1.一種crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟1中，金納米粒子aunps的粒徑為13nm，由檸檬酸修飾；球形核酸探針中apt15與acdna的摩爾比為1:0.5～1:3。
3.?根據(jù)權(quán)利要求2所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟2中，洗滌磁性微粒，將磁性微粒重懸，之后磁分離2min，移去上清，用100ul25mm?mes清洗磁性微粒，并在充分混合的情況下培養(yǎng)10min，重復(fù)3次；
4.?根據(jù)權(quán)利要求3所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟2中，每毫克磁性微粒上修飾0.07?pm～700?pm?apt29。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟3中，向修飾核酸適配體apt29的磁性微粒中加入不同濃度的目標(biāo)蛋白凝血酶進(jìn)行孵育，磁分離、除上清，再將獲得的沉淀與步驟1中制備的具有不同apt15與acdna摩爾比的球形核酸探針進(jìn)行孵育，形成磁性微粒/凝血酶/aunps-apt15/acdna三明治夾心結(jié)構(gòu)。
6.?根據(jù)權(quán)利要求5所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟4中，配制cripsr/cas12a體系，cas12a蛋白購買于蘇州近岸蛋白質(zhì)科技股份有限公司，緩沖溶液為10×neb?buffer??r2.1，購自new?england?biolabs（美國）；crrna與cas12a蛋白的摩爾比15:10。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟5中，向形成磁性顆粒/凝血酶/aunps-apt15/acdna三明治夾心結(jié)構(gòu)的溶液中加入cripsr/cas12a體系以及熒光基團(tuán)f和淬滅基團(tuán)q雙標(biāo)記的dna進(jìn)行切割，孵育60min，進(jìn)行靶標(biāo)識(shí)別以及信號(hào)輸出。
8.?根據(jù)權(quán)利要求7所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟6中，通過熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光信號(hào)的強(qiáng)度變化實(shí)現(xiàn)凝血酶的檢測(cè)，所用熒光分光光度計(jì)型號(hào)為fl-?8500購于美國的perkinelmer。
9.?根據(jù)權(quán)利要求1所述crispr/cas12a介導(dǎo)的級(jí)聯(lián)凝血酶信號(hào)放大檢測(cè)方法，其特征在于，所述acdna的序列為sh-aat?atg?tca?tta?tgt?gct?gcc?ata?tct?act?tca?gaa?act。