本發(fā)明涉及一種b-all患者預(yù)后風(fēng)險評估標(biāo)記物。
背景技術(shù)：
b系急性淋巴細胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,all)是成人最常見的all類型，危險分層和治療方式的進步顯著改善了患者的預(yù)后，但成人b-all復(fù)發(fā)率高，總體預(yù)后仍較差，長期生存僅為30％-40％。目前的危險度分層根據(jù)年齡，初診白細胞計數(shù)，染色體核型，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累以及對初始治療的反應(yīng)等將患者分為標(biāo)危和高危。但值得注意的是，標(biāo)?；颊咧腥杂胁糠只颊邚?fù)發(fā)，提示目前的危險度分層仍有待精準(zhǔn)化，因此新的預(yù)后相關(guān)分子標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)和驗證對于更精確的危險度分層十分必要，且可能提供治療靶點。
人類diaph1基因(ncbi編號：nm_001079812)位于5q31.3，編碼成蛋白mdia，屬于rho效應(yīng)蛋白，主要與肌動蛋白聚合作用、穩(wěn)定微管有關(guān)，從而影響細胞的形態(tài)以及黏附、遷移、分裂等功能，并參與疾病的發(fā)生發(fā)展。家系研究發(fā)現(xiàn)，人類diaph1純合失活突變與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)，包括小頭畸形、早發(fā)癲癇、視力障礙、智力障礙等。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種b-all患者預(yù)后風(fēng)險評估標(biāo)記物。
本發(fā)明提供了用于檢測diaph1基因的產(chǎn)品在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒的用途為如下(a1)-(a4)中的至少一種：
(a1)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后風(fēng)險評估；
(a2)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估；
(a3)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估；
(a4)b系急性淋巴細胞白血病分層診斷。
本發(fā)明還保護用于檢測diaph1基因突變的產(chǎn)品在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒的用途為如下(a1)-(a4)中的至少一種：
(a1)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后風(fēng)險評估；
(a2)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估；
(a3)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估；
(a4)b系急性淋巴細胞白血病分層診斷。
本發(fā)明還保護一種試劑盒，包括用于檢測diaph1基因的產(chǎn)品；所述試劑盒的用途為如下(a1)-(a4)中的至少一種：
(a1)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后風(fēng)險評估；
(a2)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估；
(a3)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估；
(a4)b系急性淋巴細胞白血病分層診斷。
本發(fā)明還保護一種試劑盒，包括用于檢測diaph1基因突變的產(chǎn)品；所述試劑盒的用途為如下(a1)-(a4)中的至少一種：
(a1)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后風(fēng)險評估；
(a2)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估；
(a3)b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估；
(a4)b系急性淋巴細胞白血病分層診斷。
本發(fā)明還保護diaph1基因作為靶標(biāo)在b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后風(fēng)險評估中的應(yīng)用。
本發(fā)明還保護diaph1基因作為靶標(biāo)在b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估中的應(yīng)用。
本發(fā)明還保護diaph1基因作為靶標(biāo)在b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估中的應(yīng)用。
本發(fā)明還保護一種b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后風(fēng)險評估方法，包括如下步驟：檢測待測患者單核細胞dna中diaph1基因突變情況，根據(jù)diaph1基因突變情況進行患者預(yù)后風(fēng)險評估。
所述方法中，如果待測患者單核細胞dna中diaph1基因發(fā)生突變，待測患者與diaph1基因未發(fā)生突變的患者相比，預(yù)后復(fù)發(fā)率高、無復(fù)發(fā)生存率低。
本發(fā)明還保護一種b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估方法，包括如下步驟：檢測待測患者單核細胞dna中diaph1基因突變情況，根據(jù)diaph1基因突變情況進行患者預(yù)后復(fù)發(fā)率評估。
所述方法中，如果待測患者單核細胞dna中diaph1基因發(fā)生突變，待測患者與diaph1基因未發(fā)生突變的患者相比，預(yù)后復(fù)發(fā)率高。
本發(fā)明還保護一種b系急性淋巴細胞白血病患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估方法，包括如下步驟：檢測待測患者單核細胞dna中diaph1基因突變情況，根據(jù)diaph1基因突變情況進行患者預(yù)后無復(fù)發(fā)生存率評估。
所述方法中，如果待測患者單核細胞dna中diaph1基因發(fā)生突變，待測患者與diaph1基因未發(fā)生突變的患者相比，無復(fù)發(fā)生存率低。
以上任一所述diaph1基因全長如序列表的序列1所示，diaph1基因編碼區(qū)序列如序列表的序列2所示，diaph1基因編碼的蛋白質(zhì)(diaph1蛋白)如序列表的序列3所示。
以上任一所述diaph1基因突變包括單核苷酸變異、小片段插入缺失和拷貝數(shù)變異。
以上任一所述diaph1基因突變具體可為如下(b1)-(b5)中的任一種：
(b1)編碼野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)第817位氨基酸殘基的密碼子由編碼s的密碼子突變?yōu)榫幋ap的密碼子；
(b2)編碼野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)第58位氨基酸殘基的密碼子由編碼a的密碼子突變?yōu)榫幋av的密碼子；
(b3)編碼野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)第658位氨基酸殘基的密碼子由編碼s的密碼子突變?yōu)榫幋ap的密碼子；
(b4)編碼野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)第725位氨基酸殘基的密碼子由編碼g的密碼子突變?yōu)榫幋ar的密碼子；
(b5)編碼野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)第749位氨基酸殘基的密碼子由編碼p的密碼子突變?yōu)榫幋as的密碼子；
以上任一所述diaph1基因突變具體可為如下(c1)-(c5)中的任一種：
(c1)與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第2449位核苷酸由t突變?yōu)閏；
(c2)與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第173位核苷酸由c突變?yōu)閠；
(c3)與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第1972位核苷酸由t突變?yōu)閏；
(c4)與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第2173位核苷酸由g突變?yōu)閍；
(c5)與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第2245位核苷酸由c突變?yōu)閠。
本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)diaph1基因突變是成人b-all患者累計復(fù)發(fā)率(cir)和無復(fù)發(fā)生存率(rfs)的獨立危險因素。本發(fā)明可能在b-all的分層診斷和預(yù)后評估中發(fā)揮重要作用。
附圖說明
圖1為患者累計復(fù)發(fā)率(cir)和無復(fù)發(fā)生存率(rfs)統(tǒng)計結(jié)果。
具體實施方式
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平均值。
完全緩解(cr)定義為骨髓原始淋巴細胞<5％，中性粒細胞>1.0×109/l，血細胞>100×109/l，無髓外復(fù)發(fā)，持續(xù)4周以上。
復(fù)發(fā)定義為完全緩解的患者出現(xiàn)骨髓原始細胞>5％或髓外白血病(參照文獻：j.c.alvarnas,p.a.brown,p.aoun,k.k.ballen,n.bellam,w.blum,etal.,acutelymphoblasticleukemia,j.natl.compr.canc.netw.jnccn10(2012)858–914.)。
diaph1基因全長如序列表的序列1所示，diaph1基因編碼區(qū)序列如序列表的序列2所示，diaph1基因編碼序列3所示的蛋白質(zhì)。
實施例1、diaph1基因突變與b-all患者預(yù)后風(fēng)險評估
一、研究對象
收集2007年4月至2015年12月北京大學(xué)人民醫(yī)院初診為b-all的226例患者作為研究組。入選標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥14歲；②符合b-all標(biāo)準(zhǔn)診斷(參照who關(guān)于前體b和t細胞腫瘤分類標(biāo)準(zhǔn))；③均為初診，未進行任何相關(guān)治療?；颊呋蚧颊弑O(jiān)護人(若患者年齡<18歲)均簽署知情同意書。本研究獲得北京大學(xué)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會批準(zhǔn)，遵循赫爾辛基宣言?；颊咔闆r觀察截止時間為2016年4月30日。
二、治療方案
所有患者接受誘導(dǎo)化療(共1-2個療程)，若患者達完全緩解，給予鞏固化療2療程；2療程鞏固化療后，根據(jù)患者意愿，部分患者再進行0-2個療程鞏固化療后行造血干細胞移植，其它未移植的患者繼續(xù)接受鞏固化療1-1.5年，后繼續(xù)進行維持化療至少1年。
226例患者中，共203例患者達到完全緩解。完全緩解的患者中，123例患者進行造血干細胞移植，80例患者未進行移植。
1個療程的誘導(dǎo)化療方案為：長春新堿1.5mg/m2/天，在治療第1、8、15和22天給予；柔紅霉素45mg/m2/天，在治療第1-3天和第15-17天給予；環(huán)磷酰胺800mg/m2/天，在治療第1天和第15天給予；潑尼松60mg/m2/天，在治療第1-19天給予；左旋門冬酰胺酶10,000u/m2/天，在治療第19-28天給予。
1個療程的鞏固化療方案為：甲氨蝶呤1g/m2/天，在治療第1天給予；阿糖胞苷6g/m2/天，在治療第2-7天給予；環(huán)磷酰胺600mg/m2/天，在治療第1-3天給予；柔紅霉素50mg/m2/天，在治療第4-5天給予；長春新堿2mg/m2/天，在治療第4天給予；地塞米松40mg/天，在治療第1-4天和第11-14天給予；甲氨蝶呤和左旋門冬酰胺酶(甲氨蝶呤1g/m2/天，在治療第1天給予；左旋門冬酰胺酶10,000u/m2/天，在治療第2-8天給予)或cam(環(huán)磷酰胺800mg/m2/天，在治療第1天給予；阿糖胞苷100/m2/天，在治療第1-7天給予；6-巰基嘌呤75mg/m2/天，在治療第1-7天給予；)交替使用。
維持化療方案為：6-巰基嘌呤50mg/m2/天，每天1次；甲氨蝶呤mtx20mg/m2/天，每周1次。
中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病預(yù)防：患者在誘導(dǎo)和鞏固化療期間接受8-10次三聯(lián)藥物(甲氨蝶呤、阿糖胞苷和地塞米松)鞘內(nèi)注射(參照文獻：yanch,jiangq,wangj,xulp,liudh,jiangh,chenh,zhangxh,liuky,huangxj.superiorsurvivalofunmanipulatedhaploidenticalhematopoieticstemcelltransplantationcomparedwithchemotherapyaloneusedaspost-remissiontherapyinadultswithstandard-riskacutelymphoblasticleukemiainfirstcompleteremission.biolbloodmarrowtransplant.2014sep；20(9):1314-21.)。
123例(54％)患者接受異基因造血干細胞移植，34例(28％)hla全相合，87例(71％)hla半相合(1個hla抗原不合4例，2個hla抗原不合20例，3個hla抗原不合63例),1例(1％)非血緣hla全相合，1例(1％)自體移植。hla全合移植患者及自體移植患者，預(yù)處理方案包括：阿糖胞苷(ara-c)，環(huán)磷酰胺(ctx)，白舒菲(bu)以及甲環(huán)己亞硝脲(meccnu)。對hla不合/單倍體移植患者或非血緣hla全相合移植患者，預(yù)處理方案加用抗人胸腺球蛋白(atg)。所有供者均接受rhg-csf5μg/(kg·d)，連續(xù)皮下注射5-6天。第4天采集骨髓，有核細胞要求達3-4×108/kg；第5-6天應(yīng)用cobe血細胞分離機采集外周血干細胞，循環(huán)總量約10l，總單個核細胞達3-4×108/kg；非血緣供者不采集骨髓，第5-6天應(yīng)用cobe血細胞分離機采集外周血干細胞，循環(huán)總量約10l，總單個核細胞達6-8×108/kg。所有采集物根據(jù)供受者abo血型相合程度進行必要的去紅和/或去漿處理后立即回輸給患者。移植物抗宿主病預(yù)防采用環(huán)孢素，驍悉和短程環(huán)磷酰胺聯(lián)合方案(參照文獻：huangxj,liudh,liuky,xulp,chenh,hanw,chenyh,zhangxh,ludp.treatmentofacuteleukemiawithunmanipulatedhla-mismatched/haploidenticalbloodandbonemarrowtransplantation.biolbloodmarrowtransplant.2009feb；15(2):257-65.)。
三、測序研究方案
1、標(biāo)本采集
226例患者均在初診時進行標(biāo)本采集，其中203例完全緩解的患者均在首次完全緩解時再次進行標(biāo)本采集。采集方法為：采集患者骨髓4ml，加入edta抗凝，應(yīng)用密度梯度離心法提取單個核細胞。采用美國invitrogen公司dnazol提取單個核細胞總dna。
2、對步驟1得到的樣本進行測序分析，具體如下：
(1)配對樣本：從203例完全緩解患者的樣本中，隨機抽取104對樣本(初診期+完全緩解期)，其中8對樣本進行全基因組測序(wgs)測序分析，13對樣本進行全外顯子組測序(wes)分析，88對樣本進行目標(biāo)靶區(qū)測序(trs)分析。這其中，5對樣本同時做了wes和trs用于驗證。
(2)僅初診樣本：226例中的其余患者初診期樣本(共122例樣本)僅進行目標(biāo)靶區(qū)測序(trs)分析。
全基因組測序(wgs)：取總量0.5μg以上的dna樣品建庫。利用covaris破碎儀將基因組dna隨機打斷成長度為350bp的片段，經(jīng)末端修復(fù)、磷酸化以及加a尾后，片段兩端分別連接接頭，制備成dna文庫。文庫構(gòu)建完成后，利用美國bcekman公司的ampurexpsystem進行純化，隨后使用agilent2100對文庫的insertsize進行檢測，insertsize符合預(yù)期后，使用q-pcr方法對文庫的有效濃度(3nmol/l)進行準(zhǔn)確定量，以保證文庫質(zhì)量。利用美國hiseqxpecluster試劑盒聚集樣本，然后進行illuminahiseqpe150測序。
全外顯子組測序(wes)和目標(biāo)靶區(qū)測序(trs)：取總量0.6μg以上的dna樣品建庫。wes測序文庫通過美國agilent公司的agilentsureselecthumanallexon試劑盒構(gòu)建，trs由agilentsureselecthumancustomdesignpanel(310個基因，表1)構(gòu)建。樣本由美國covaris公司hydrodynamicshearingsystem生成180-280bp的片段。經(jīng)末端修復(fù)、加a尾和連接接頭后進行pcr。然后利用生物素標(biāo)記的探針進行雜交，用鏈霉素磁珠捕獲外顯子組區(qū)域。對捕獲的區(qū)域加上標(biāo)簽后進行測序。產(chǎn)物純化、庫檢、聚集及測序同wgs。
表1設(shè)計面板的310個基因
測序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制：高通量測序得到的原始圖像數(shù)據(jù)經(jīng)堿基識別分析轉(zhuǎn)化為原始測序序列，結(jié)果以fastq文件格式存儲，其中包含測序序列的序列信息以及其對應(yīng)的測序質(zhì)量信息。測序得到的原始數(shù)據(jù)中會有少量序列包含接頭信息、低質(zhì)量堿基或未檢出的堿基，對后續(xù)信息分析造成很大干擾。為了保證信息分析質(zhì)量，必須對原始數(shù)據(jù)進行精細過濾，得到無污染的序列用于后續(xù)分析。數(shù)據(jù)過濾主要包括成對去除以下三種情況的序列：1)、含有接頭序列的序列；2)、單端序列中n(n表示無法確定堿基信息)的堿基個數(shù)超過該條序列堿基總數(shù)的10％的序列；3)、單端序列中低質(zhì)量(質(zhì)量值低于5)堿基數(shù)超過該條序列長度比例的50％的序列。
序列比對及加工：有效測序數(shù)據(jù)通過bwa軟件(參照文獻：lih,durbinr.fastandaccurateshortreadalignmentwithburrows-wheelertransform[j].bioinformatics,2009,25(14):1754-1760.)比對到參考基因組，得到bam格式的最初的比對結(jié)果。利用samtools(參照文獻：lih,handsakerb,wysokera,etal.thesequencealignment/mapformatandsamtools[j].bioinformatics,2009,25(16):2078-2079.)、picard(http://broadinstitute.github.io/picard/)和gatk軟件(參照文獻：depristoma,bankse,poplinr,etal.aframeworkforvariationdiscoveryandgenotypingusingnext-generationdnasequencingdata[j].natgenet,2011,43(5):491-498.)整理bam文件，并進行標(biāo)記重復(fù)、局部重新排列、堿基質(zhì)量再校準(zhǔn)等處理，從而得到bam格式的最終比對結(jié)果。利用比對到基因組上的有效數(shù)據(jù)進行測序覆蓋度和深度的統(tǒng)計(表2)。
表2測序深度和覆蓋度統(tǒng)計
3、將步驟2得到的結(jié)果進行分析
(1)配對樣本分析：利用mutect軟件(參照文獻：cibulskisk,lawrencems,cartersl,etal.sensitivedetectionofsomaticpointmutationsinimpureandheterogeneouscancersamples[j].natbiotechnol,2013,31(3):213-219.)檢測單核苷酸變異(snvs)。strelka軟件檢測插入缺失(indels)(參照文獻：saundersct,wongws,swamys,etal.strelka:accuratesomaticsmall-variantcallingfromsequencedtumor-normalsamplepairs[j].bioinformatics,2012,28(14):1811-1817.)。control-freec軟件檢測拷貝數(shù)變異(參照文獻：boevav,popovat,bleakleyk,etal.control-freec:atoolforassessingcopynumberandalleliccontentusingnext-generationsequencingdata[j].bioinformatics,2012,28(3):423-425.)。annovar軟件(參照文獻：wangk,lim,hakonarsonh.annovar:functionalannotationofgeneticvariantsfromhigh-throughputsequencingdata[j].nucleicacidsres,2010,38(16):e164.)對檢測的體細胞突變進行注釋。利用千人基因組數(shù)據(jù)庫(參照文獻：abecasisgr,autona,brooksld,etal.anintegratedmapofgeneticvariationfrom1,092humangenomes[j].nature,2012,491(7422):56-65.)或exac數(shù)據(jù)庫(參照文獻：lekm,karczewskikj,minikelev,etal.analysisofprotein-codinggeneticvariationin60,706humans[j].nature,2016,536(7616):285-291.)過濾掉人群中頻率大于0.01的變異位點，去除個體間多樣性位點，保留頻率低于0.01的變異位點。music軟件(參照文獻：deesnd,zhangq,kandothc,etal.music:identifyingmutationalsignificanceincancergenomes[j].genomeres,2012,22(8):1589-1598.)用于檢測高頻突變基因，gistic軟件(beroukhimr,getzg,nghiemphul,etal.assessingthesignificanceofchromosomalaberrationsincancer:methodologyandapplicationtoglioma[j].procnatlacadsciusa,2007,104(50):20007-20012.)。
(2)僅初診樣本分析：利用samtools檢測單核苷酸多態(tài)性，再通過以下步驟進行snvs過濾：1)、比對千人基因組數(shù)據(jù)庫或exac數(shù)據(jù)庫，過濾掉人群中頻率大于0.01的變異位點；2)、過濾掉在構(gòu)建的88例正常人群trs數(shù)據(jù)庫中的多態(tài)性位點。
88例正常人群trs數(shù)據(jù)庫為步驟2中88對用于目標(biāo)靶區(qū)測序(trs)分析的配對樣本中的緩解期樣本數(shù)據(jù)組成的數(shù)據(jù)庫。
采用spss19.0，graphadprism5.0和r統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。運用kaplan-meier法計算生存率，log-rank檢驗進行生存分析，建立cox比例風(fēng)險回歸模型對diaph1基因突變情況及其他可能影響預(yù)后的因素進行多因素分析，研究diaph1基因突變對累積復(fù)發(fā)率(cir)和無復(fù)發(fā)生存率(rfs)等預(yù)后指標(biāo)的影響。p>0.1變量從模型中去除，以p<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
四、研究結(jié)果
高頻基因突變顯示，在226例患者中，共有diaph1突變(均為點突變)陽性患者8例，占4％，為首次在成人b-all報道的高頻突變基因。
8例diaph1突變陽性患者具體突變情況如下：
3例：與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第2449位核苷酸由t突變?yōu)閏，與野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)的區(qū)別在于：第817位氨基酸由s突變?yōu)閜；
2例：與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第173位核苷酸由c突變?yōu)閠，與野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)的區(qū)別在于：第58位氨基酸由a突變?yōu)関；
1例：與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第1972位核苷酸由t突變?yōu)閏，與野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)的區(qū)別在于：第658位氨基酸由s突變?yōu)閜；
1例：與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第2173位核苷酸由g突變?yōu)閍，與野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)的區(qū)別在于：第725位氨基酸由g突變?yōu)閞；
1例：與野生型diaph1基因的編碼區(qū)(序列表的序列2)的區(qū)別在于：第2245位核苷酸由c突變?yōu)閠，與野生型diaph1蛋白(序列表的序列3)的區(qū)別在于：第749位氨基酸由p突變?yōu)閟。
把獲得完全緩解的患者納入生存分析。總共203例患者獲得完全緩解，其中diaph1突變陽性患者7例。臨床資料提示，7例diaph1突變陽性患者均出現(xiàn)復(fù)發(fā)，其中接受移植患者2例，截至隨訪終點仍然存活；未接受移植患者5例，4例死亡。diaph1野生型患者復(fù)發(fā)65例，其中接受移植患者121例，截至隨訪時間存活99例；未接受移植患者75例，19例死亡。
單因素分析提示，diaph1突變型患者5年cir為100％，5年rfs為0％；diaph1野生型患者5年cir為47％，5年rfs為50％。diaph1突變型患者5年cir更高(100％，95％可信區(qū)間[59，100％]vs.47％，95％可信區(qū)間[40，54％]；p＝<0.001)以及更差的5年rfs(0，95％可信區(qū)間[0,41％]vs.50％，95％可信區(qū)間[43,57％]；p＝<0.001)(圖1)。
納入diaph1突變、年齡(按照年齡對患者進行分組，分為大于等于35歲或小于35歲)、性別、mrd、白細胞計數(shù)(按照初診時白細胞計數(shù)對患者進行分組，分為大于等于30×109/l或小于30×109/l)、ikzf1缺失、bcr-abl1、mll重排和治療方式(是否移植)預(yù)后相關(guān)因素，多因素分析顯示，diaph1突變是cir(hr＝4.3[1.7,11.0]；p＝0.002)和rfs(hr＝4.1[1.8,9.2]；p＝0.001)的獨立危險因素。其他因素中，造血干細胞移植是cir(hr＝0.2[0.1-0.4]；p<0.001)和rfs(hr＝0.2[0.1-0.4]；p<0.001)的保護性因素，mll重排是cir(hr＝5.3[2.8-10.3]；p<0.001)和rfs(hr＝5.2[2.2-12.2]；p<0.001)的獨立危險因素(表3)。而年齡、性別、mrd、白細胞計數(shù)、ikzf1缺失、bcr-abl1等因素對預(yù)后無影響。
表3203例患者cir和rfs多因素分析
結(jié)果表明，diaph1基因突變是成人b-all患者cir和rfs的獨立危險因素。本發(fā)明可能在b-all的分層診斷和預(yù)后評估中發(fā)揮重要作用。
sequencelisting
<110>北京大學(xué)人民醫(yī)院
<120>一種b-all患者預(yù)后風(fēng)險評估標(biāo)記物
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