背景技術(shù)：

1、寡核苷酸是短的dna或rna寡聚物，其可通過(guò)化學(xué)方式合成以用于廣泛的應(yīng)用。利用合成寡核苷酸作為治療劑的最新發(fā)展增加了對(duì)能夠以高效率和純度大量生產(chǎn)寡核苷酸的合成方法的需求。

2、傳統(tǒng)上，寡核苷酸是通過(guò)固相自動(dòng)合成儀，利用亞磷酰胺化學(xué)合成的，限于小于2摩爾的規(guī)模。因此，固相合成不足以生產(chǎn)大量適應(yīng)癥的寡核苷酸藥物的臨床開(kāi)發(fā)和商業(yè)化所需的材料。此外，固相合成通常需要使用過(guò)量的試劑，且因此增加了與生產(chǎn)靶寡核苷酸相關(guān)的成本。

3、因此，需要一種穩(wěn)健的方法來(lái)合成適用于以高效率和高純度進(jìn)行的大規(guī)模制造過(guò)程的寡核苷酸。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開(kāi)描述了一種通過(guò)偶聯(lián)兩個(gè)或更多個(gè)(例如，三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六個(gè)等)寡核苷酸片段來(lái)制造寡核苷酸的匯聚液相方法，每個(gè)寡核苷酸片段具有兩個(gè)或更多個(gè)(例如，三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、六等)核苷酸。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，本公開(kāi)的匯聚液相方法可用于合成具有高純度的受保護(hù)寡核苷酸，而無(wú)需通過(guò)色譜法(例如柱色譜法)純化，這使得所述方法適用作大規(guī)模制造過(guò)程。在脫保護(hù)和標(biāo)準(zhǔn)下游純化后，可獲得適用于治療用途的高純度aso寡核苷酸。本公開(kāi)還提供了涉及匯聚液相方法的反應(yīng)步驟。

技術(shù)特征：

1.一種用于制備式(ai)化合物或其鹽的液相方法：

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中r15為4,4'-二甲氧基三苯甲基。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述脫保護(hù)反應(yīng)在干燥劑的存在下進(jìn)行。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述干燥劑是分子篩。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中分子篩的尺寸是

6.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述無(wú)水或基本上無(wú)水的溶液是通過(guò)在脫保護(hù)反應(yīng)之前使用共沸蒸餾去除水而獲得的。

7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述脫保護(hù)反應(yīng)在包含-sh基、硅烷基、硅氧烷基、聚苯乙烯基、呋喃、吡咯或吲哚的陽(yáng)離子清除劑存在下進(jìn)行。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述陽(yáng)離子清除劑為式rsh的化合物，其中r為烷基、環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基或雜芳基，其各自任選地被取代。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中rsh為ch3(ch2)5sh、ch3(ch2)11sh、環(huán)己硫醇、ch3ch2oc(＝o)ch2ch2sh。

10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述脫保護(hù)反應(yīng)通過(guò)使式(aii)化合物與脫三苯甲基化試劑反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。

技術(shù)總結(jié)
本公開(kāi)描述了一種通過(guò)偶聯(lián)兩個(gè)或更多個(gè)寡核苷酸片段來(lái)制造寡核苷酸的匯聚液相方法，每個(gè)寡核苷酸片段具有兩個(gè)或更多個(gè)核苷酸。本公開(kāi)還提供了所述匯聚液相方法所牽涉的反應(yīng)步驟。

技術(shù)研發(fā)人員：石向林,W·F·基斯曼,F·安蒂亞,Y·菲永,周旋,嚴(yán)無(wú)名,江虹,H·阮,R·S·格朗克,市丸泰介,濱垣卓也,高橋大輔
受保護(hù)的技術(shù)使用者：渤健馬薩諸塞州股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19