本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，特別涉及一種滸苔寡糖及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、滸苔屬于綠藻綱、石莼目、石莼科，是我國(guó)沿海常見(jiàn)海藻，作為食用和藥用的歷史悠久。中醫(yī)認(rèn)為滸苔性味甘咸、微寒，具有涼血、利尿、清熱解毒的功效。海藻中含有人體必需的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素等多種營(yíng)養(yǎng)成分，其中多糖具有抗凝血、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、降血脂、抗病毒等生物活性。因此，海藻除了可以直接食用外，還可以加工提純，應(yīng)用于保健食品和醫(yī)用藥品的研發(fā)。硫酸鼠李聚糖是一種主要由鼠李糖組成的硫酸多糖，在自然界中主要存在于滸苔、礁膜和石莼等綠藻中。

2、滸苔中硫酸鼠李聚糖由高度硫酸化的鼠李糖分子和各種高度支化的多糖組成，包括木糖、葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸糖。對(duì)滸苔多糖和寡糖結(jié)構(gòu)的研究雖然開(kāi)始的很早，但是關(guān)于精細(xì)結(jié)構(gòu)的研究較少，ray從扁滸苔中利用草酸鹽提取并分離純化得到一種水溶性硫酸多糖，該多糖的結(jié)構(gòu)分析結(jié)果顯示其主要由(1→4)-rha、(1→2,4)-rha、(1→4)-xyl、(1→4)-glca以及端基clca組成，硫酸基團(tuán)位于(1→4)-rha的c-3位以及(1→4)-xyl的c-2位。chattopadhyay對(duì)印度扁滸苔水提硫酸多糖進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)該多糖由c-3被部分硫酸化的(1→4)-rha、(1→2,4)-rha和部分c-2位被硫酸化的(1→4)-xyl、(1→4)-glc、(1→3)-gal、(1→6)-gal、(1→4)-glca以及端基clca組成。因此，不同滸苔多糖的結(jié)構(gòu)在連接方式、硫酸化位置方面存在細(xì)小差異。

3、糖尿病是一類病因復(fù)雜的內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，以高血糖為主要標(biāo)志。糖尿病的治療主要包括飲食控制、運(yùn)動(dòng)治療、藥物治療等。常用的口服藥物包括二甲雙胍、格列齊特、阿卡波糖、羅格列酮或注射胰島素及胰島素類似物來(lái)控制血糖水平。近年來(lái)的研究表明，天然來(lái)源的海藻寡糖具有降血糖的潛力，能夠通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮作用。海藻寡糖可以抑制α-葡萄糖苷酶的活性，從而減緩血糖的上升。此外，海藻寡糖還能促進(jìn)胰島素的分泌，改善胰島素抵抗，以及通過(guò)抗氧化和抗炎作用保護(hù)胰島β細(xì)胞，進(jìn)而降低血糖水平。滸苔是在我國(guó)海域廣泛分布的大型綠藻，寡糖含量高、無(wú)毒且無(wú)顯著副作用，為開(kāi)發(fā)降血糖活性藥物或功能性食品提供依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種滸苔寡糖及其制備方法和應(yīng)用。所述滸苔寡糖安全性好，緩解2型糖尿病的效果明顯。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

3、本發(fā)明提供了一種滸苔寡糖，所述滸苔寡糖的聚合度為2-10，其中包含鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和木糖。

4、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖中的硫酸基團(tuán)位于→3)-α-l-fuc p-(1→的c-4位以及→4)-α-l-fuc p-(1→的c-3位。

5、進(jìn)一步的，所述鼠李糖是由→3)-α-l-rha p-(1→和→4)-α-l-rha p-(1→組成的；葡萄糖是由→4)-β-d-glc p-(1→和→6)-β-d-glc p-(1→組成的。

6、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖是由滸苔多糖降解制備得到；所述滸苔多糖中鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和木糖的百分比分別為57.9%、32.4%、5.1%、4.6%。

7、進(jìn)一步的，所述滸苔多糖的結(jié)構(gòu)示意圖如下所示：

8、

9、其中，r1=h或者h(yuǎn)so3-，r3=h,?rha p-(1→,?gal或者xylp-(1→。

10、本發(fā)明還提供了所述的滸苔寡糖的制備方法，包括以下步驟：

11、（1）向滸苔粉末中以1：5（w/v）的料液比加入95%乙醇，80℃加熱4?h進(jìn)行脫脂處理，離心收集滸苔沉淀，沉淀經(jīng)55?℃烘干；

12、（2）向所述步驟（1）烘干的滸苔沉淀中以1：10（w/v）的料液比加入蒸餾水，室溫條件下連續(xù)攪拌4?h，離心收集上清液；

13、（3）利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)所述步驟（2）中的上清液進(jìn)行濃縮，然后再利用3500?da透析袋進(jìn)行脫鹽處理，獲得濃縮液；

14、（4）向所述步驟（3）的濃縮液中以1:?4（v/v）的料液比加入95%乙醇進(jìn)行醇沉，4?℃靜置過(guò)夜后，離心收集沉淀；

15、（5）利用丙酮和無(wú)數(shù)乙醇對(duì)所述步驟（4）中的沉淀進(jìn)行脫色和脫水處理，55?℃烘干，得到滸苔多糖粗品；

16、（6）利用q-sepharose?fast?flow陰離子交換柱對(duì)滸苔多糖進(jìn)行分離純化，得到滸苔多糖；

17、（7）在所述滸苔多糖中加入0.1?mol/l的h2so4，至滸苔多糖的終濃度為10?mg/ml，80?℃水浴加熱降解5?h，降解液中加入飽和的氫氧化鋇溶液至不再產(chǎn)生沉淀，離心取上清，上清液經(jīng)500?da透析袋透析、脫鹽處理后，經(jīng)冷凍干燥獲得寡糖混合物，寡糖混合物經(jīng)bio-gel?p4凝膠柱進(jìn)一步純化后，得到滸苔寡糖。

18、進(jìn)一步的，所述步驟（6）中q-sepharose?fast?flow陰離子交換柱的長(zhǎng)度為40?cm，直徑為3.5?cm，洗脫條件是0?mol/l、0.5?mol/l、1?mol/l和2?mol/l?nacl溶液。

19、進(jìn)一步的，所述步驟（7）中bio?gel?p4凝膠柱的長(zhǎng)度為100?cm，直徑為1.5?cm，洗脫條件是0.2?mol/l?nh4hco3溶液，流速為0.3?ml/min。

20、本發(fā)明還提供了所述的滸苔寡糖在制備改善糖尿病的藥物中的應(yīng)用。

21、進(jìn)一步的，所述糖尿病為2型糖尿病。

22、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖改善2型糖尿病功能的有效劑量為50?mg/kg-200?mg/kg。

23、最優(yōu)的，所述滸苔寡糖改善2型糖尿病功能的最佳有效劑量為150?mg/kg。

24、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖能夠明顯降低2型糖尿病小鼠的空腹血糖和血清胰島素水平、改善胰島素抵抗，有效控制2型糖尿病小鼠的血糖水平。

25、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖能夠通過(guò)降低2型糖尿病小鼠的血清糖蛋白水平、甘油三脂、總膽固醇、低密度脂蛋白，上調(diào)高密度脂蛋白含量來(lái)提高2型糖尿病小鼠的脂質(zhì)代謝能力。

26、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖能夠提高2型糖尿病小鼠肝臟中的肝糖原積累量，增強(qiáng)肝臟糖原合成能力。

27、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖能夠提高2型糖尿病小鼠的機(jī)體抗氧化能力，保護(hù)胰島β細(xì)胞功能。

28、進(jìn)一步的，所述滸苔寡糖能夠通過(guò)緩解2型糖尿病小鼠的胰島組織損傷，保護(hù)胰島的功能。

29、與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果和優(yōu)點(diǎn)在于：

30、本發(fā)明獲得的寡糖原料是綠藻滸苔，其來(lái)源豐富，使用安全。本發(fā)明利用滸苔制備的多糖ep屬于硫酸鼠李聚糖，ep單糖組成為鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸和少量木糖，百分比是57.9%、32.4%、5.1%、4.6%。ep中鼠李糖主要是由→3)-α-l-rha p-(1→和→4)-α-l-rha p-(1→組成，葡萄糖是由→4)-β-d-glc p-(1→和→6)-β-d-glc p-(1→組成，硫酸基團(tuán)主要位于→3)-α-l-rha p-(1→的c-4位以及→4)-α-l-rha p-(1→的c-3位。

31、本發(fā)明對(duì)滸苔寡糖eps的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行表征，并重點(diǎn)探究了eps改善小鼠2型糖尿病的活性作用和機(jī)制，其改善小鼠2型糖尿病的活性效果明顯，不僅能夠降低空腹血糖和血清胰島素水平，還能改善胰島素抵抗、提高脂質(zhì)代謝能力、保護(hù)胰島功能。經(jīng)本發(fā)明驗(yàn)證，滸苔寡糖eps可以作為一種緩解2型糖尿病的天然產(chǎn)物，通過(guò)提高2型糖尿病小鼠的機(jī)體抗氧化能力、減輕胰島組織損傷，保護(hù)胰島功能。所以，eps具有發(fā)展成為治療和改善2型糖尿病的藥物和功能食品的巨大潛力。