xiàn)M超過(guò)R幾個(gè)比率。例如，式R-L-M的綴合物或其藥物學(xué)上可接受鹽，可以用于轉(zhuǎn)運(yùn)M穿過(guò)血腦屏障，其中R可以是，例如，選自如在此所述的5、67、76、91和97號(hào)肽的載體。該載體在與L-M連接后能夠穿過(guò)血腦屏障并可以轉(zhuǎn)運(yùn)M穿iijk腦屏障。根據(jù)本發(fā)明，M可以是用于治療或診斷神經(jīng)系統(tǒng)疾病的物質(zhì)。在此應(yīng)當(dāng)理解當(dāng)超過(guò)一個(gè)的載體綴合位點(diǎn)可用或存在時(shí)，可以將超過(guò)一個(gè)的藥物或藥物分子綴合于本發(fā)明的載體上。因此，綴合物可以包括一個(gè)或多個(gè)藥物分子。綴合物自身可以是活性的，即，即使與載體相連時(shí)藥物仍可以是活性的。此外，根據(jù)本發(fā)明，化合物可以從載體中釋放出來(lái)或不釋放出來(lái)，即，通常在轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障之后。因此，化合物可以是能從綴合物中(或從載體中)^放出來(lái)的并且此后可以變成活性的。更具體地，物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)穿itii腦屏障后可以從載體中釋放出來(lái)。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，提供了用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿itA腦屏障的綴合物，該綴合物可以包括(a)栽體；和(b)連于栽體上的物質(zhì)，其中該綴合物能夠穿itin腦屏障并因此轉(zhuǎn)運(yùn)該物質(zhì)穿ii血腦屏障。另一方面中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的載體或綴合物用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)有此需要的哺乳動(dòng)物的血腦屏障的用途。再一方面中，本發(fā)明涉及一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子用于轉(zhuǎn)運(yùn)與其連接的化合物穿過(guò)患者的血腦屏障的用途。另一方面中，本發(fā)明涉4此所述的栽體或綴合物用于診斷神經(jīng)系統(tǒng)疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的用途。例如，可以將載體或綴合物用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的體內(nèi)檢測(cè)。載體可以選自，例如，(生物活性)的組畫牛胰蛋白酶抑制劑(SEQIDNO.:98)，-可以包括SEQIDN0.:1中限定的M酸序列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-由SEQIDNO.:l構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-SEQIDNO.:1的生物活性類似物，和；-SEQIDNO.:1的生物活性片段或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。更具體地，載體可以選自，例如，(生物活性)組-可以包括SEQIDNO.:1中限定的M,列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，—由SEQIDNO.:1構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，—SEQIDNO.:1的生物活性類似物，和；-SEQIDNO.:1的生物活性片段或SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。才艮據(jù)本發(fā)明，當(dāng)該類似物由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述類似物是酰胺化的。更具體地，載體可以選自，例如-10至54個(gè)(例如，19-50個(gè))M酸長(zhǎng)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1，-由SEQIDNO.:l構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-(例如，約19至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)的)SEQIDNO.:1的生物活性類似物，只要當(dāng)所述類似物由SEQIDNO.:67構(gòu)成時(shí)，所述類似物是酰胺化的，-10至18個(gè)M酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段，和；-約10至18個(gè)氨基酸的SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段。另一方面中，本發(fā)明涉及一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子在制造藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明，提供了一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子在制造用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病或用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙的藥物中的用途。再一方面中，本發(fā)明涉及在此所述的載體或綴合物在制造用于治療腦病(腦相關(guān)疾病)或神經(jīng)系統(tǒng)疾病，用于診斷腦病或神經(jīng)系統(tǒng)疾病或用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿itjk腦屏障的藥物中的用途。另一方面中，本發(fā)明涉》4^發(fā)明的載體或綴合物用于治療具有例如神經(jīng)t…、"二，、一，、、…根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明所包括的神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括，例如并且不受限制，腦瘤、腦轉(zhuǎn)移瘤、神經(jīng)分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風(fēng)和血腦屏障相關(guān)的^L能失常。另一方面中，本發(fā)明涉及轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)哺乳動(dòng)物(人、動(dòng)物)的血腦屏障的方法，其可以包括將化合物給藥于哺乳動(dòng)物的步驟，該化合物包括與一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子連接的物質(zhì)。再一方面中，本發(fā)明提供了治療患者的神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，包括將藥物給藥于患者，該藥物包括一類與牛力夷蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子和適于治療該疾病的化合物，該化合物與一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子連接。另一方面中，提供了治療患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙的方法，包括將藥物給藥于患者，該藥物包括一類與牛胰蛋白酶抑制劑相關(guān)的分子和適于治療該疾病的化合物，該化合物與牛胰蛋白酶抑制劑連接。再一方面中，提供了轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障的方法，其包括將本發(fā)明的藥物組合物給藥于個(gè)體的步驟。另一方面中，本發(fā)明還涉及治療有此需要的哺乳動(dòng)物(例如，患者)(例如，具有神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患者)的方法。該方法可以包括將本發(fā)明的載體、綴合物和/或藥物組合物給藥于哺乳動(dòng)物。本發(fā)明另外涉及診斷有此需要的哺乳動(dòng)物(例如，患者)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法(即診斷方法)。該方法可以包括將本發(fā)明的栽體、綴合物和/或藥物組合物給藥于哺乳動(dòng)物(人個(gè)體、患者、動(dòng)物)。根據(jù)本發(fā)明，可以動(dòng)脈內(nèi)、鼻內(nèi)、皿內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、經(jīng)皮或口服來(lái)進(jìn)行給藥。根據(jù)本發(fā)明，可以將治療有效量的藥物組合物給藥于哺乳動(dòng)物。需要的哺乳動(dòng)物(需要的個(gè)體)可以是，例如，具有神經(jīng)系統(tǒng)疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腦癌、腦轉(zhuǎn)移瘤等或處于具有神經(jīng)系統(tǒng)疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、腦癌、腦轉(zhuǎn)移瘤等風(fēng)險(xiǎn)中的哺乳動(dòng)物。另一方面中，本發(fā)明涉及藥物組合物，其可以包括，例如-本發(fā)明的載體(其可以選自在此所述的任一種多肽)或綴合物；和-藥物學(xué)上可接受的載體，例如，藥物學(xué)上可接受的賦形劑。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物可以用于例如治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物可以用于例如診斷神經(jīng)系統(tǒng)疾病。此外，根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物可以用于例如轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障。此外，根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物可以用于例如將物質(zhì)遞送至個(gè)體的CNS。此外，根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物可以用于例如治療有此需要的哺乳動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物可以用于將物質(zhì)遞送至個(gè)體的CNS。在此應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明包括載體(多肽)或綴合物的藥物學(xué)上可接受的鹽。組合物(藥物組合物)因而可以包括如在此所限定的制造的藥物以及藥物學(xué)上可接受的賦形劑。對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，以下對(duì)下列術(shù)語(yǔ)進(jìn)行定義。術(shù)語(yǔ)"載體"或"媒介物"意指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)化合物的化合物或分子如多肽。例如，轉(zhuǎn)運(yùn)可以穿過(guò)血腦屏障而發(fā)生。可以將載體連接(共價(jià)或非共價(jià))或綴合到另一種化合物或物質(zhì)上并因此能夠轉(zhuǎn)運(yùn)其他化合物或物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障。例如，載體可以與腦內(nèi)皮細(xì)胞上存在的受體結(jié)合并因此通過(guò)轉(zhuǎn)月te作用被轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障。栽體可以是為此可以獲得高水平的經(jīng)內(nèi)皮轉(zhuǎn)運(yùn)的分子。載體可以是，但不限于，蛋白質(zhì)、肽或肽才莫擬物并可以是天然存在的或通過(guò)化學(xué)合成或遺傳重組技術(shù)(遺傳工程)來(lái)生產(chǎn)。術(shù)語(yǔ)"綴合物"意指載體和另一種化合物或物質(zhì)的組合。綴合物性質(zhì)上可以是化學(xué)的，如通過(guò)連接物，或本質(zhì)上是遺傳的，例如通過(guò)遺傳重組技術(shù)，(例如，綠色熒光蛋白、P-半乳糖苷酶、組胺酸標(biāo)記等)的融合蛋白中。表述"小分子藥物"意指具有1000g/mol或更低分子量的藥物。術(shù)語(yǔ)"治療"意指獲得所需的藥理性和/或生理性效果，例如，癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制、癌細(xì)胞的死亡或神經(jīng)系統(tǒng)疾病或病癥的緩解。就完全或部，防疾病或其癥狀而言，該效果可以是預(yù)防性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或由疾病引起的副作用而言，該效果可以是治療性的。如在此所用的"治療"涵蓋哺乳動(dòng)物(特別;l:人)疾病的任何治療，并包括(a)預(yù)防可以易患該疾病M沒(méi)有診斷為患有該疾病的個(gè)體中發(fā)生的疾病或病癥(例如，預(yù)防癌癥)的發(fā)生；(b)抑制疾病，(例如，阻止其M);或(c)緩解疾病(例如，減輕與疾病相關(guān)的癥狀)。如在此所用的"治療"涵蓋藥劑或化合物對(duì)個(gè)體的任何給藥來(lái)治療、治愈、緩解、改善、減輕或抑制該個(gè)體的病癥，包括，并且不受限制，將載體-物質(zhì)綴合物給藥于個(gè)體。術(shù)語(yǔ)"癌癥"意指任何細(xì)胞惡性腫瘤，其獨(dú)特的性狀是失去正?？刂疲鋵?dǎo)致無(wú)節(jié)制生長(zhǎng)、缺乏分化和入侵局部組織和轉(zhuǎn)移的能力。癌癥可以在任何器官的任何組織中t艮。更具體地，癌癥包括但不限于，腦癌。術(shù)語(yǔ)"給藥"意指遞送方式，包括但不限于，動(dòng)脈內(nèi)、鼻內(nèi)、>內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、經(jīng)皮或口服?？梢詫⑷談┝糠殖梢粋€(gè)、兩個(gè)或多個(gè)適合于在整個(gè)時(shí)間段內(nèi)給藥一次、兩次或多次形式的劑量。術(shù)語(yǔ)"治療有效"或"有效量"意指足以基本上改善一些與疾病或醫(yī)學(xué)病癥相關(guān)癥狀的化合物的量。例如，在癌癥或精神病癥或神經(jīng)系統(tǒng)或CNS疾病的治療中，減輕、預(yù)防、延遲、抑制或阻止疾病或病癥的任何癥狀的物質(zhì)或化合物將是在治療上有效的。治療有效量的物質(zhì)或化合物不需要治愈疾病或病癥，但將提供疾病或病癥的治療，使得該疾病或病癥的發(fā)作得到延遲、阻礙或預(yù)防，或該疾病或病癥的癥狀得到緩解，或該疾病或病癥的期P艮得到改變，或例如，降低疾病的嚴(yán)重程度或加速個(gè)體的恢復(fù)。本發(fā)明的載體和綴合物可以與常規(guī)治療方法和/或療法聯(lián)合使用或可以與常規(guī)治療方法和/或療法分開(kāi)使用。當(dāng)本發(fā)明的綴合物與使用其它物質(zhì)的療法聯(lián)合給藥時(shí)，可以將它們按次序或同時(shí)給藥于個(gè)體。另夕卜，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以由與藥物學(xué)上可接受賦形劑結(jié)合的本發(fā)明的栽體-物質(zhì)綴合物，如在此所述的，和本領(lǐng)域已知的另一種治療劑或預(yù)防劑的組合構(gòu)成。藥物學(xué)上可接受的酸加成鹽可以通過(guò)本領(lǐng)域已知和常用的方法來(lái)制備并包括于本發(fā)明中。本發(fā)明的生物活性多肽包括功能衍生物。術(shù)語(yǔ)"功能衍生物"意指本發(fā)明的載體或物質(zhì)或綴合物及其鹽的"化學(xué)衍生物"、"片段"或"變體"生物活性序列或部分。載體功能衍生物能夠連接或綴合到另一種化合物或物質(zhì)上并穿iij6L腦屏障且因此能夠轉(zhuǎn)運(yùn)另一種化合物或物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障。術(shù)語(yǔ)"化學(xué)衍生物"意指本發(fā)明的載體、物質(zhì)或綴合物，其含有不是該栽體、物質(zhì)或載體-物質(zhì)綴合物的一部分的附加化學(xué)部分。共價(jià)修飾包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。可以使用本領(lǐng)域7>^口的方法，通過(guò)直掩化學(xué)合成來(lái)方便地制^f匕學(xué)衍生物。例如，可以將這樣的修飾引入蛋白質(zhì)或肽載體、物質(zhì)或栽體-物質(zhì)綴合物中，其通過(guò)將靶向氨基酸殘基與能夠與選定的側(cè)鏈或末端殘基反應(yīng)的有機(jī)衍生劑反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。載體化學(xué)衍生物能夠穿itjk腦屏障并連接或綴合到另一種化合物或物質(zhì)上且因此能夠轉(zhuǎn)運(yùn)另一種化合物或物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，獲得非常高水平的經(jīng)內(nèi)皮轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障，而對(duì)血腦屏障的完整性沒(méi)有任何影響。術(shù)語(yǔ)"物質(zhì)"無(wú)差別地意指抗體、藥物(如醫(yī)療藥物)或化合物如治療劑或化合物、標(biāo)記、示蹤劑或成<象化合物。術(shù)語(yǔ)"治療劑"或"藥劑"意指用于治療疾病的癥狀、身體或精神病癥、損傷或感染的藥劑和/或藥品和/或藥物，并包括但不限于，抗生素、抗癌劑、抗血管生成劑和在中樞神經(jīng)系統(tǒng)水平上具有活性的分子。例如，可以靜脈內(nèi)給藥紫杉醇來(lái)治療腦癌。術(shù)語(yǔ)"病癥"意指任何引起個(gè)體疼痛、不適、惡心、疾病或傷殘(精神或身體)的情況，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病、損傷、感染或慢性或急性疼痛。可以用本發(fā)明治療的神經(jīng)系統(tǒng)疾病包括，但不限于，腦瘤、腦轉(zhuǎn)移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病和中風(fēng)。如在此所用的，"藥物組合物，，意指治療有效量的物質(zhì)以及藥物學(xué)上可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、輔助劑和/或載體。如在此所用的"治療有效量"指的是對(duì)于特定的病癥和給藥方案提供治療效果的量。這容物(例如，Tris-HCl、醋酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強(qiáng)度的稀釋劑、添加劑如白蛋白或明膠來(lái)防止被表面吸收、去污劑(例如，吐溫20、吐溫80、PluronicF68、膽汁酸鹽)、增溶劑(例如，甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(例如，抗壞血酸、偏亞疏酸氫鈉)、防腐劑(例如，硫柳汞、苯曱醇、對(duì)羥基苯甲酸酯)、增量物質(zhì)或張力調(diào)節(jié)劑(例如，乳糖、甘露醇)、聚合物如聚乙二醇與蛋白質(zhì)的共價(jià)連接，與金屬離子配合或?qū)⒃撐镔|(zhì)摻加到聚合物如聚乳酸、聚乙醇酸、7jc凝膠等的顆粒制劑之中或之上，或摻加到脂質(zhì)體、微乳液、膠束、單層或多層脂質(zhì)體、紅細(xì)胞影或原生質(zhì)球上。這樣的組合物將影響物理狀態(tài)、溶解度、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放率和體內(nèi)清除率。受控或持續(xù)釋放組合物包括親脂性儲(chǔ)庫(kù)(例如，脂肪酸、蠟、油)中的制劑。本發(fā)明還包括用聚合物(例如，泊洛沙姆或poloxamine)包被的顆粒組合物。本發(fā)明組合物的其它實(shí)施方案摻入顆粒形式的保護(hù)性涂層、蛋白酶抑制劑或滲透增強(qiáng)劑，用于各種給藥途徑，包括非腸道、肺、鼻、口、陰道、直腸途徑。一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物非腸道、癌附近(paracancerally)、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、tt內(nèi)、心室內(nèi)、頭顱內(nèi)和腫瘤內(nèi)給藥。此外，如在此所用的"藥物可接受栽體"或"藥物載體"是本領(lǐng)域已知的并包括，但不限于，0.01-0.1M或0.05M磷酸鹽緩沖液或0.8%鹽水。此外，這樣的藥物學(xué)上可接受栽體可以是水性或非水性溶液、懸浮液和乳液。非水性溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油和可注射的有機(jī)酯類如油酸乙酯。水性載體包括水、醇"&溶液、乳液或懸浮液，包4舌鹽水和緩沖媒介物。非腸道媒介物包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸化林格氏或固定油。靜脈內(nèi)媒介物包括流體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑，如基于林格氏葡萄糖的那些等。還可以存在防腐劑和其它添加劑，如，例如，抗微生物劑、抗氧化劑、整理劑(collatingagents)、惰性氣體等。"類似物"在此應(yīng)^皮理解為源自原始序列或一部分原始序列的多肽并且其可以包括一個(gè)或多個(gè)》務(wù)飾；例如，一個(gè)或多個(gè)M酸序列中的修飾(例如，氨基酸添加、缺失、插入、置換等)，一個(gè)或多個(gè)氨基酸的主鏈或側(cè)鏈中的修飾，或?qū)⒒鶊F(tuán)或另一個(gè)分子添加至一個(gè)或多個(gè)氨基酸(側(cè)鏈或主鏈)。因此，"類似物，，在此應(yīng)被理解為具有與在此所述的多斜目似的生物活性和化學(xué)結(jié)構(gòu)(或其結(jié)構(gòu)的一部分)的分子。類似物包括在多肽的一個(gè)或兩個(gè)末端上和/或在多肽M酸序列的內(nèi)部可以具有，例如，一個(gè)或多個(gè)M酸插入的多肽。"類似物"可以具有與原始序列或一部分原始序列的序列相似性和/或序列同一性并且還可以具有如在此所討論的其結(jié)構(gòu)4務(wù)飾。兩個(gè)序列之間相似性的程g基于同一性(相同的氨基酸)和保守性置換的百分比。例如，可以在2、3、4、5、10、19、20個(gè)氨基酸或更多(和其之間的任何數(shù)量)的區(qū)域內(nèi)比較相似性或同一性。同一性在此可以包括與原始糾目同的和與原始多^bN比較時(shí)可以占據(jù)相同或相似位置的M酸。例如，具有與原始多肽50%同一性的類似物可以包括例如，包含50%原始多肽的氨基酸序列和具有其它百分比的相似性的類似物。在此應(yīng)當(dāng)理解在與原始肽的M酸相同或相似的類似物的M酸之間可以發(fā)現(xiàn)缺口。該缺口可以沒(méi)有氨基酸、包括一個(gè)或多個(gè)與原始肽不相同或相似的氨基酸。在此包括本發(fā)明載體(多肽)的生物活性類似物。例如,可以使用WisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.0中的算法GAP、BESTFIT或FASTA確定同一性百分比，使用默認(rèn)缺口重量。例如，類似物可以包含或具有與原始M酸序列的50%同一性并且一部分占據(jù)相似位置的剩余的氨基酸可以是例如非保守性或保守性氨基酸置換。因此，本發(fā)明的類似物包括與原始序列或一部分原始序列具有至少90%序列相似性的那些類似物。"類似物"可以具有，例如，至少35%、50%、60%、70%、80%、90%或95%(96°/。、97%、98%、99%和100%)與原始序列或一部分原始序列的序列相似性。此外，"類似物"還可以具有，例如，至少35%、50%、60%、70%、亂90線95%(96%、97%、98%、99°/。和100%)與原始序列的序列相似性并且在氨基酸主鏈或側(cè)鏈中具有一個(gè)或多個(gè)置換的組合或添加基團(tuán)或另一個(gè)分子等。用來(lái)與其它的M酸相似的示例性M酸(保守性氨基酸)是本領(lǐng)域已知的并包括，例如，表l中所示的那些。本發(fā)明的類似物還包括與原始序列或一部分原始序列可以具有至少35%、50%、60%、70%、80%、90%或95%(96%、97%、98%、99%和100%)序列同一性的那些類似物。此外，"類似物"可以具有，例如，35%、50%、60%、70%、80%、90%或95%氨基酸的主鏈或側(cè)鏈中具有一個(gè)或多個(gè)置換的組合或添加基團(tuán)或另一個(gè)分子等與原始序列的(序列)同一性(即，與原始肽至少35°/。、50%、60%、70%、80%、90%或95%相同的類似物)并且在氨基酸的主鏈或側(cè)鏈中具有一個(gè)或多個(gè)置換的組合或添加基團(tuán)或另一個(gè)分子等。"片段"在此應(yīng)被理解為源自原始或親本序列的一部分或源自所述親本序列的類似物的多肽。片段包括具有一個(gè)或多個(gè)tt酸截?cái)嗟亩嚯?，其中所述截?cái)嗫梢栽醋园被?N-末端)、氛基端(C-末端)，或源自蛋白質(zhì)的內(nèi)部。片段可以包含與原始序列的相應(yīng)部分相同的序列。本發(fā)明包括在此所述的載體(多肽)的生物活性片段。因此，本發(fā)明包括在此所述載體的原始多肽、片段(修飾或未<|^的)、類似物(#^或未修飾的)、衍生物(修飾或未修飾的)、同系物H請(qǐng)或未^f"飾的)形式的生物活性多肽。因此，在此包括與原始多斜目比較具有不顯著破壞所需生物活性的修飾的任何多肽。本領(lǐng)域7么^口，可以對(duì)本發(fā)明的多肽進(jìn)行各種修飾而不會(huì)有害地影響它們的生物活性。另一方面，這些修飾可以保持或提高原始多肽的生物活性或可以最佳化本發(fā)明多肽的一個(gè)或多個(gè)在某些情況下可能是需要的或理想的特性(例如，穩(wěn)定性、生物利用率等)。本發(fā)明的多肽包括，例如，M,列的那些多肽。#^可以發(fā)生在多肽的^(可位置，包括多肽主鏈、氨基酸側(cè)鏈和M-或g-末端?？梢岳斫庠谥付ǘ嚯闹械膸讉€(gè)位點(diǎn)上可以存在相同或不同程度的相同類型的〗奮飾。此外，指定的多肽可以含有許多類型的修飾。多肽作為泛素化的結(jié)果可以是分支的，并且它們可以是環(huán)狀的，具有或不具有分支。環(huán)狀、分支和分支環(huán)狀多肽可以由翻譯后自然過(guò)程產(chǎn)生或可以由合成方法制得。修飾包括，例如，并且不受限制，聚乙二醇化、乙?；?、?；?、乙酰亞M甲基(Acm)基團(tuán)的添加、ADP-核糖基化、M化、化、生物素化、曱氨酖化、羧乙基化、酯化、共價(jià)連接黃素、共價(jià)連接血紅素部分、共價(jià)連接核苷酸或核苷酸衍生物、共價(jià)連接藥物、共價(jià)連接標(biāo)記(例如，熒光性的、放射活性的，等)、共價(jià)連接脂質(zhì)或脂質(zhì)衍生物、共價(jià)連接磷脂酰肌醇、交聯(lián)、環(huán)化、二硫鍵形成、脫曱基、共價(jià)交聯(lián)的形成、胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲?；?、Y-^&化、糖基化、GPI錨形成、羥基化、石^(匕、甲基化、肉豆蔻?；?、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、異戊二烯基化、外消旋化、硒酰化、石克酸鹽化、轉(zhuǎn)移-RNA介導(dǎo)的氨基酸添加至蛋白質(zhì)如精氨酰化和泛素化等。在此應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明包括對(duì)在此所述的多肽多于一個(gè)的修飾達(dá)到生物活性與原始(親本)多W目似的程度。如上所述，肽修飾可以包括，例如，多肽序列中的M酸插入(即，添加)、缺失和置換(即，替換)，保守性或非保守性的(例如，D-M酸、脫氨基酸)，其中這樣的改變基本上沒(méi)有改變?cè)摱嚯牡恼w生物活性。置換的實(shí)例可以是保守性置換(即，其中一個(gè)殘基由另一個(gè)相同大類或組的歹i&替換)或當(dāng)需要時(shí)，是非保守性置換(即，其中一個(gè)g由另一種類型的M酸替換)。此外，非天然存在的M酸可以替代天然存在的M酸(即，非天然存在的保守性氨基酸置換或非天然存在的非保守性氨基酸置換)。如所理解的，天然存在的^酸可以被細(xì)分類為酸性、堿性、中性和極性，或中性和非極性。此外，編碼tt酸中有三個(gè)是芳香族的。不同于本發(fā)明的確定多肽的編碼多肽含有氨基酸的置換密碼子可能是有用的，其來(lái)自與所替代的M酸相同的類型或組。因此，在某些情況下，堿性氨基酸Lys、Arg和His是可互換的；酸性氨基酸Asp和Glu是可互換的；中性極性M酸Ser、Thr、Cys、Gln和Asn是可互換的；非極性脂族氨基酸Gly、Ala、Val、Ile和Leu是可互換的，但由于大小Gly和Ala的更密切相關(guān)而Val、Ile和Leu彼此更密切相關(guān)，且芳香族氨基酸Phe、Trp和Tyr是可互換的。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步注意如果多肽是合成的，還可以用不是由DNA天然編碼的氨基酸(非天然存在的或非天然的氨基酸)進(jìn)行置換。非天然存在的氬基酸在此應(yīng)被理解為不是在哺乳動(dòng)物中自然產(chǎn)生的或發(fā)現(xiàn)的氨基酸。非天然存在的氨基酸包括D-氛基酸、具有連接到半皿酸的硫原子上的乙酰氨基甲基的氨基酸、聚乙二醇化的氨基酸等。因此限定的多肽序列中包含非天然存在的M酸將產(chǎn)生原始多肽的衍生物。非天然存在的氨基酸(殘基)還包括式NH2(CH2)nCOOH的co氨基酸，其中n是2-6，中性非極性氨基酸，如肌氨酸、叔丁基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、N-甲基異亮氨酸、正亮氨酸等。苯基甘氨酸可以替代Trp、Tyr或Phe;M酸和甲硫氨酸亞砜是中性非極性的，半自^A酸性的，鳥(niǎo)氨酸是堿性的。脯氨酸可以被羥基脯氨酸置換并保留構(gòu)象賦予特性。本領(lǐng)域已知類似物可以通過(guò)置換誘變來(lái)產(chǎn)生并保持本發(fā)明多肽的生物活性。這些類似物使該蛋白質(zhì)分子中的至少一個(gè)M酸^&被除去并在其位置上插入不同的殘基。被確認(rèn)為"保守性置換"的置換實(shí)例顯示于表l中。如果這樣的置換導(dǎo)致不理想的改變，那么引入其他類型的置換，表l中稱為"示例性置換"，或關(guān)于氨基酸類別在此進(jìn)一步所述的，并篩選產(chǎn)物。有時(shí)，可能所關(guān)心的是通過(guò)氨基酸置換、插入或缺失來(lái)改變多肽的生物活性。例如，多肽的修飾可以導(dǎo)致多肽生物活性的增加，可以調(diào)節(jié)其毒性，可以導(dǎo)致生物利用率或穩(wěn)定性的改變，或可以調(diào)節(jié)其免疫活性或免疫特性。通過(guò)選擇置換來(lái)實(shí)現(xiàn)功能或免疫特性的實(shí)質(zhì)性修飾，這些置換對(duì)維持(a)置換區(qū)域內(nèi)多肽主鏈的結(jié)構(gòu)，例如，作為片層或螺旋構(gòu)象，(b)耙向位點(diǎn)上分子的電荷或疏水性，或(c)側(cè)鏈的大小的效果顯著不同。基于常見(jiàn)的側(cè)鏈特性將天然存在的殘基分成幾組(1)疏水性正亮氨酸、甲減氨酸(Met)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)、組氨酸(His)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe),(2)中性親水性半胱氨酸(Cys)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)(3)酸性/帶負(fù)電荷的天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)(4)堿性天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、組氨酸(His)、賴氨酸(Lys)、精氦酸(Arg)(5)影響鏈取向的殘基甘氨酸(Gly)、脯氨酸(Pro);(6)芳香族色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、組氨酸(His)(7)極性Ser、Thr、Asn、Gin(8)堿性帶正電荷的:Arg、Lys、His,和；(9)帶電荷的Asp、Glu、Arg、Lys、His非保守性置換需要將這些類別之一的一個(gè)成員換成另一個(gè)成員。保守性置換需要將這些組之一的一個(gè)成員換成這些組中的另一個(gè)成員。表1中列出了可替換的其他保守性氨基酸置換。表1氨基酸置換<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>生物活性類似物可以是，例如，原始序列中具有至少一個(gè)(即，非保守性或保守性)氨基酸置換的類似物。生物活性類似物還可以是例如，具有一個(gè)或多個(gè)M酸插入的類似物。其他示例性類似物包括，例如-具有式I:X「SEQIDNO.:l-X:的SEQIDNO.1類似物-具有式II:X:-血管肽-1-&的血管肽-l類似物和-具有式III:Xr~血管肽-2-&的血管肽-2類似物Xi和X;可以獨(dú)立地是0至約100個(gè)(例如，0至約30至50個(gè))酸的M酸序列。l和t可以源自牛胰蛋白酶抑制劑或牛胰蛋白酶抑制劑類源M酸序列)。式I、II或III的化合物還可以包含血管肽-1、血管肽-2或SEQIDNO.1的M酸序列內(nèi)的氨基酸置換、缺失或插入。然而，該類似物優(yōu)選是生物活性的，如通過(guò)在此所述的測(cè)定之一或通過(guò)任何相似或等價(jià)測(cè)定所確定的?？梢允褂迷诖怂龅臏y(cè)定或方法之一來(lái)鑒定生物活性多肽(例如，栽體)。例如，候選栽體可以通過(guò)常規(guī)肽合成生產(chǎn)，與在此所述的紅豆杉醇綴合并在在此所述的體內(nèi)模型中測(cè)試。例如，可以基于與沒(méi)有用綴合物治療的對(duì)照相比較提高已經(jīng)注射了腫瘤細(xì)胞并用綴合物治療的動(dòng)物的存活率的功效來(lái)鑒定生物活性載體。此外，可以基于原位腦灌注測(cè)定中其在實(shí)質(zhì)中的位置來(lái)鑒定生物活性載體。在此應(yīng)當(dāng)理解，如果對(duì)于本發(fā)明的特定特征(例如，溫度、濃度、時(shí)間等)提及"范圍"或"一組物質(zhì)"，則本發(fā)明涉及并在此明確地引入每個(gè)具體的成員和其中任何亞范圍或亞組的組合。因此，應(yīng)將任何指定的范圍或組理解為單獨(dú)提及某個(gè)范圍或組的每個(gè)成員以及其中所包括的每個(gè)可能的亞范圍或亞組的簡(jiǎn)化方式；并且對(duì)于其中的任何亞范圍或亞組同樣如此。因此，例如，-對(duì)于10至18個(gè)M酸的長(zhǎng)度，應(yīng)當(dāng)理解為在此具體引入每個(gè)個(gè)別的長(zhǎng)度，例如，18、17、15、10的長(zhǎng)度，和其之間的任何數(shù)目等；因此，除非特別指出，應(yīng)將在此提及的每個(gè)范圍理解為包括兩個(gè)端點(diǎn)。例如，5至10個(gè)氨基酸長(zhǎng)的表述應(yīng)被理解為包括5和10;-關(guān)于其他*如序列、長(zhǎng)度、濃度、元件等…同樣如此在此特別應(yīng)當(dāng)理解在此限定的序列、區(qū)域、部分各自包括所述的每個(gè)個(gè)別的序列、區(qū)域、部分以;^每個(gè)可能的亞序列、亞區(qū)域、亞部分，不管將這樣的亞序列、亞區(qū)域、亞部分定義為肯定包括特定的可能性、排除特定的可能性還是其組合；例如對(duì)于區(qū)域的排除性定義應(yīng)當(dāng)如下"只要所述多肽不短于4、5、6、7、8或9個(gè)氨基酸。另外否定性限制的另一實(shí)例如下包含SEQIDNO.:X的序列，排除SEQIDNO.Y的多肽；等。否定性限制的再一實(shí)例如下只要所述多肽不是(不包含或不由其構(gòu)成)SEQIDNO.:Z。附圖簡(jiǎn)述附圖中說(shuō)明了本發(fā)明的典型實(shí)施方案，其中圖l說(shuō)明了使用Tricine皿分析的實(shí)例；圖2說(shuō)明了本發(fā)明的載體或媒介物與紫杉醇連接的方法；圖3說(shuō)明了使用與牛胰蛋白酶抑制劑綴合的紫杉醇對(duì)Lewis大鼠的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤才莫型的治療效果；圖4說(shuō)明了使用與血管肽-1綴合的紫杉醇對(duì)棵鼠的成膠質(zhì)細(xì)胞瘤模型的治療效果；圖5說(shuō)明了使用交聯(lián)劑BS3使牛胰蛋白酶抑制劑與IgG綴合的方案；圖6說(shuō)明了使用交聯(lián)劑疏代-EMCS使牛胰蛋白酶抑制劑與IgG綴合的方案；圖7說(shuō)明了IgG-牛胰蛋白酶抑制劑綴合物的腦滲透；圖8說(shuō)明了紅豆杉醇-血管肽-2綴合物對(duì)^成膠質(zhì)細(xì)胞瘤小鼠(無(wú)胸腺、棵鼠)存活的治療效果；圖9說(shuō)明了本發(fā)明的典型多肽的結(jié)構(gòu)。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及可以作為將物質(zhì)、藥物或其他分子轉(zhuǎn)運(yùn)至腦和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的載體的新分子。自身不能或無(wú)法穿過(guò)血腦屏障的物質(zhì)、藥物或其他分子當(dāng)與載體連接或偶聯(lián)(綴合)時(shí)將被轉(zhuǎn)運(yùn)穿itj6L腦屏障。另夕卜，還可以觀察到自身能夠穿itjfe腦屏障的物質(zhì)當(dāng)與本發(fā)明的載體綴合時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)得到了提高。這樣的綴合物可以為組合物，如藥物組合物的形式，用于治療病癥或疾病。對(duì)作為栽體的候選分子的i殳計(jì)在國(guó)際公開(kāi)WO2004/060403中，發(fā)明人公開(kāi)了血管肽-l(SEQIDNO.:67)和牛胰蛋白酶抑制劑(SEQIDNO.:98)是有效的載體，用于轉(zhuǎn)運(yùn)所需的分子穿過(guò)血腦屏障。在此發(fā)明人證明了其他分子也可以用作載體，用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障。因此，將具有和牛胰蛋白酶抑制劑和血管肽-l相似結(jié)構(gòu)域的肽和血管肽-1的修飾形式(酖胺化的，67號(hào)肽)設(shè)想為潛在的載體。這些衍生的肽類似牛胰蛋白酶抑制劑和血管肽-l，但是包含不同的M酸插入并帶有不同的電荷。迄今，測(cè)試了表2中列出的96種肽以;Sjf列表中列出的其他肽作為栽體的可能性。在此應(yīng)當(dāng)理解以下的實(shí)驗(yàn)中，已經(jīng)基于與其他的及bN比較較高的活性選擇了肽。沒(méi)有選擇用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的那些肽決不是要放棄而是旨在將其視為非功能性的。這些肽顯示出顯著的活性并具有作為(生物活性)載體的用途并且也包括于本發(fā)明中。表2.來(lái)自與牛胰蛋白酶抑制劑和血管肽-1相似結(jié)構(gòu)域的具有不同電荷和氨基酸插入的96種肽的設(shè)計(jì)<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>使用體外模型的選擇將體外模型用于篩選測(cè)定并用于藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至腦的機(jī)制研究。由CELLIALTechnologies公司研發(fā)出該有效的血腦屏障體外模型。為了得到可重復(fù)的結(jié)果，使用體外模型來(lái)評(píng)價(jià)不同載體到達(dá)腦的能力。該模型由牛腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和大鼠M^細(xì)胞的共培養(yǎng)物構(gòu)成。它呈現(xiàn)出腦內(nèi)皮所特有的超結(jié)構(gòu)特征，包括緊密連接、缺乏穿孔、缺乏經(jīng)內(nèi)皮的通道、親水性分子的低滲透性和高電阻。此外，該模型顯示出多種測(cè)試分子的體外和體內(nèi)分析之間良好的相關(guān)系數(shù)。迄今，獲得的所有數(shù)據(jù)顯示出該BBB模型通過(guò)重現(xiàn)一些體內(nèi)存在的細(xì)胞環(huán)境的復(fù)雜性嚴(yán)格i4^莫擬了體內(nèi)狀況，同時(shí)保留了與組織培養(yǎng)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)。許多研究已經(jīng)證實(shí)了該細(xì)胞共培養(yǎng)物是最可重復(fù)的BBB體外模型之一。使用BBCEC和星形細(xì)胞的共培養(yǎng)物建立了BBB的體外模型。在細(xì)胞培R前，用大鼠^C^f、蛋白覆蓋在平板插入物(Millicel卜PC3.0"M;30-mm直徑)的上表面。然后將它們置于含有涂布于2mL共培養(yǎng)基中的濾器上表面的星形細(xì)胞和BBCEC的六孔微量平板中。將該BBCEC培養(yǎng)基一周更換三次。在這些條件下，7天后分化的BBCEC形成匯合單層。在達(dá)到匯合后5至7天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。測(cè)量蔗糖的滲透系數(shù)來(lái)證實(shí)內(nèi)皮滲透性。由新生大鼠的大腦皮層制備混合星形細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)物(DehouckM.P.，MeresseS.，DelormeP.,FruchartJ.C.,Cecchelli，R.AnEasier，Reproductible,andMass-ProductionMethodtoStudytheBlood—BrainBarrierInVitro./腸,oc/柳，54,1798-1801,1990)。簡(jiǎn)而言之，除去腦膜后，將腦組織輕柔地壓過(guò)82jiim尼龍篩。將星形細(xì)胞在2mL補(bǔ)充了10%熱滅活的胎牛血清的最佳培養(yǎng)基(DMEM)中以1.2x10、田胞/mL的濃度涂布于六孑L微量平板上。將培養(yǎng)基每周更換兩次。從CellialTechnologies獲得牛大腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞(BBCEC)。在補(bǔ)充了10%(v/v)馬血清和10。/。熱滅活的小牛血清、2mM谷氨酰胺、50jlig/mL慶大霉素和lng/raL基礎(chǔ)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(每隔一天加入)的DMEM培養(yǎng)基存在下培養(yǎng)細(xì)胞。最初，進(jìn)行一^擇，使用BBB的體外模型測(cè)試表2中所述的96種肽作為載體。將每種溫口到用內(nèi)皮細(xì)月嫂蓋或沒(méi)有覆蓋的插入物的上表面，在37。C保持90分鐘。孵育后，通過(guò)電泳解析位于室下表面的肽。用考馬斯藍(lán)將電泳凝皎染色來(lái)顯現(xiàn)所述肽，如圖1中所示的一些肽(不限于此)。在此通常將血管肽-1(SEQIDNO.:67或67號(hào)肽(i^化形式))用作參照或用于比較目的。圖1中，##種涂布于濾器上表面的初始^口載于電泳皿(ini)上作為對(duì)照。轉(zhuǎn)月g作用90分鐘后，將覆蓋了(+)或沒(méi)有覆蓋(-)內(nèi)皮細(xì)胞的濾器基底外側(cè)面的50m1體積也加栽于Tricine皿上。為了顯現(xiàn)，用考馬斯藍(lán)將肽染色。在一級(jí)篩選后，選擇通過(guò)考馬斯藍(lán)染色在室下表面檢測(cè)到的肽(5、8、45、67、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、81、82、90和91)用于進(jìn)一步研究，使用碘化肽。簡(jiǎn)而言之，使用來(lái)自Sigma的碘-珠用標(biāo)準(zhǔn)程序?qū)⑦x定的肽石制匕。每種蛋白質(zhì)使用兩個(gè)碘-珠。在3mlWhatmar^濾器上用磷酸鹽緩沖液(pb)將這些珠粒洗滌兩次并重懸浮于60m1的pb中。在室溫下將來(lái)自Amersham-Pharmaciabiotech的1251(1mCi)加入到珠^立懸浮液中保持5分鐘。通it^口入100|ag(80-100|i1)珠粒懸浮液來(lái)開(kāi)始每種肽的》典化。在室溫下孵育10分鐘后，將上清液施加到預(yù)先填充了5ml來(lái)自Pierce的交聯(lián)葡聚糖1"的脫鹽柱上并用10mlPBS1251-蛋白質(zhì)。收集0.5ml的級(jí)分并測(cè)量5m1的各級(jí)分中的放射性。匯集對(duì)應(yīng)于1251-蛋白質(zhì)的級(jí)分并對(duì)pH7.4的Ringer/Hepes緩沖液滲析。放射性標(biāo)記的效率為0.6-1.0x1()8cpm/100Mg蛋白質(zhì)。還使用BBB的體外模型研究了碘化肽。在37。C將每種肽加到覆蓋了或沒(méi)有覆蓋內(nèi)皮細(xì)胞的插入物的上表面，保持90分鐘。孵育后，對(duì)位于室下表面的M行TCA沉淀。將結(jié)a示為cpm比率。對(duì)于每種[1251]-肽，將底部室中的cpm數(shù)目除以加入覆蓋了內(nèi)皮細(xì)胞(+細(xì)胞/初始)或;^蓋(-細(xì)胞/初始)的濾器的cpm總數(shù)。還計(jì)算了存在于用內(nèi)皮細(xì)胞覆蓋或沒(méi)有a^的濾器的底部室中的rn-肽數(shù)目之間的比率(+細(xì)胞/-細(xì)胞)。非常低的-細(xì)胞/初始比率表示濾器可能干擾肽(肽5和8)。高的+細(xì)胞/初始和+細(xì)胞/-細(xì)胞比率表示肽較好地穿過(guò)了腦內(nèi)皮細(xì)胞。之前選定的18種肽的結(jié)果顯示于表3中。表3在二級(jí)篩選后肽的篩選結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>從這些結(jié)果中，選#+細(xì)胞/-細(xì)胞比率一般高于0.35的12種肽，即，5、8、67、75、76、77、78、79、81、82、90和91。由于它們的+細(xì)月包/-細(xì)月包比率(>0.2)，還選擇了#91和#77肽用于進(jìn)一步研究。然后通過(guò)使用體外BBB模型估算它們的滲透性系數(shù)來(lái)研究12種選定的肽。在星形細(xì)胞存在下生長(zhǎng)于濾器上的BBCEC單層上的BBB才莫型中通過(guò)測(cè)量["C]蔗糖滲透性來(lái)確定250nM每種選定的肽對(duì)BBB完整性的影響。為了完成該測(cè)試，將生長(zhǎng)于插入物上的腦內(nèi)皮細(xì)胞單層轉(zhuǎn)移至每孔(基底外側(cè)區(qū)室)含有2mLRinger-Hepes的6-孔平板中，在37。C下保持兩小時(shí)。Ringer-Hepes溶液由150mMNaCl、5.2mMKC1、2.2mMCaCl2、0.2mMMgCl2、6mMNaHC03、5mMHepes、2.8mMHepes構(gòu)成、pH7.4。在每個(gè)頂端室中，將培養(yǎng)基更換為lmL含有標(biāo)記的["C]-蔗糖的Ringer-Hepes。在不同時(shí)間，將插入物置于另一個(gè)孔中。在沒(méi)有細(xì)胞的濾器或覆蓋了BBCEC細(xì)胞的濾器上，在37。C測(cè)量["C]蔗糖通過(guò)。在時(shí)間為零時(shí)的實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)加入肽。將結(jié)果以蔗糖清除(ju1)作為時(shí)間(分鐘)的函數(shù)來(lái)作曲線。清除()j1)=[C]AxVA[C]A-腔外(Abluminal)痕量濃度[C]LVA-腔外室的體積[C]L-腔內(nèi)(Luminal)痕量濃度線性變化的斜率(M1/分鐘)是在肽存在下沒(méi)有細(xì)胞的濾器(Psf)和覆蓋了BBCEC細(xì)胞的濾器(PSt)的蔗糖滲透系數(shù)。按照以下計(jì)算滲透系數(shù)(Pe):1/Pe=(1/PSt-1/PSf)/濾器面積(4.2cm2)選擇具有最高Pe的肽67、76、90、91、5、79、8和78。將原位腦灌注(小鼠中)用作第四級(jí)選擇來(lái)選擇最佳的肽。該程序還將腦血管區(qū)室中剩余的化合物與已經(jīng)穿過(guò)腔外內(nèi)皮膜進(jìn)入腦實(shí)質(zhì)的化合物區(qū)分開(kāi)來(lái)。實(shí)際上，灌注后毛細(xì)血管減液的才支術(shù)可用于測(cè)量分子是否真正穿過(guò)內(nèi)皮進(jìn)入了腦實(shí)質(zhì)。使用該技術(shù)，在此證明了特異性肽趨于在腦實(shí)質(zhì)部分中累積(參見(jiàn)表4)。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>四種肽，即5、67、76和91，顯示出在實(shí)質(zhì)中最高水平的分布，體積高于20ml/100g并且其代表見(jiàn)于整個(gè)大腦(勻漿)體積的至少25%,因此顯示出作為用作轉(zhuǎn)運(yùn)載體的最高潛能。排除了肽79，因?yàn)槠湓谀X實(shí)質(zhì)中的體積分布較低(18ml/100g)。肽67代表發(fā)明人遞交的在先申請(qǐng)中所述的血管肽-l的,化形式。肽的§化影響了肽的總電荷。如在表2和3中明顯可見(jiàn)的，具有不同電荷的兩種肽不一定具有相同的活性。因此本發(fā)明的載體可以用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)血腦屏障的方法中，該方法包括將含有連接到載體如牛胰蛋白酶抑制劑或其功能衍生物(即，牛胰蛋白酶抑制劑類似物、牛胰蛋白酶抑制劑片段、牛胰蛋白酶抑制劑衍生物、牛胰蛋白酶抑制劑片段的類似物)上的活性成分或藥劑給藥于個(gè)體?？梢詣?dòng)脈內(nèi)、鼻內(nèi)、內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、經(jīng)皮或口服將栽體和綴合物給藥于患者。藥劑可以是，例如，^jk管生成化合物。該藥劑可以具有160，000道爾頓的最大分子量。如在此所討論的，該藥劑可以是標(biāo)記或藥物，如小分子藥物、蛋白質(zhì)、肽或酶。藥物可以適于治療，例如，患者的神經(jīng)系統(tǒng)疾病或中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙。藥物可以是細(xì)胞毒性藥物并且標(biāo)記可以是可檢測(cè)標(biāo)記如放射活性標(biāo)記、綠色熒光蛋白、組胺酸標(biāo)記蛋白或P-半乳糖普酶。可以將藥劑遞送到，例如，患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，其中所提及的用途、方法、化合物、物質(zhì)、藥物或藥品可以不改變患者血腦屏障的完整性。根據(jù)本發(fā)明另外的實(shí)施方案，肽可以選自牛胰蛋白酶抑制劑、牛胰蛋白酶抑制劑片段(SEQIDN0:1)和SEQIDNO:l至97、99、100或101中限定的任一種肽。例如，肽5、76、91、97和97以及肽67可以用于本發(fā)明中，通過(guò)使它們與物質(zhì)或化合物連接，用于轉(zhuǎn)運(yùn)所述物質(zhì)或化合物穿過(guò)患者的血腦屏障。所述物質(zhì)或化合物可以適于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙。本發(fā)明的載體，如例如，肽5、76、91和97以及肽67可以與可檢測(cè)標(biāo)記連接或用可檢測(cè)標(biāo)記來(lái)標(biāo)記，可檢測(cè)標(biāo)記如放射性成像劑，如發(fā)射射線的那些，例如使用放射性成像劑-抗體-載體綴合物用于檢測(cè)疾病或病癥，其中抗體與疾病或病癥特異性抗原結(jié)合。除抗體以外的并且本領(lǐng)域已知并常用的其他結(jié)合分子也包括于本發(fā)明中。另夕卜，本發(fā)明的載體或其功能衍生物或其混合物可以與治療劑連接，來(lái)治療疾病或病癥，或可以與其混合物連接或用其混合物標(biāo)記?？梢酝ㄟ^(guò)在允許物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障的條件下將本發(fā)明的載體-物質(zhì)綴合物給藥于個(gè)體來(lái)實(shí)現(xiàn)治療。在此使用的治療劑可以是藥物、藥品、發(fā)射射線的物質(zhì)、細(xì)胞毒素(例如，化療劑)和/或其生物活性片段，和/或其混合物以允許細(xì)胞殺傷，或可以是用于治療、治愈、緩解、改善、減輕或抑制所治療個(gè)體的疾病或病癥的物質(zhì)。治療劑可以是合成產(chǎn)物或真菌、細(xì)菌或其它微生物如支原體、病毒等、動(dòng)物如爬行動(dòng)物或植物來(lái)源的產(chǎn)物。治療劑和/或其生物活性片段可以是酶促活性劑和/或其片段，或可以通過(guò)抑制或阻斷重要和/或必要細(xì)胞途徑或通過(guò)與重要和/或必要天然存在的細(xì)胞成分竟?fàn)巵?lái)起作用。#■99或低劑量硤-131來(lái)舉例說(shuō)明。用于本發(fā)明中可檢測(cè)標(biāo)記或標(biāo)志可以是放射性標(biāo)記、熒光標(biāo)記、核磁共振活性標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、發(fā)色團(tuán)標(biāo)記、PET掃描儀的正電子發(fā)射同位素、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記或酶標(biāo)記。熒光標(biāo)記包括但不限于，綠色熒光蛋白(GFP)、熒光素和若丹明?；瘜W(xué)發(fā)光標(biāo)記包括但不限于，螢光素酶和P-半乳糖苷酶。酶標(biāo)記包括但不限于過(guò)氧化物酶和磷酸酶。組胺酸標(biāo)記也可以是可檢測(cè)標(biāo)記。預(yù)期物質(zhì)可以在轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)血腦屏障后從載體中釋放出來(lái)，例如通過(guò)酶切割或載體和物質(zhì)之間化學(xué)鍵的斷裂。然后l^;改劑可以在載體不存在下以其預(yù)計(jì)能力來(lái)起作用。通過(guò)參照以下實(shí)施例將更容易理解本發(fā)明，給出這些實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明而不是限制其范圍。用牛胰蛋白酶抑制劑給出了以下實(shí)施例。然而，關(guān)于它們作為轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿itii腦屏障的載體的潛能，在此已經(jīng)證明了本發(fā)明的分子具有與牛胰蛋白酶抑制劑共同的特性。因此這些實(shí)施例適用于本發(fā)明的分子。實(shí)施例I藥物綴合的策略(紫杉醇)對(duì)于綴合，紫杉醇(TAX0IA紅豆杉醇)具有2個(gè)策略位置(位置C2，和C7)。圖2說(shuō)明了本發(fā)明的栽體與紫杉醇連接的方法。簡(jiǎn)而言之，將紫杉醇與琥珀酸酐嘧。定在室溫反應(yīng)3小時(shí)以在位置2，上連接琥珀醃基團(tuán)。這樣的2，-琥珀酰紫杉醇在位置2，上具有可斷裂的酯鍵，在斷裂時(shí)其可以簡(jiǎn)單地釋放琥珀酸。如果需要，該可斷裂的酯鍵可以進(jìn)一步用于使用連接物的各種修飾。然后將所得到的2，-0-琥珀酰-紫杉醇與DMSO中的EDC/NHS在室溫反應(yīng)9小時(shí)，接著加入Ringer/DMSO中的栽體，在室溫持續(xù)另外的4小時(shí)反應(yīng)時(shí)間。通過(guò)HPLC監(jiān)控圖2中所示的綴合反應(yīng)。捧爭(zhēng)個(gè)中間產(chǎn)物，如紫杉醇、2，-0-琥珀酰-紫杉醇和2，-0-NHS-琥珀酰-紫杉醇純化，并^f吏用不同方法如HPLC、薄層色i普、NMR("C或111交換)、熔點(diǎn)、質(zhì)譜來(lái)證實(shí)。通過(guò)質(zhì)鐠和SDS-聚丙烯,:^電泳來(lái)分析最終的綴合物。這允許確定每個(gè)載體上綴合的紫杉醇分子的數(shù)量。確定牛胰蛋白酶抑制劑_紫杉醇綴合物的轉(zhuǎn)吞胞能力并呈現(xiàn)于以下的表5中。表5牛胰蛋白酶抑制劑-紅豆杉醇綴合物穿過(guò)BBB的轉(zhuǎn)吞胞能力的確定<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>綴合物沒(méi)有影響牛胰蛋白酶抑制劑穿過(guò)該屏障的能力還維持了該屏障的完整性如表5中所看到的，紫杉醇與牛胰蛋白酶抑制劑的綴合仍然能過(guò)穿itj6L腦屏障的體外模型而沒(méi)有影響蔗糖完整性，因此證明了本發(fā)明的分子(在此也稱為載體)與大的化學(xué)個(gè)體如紫杉醇綴合時(shí)仍然保持了它們的活性。然后進(jìn)行了大鼠腦腫瘤模型的存活研究來(lái)證實(shí)綴合的紫杉醇在體內(nèi)是否仍然是有活性的。對(duì)于大鼠腦腫瘤模型，大鼠接受腦內(nèi)植入50000個(gè)CNS-1成膠質(zhì)瘤細(xì)胞。三(3)天后，動(dòng)物通過(guò)靜脈內(nèi)注射接受媒介物(牛胰蛋白酶抑制劑)、紫杉醇(5mg/kg)或紫杉醇-牛胰蛋白酶抑制劑(5mg/kg)的治療。然后每周給予治療直至將動(dòng)物處死(參見(jiàn)圖3)。每天監(jiān)控大鼠的臨床癥狀和體重減輕。根據(jù)優(yōu)質(zhì)動(dòng)物失見(jiàn)范(goodanimalpractice)的實(shí)驗(yàn)方案，當(dāng)觀察到體重減輕持續(xù)了連續(xù)3天時(shí)或在體重減輕超過(guò)動(dòng)物最初體重的20%之前將動(dòng)物處死。使用相同的實(shí)驗(yàn)方案，以最大耐受劑量(54mg/kg)單獨(dú)注射紫杉醇時(shí)，不能提高鼠的存活率(Laccabue等，2001Cancer,92(12):3085-92)。還在植7vA腦腫瘤異種移植物的小鼠中進(jìn)行了存活研究。對(duì)于小鼠腦肺瘤模型，小鼠接受腦內(nèi)才1X500000個(gè)人U87成M^瘤細(xì)胞。^LX3A^，動(dòng)物通過(guò)靜脈內(nèi)注射接受紫杉醇-血管肽1(5mg/kg)或媒介物的治療。然后每周給予治療直至將動(dòng)物處死。每天監(jiān)控小鼠的臨床癥狀和體重減輕。根據(jù)優(yōu)質(zhì)動(dòng)物規(guī)范的實(shí)驗(yàn)方案，當(dāng)觀察到體重減輕持續(xù)了連續(xù)3天時(shí)或在體重減輕超過(guò)動(dòng)物最初體重的20%之前將動(dòng)物處死。此刻觀察到對(duì)照組的中值存活是19土2天。對(duì)于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，認(rèn)為20%的存活增加是顯著性的。如圖4中所看到的，綴合物紫杉醇-血管肽-l保持了其活性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的效果。與對(duì)照組相比較時(shí)，紫杉醇-血管肽l治療的動(dòng)物的存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)(p<0.05，n=8)。在這兩項(xiàng)存活研究中獲得的結(jié)果表明紫杉醇與本發(fā)明載體的綴合提高了動(dòng)物存活率。實(shí)施例II抗體綴合的策略由于蛋白質(zhì)通常具有幾個(gè)氨基可用于綴合，所以將使用硫代-NHS/EDC激活的胺偶聯(lián)用于交聯(lián)治療性抗體與本發(fā)明的載體。選擇該方法是因?yàn)樗且环N快速、簡(jiǎn)單和可重復(fù)的偶聯(lián)技術(shù)，因?yàn)樗玫降木Y合物是穩(wěn)定的，同時(shí)仍然保留抗體的生物活性并且其在偶聯(lián)過(guò)程中具有容易受控的高綴合能力和4氐的非特異性相互作用。已經(jīng)將抗體或抗體片段(Fab和Fab，2)與本發(fā)明的栽體綴合以提高它們向大腦的遞送。各種綴合方法已經(jīng)用于首先使IgG和牛胰蛋白酶抑制劑綴合，已經(jīng)證明本發(fā)明的載體確切贈(zèng)目當(dāng)于牛胰蛋白酶抑制劑。對(duì)于IgG的綴合，已經(jīng)測(cè)試了不同的交聯(lián)劑，如BS3[雙(磺基琥珀酰亞胺基)辛二酸酯]、NHS/EDC(N-羥基琥珀酰亞胺和N-乙基-N，(二甲基氨基丙基)碳化二亞胺或硫代-EMCS([N-e-馬來(lái)酰亞胺己酸]酰肼)。BS'是革巴向可及伯胺的同雙功能N-羥fe^珀酰亞胺酯。NHS/EDC引起伯胺基團(tuán)與的綴合。硫代-EMCSA^應(yīng)朝向M和M的異雙功能^Ji性基團(tuán)(馬來(lái)酰亞胺和NHS-酯)。首先評(píng)價(jià)了使用交聯(lián)劑BS3(圖5)或硫代-EMCS(圖6)的IgG與牛胰蛋白酶抑制劑的綴合。然后測(cè)試了IgG或IgG-綴合物穿過(guò)BBB的轉(zhuǎn)運(yùn)。使用本發(fā)明人實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)的原位腦灌注方法測(cè)量了[1251]-IgG至鼠腦毛細(xì)血管腔內(nèi)側(cè)的吸收以用于研究鼠腦中的藥物吸收(Dagenais等，2000，J.Cereb.BloodFlowMetab.20(2):381-386)。通過(guò)Smith以前所述的確定BBB轉(zhuǎn)運(yùn)常數(shù)(1996，Pharm.Biotechnol.8:285-307)。將IgG吸4t^示為來(lái)自以下等式的分布體積(Vd):Vd=Q*br/C'pf其中Q'br是計(jì)算的每克右腦半球[1251]-IgG或ri]-IgG-牛胰蛋白酶抑制劑綴合物的量且(Tpf是在灌注液中測(cè)量的標(biāo)記的痕量濃度。該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明[1251]-IgG-牛胰蛋白酶抑制劑綴合物的腦吸收高于未綴合n]-IgG的腦吸收(參見(jiàn)圖7)。IgG與牛胰蛋白酶抑制劑的綴合提高了它們?cè)隗w內(nèi)腦實(shí)質(zhì)中的累積。實(shí)施例III紅豆杉醇-血管肽-2綴合物對(duì)小鼠存活的影響使用紅豆杉醇-血管肽-2(在此稱為97號(hào)肽(血管肽2是未B化的))進(jìn)行了該研究以確定紅豆杉醇與血管肽-2的綴合是否能夠提高小鼠存活率。SEQIDN0.:97中顯示了血管肽-2的結(jié)構(gòu)。對(duì)于該實(shí)驗(yàn)，小鼠接受腦內(nèi)移植500000個(gè)人U87成膠質(zhì)瘤細(xì)胞。植入后3天，用4某介物(DMS0/Ringer-Hepes80:20v/v(即，對(duì)照))或紅豆杉醇-血管肽-2綴合物(3:1，即，每種肽3個(gè)紅豆杉醇分子的比率；TxlAn2(5mg/kg))通過(guò)尾靜脈注射來(lái)治療動(dòng)物(圖8)。每天監(jiān)控小鼠的臨床癥狀和體重減輕。給予治療直至將動(dòng)物處死。如表6中所示的，我們觀察到對(duì)照組的中值存活為18天而接受紅豆杉醇-血管肽-2綴合物的小鼠的中值存活為21天(圖8)。對(duì)于用紅豆杉醇-血管肽-2綴合物治療的小鼠所獲得的存活曲線(紅色)表示中值存活顯著提高了17%(圖8)。也在表6中呈現(xiàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明紅豆杉醇-血管肽-2綴合物的給藥將存活顯著提高了17%(p值-O.048)。表6.存活研究的結(jié)果小結(jié)a.中值存活天數(shù)提高了(％)小鼠(n)對(duì)照18.0一7TxlAn2綴合物21.0+177b.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(P值)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異對(duì)照與Txlan2綴合物p=0，048是本申請(qǐng)中提及的每篇出版物、專利和專利申請(qǐng)的內(nèi)容在此引入作為參考。盡管在此已經(jīng)詳細(xì)描述并在附圖中說(shuō)明了本發(fā)明，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于在此所述的實(shí)施方案并且可以進(jìn)行各種改變和改進(jìn)而不脫離本發(fā)明的范圍或精神。盡管已經(jīng)結(jié)合具體的實(shí)施方案描述了本發(fā)明，但應(yīng)當(dāng)理解能夠進(jìn)一步改進(jìn)且該申請(qǐng)意欲涵蓋通常按照本發(fā)明原理的本發(fā)明任何變化、用途或改i^JL包括在本發(fā)明所屬領(lǐng)域已知或常規(guī)實(shí)踐內(nèi)的與本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容的偏離，并且可以將這樣的偏離應(yīng)用于此前所述的必要特征并且落入所附權(quán)利要求的范圍中。序列表SEGIDNO.s1TFVYGGCRAKRNNFKSAED2TFQYGGCMGNGNFVTEKEPFFYGGcGGNRNNFDTEEY4SFYYGGcIjGNKNNYIjREEE5tFFYGGcRAKRNNFkRAKY5號(hào)肽包括SEQIDNO.:5中限定的氨基,列并在其N-末端是化的(參見(jiàn)例如圖9)6TFFY<5GCRGKRNNFKRAKY7TFFYGGCRAKKNNYKRAKY8tffyggcrgkkNTistfkraky9TFQYGGCRAKRNNFKRAKY10TFQYGGCRGKKNNFKRAK11TFFYGGcIjGKRnNFKRAKY12tFFYGGsIjGKRNNFKRAKY13PFFYGGcGGKKNNFKRAKY14TFFYGGcRGKGNNYKRAKY15pffyggcrgkrnnfIjraky16TFFYGGcRGKRNNFKREKY17PFFYGGcRAKKNNFKRAKE18TFFYGGcRGKRNNFKRAKD19TFFYGGcRAKRNNFDRAKY20TFFYGGcRGKKNNFKRAEY21pffyggcganrfkrak22TFFYGGcGGKKNFKTAKY23TFFYGGcRGRNNFIjRAK24TFFYGGcRGNRNFKTAKY25TFFYGGsRGNRNNFKTAKY26TFFYGGcIjGNGNNFKRAKY27TFFyGGcIjGNRNNFIjRAKY28TPFYGGCIjGNRNNFKTAKY29TFFYGGCRGNGNNFKSAKY30TFFYGGCRGKKNNFDREKY31TFFYGGCRGKRNNFIjREKE32TFFYGGCRGKGFDRAKY33TFFYGGSRGKGNNFDRAKY34TFFGGCRGNGNNFVTAKY35PFFYGGCGGKGNNYVTAKY36TFFYGGCIiGKGNNFIjTAKY37SFFYGGCIiGNKNNFIjTAKY38TFFGGCGGNKNNFVREKY39TFFYGGCMGNKNFVREKY40TFFYGGsMGNKNNFVREKY41PFFYGGcI;GNRNNYVRKY42TFFYGGcIjGNRNNFVREKY43TFFYGGcGNKNNYVREKY44TFFYGGcGGNGNFIjTAKY45TFFYGGcRGNRNNFIiTAEY46TFFYGGcRGNGNFKSAEY47PFFYGGcIjGKNNFKTAEY48TFFYGGcRGRNNFKTEEY49TFFYGGcRGKRNNFKTEED50PFFYGGcGGNGNNFVREKY51SFFGGcMGGNNFVREKY52PFFYGGcGGNGNNFIjREKY53TFFYGGcIjGNGNNFVREKY54SFFYGGc!>GNGNNYIjRKY55TFFYGGsIiGGNNFVREKY56TFFGGcRGNGNNFVTAEY57tffyggc:lgkgnnfvsaey5Btffyggc:lGnrnnfdraey59tFFYGGcIjGNRNNFIjREEY60TFFYGGcIjGNKNNYLiREEY61pffyggcggnrnnyreey62PFFYGGSGGNRNNYL<REEY63MRpDFCIiEPPYTGPCVAR工64ARIIRYFYNAKAGIjCQTFVYG65GGCRAKRNNYKSAEDCMRTCG66PDFcIiEPPYTGPCVARIIRYFY67TFFGGCRGKRNNFKTEEY67號(hào)肽包括SEQIDNO.:67中限定的氨基酸序列并且在其N-末端是M化的(參見(jiàn)例如圖9)68KFFYGGCRGKRNnFKTEEY69TFYYGGCRGKRNNYKtEEy70TFFYGGSRGKRfKTEEY71ctffygccrgkrnnfkteey72TFFYGGCRGKRNNFKTEEYC73CTFFYGSCRGKRNNFKTEEY74TFfYGGSRGKRNNFKTEEYC75pfFYGGcrGkrNnFktEEy76tffyggcrgkrnnfktkey76號(hào)肽包括SEQIDNO.:76中限定的氨基酸序列并且在其N-末端是酰胺化的(參見(jiàn)例如圖9)77TFFYGGKRGKRNNFKTEEY78TFFYGGCRGKRNNFKTKRY79TFFYGGKRGKRNNFKTAEY80TFFYGGKRGKRNNFKTAGY81TFFYGGKRGKRNNFKReKY81TFFYGGCGGNGNNFIjTAKY82TFFYGGCRGNRNNFLiTAEY83T.FFYGGCRGNGNNFKSAEY84pffyggcIjgnknnfktaey85TFFYGGCRGNRNNFKTEEY86TFFYGGCRGKRNNFKTEED87PFFYGGCGGNGNNFVREK88rfkyggc;lgnmnnfetlee89RFKYGGCIiGNKNNFLRIiKY91RFKYGGCLGNKNNYIiRIiKY91號(hào)肽包括SEQIDNO.:91中限定的氨基酸序列并且在其N-末端是酰胺化的(參見(jiàn)例如圖9)92KTKRKRKKQRVKIAYEEIF93KTKRKRKKQRVKIAY94RGGRIiSYSRRFSTSTGR95rrIjsysrrrfRQIK工WFQNRRMKWKK97TFFYGGSRGKRNFKTEEYS8mrPdfcIjepPytGpcvariIRYFYNAKAGIjCQTFVYGGCRAKRNNFKSAEDCMRTCG99TFFYGGCRGKRNFKTKEY100RFKYGGCIjGNKNnY:lRIikY101TFFYGGCRAKRNNFKRAKY102NAKAG:lCQTFVYGGCIiAKrESAEDCMRTCGGA103YGGCRAKRNNFKSAEDCMRGA104GCQTFVYGGCRAKRNNFK105IjCQTFVYGGCEAKRNNFKSSEQIDNO.:106atgagaccagatttctgcctcgagccgccgtacactgggccctgcaaagctcgtatcatc5cgttacttctacaatgcaaaggcaggcctgtgtcagaccttcgtatacggcggctgcagagctaagcgtaacaacttcaaatccgcggaagactgcatgcgtacttgcggtggtgcttag權(quán)利要求1.能夠穿過(guò)體外測(cè)定中模仿哺乳動(dòng)物血腦屏障的細(xì)胞層的生物活性多肽，所述多肽選自a)包括SEQIDNO.1中限定的氨基酸序列的牛胰蛋白酶抑制劑片段，b)由SEQIDNO.1構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，c)SEQIDNO.1的生物活性類似物，d)SEQIDNO.1的生物活性片段，和；e)SEQIDNO.1類似物的生物活性片段。2.能夠穿過(guò)體外測(cè)定中才莫仿哺乳動(dòng)物血腦屏障的細(xì)胞層的生物活性多肽，所述多肽選自-19至50個(gè)M酸長(zhǎng)的牛胰蛋白酶抑制劑片段，其可以包括SEQIDNO.:1,-由SEQIDNO.:l構(gòu)成的牛胰蛋白酶抑制劑片段，-9至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)的SEQIDNO.:1的生物活性類似物，只要所述類似物不包4舌SEQIDN0.:102、103、104或105并且只要當(dāng)所述類似物由SEQIDNO.:67構(gòu)成時(shí)，所述類似物是酰胺化的，-10至18個(gè)氨基酸的SEQIDNO.:1的生物活性片^殳，和；-約10至18個(gè)氨基酸的SEQIDNO.:1的生物活性片段。3.權(quán)利要求1或2的多肽，其中所述SEQIDNO.:l的生物活性類似物選自a)包括與SEQIDNO,:1的絲,列至少35°/。同一性的SEQIDNO.:1類似物，b)包括與SEQIDNO.:1的^J^,列至少40%同一性的SEQIDNO.:1類似物，c)包括與SEQIDNO.:1的絲^f列至少50%同一性的SEQIDNO.:1類似物，d)包括與SEQIDNO.:1的絲,列至少60%同一性的SEQIDNO.:1類似物，e)包括至少70%SEQIDNO.:1的M餅列同一性的SEQIDNO.:1類似物，f)包括至少80%SEQIDNO.:1的狄絲列同一性的SEQIDNO.:1類似物，g)包括至少90%SEQIDNO.:1的M酸序列同一性的SEQIDNO.:1類似物，h)包括至少95%SEQIDNO.:1的絲餅列同一性的SEQIDNO.:1類似物。4.權(quán)利要求1的多肽，其中所述的SEQIDNO.:1的生物活性類似物包4舌選自SEQIDNO.:2至SEQIDNO.:62、SEQIDNO.:68至SEQIDNO.:93和SEQIDNO.:97中限定的^i^酸序列的^J^酸序列。5.權(quán)利要求l的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性類似物包括SEQIDNO.:67中限定的M酸序列。6.權(quán)利要求5的多肽，其中所述多肽是酰胺化的。7.權(quán)利要求l的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性類似物包括SEQIDNO.:99、100或101中限定的^J^酸序列。8.權(quán)利要求1至4或7任一項(xiàng)的多肽，其中所述M,列是酰胺化的。9.權(quán)利要求1的多肽，其中所述牛胰蛋白酶抑制劑片段是10至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)。10.斥又利要求10的多肽，其中所述牛胰蛋白酶抑制劑片段是10至50個(gè)氨基酸長(zhǎng)。11.權(quán)利要求4至7任一項(xiàng)的多肽，其中所述#^*列包括1至12個(gè)氨基酸置換。12.權(quán)利要求4至7任一項(xiàng)的多肽，其中所述M^列包括1至10個(gè)氨基酸置換。13.權(quán)利要求4至7任一項(xiàng)的多肽，其中所述^*列包括1至5個(gè)氨基酸置換。14.權(quán)利要求ll的多肽，其中所述M酸置換是非保守性的。15.權(quán)利要求ll的多肽，其中所述絲酸置^:保守性的絲酸置換。16.權(quán)利要求3的多肽，其中所述類似物與SEQIDNO.:1相應(yīng)位置氨基酸不同的至少一個(gè)M^^呆守性氨基酸置換。17.權(quán)利要求1的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性片段是10至18個(gè)氨基酸長(zhǎng)。18.權(quán)利要求l的多肽，其中所述SEQIDNO.:1類似物的生物活性片段是1G至18個(gè)氨基酸長(zhǎng)。19.權(quán)利要求17的多肽，其中所述SEQIDNO.:1的生物活性片段包括SEQIDNO.:1的至少10個(gè)氨基酸。20.權(quán)利要求17的多肽，其中所述SEQIDNO.:l類似物的生物活性片段包括所述SEQIDNO.:1類似物的至少10個(gè)氨基酸。21.—種綴合物，包括a)選自權(quán)利要求l至20任一項(xiàng)多肽的載體；和b)選自藥物、可檢測(cè)標(biāo)記、蛋白質(zhì)、基于蛋白質(zhì)的化合物和多肽的物質(zhì)。22.—種綴合物，包括a)選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的載體，只要當(dāng)所述載體由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是酰胺化的，和；b)選自藥物、可檢測(cè)標(biāo)記、蛋白質(zhì)、基于蛋白質(zhì)的化合物和多肽的物質(zhì)。23.權(quán)利要求21或22的綴合物，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是放射性成像劑。24.權(quán)利要求21或22的綴合物，其中所述基于蛋白質(zhì)的化合物是抗體或其抗體片段。25.權(quán)利要求21或22的綴合物，其中所述物質(zhì)是小分子藥物。26.權(quán)利要求25的綴合物，其中所述小分子藥物是抗癌藥物。27.權(quán)利要求26的綴合物，其中所述抗癌藥物選自紫杉醇、長(zhǎng)^^堿、長(zhǎng)春新堿、依托泊苷、阿霉素、環(huán)磷酰胺、泰索帝、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥及其組合。28.選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)綴合物的用途，用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)需要該物質(zhì)的哺乳動(dòng)物的血腦屏障。29.選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)綴合物的用途，用于轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)穿過(guò)需要該物質(zhì)的哺乳動(dòng)物的血腦屏障，只要當(dāng)所述載體由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是酰胺化的。30.權(quán)利要求28或29的用途，其中所述物質(zhì)是可檢測(cè)標(biāo)記。31.權(quán)利要求28或29的用途，其中所述可檢測(cè)標(biāo)記是放射性成像劑。32.權(quán)利要求28或29的用途，其中所述物質(zhì)M于蛋白質(zhì)的化合物。33.權(quán)利要求32的用途，其中所述基于蛋白質(zhì)的化合物是抗體或其抗體片段。34.權(quán)利要求28或29的用途，其中所述物質(zhì)是小分子藥物。35.權(quán)利要求34的用途，其中所述小分子藥物是抗癌藥物。36.權(quán)利要求35的用途，其中所述抗癌藥物選自紫杉醇、長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿、依托泊苷、阿霉素、環(huán)磷酰胺、泰索帝、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥及其組合。37.選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物在制造用于治療腦或神經(jīng)系統(tǒng)疾病或用于診斷腦或神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的用途。38.選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的栽體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物在制造用于治療腦或神經(jīng)系統(tǒng)疾病或用于診斷腦或神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物中的用途，只要當(dāng)所述載體由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是酰胺化的。39.權(quán)利要求37或38的用途，其中所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病選自腦瘤、腦轉(zhuǎn)移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風(fēng)和血腦屏障相關(guān)的機(jī)能失常。40.權(quán)利要求39的用途，其中所#腦屏障相關(guān)的機(jī)能失常疾病^巴胖。41.治療患有神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者的方法，包括施用選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的栽體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物。42.治療患有神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者的方法，包括施用選自權(quán)利要求1至任一項(xiàng)多肽的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物，只要當(dāng)所述載體由SEQIDN0:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是,化的。43.診斷有此需要的患者中神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，包括施用選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物。44.診斷有此需要的患者中神經(jīng)系統(tǒng)疾病的方法，包括施用選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物，只要當(dāng)所述載體由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是,化的。45.選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的載體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物用于治療患有神經(jīng)系統(tǒng)疾病的哺乳動(dòng)物或用于診斷有此需要的哺乳動(dòng)物中神經(jīng)系統(tǒng)疾病的用途。46.選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的栽體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物用于治療患有神經(jīng)系統(tǒng)疾病的哺乳動(dòng)物或用于診斷有此需要的哺乳動(dòng)物中神經(jīng)系統(tǒng)疾病的用途，只要當(dāng)所述載體由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是酰胺化的。47.權(quán)利要求45或46的用途，其中所述神經(jīng)系統(tǒng)疾病選自腦瘤、腦轉(zhuǎn)移瘤、精神分裂癥、癲癇、阿爾茨海默氏病、帕金森病、亨廷頓病、中風(fēng)和血腦屏正相關(guān)的機(jī)能失常。48.權(quán)利要求47的用途，其中所iiA腦屏障相關(guān)的機(jī)能失常疾病;O巴胖。49.一種藥物組合物，包括^a)選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的栽體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物，和；b)藥物學(xué)上可接受的載體。50.—種藥物組合物，包括a)選自權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)多肽的栽體或權(quán)利要求21至27任一項(xiàng)的綴合物，只要當(dāng)所述載體由SEQIDNO:67構(gòu)成時(shí)，所述載體是酰胺化的，和；b)藥物學(xué)上可接受的載體。51.權(quán)利要求49或50的藥物組合物，其中所述藥物組合物用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病。52.權(quán)利要求49或50的藥物組合物，其中所述藥物組合物用于診斷神經(jīng)系統(tǒng)疾病。53.編碼權(quán)利要求1至4或7任一項(xiàng)多肽的核苷酸序列。54.權(quán)利要求43的核苷*列，其中所W列由選自核糖核苷酸、脫氧核糖核苦酸及其核苷酸類似物的核苷酸構(gòu)成。專利摘要本發(fā)明涉及藥物遞送領(lǐng)域中的改進(jìn)。更具體地，本發(fā)明涉及源自牛胰蛋白酶抑制劑和牛胰蛋白酶抑制劑類似物的多肽以及綴合物和含有這些多肽或綴合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及這些多肽在轉(zhuǎn)運(yùn)化合物或藥物穿過(guò)哺乳動(dòng)物血腦屏障中和在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療和診斷中的用途。文檔編號(hào)C12N15/15GKCN101160403SQ200580049237公開(kāi)日2008年4月9日申請(qǐng)日期2005年7月21日發(fā)明者A·雷吉納,C·謝,M·德穆勒,R·貝利沃申請(qǐng)人:安吉奧開(kāi)米公司導(dǎo)出引文BiBTeX,EndNote,RefMan