本發(fā)明涉及藥物制備，具體涉及fto在制備診斷子癇前期的產(chǎn)品中的應(yīng)用、fto的干擾序列及干擾序列的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、子癇前期(preeclampsia，pe)是妊娠期特發(fā)的一種多系統(tǒng)受累的全身性綜合征，主要表現(xiàn)為妊娠20周后血壓升高(收縮壓≥140mmhg/舒張壓≥90mmhg)、蛋白尿(≥300mg/24h；尿蛋白定性≥(+))，出現(xiàn)頭痛、惡心、上腹不適等癥狀，可累及心、腦、肝、腎等多個(gè)臟器，引起嚴(yán)重的心力衰竭、胎盤早剝、胎死宮內(nèi)等母嬰并發(fā)癥，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍生兒死亡的主要原因之一。因此，終止妊娠、娩出胎盤是目前為止最有效的根治方法。隨著醫(yī)學(xué)和科研的不斷進(jìn)步，pe在早期篩檢方面取得了一定的進(jìn)展，但其死亡率和發(fā)病率仍居高難下。因此，如何預(yù)防pe的發(fā)生、并在早期及時(shí)實(shí)施干預(yù)及治療措施，是醫(yī)學(xué)科研工作者們亟待解決的難題。

2、目前，pe的病因尚未完全明確，但學(xué)界普遍認(rèn)為pe是因胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲遷移不足導(dǎo)致胎盤低灌注，致使局部微環(huán)境炎癥因子的釋放，誘發(fā)全身血管炎癥和內(nèi)皮功能障礙，最終導(dǎo)致母體出現(xiàn)高血壓及器質(zhì)性疾病等的臨床癥狀。其中，胎盤作為妊娠期特有的器官，是胎兒與母體營養(yǎng)物質(zhì)交換的主要紐帶，其功能異常是pe形成的核心和關(guān)鍵，而滋養(yǎng)細(xì)胞是胎盤獨(dú)有的一種細(xì)胞類型，其結(jié)構(gòu)損傷及功能的異常，會(huì)對(duì)胎盤正常生理功能產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的改變。因此，深入探討pe發(fā)病的機(jī)制，探尋pe的防治方法具有重要的科學(xué)意義。

3、大量基礎(chǔ)研究表明，傳統(tǒng)表觀遺傳學(xué)如dna甲基化、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑，可通過調(diào)控相關(guān)基因的表達(dá)，調(diào)節(jié)胎盤發(fā)育及適應(yīng)性改變，參與pe的發(fā)生發(fā)展。近期，rna甲基化修飾作為表觀遺傳學(xué)調(diào)控的新興研究方向，備受醫(yī)學(xué)科研工作者的關(guān)注。rna修飾作為一種轉(zhuǎn)錄后調(diào)控方式，是疾病發(fā)生發(fā)展過程中表觀遺傳失調(diào)的一項(xiàng)重要分支。m6a(n6-methyladenosine)作為真核生物中最常見的rna修飾之一，具有保守、動(dòng)態(tài)和可逆的特征。m6a修飾主要發(fā)生在rna腺嘌呤(a)第6位n原子上，是一種類似于dna甲基化轉(zhuǎn)錄后修飾方式。m6a甲基化主要通過甲基轉(zhuǎn)移酶3(methyltransferase-like?protein?3，mettl3)和甲基轉(zhuǎn)移酶14(methyltransferase-like?protein?14，mettl14)完成。m6a去甲基化主要由脂肪和肥胖相關(guān)蛋白(fat?mass-and?obesity-associaed?gene，fto)和alkb同源物5(alk?bhomologue?5，alkbh5)共同執(zhí)行。m6a閱讀蛋白包括yth結(jié)構(gòu)域蛋白家族(yth?domainfamilyproteins?1-3，ythdf1-3)和胰島素樣生長因子2mrna結(jié)合蛋白1/2/3(insulin-likegrowth?factorⅱmrna-bindingprotein?1/2/3，igf2bp1/2/3)，識(shí)別發(fā)生m6a的甲基化位點(diǎn)并增強(qiáng)rna穩(wěn)定性。m6a修飾主要發(fā)生在rrach(r＝g或a，h＝a，c或u)的共有序列中，可調(diào)控mrna剪切、成熟、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯和降解的代謝全過程，在基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用，其異常修飾可參與腫瘤發(fā)生、心血管疾病、肥胖、脂肪代謝等多種疾病。迄今為止，已有一些關(guān)于pe胎盤中mrna修飾的報(bào)道，但其在pe發(fā)病中的作用尚未明確。fto是m6a去甲基化酶，位于染色體16q12.2上，編碼2-羥戊二酸(2-og)fe(ii)依賴的alkb家族雙加氧酶，全長為410.50kb，包括9個(gè)外顯子和8個(gè)內(nèi)含子。fto主要與m6a甲基轉(zhuǎn)移酶共同調(diào)節(jié)體內(nèi)m6a水平，在人類生理和病理過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。fto參與惡性腫瘤的發(fā)病過程，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、腫瘤干細(xì)胞特性和耐藥等惡性生物學(xué)行為，臨床上可通過靶向fto進(jìn)行治療。研究發(fā)現(xiàn)fto通過igf2bp2介導(dǎo)的m6a修飾抑制apoe的表達(dá)，通過調(diào)節(jié)il-6/jak2/stat3信號(hào)通路來抑制甲狀腺癌的糖酵解，從而抑制腫瘤生長。研究發(fā)現(xiàn)fto通過m6arna修飾，降低哺乳動(dòng)物心臟和缺氧心肌細(xì)胞的收縮功能，并為心肌梗死的治療提供了新的機(jī)制。最新研究發(fā)現(xiàn)，降脂藥物阿托伐他汀可以降低內(nèi)皮細(xì)胞中fto蛋白的表達(dá)，通過m6a修飾方式上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞中kruppel樣因子2(kruppel-like?factor?2，klf2)和enos?mrna表達(dá)水平，抑制粘附分子vcam-1和icam-1的表達(dá)。但目前關(guān)于fto在pe發(fā)病過程中的作用效果尚未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種fto在制備診斷子癇前期的產(chǎn)品中的應(yīng)用，本發(fā)明中的fto能夠作為診斷子癇前期的制劑的有效分子，且本發(fā)明通過fto篩選出了能用于制備治療子癇前期的干擾序列fto-rnai(118151-1)、fto-rnai(118152-2)、fto-rnai(118153-1)。

2、本發(fā)明提供了一種fto在制備診斷或治療子癇前期的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述fto序列如seq?id?no.1所示。

3、進(jìn)一步地，所述產(chǎn)品為試劑盒。

4、進(jìn)一步地，所述試劑盒包括檢測fto的引物，檢測所述fto的引物序列為：

5、正向引物：5’-gttcacaacctcggtttagttc-3’；

6、反向引物：5’-catcatcattgtccacatcgtc-3’。

7、進(jìn)一步地，所述試劑盒包括tb?greenpremix?ex?taq?ii(tli?rnaseh?plus)(2x)、dna模板、無酶水。

8、本發(fā)明還提供了一種所述fto的干擾序列，所述干擾序列為fto-rnai(118151-1)、fto-rnai(118152-2)或fto-rnai(118153-1)。

9、本發(fā)明還提供了所述的干擾序列在制備治療子癇前期的藥物中的應(yīng)用。

10、進(jìn)一步地，所述藥物的唯一有效成分為fto-rnai(118151-1)、fto-rnai(118152-2)和fto-rnai(118153-1)中的任意一種或幾種的組合。

11、進(jìn)一步地，所述藥物包括藥學(xué)上可接受的載體或輔料。

12、進(jìn)一步地，所述載體或輔料包括但不限于有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂或礦物油。

13、所述藥物根據(jù)需要可以被制備成口服制劑或注射制劑?？诜苿┛梢詾槟z囊劑、顆粒劑、片劑、口服液或其他液體制劑。注射制劑為經(jīng)靜脈注射或肌肉注射形式給藥的制劑，如注射液或注射用粉末。

14、進(jìn)一步地，所述干擾序列用于制備滋養(yǎng)細(xì)胞遷移、侵襲或增殖的促進(jìn)劑。進(jìn)一步地，所述干擾序列用于制備滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡或炎癥的抑制劑。

15、進(jìn)一步地，所述的子癇前期是由缺氧誘導(dǎo)發(fā)生的。

16、本發(fā)明還提供一種篩選預(yù)防、改善或治療子癇前期的藥物的方法，包括：

17、將候選藥物給藥子癇前期模型，檢測給藥前后所述fto的表達(dá)量，給藥后所述子癇前期的表達(dá)量低于給藥前所述子癇前期的表達(dá)量是候選藥物為目標(biāo)藥物的指示。

18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

19、1、本發(fā)明結(jié)合臨床胎盤組織樣本和缺氧誘導(dǎo)的人胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞(htr-8/svneo、jeg-3、bewo)體外研究模型，通過對(duì)pe患者胎盤組織和滋養(yǎng)細(xì)胞中m6a相關(guān)甲基化酶進(jìn)行篩選，確定fto為參與調(diào)控pe?m6a修飾的關(guān)鍵去甲基化酶，為pe的臨床早期預(yù)測及精準(zhǔn)治療提供了新的潛在的靶點(diǎn)及思路。

20、2、本發(fā)明提供的fto能夠用于制備診斷子癇前期的制劑，在缺氧誘導(dǎo)子癇前期后fto表達(dá)量顯著提高，表明fto能作為子癇前期的分子標(biāo)記。

21、3、本發(fā)明針對(duì)fto設(shè)計(jì)出了干擾序列fto-rnai(118151-1)、fto-rnai(118152-2)、fto-rnai(118153-1)；通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，三種干擾序列均對(duì)fto有顯著的抑制作用，且三種干擾序列表達(dá)的抑制效果大致相同。

22、4、本發(fā)明提供的fto的干擾序列fto-rnai(118151-1)、fto-rnai(118152-2)、fto-rnai(118153-1)干擾后，滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力提高，滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡和炎癥減弱，說明fto-rnai(118151-1)、fto-rnai(118152-2)、fto-rnai(118153-1)能夠顯著減弱缺氧誘導(dǎo)子癇前期的發(fā)作，為子癇前期的治療和預(yù)防復(fù)發(fā)提供了理論依據(jù)。