本發(fā)明屬于天然藥物制備領域，涉及一種來源于海南腺萼木的具有新穎化學結構的降倍半萜類化合物，具體涉及一種降倍半萜類化合物及其制備方法及其在抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術：

1、惡性腫瘤目前仍然是嚴重威脅人類生命和健康的第二號殺手，僅位居心血管疾病之后?，F(xiàn)代醫(yī)學對腫瘤的治療主要包括手術治療、化療和放療，還有近些年發(fā)展起來的生物治療。但惡性腫瘤是全身性疾病，往往在做出臨床診斷時已發(fā)生轉移，而手術只能解決局部的腫瘤負荷，術后仍需要施以輔助性的化療。然而，目前用于化療的藥物主要為抗腫瘤類藥物，其通過直接作用于dna、rna或微管蛋白等與正常人體細胞的共有組分來誘導細胞調亡，導致該類藥物選擇性差，毒副作用大。隨著現(xiàn)代生命科學的進步，腫瘤發(fā)生和發(fā)展的機制不斷被認知，利用這些生物醫(yī)學研究的成果，繼續(xù)尋找作用機制新穎、選擇性強、毒副作用小、具有自主知識產權的抗腫瘤活性物質是抗腫瘤新藥研究的重要任務。

2、分子靶向抗腫瘤藥物能夠針對腫瘤細胞生長和增殖過程中的特異性靶點選擇性地殺傷腫瘤細胞而不損傷正常組織，給腫瘤治療領域帶來了革命性的進展。與傳統(tǒng)細胞毒藥物不同，這類藥物主要針對正常細胞不表達或很少表達而在腫瘤細胞生長和增殖過程中存在的某些特異性分子或靶點，故可以特異性地作用于腫瘤細胞而不損傷正常的組織和細胞。分子靶向抗腫瘤藥物的出現(xiàn)給選擇性好、毒副作用小的抗腫瘤新藥的研制帶來了希望。在各種分子靶點中，蛋白酪氨酸激酶(protein?tyrosine?kinase，ptk)是目前研究較多且效果明顯的抗腫瘤藥物靶點之一，已成為抗腫瘤靶向治療藥物的研究重點及熱點，具有廣闊的應用前景。目前臨床上使用的小分子靶向抗腫瘤藥物主要為酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，包括單靶點酪氨酸激酶抑制劑和多靶點酪氨酸激酶抑制劑。酪氨酸激酶通過一個復雜的細胞內網絡通路控制細胞增殖，生存，細胞凋亡，血管生成，侵襲和轉移，腫瘤組織最初可能對單靶點酪氨酸激酶抑制劑有反應，但可以通過自分泌或旁分泌、產生配體、受體突變、激活下游信號通路和啟用替代信號等途徑等多種機制獲得拮抗能力，腫瘤存在這些逃逸機制是多靶點治療必要性的基礎。臨床實踐同樣表明，單靶點酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，如厄洛替尼和吉非替尼，盡管選擇性強、毒副作用小，但在使用過程中易產生耐藥性，無法徹底殺滅腫瘤細胞，而聯(lián)合用藥又會帶來嚴重的不良反應，影響各自的藥動學特性。多靶點酪氨酸激酶抑制劑具有減少藥物使用種類，可從多方面發(fā)揮效用，對抗耐藥性，避免產生藥物相互作用，減少不良反應等優(yōu)點。許多多靶點酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物因其選擇性高、療效好、毒性小的臨床特點，已逐漸成為某些腫瘤治療的一線用藥。

3、茜草科rubiaceae腺萼木屬mycetia植物全世界約有30余種，集中分布于亞洲的熱帶地區(qū)。分布于我國的腺萼木屬植物有15種、1變種以及3變型，分布于西南部至東南部[中國科學院中國植物志編委會.中國植物志.第71(1)卷.科學出版社.北京:1999,pp?313-325.]。由于腺萼木屬植物分布的地域性和特有性，關于腺萼木屬植物中化學成分及其藥理活性的研究報道極為罕見，截至目前，僅有兩篇有關于該屬植物m.longifolia(采集于孟加拉國)和m.cauliflora(采集于韓國)粗提取物抗炎活性及其初步作用機制的初步研究報道，未見任何關于該屬植物中化學成分的研究報道[jain,p.；hossain,m.a.；fatema,k.；mazumder,k.u.；hossain,m.s.；hossain,h.；alam,m.a.；reza,h.m.antinociceptive?andanti-inflammatory?activities?ofmycetia?longifolia(wall.)o.kuntze.j.herbsspices?med.plants?2015,21,321–331.；jeong,s.g.；kim,s.；kim,h.g.；kim,e.；yang,w.s.；oh,j.；sung,g.h.；hossain,m.a.；lee,j.；kim,j.h.；cho,j.y.mycetia?caulifloramethanol?extract?exerts?anti-inflammatory?activity?by?directly?targeting?pdk1inthe?nf-κb?pathway.j.ethnopharmacol.2019,231,1–9.]。分布于海南的腺萼木屬植物一共有3種，分別為海南腺萼木m.hainanensis、毛腺萼木m.hirta和華腺萼木m.sinensis[中國科學院中國植物志編委會.中國植物志.第71(1)卷.科學出版社.北京:1999,pp?313-325.]。其中，海南腺萼木為海南特有植物，迄今為止尚未見任何有關于海南腺萼木中化學成分及其藥理活性的研究報道。

4、海南腺萼木m.hainanensis為夾竹桃科狗牙花屬植物，主要分布于海南省和云南省，為黎族民間常用植物藥，用于治療炎癥性疾病，主治關節(jié)炎和背痛等癥，藥用歷史悠久，療效顯著[中國科學院中國植物志編委會.中國植物志.第71(1)卷.科學出版社.北京:1999,pp?313-325.]。目前尚未見其有應用在抗腫瘤方面的研究。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供了一種從海南腺萼木枝葉中分離得到的具有新穎化學結構的降倍半萜類化合物mycehainanic?acid，該化合物具有顯著的抗腫瘤活性和與陽性對照藥相當?shù)牡鞍桌野彼峒っ傅囊种苹钚裕梢赃M一步開發(fā)成以蛋白酪氨酸激酶為靶標的抗腫瘤藥物。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案為：提供一種降倍半萜類化合物，化學名為mycehainanic?acid，其化學結構如下：

3、

4、本發(fā)明的另一目的是提供一種降倍半萜類化合物的制備方法，包括以下步驟：

5、a.將陰干的海南腺萼木枝葉粉碎后用85％乙醇溶液或甲醇提取六次，過濾，收集濾液，再減壓濃縮干燥，獲得醇提取物；

6、b.將醇提取物加水制成混懸液，依次用石油醚和乙酸乙酯進行萃取，石油醚萃取液減壓濃縮，得石油醚萃取浸膏；

7、c.將石油醚萃取浸膏進行柱色譜分離純化得到單體化合物mycehainanic?acid。

8、進一步地，所述步驟c具體如下：①將石油醚萃取浸膏經硅膠柱色譜分離，分別按體積比95:5、90:10、80:20、70:30和40:60進行石油醚-丙酮梯度洗脫，收集體積比為70:30的石油醚-丙酮洗脫物；②取石油醚-丙酮(體積比70:30)洗脫物經mci樹脂柱層析去除色素，用體積比為40:60、55:45和70:30的甲醇-水梯度洗脫，收集體積比為55:45的甲醇-水洗脫物；③取甲醇-水(體積比55:45)洗脫物進行ods柱層析，用體積比為50:50、55:45和65:35的甲醇-水梯度洗脫，收集體積比為55:45的甲醇-水洗脫物濃縮；④取甲醇-水(體積比55:45)洗脫物用制備型高效液相色譜(hplc)分離，流動相為甲醇-水，體積比48:52，得到單體化合物mycehainanic?acid。

9、本發(fā)明的再一目的在于提供降倍半萜類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應用，尤其是提供降倍半萜類化合物mycehainanic?acid在制備以蛋白酪氨酸激酶為靶標的靶向抗腫瘤藥物方面的應用。

10、進一步地，所述腫瘤細胞株包括jeko-1(人套細胞淋巴瘤細胞)、a549(人肺癌細胞)、smmc-7721(人肝癌細胞)、mcf-7(人乳腺癌細胞)和sw480(人結腸癌細胞)等五種腫瘤細胞株。

11、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下效果：

12、本發(fā)明通過對海南腺萼木枝葉中的化學成分進行系統(tǒng)研究過程中，首次從其石油醚萃取部位中分離鑒定了一個具有新穎化學結構的降倍半萜類化合物mycehainanicacid。多種體外活性評價結果表明：該化合物具有顯著的抗腫瘤活性和與陽性對照藥相當?shù)牡鞍桌野彼峒っ傅囊种苹钚裕梢赃M一步開發(fā)成以蛋白酪氨酸激酶為靶標的抗腫瘤藥物，以充分發(fā)揮了其藥用價值和經濟價值。