本發(fā)明涉及生物檢測和治療技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種抗clu抗體及應(yīng)用、制備方法和試劑盒。

背景技術(shù)：

簇集蛋白(clusterin，clu)是近年新發(fā)現(xiàn)的一種凋亡相關(guān)蛋白，分子量為50kd的糖蛋白，廣泛存在于人類及動物的許多組織中，在多種病理、生理過程(包括組織重構(gòu)、再生、脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、補(bǔ)體調(diào)節(jié)和凋亡等)中發(fā)揮重要作用。clu在正常的成熟組織中低表達(dá)，而選擇性地在某些惡性腫瘤中高表達(dá)。clu有2種主要亞型：分泌型clu和核型clu，功能分別為促凋亡和促生存。

在惡性腫瘤中，以clu為靶點(diǎn)的研究已逐步展開。研究結(jié)果表明(臧家蘭.clusterin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)與臨床特征關(guān)系的研究.中國腫瘤臨床，2007,34(15)：880-882)，clu在正常乳腺組織中不表達(dá)，在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況正相關(guān)，與er、pr負(fù)相關(guān)、與腫瘤的臨床分期和分化程度正相關(guān)(trougakosip.silencingexpressionoftheclusterin/apolipoproteinjgeneinhumancancercellsusingsmallinterferingrnainducesspontaneousapoptosis,reducedgrowthability,andcellsensitizationtogenotoxicandoxidativestress.cancerresearch.2004,64(5):1834-1842)。針對clusterin反義寡核苷酸治療可以提高乳腺癌細(xì)胞對部分化療藥物的治療敏感性(遲紹云.脂質(zhì)體介導(dǎo)clusterin反義寡核苷酸抑制胰腺癌細(xì)胞侵襲力及增強(qiáng)5-fu化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志.2012,28(2):173-176)，從而有望成為乳腺癌治療的新靶點(diǎn)。而clusterin和herceptin的聯(lián)合靶向治療(antisenseclusterinoligodeoxynucleotidesincreasetheresponseofher-2geneamplifiedbreastcancercellstotrastuzumab.journalofcellularphysiology.2005,204(2):463–469)，有望成為乳腺癌治療的方法。

另外，clusterin在膀胱癌(srsylvester.localizationofsulfatedglycoprotein-2(clusterin)onspermatozoaandinthereproductivetractofthemalerat.biologyofreproduction,1991,45(1):195)、非小細(xì)胞肺癌(左志通.簇集蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá).江蘇醫(yī)藥.2012,38(18):2146-2148)、宮頸癌(伊麗莎.clusterin和ki67在宮頸癌的表達(dá)及其臨床意義.中山大學(xué),2008)中均有表達(dá)，對其在腫瘤中的表達(dá)特性的研究，有助于為診斷、治療及預(yù)后判斷提供理論依據(jù)和應(yīng)用前景。

在心腦血管疾病中，clusterin具有多種生物學(xué)活性，包括保護(hù)細(xì)胞，調(diào)節(jié)補(bǔ)體系統(tǒng)，正常情況下表達(dá)量低，病理情況下表達(dá)量升高(jsabatte.semenclusterinisanoveldc-signligand.journalofimmunology,2011,187(10):5299-309；azoubeidi.smallheatshockproteinsincancertherapyandprognosis.internationaljournalofbiochemistry&cellbiology.2012,44(10):1646)。研究表明clu在腦梗死(徐艷.簇集蛋白在急性腦梗死中的表達(dá)及其臨床意義.重慶醫(yī)學(xué).2016,45(21):2942-2945)，腦出血等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中呈現(xiàn)高表達(dá)，且證實(shí)在以上神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，主要發(fā)揮神經(jīng)元保護(hù)作用。

基因在加工過程中會因降解掉而難以檢測，而核酸檢測方法必須經(jīng)過專門的核酸提取和純化過程，增加了額外的工作量。基于蛋白的免疫學(xué)分析方法，采用高度特異性的抗原抗體反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)樣本快速、準(zhǔn)確、高效的檢測，其技術(shù)關(guān)鍵是制備具有高度特異性的抗體

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種抗clu抗體，其可特異性結(jié)合clu蛋白，具有較高的特異性，可用于通過免疫印跡(westernblot)、酶聯(lián)免疫吸附(elisa)、免疫組織化學(xué)(ihc)以及流式細(xì)胞術(shù)(facs)等手段檢測樣品中的clu蛋白，也可以用于clu蛋白在腫瘤和炎癥組織或細(xì)胞中的定性、定量和定位檢測。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種抗clu的抗體片段，其具有與上述抗clu抗體等同的效果，可特異性結(jié)合clu蛋白，具有較高的特異性。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述抗clu抗體以及抗clu的抗體片段的在檢測和治療中的應(yīng)用。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述抗clu抗體的制備方法，所制得的抗clu抗體效價(jià)高，特異性好。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種檢測clu蛋白的試劑盒。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種抗clu抗體，其含有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.5所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.6所示。

一種抗clu的抗體片段，所述抗體片段是由上述的抗clu抗體的抗體片段形成的fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子或多特異性抗體。

上述的抗clu抗體或上述的抗clu的抗體片段在檢測生物樣品中clu蛋白中的應(yīng)用。

上述的抗clu抗體的制備方法，其包括：用氨基酸序列如seqidno.2中的第23-449位所示的抗原肽免疫動物。

一種檢測clu蛋白的試劑盒，其含有上述的抗clu抗體或上述的抗clu的抗體片段。

本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明提供的抗clu抗體，其含有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.5所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.6所示。該抗clu抗體可以特異性識別結(jié)合clu重組蛋白、以及表達(dá)clu分子的炎癥組織細(xì)胞或腫瘤組織細(xì)胞，具有較高的特異性以及親和力，可用于通過免疫印跡(westernblot)、酶聯(lián)免疫吸附(elisa)、免疫組織化學(xué)(ihc)以及流式細(xì)胞術(shù)(facs)等手段檢測樣品中的clu蛋白，也可以用于clu蛋白在腫瘤和炎癥組織或細(xì)胞中的定性、定量和定位檢測。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應(yīng)當(dāng)理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對范圍的限定，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關(guān)的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的clu重組蛋白純化結(jié)果；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例5提供的鼠單克隆抗體14b7對重組clu蛋白的免疫印跡檢測結(jié)果；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例6提供的鼠單克隆抗體14b7對a549(人肺癌細(xì)胞)細(xì)胞的免疫印跡檢測結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對本發(fā)明實(shí)施例的一種抗clu抗體及應(yīng)用、制備方法和試劑盒進(jìn)行具體說明。

本發(fā)明應(yīng)用生物信息學(xué)分析，來自于uniprot中p10909的蛋白序列，基因合成clu蛋白的23位到449位氨基酸對應(yīng)的核苷酸，優(yōu)化為大腸桿菌表達(dá)密碼子，克隆至表達(dá)載體質(zhì)粒pet30a(novagen公司)中，進(jìn)行低溫可溶表達(dá)，超聲破碎后，ni2+親和純化作為免疫原，免疫balb/c小鼠。經(jīng)細(xì)胞融合、重組clu的elisa篩選，并測定亞類為igg2a型單克隆抗體，陽性克隆細(xì)胞注射小鼠腹腔誘導(dǎo)產(chǎn)生腹水，經(jīng)過proteina/g親和純化，獲得高效分泌單克隆抗體的陽性雜交瘤細(xì)胞系，免疫印記(westernblot)實(shí)驗(yàn)顯示該抗體能特異識別重組的clu蛋白以及表達(dá)clu分子的腫瘤細(xì)胞系。

基于上述結(jié)果，一方面，本發(fā)明提供了抗clu抗體，其含有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.5所示，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.6所示。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述抗clu抗體由小鼠雜交瘤細(xì)胞系14b7分泌得到。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述小鼠雜交瘤細(xì)胞系14b7由抗原肽免疫小鼠得到的脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合得到，所述抗原肽的氨基酸序列如seqidno.2中的第23-449位所示。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，上述抗clu抗體為小鼠igg2a亞型單克隆抗體。

本發(fā)明提供的抗clu抗體可以特異性識別結(jié)合clu重組蛋白、以及表達(dá)clu分子的炎癥組織細(xì)胞或腫瘤組織細(xì)胞，具有較高的特異性以及親和力，可用于通過免疫印跡(westernblot)、酶聯(lián)免疫吸附(elisa)、免疫組織化學(xué)(ihc)以及流式細(xì)胞術(shù)(facs)等手段檢測樣品中的clu蛋白，也可以用于clu蛋白在腫瘤和炎癥組織或細(xì)胞中的定性、定量和定位檢測。

另一方面，本發(fā)明提供了一種抗clu的抗體片段，所述抗體片段是由上述的抗clu抗體的抗體片段形成的fab片段、fab'片段、f(ab')2片段、fv片段、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子或多特異性抗體。

另一方面，本發(fā)明提供了上述抗clu抗體或上述的抗clu的抗體片段在檢測生物樣品中clu蛋白中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，所述生物樣品為腫瘤組織或細(xì)胞；或者，所述生物樣品為炎癥組織或細(xì)胞。

另一方面，本發(fā)明提供了上述抗clu抗體的制備方法，其包括：用氨基酸序列如seqidno.2中的第23-449位所示的抗原肽免疫動物。

本發(fā)明通過生物信息學(xué)分析顯示clu的23-449位抗原性好，含有b細(xì)胞表位，以clu的29-290區(qū)為重組蛋白(抗原肽)免疫小鼠，制備鼠單克隆抗clu抗體，得到的抗clu抗體可以識別clu且具有較強(qiáng)的特異性。

當(dāng)然，需要說明的是，也可以選用其他動物例如兔、大鼠、豬等哺乳動物進(jìn)行免疫制備抗體。

進(jìn)一步地，本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，在免疫前，該制備方法還包括：將含有可編碼上述抗原的經(jīng)過密碼子優(yōu)化的核苷酸序列的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)表達(dá)純化得到重組蛋白，將該重組蛋白作為抗原肽(或稱免疫原)免疫動物。

其中，核苷酸序列如seqidno.1所示，其編碼得到的蛋白包括有clu分子的第23-449位片段蛋白，該核苷酸序列易于大腸桿菌可溶表達(dá)。

進(jìn)一步地，本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，在免疫后，該制備方法還包括：取免疫后的動物例如小鼠的脾臟細(xì)胞，將其與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得可分泌抗clu抗體的小鼠雜交瘤細(xì)胞系14b7，培養(yǎng)該雜交瘤細(xì)胞系14b7，獲得抗clu抗體。

另一方面，本發(fā)明提供了一種檢測clu蛋白的試劑盒，其含有上述的抗clu抗體或上述的抗clu的抗體片段。

本發(fā)明提供的試劑盒可通過免疫印跡(westernblot)、酶聯(lián)免疫吸附(elisa)、免疫組織化學(xué)(ihc)以及流式細(xì)胞術(shù)(facs)檢測樣品中clu蛋白情況，具有較好的特異性。

以下結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

clu重組蛋白表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建

clu單克隆按照編碼的p10909的蛋白序列，基因合成的方式合成clud蛋白(seqidno.2)第23位到449位氨基酸序列對應(yīng)的dna序列，優(yōu)化為大腸桿菌表達(dá)密碼子(seqidno.1)，引入酶切位點(diǎn)ecori和xhoi，克隆到表達(dá)載體pet30a(novagen公司)上，進(jìn)行測序分析，選取測序正確的克隆進(jìn)行蛋白表達(dá)純化。

實(shí)施例2

clu重組蛋白表達(dá)和純化

將含有clu正確序列的質(zhì)粒的大腸桿菌培養(yǎng)至od600為0.5，加入10μmol/l的iptg，16℃過夜培養(yǎng)，收菌后超聲破碎，進(jìn)行ni2⁺親和純化。并進(jìn)行12％sds-page檢測，考馬斯亮藍(lán)染色，結(jié)果如圖1所示，重組clu蛋白分子量約為50kda，

圖1結(jié)果(圖中：marker為分子量標(biāo)記)顯示在55kd的偏下的位置有條帶，說明本實(shí)施例得到clu重組蛋白表達(dá)正確。

實(shí)施例3

1.動物免疫

取7周齡雌性balb/c小鼠用實(shí)施例2中純化的重組蛋白進(jìn)行腹部皮下多位點(diǎn)免疫注射。初次免疫，使用弗氏完全佐劑，免疫劑量為100μg/只。每3周加強(qiáng)免疫一次，連續(xù)加強(qiáng)3次，使用弗氏不完全佐劑，免疫劑量為100μg/只。第四次免疫日開始眼眶采血，每周一次，連續(xù)采血4次，分離血清，采用間接elisa法進(jìn)行血清效價(jià)檢測。選取效價(jià)最高的小鼠進(jìn)行肌肉注射沖擊免疫，劑量為100μg/只。

2.細(xì)胞融合

在無菌條件下，取沖擊免疫3天以后的小鼠脾臟，于平皿中用注射器針芯研磨成細(xì)胞懸液后計(jì)數(shù)，細(xì)胞數(shù)為1×10⁸，同時(shí)制備腹腔懸液(巨噬細(xì)胞)作為飼養(yǎng)細(xì)胞備用。將以上脾臟細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞sp2/0(購自atcc)以10:1比例混合，離心1500rpm，5min，棄上清。在60s加入1ml的peg1500(sigma公司)，37℃靜置60s后，加入10ml的dmem(hyclone公司)，離心1000rpm，5min，棄上清。加入10ml血清(gibco公司)、5ml混合10×hat(gibco公司)的胸腺細(xì)胞和含有羧甲基纖維素(終濃度1.3％)的半固體培養(yǎng)基充分混勻，然后均勻的倒入細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入到濕盒中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3.單克隆細(xì)胞株鑒定

3.1elisa篩選

融合后10天克隆細(xì)胞團(tuán)清晰可見，將克隆團(tuán)置于事先準(zhǔn)備好含有15％血清培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3天后換液。2天后，取100μl上清，使用重組蛋白進(jìn)行間接elisa檢測抗原和抗體特異性反應(yīng)能力，并將陽性克隆轉(zhuǎn)入24孔板培養(yǎng)。3天后再次進(jìn)行間接elisa檢測，然后轉(zhuǎn)入6孔板進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

3.2亞類鑒定

根據(jù)亞類測定試劑(sigma公司)對間接elisa篩選出的陽性鼠單克隆細(xì)胞株進(jìn)行亞類測定。結(jié)果顯示，本發(fā)明的單克隆抗體為igg2a型鼠單克隆抗體，編號14b7，命名為小鼠雜交瘤細(xì)胞系14b7。使用凍存液(10％dmso、20％血清、70％dmem)進(jìn)行凍存。

4單克隆抗體的獲得

4.1細(xì)胞復(fù)蘇和擴(kuò)大培養(yǎng)

從液氮中取出14b7細(xì)胞凍存管，于37℃快速融解，1000rpm，5min離心去除凍存液，于37℃、5％co2培養(yǎng)至對數(shù)生長期，期間注意觀察細(xì)胞狀態(tài)。

4.2腹水制備

小鼠腹腔誘生腹水法：注射降植烷致敏小鼠，使用0.01mpbs洗滌并懸起對數(shù)生長期細(xì)胞，計(jì)數(shù)1×10⁶個(gè)細(xì)胞/ml，注射入腹腔。觀察小鼠狀態(tài)，8天后收集腹水。脊椎脫臼法處死腹部隆起的小鼠，用75％酒精浸泡消毒，用手術(shù)剪刀剪開腹部上皮，剪開腹膜，將注射器插入吸取腹水，3000rpm，10min離心，于-20℃保存。

4.3單克隆抗體的純化

用proteina/g(ge公司)親和層析法按說明書從腹水中純化抗體，得到鼠單克隆抗體14b7即抗clu抗體。sds-page膠考馬斯亮藍(lán)染色鑒定純度，bca法測定濃度。

實(shí)施例4

單克隆抗體可變區(qū)序列測定

1.總rna的獲取

從液氮中取出14b7雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞凍存管，于37℃快速融解，1000rpm，5min離心去除凍存液，置于100mm孔板，培養(yǎng)至占培養(yǎng)板約80％，加入1mltrizol試劑(thermo公司)，并依據(jù)說明書提取雜交瘤細(xì)胞總rna。

2.cdna第一鏈的獲取

取2.5μg上述總rna，加入decp水，使體積達(dá)到11μl，加入1.0μloligo(dt)(10μm)，加入1μldntps(10mm)，混合均勻，65℃孵育5分鐘后置冰上1分鐘，然后加入4μlrtbuffer(5×)，1.0μldtt(100mm)，1μlribonucleaseinhibitor及1μl逆轉(zhuǎn)錄酶(takara公司)，50℃反應(yīng)10min。80℃孵育10分鐘以終止反應(yīng)，獲得的cdna保存在-20℃。

3基因擴(kuò)增

取上述2μlcdna進(jìn)行pcr擴(kuò)增，5μl10×pcr緩沖液，1μldntps(10mm)，2μlmgso4(50mm)，1μl上游引物，1μl下游引物，0.2μltaqdna聚合酶，decp水定容至50μl。pcr擴(kuò)增程序?yàn)?4℃，5min；30個(gè)循環(huán)(94℃，30s；55℃，40s；68℃，40s)；72℃，10min。擴(kuò)增出的片段進(jìn)行測序。

其中，物序列的設(shè)計(jì)按照文獻(xiàn)(bodobrocks.species-crossreactivescfvagainstthetumorstromamarker“fibroblastactivationprotein”selectedbyphagedisplayfromanimmunizedfap-/-knock-outmouse)進(jìn)行。用于擴(kuò)增重鏈可變區(qū)的引物如表1所示，其中mhv.b1直至mhv.b12的12條引物為上游引物，可分別與重鏈下游引物mhc.f組合用于擴(kuò)增重鏈可變區(qū)基因。用于擴(kuò)增輕鏈可變區(qū)的引物如表1下，其中mkv.b1直至mkv.b10的10條引物為上游引物，可分別與輕鏈下游引物組合用于擴(kuò)增kappa輕鏈的可變區(qū)基因。

表1引物序列

測序結(jié)果顯示，鼠雜交瘤細(xì)胞株14b7分泌的單克隆抗體14b7的重鏈和輕鏈可變區(qū)的dna序列分別如seqidno.3和seqidno.4所示，其對應(yīng)的重鏈和輕鏈的可變區(qū)氨基酸序列分別如seqidno.5和seqidno.6所示。

實(shí)施例5

鼠單克隆抗體14b7對重組clu蛋白特異性反應(yīng)

選擇clu重組蛋白，用免疫印跡法檢測本發(fā)明實(shí)施例3的單克隆抗體的識別特異性，蛋白上樣5ng，進(jìn)行10％聚丙烯酰胺凝膠電泳，使用電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(濕轉(zhuǎn)，tanon公司)將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到0.45μm的pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于封閉液(含1％bsa的tbs-t)中4℃過夜。加入單克隆抗體14b7，室溫孵育1h。用tbs-t洗膜后，加入1：10000稀釋的羊抗鼠二抗(hrp標(biāo)記，北京全式金生物技術(shù)有限公司)，室溫孵育0.5h。tbs-t洗膜，加入ecl顯色液(thermo公司)，westernblot凝膠成像分析系統(tǒng)(tanon公司)采集圖像數(shù)據(jù)。

結(jié)果如圖2所示(圖中：marker為分子量標(biāo)記，14b7代表鼠單克隆抗體14b7)，鼠單克隆抗體14b7可特異性識別重組clu蛋白，分子量大小約為54kd的條帶，具有很高的特異性。

實(shí)施例6

鼠單克隆抗體14b7對表達(dá)clu蛋白的a549細(xì)胞系特異性反應(yīng)

選擇a549細(xì)胞系，用免疫印跡法檢測本發(fā)明的鼠單克隆抗體的識別特異性。蛋白上樣100μg，進(jìn)行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳，使用電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(濕轉(zhuǎn)，tanon公司)將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到0.22μm的pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于封閉液(含1％bsa的tbs-t)中4℃12h。加入單克隆抗體14b7，4℃孵育12h。用tbs-t洗膜后，加入1：10000稀釋的羊抗鼠二抗(hrp標(biāo)記，北京全式金生物技術(shù)有限公司)，室溫孵育1h。tbs-t洗膜，加入ecl顯色液(thermo公司)，westernblot凝膠成像分析系統(tǒng)(tanon公司)采集圖像數(shù)據(jù)。

結(jié)果圖3所示(圖中：marker為分子量標(biāo)記，14b7代表單克隆抗體14b7)，本發(fā)明提供的單克隆抗體14b7可特異性識別a549中分子量大小約為50kda的條帶，具有很高的特異性。

綜上，本發(fā)明提供的抗clu抗體(即上述的鼠單克隆抗體14b7)，其含有重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，其中，重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.5所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seqidno.6所示。該抗clu抗體可以特異性識別結(jié)合clu重組蛋白、以及表達(dá)clu分子的炎癥組織細(xì)胞或腫瘤組織細(xì)胞，具有較高的特異性以及親和力，可用于通過免疫印跡(westernblot)、酶聯(lián)免疫吸附(elisa)、免疫組織化學(xué)(ihc)以及流式細(xì)胞術(shù)(facs)等手段檢測樣品中的clu蛋白，也可以用于clu蛋白在腫瘤和炎癥組織或細(xì)胞中的定性、定量和定位檢測。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

序列表

<110>聯(lián)合益康（北京）生物科技有限公司

<120>一種抗clu抗體及應(yīng)用、制備方法和試劑盒

<160>6

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>1350

<212>dna

<213>人工序列

<400>1

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<212>prt

<213>人工序列

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195200205

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305310315320

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325330335

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340345350

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420425430

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435440445

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<210>3

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<213>人工序列

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atttcttgcaaatctagtcagagtcttaagacctacttacattggtacctcgagaagcca120

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<212>prt

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<212>prt

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100105