技術(shù)特征：

1.一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s1中重組膠原蛋白基因片段(col17a)n中，col17a為如seq?id?no.1所示的氨基酸序列，或在seq?id?no.1基礎(chǔ)上進(jìn)行一定程度上的氨基酸替換、插入、取代、添加或缺失修改后的氨基酸序列，或與seq?id?no.1氨基酸序列具有大于80％同源性的氨基酸序列；n為大于或等于1的整數(shù)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s1中直系同源啟動(dòng)子為來(lái)源于pichia?pastoris的aox1啟動(dòng)子或hansenulapolymorpha的fmd啟動(dòng)子；所述fmd啟動(dòng)子的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s2中pcr克隆包括以下步驟：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s2-3中驗(yàn)證引物為col17a-f/r。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s3中g(shù)s115感受態(tài)的制備與ppic9k-(col17a)n的表達(dá)包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s3-2中電擊轉(zhuǎn)化參數(shù)如下：電擊電壓2kv，電容25μf，電阻200ω，電擊時(shí)間5msec。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白的制備方法，其特征在于，所述s3-2中電擊結(jié)束后立刻往電轉(zhuǎn)杯中加入預(yù)冷山梨醇溶液，輕輕吹打混勻后迅速轉(zhuǎn)移到離心管中，放置在30℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

9.一種如權(quán)利要求1-8任一所述制備方法制得的高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白。

10.一種如權(quán)利要求9所述高生物活性重組人源ⅹⅶ型膠原蛋白在促進(jìn)組織再生和毛囊修復(fù)再生中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)一種高生物活性重組人源ⅩⅦ型膠原蛋白氨基酸序列及其制備方法與應(yīng)用，首先分析人源ⅩⅦ型膠原蛋白α1鏈的氨基酸序列，選取該蛋白不同功能域非跨膜區(qū)不易被內(nèi)源或外源蛋白酶降解的部分氨基酸片段，將其重復(fù)拼接得到重組膠原蛋白基因片段(Col17a)n，然后在重組膠原蛋白基因片段5’端引入來(lái)源于不同甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母的同源啟動(dòng)子，優(yōu)化合成挑選的(Col17a)n和啟動(dòng)子片段，利用PCR克隆獲取連接片段，通過(guò)Gibson?Assembly無(wú)縫連接技術(shù)連接膠原蛋白片段(Col17a)n、啟動(dòng)子片段和pPIC9K載體骨架片段，構(gòu)建得到重組人源ⅩⅦ型膠原蛋白的畢赤酵母表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K?(Col17a)n。

技術(shù)研發(fā)人員：林博,黃艷芳,吳偉斌
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣東筑美生物醫(yī)療科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19