本發(fā)明涉及濕法冶金領(lǐng)域，更具體的是涉及一種純度為100％的羊肚菌母種的制作方法。

背景技術(shù)：

羊肚菌是一種珍稀食用菌品種,因其菌蓋表面凹凸不平、狀如羊肚而得名。羊肚菌(morchella)，又名草笠竹，是一種珍貴的食用菌和藥用菌。羊肚菌于1818年被發(fā)現(xiàn)。用于食積氣滯、脘腹脹滿、痰壅氣逆喘咳。羊肚菌又稱羊肚菜、羊蘑。其結(jié)構(gòu)與盤菌相似，上部呈褶皺網(wǎng)狀，既像個(gè)蜂巢，也像個(gè)羊肚，因而得名。羊肚菌在山火之后的兩至三年內(nèi)產(chǎn)量特高，因此北美的采摘者會(huì)根據(jù)山火來采集羊肚菌。然而，當(dāng)火災(zāi)被控制后，在同一個(gè)地區(qū)內(nèi)，它的生長數(shù)量會(huì)年復(fù)一年地減少。

目前已開始仿生馴化栽培。羊肚菌母種的生產(chǎn)制作是仿生馴化栽培的第一步，也是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。羊肚菌母種的制作是整個(gè)仿生馴化栽培生產(chǎn)過程中最重要的環(huán)節(jié)，也是基礎(chǔ)中的基礎(chǔ)；由于在羊肚菌母種的制作過程中，提純前并不能確定培養(yǎng)皿中的菌絲是羊肚菌菌絲，也不能確定是否只有羊肚菌菌絲體一種物質(zhì)存在，所以傳統(tǒng)方法不能保證提純后的羊肚菌母種的純度，但是母種的純度直接關(guān)系到接下來的種植能否成功。

因此尋找到一種制作度純度為100％羊肚菌母種的方法尤為重要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于：為了解決現(xiàn)有羊肚菌母種制純度低的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種純度為100％的羊肚菌母種的制作方法。

本發(fā)明為了實(shí)現(xiàn)上述目的具體采用以下技術(shù)方案：

一種純度為100％的羊肚菌母種的制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

1、培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：

a:把空白培養(yǎng)皿高壓滅菌后放入超凈工作臺備用；

b：把母種培養(yǎng)基高壓滅菌，滅好菌后放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌，5分鐘后，關(guān)閉紫外線燈；

c：打開超凈工作臺送風(fēng)模式，在超凈工作臺里快速把經(jīng)過步驟b的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基分裝到經(jīng)過步驟a中的每一個(gè)空白培養(yǎng)皿里；

2、羊肚菌子實(shí)體的準(zhǔn)備：把準(zhǔn)備好的羊肚菌新鮮子實(shí)體放入超凈工作臺，紫外線殺菌20～30分鐘后，關(guān)閉紫外線燈，后續(xù)步驟待用；

3、培養(yǎng)：開啟超凈工作臺其它工作模式，用手術(shù)刀取經(jīng)過步驟2的羊肚菌菌柄內(nèi)側(cè)的綠豆粒大小的子實(shí)體塊，再把子實(shí)體塊放入經(jīng)過步驟1中的培養(yǎng)皿的中心位置的培養(yǎng)基中，然后蓋上培養(yǎng)皿的蓋子用封口膜把培養(yǎng)皿的邊緣封好口，在放入生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)3～4天，溫控制在12℃～18℃，子實(shí)體塊四周長出菌絲體；

4、菌絲觀察：步驟3中得到的菌絲體用接種針挑取一些放到事先準(zhǔn)備好的蓋玻片上，并加少量無菌水滴在菌絲體上，并用載玻片壓實(shí)菌絲體后拿到顯微鏡下，確認(rèn)是羊肚菌的菌絲體，整個(gè)過程要在超凈工作臺其它工作模式開啟下進(jìn)行；

5、菌絲體提純：經(jīng)過步驟4觀察后，沒有其它雜菌菌絲和雜菌孢子后再進(jìn)行提純工作，把高壓滅菌好并且凝固的斜面試管培養(yǎng)基放入超凈工作臺，把培養(yǎng)好的菌絲體放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌30分鐘后關(guān)閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養(yǎng)皿中從子實(shí)體四周長出的菌絲接入凝固試管培養(yǎng)基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴(yán)后放人生化培養(yǎng)箱15℃～18℃下培養(yǎng)，7天后試管內(nèi)的菌絲體長滿后，得到羊肚菌母種。

進(jìn)一步地，步驟1中的步驟c中，分裝到培養(yǎng)皿里的培養(yǎng)基的厚度為1.5mm～4mm。

進(jìn)一步地，步驟4中顯微鏡選用10倍物鏡觀察菌絲體。

本發(fā)明的有益效果如下：

1、本發(fā)明的過程簡單，傳統(tǒng)的羊肚菌菌種培養(yǎng)時(shí)，由于提純前并不能確定培養(yǎng)皿中的菌絲是羊肚菌菌絲，也不能確定是否只有羊肚菌菌絲體一種物質(zhì)存在，所以傳統(tǒng)方法不能保證提純后的羊肚菌母種的純度，本發(fā)明在提純前進(jìn)行了菌絲的切片在顯微鏡下觀察，在保證沒有其它雜菌菌絲和雜菌孢子后再進(jìn)行提純工作，保證了羊肚菌菌種培養(yǎng)100％的純度。

2、增加顯微鏡切片觀察這一步，并不是一個(gè)抽樣調(diào)查，我們會(huì)對每一個(gè)培養(yǎng)皿中還沒做菌絲提純工作的菌絲體先在顯微鏡下觀察，觀察后再?zèng)Q定是否還需要進(jìn)行接下來的提純工作減少了工作的盲目性，減少了技術(shù)員的工作量，減少了有問題的菌種流入市場的可能性。

具體實(shí)施方式

為了本技術(shù)領(lǐng)域的人員更好的理解本發(fā)明，以下實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供

一種純度為100％的羊肚菌母種的制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

1、培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：

a:把8個(gè)為一組的空白培養(yǎng)皿高壓滅菌后放入超凈工作臺備用；

b：把玻璃容器里的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基高壓滅菌，滅好菌后放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌，5分鐘后，關(guān)閉紫外線燈；

c：打開超凈工作臺送風(fēng)模式，在超凈工作臺里快速把經(jīng)過步驟b的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基分裝到經(jīng)過步驟a中的每一個(gè)空白培養(yǎng)皿里，分裝到培養(yǎng)皿里的培養(yǎng)基的厚度為4mm；

2、羊肚菌子實(shí)體的準(zhǔn)備：把準(zhǔn)備好的羊肚菌新鮮子實(shí)體放入超凈工作臺，紫外線殺菌30分鐘后，關(guān)閉紫外線燈，后續(xù)步驟待用；

3、培養(yǎng)：開啟超凈工作臺其它工作模式，用手術(shù)刀取經(jīng)過步驟2的羊肚菌菌柄內(nèi)側(cè)的綠豆粒大小的子實(shí)體塊，再把子實(shí)體塊放入經(jīng)過步驟1中的培養(yǎng)皿的中心位置的培養(yǎng)基中，然后蓋上培養(yǎng)皿的蓋子用封口膜把培養(yǎng)皿的邊緣封好口，在放入生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)4天，溫控制在18℃，子實(shí)體塊四周長出菌絲體；

4、菌絲觀察：步驟3中得到的菌絲體用接種針挑取一些放到事先準(zhǔn)備好的蓋玻片上，并加少量無菌水滴在菌絲體上，并用載玻片壓實(shí)菌絲體后拿到顯微鏡下，用10倍物鏡觀察，確認(rèn)是羊肚菌的菌絲體，整個(gè)過程要在超凈工作臺其它工作模式開啟下進(jìn)行；

5、菌絲體提純：經(jīng)過步驟4觀察后，沒有其它雜菌菌絲和雜菌孢子后再進(jìn)行提純工作，把高壓滅菌好并且凝固的斜面試管培養(yǎng)基放入超凈工作臺，把培養(yǎng)好的菌絲體放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌30分鐘后關(guān)閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養(yǎng)皿中從子實(shí)體四周長出的菌絲接入凝固試管培養(yǎng)基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴(yán)后放人生化培養(yǎng)箱18℃下培養(yǎng)，7天后試管內(nèi)的菌絲體長滿后，從而得到100％的羊肚菌母種。

實(shí)施例2

一種純度為100％的羊肚菌母種的制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

1、培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：

a:把8個(gè)為一組的空白培養(yǎng)皿高壓滅菌后放入超凈工作臺備用；

b：把玻璃容器里的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基高壓滅菌，滅好菌后放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌，4分鐘后，關(guān)閉紫外線燈；

c：打開超凈工作臺送風(fēng)模式，在超凈工作臺里快速把經(jīng)過步驟b的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基分裝到經(jīng)過步驟a中的每一個(gè)空白培養(yǎng)皿里，分裝到培養(yǎng)皿里的培養(yǎng)基的厚度為1.5mm；

2、羊肚菌子實(shí)體的準(zhǔn)備：把準(zhǔn)備好的羊肚菌新鮮子實(shí)體放入超凈工作臺，紫外線殺菌20分鐘后，關(guān)閉紫外線燈，后續(xù)步驟待用；

3、培養(yǎng)：開啟超凈工作臺其它工作模式，用手術(shù)刀取經(jīng)過步驟2的羊肚菌菌柄內(nèi)側(cè)的綠豆粒大小的子實(shí)體塊，再把子實(shí)體塊放入經(jīng)過步驟1中的培養(yǎng)皿的中心位置的培養(yǎng)基中，然后蓋上培養(yǎng)皿的蓋子用封口膜把培養(yǎng)皿的邊緣封好口，在放入生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)3天，溫控制在12℃，子實(shí)體塊四周長出菌絲體；

4、菌絲觀察：步驟3中得到的菌絲體用接種針挑取一些放到事先準(zhǔn)備好的蓋玻片上，并加少量無菌水滴在菌絲體上，并用載玻片壓實(shí)菌絲體后拿到顯微鏡下，用10倍物鏡觀察，確認(rèn)是羊肚菌的菌絲體，整個(gè)過程要在超凈工作臺其它工作模式開啟下進(jìn)行；

5、菌絲體提純：經(jīng)過步驟4觀察后，沒有其它雜菌菌絲和雜菌孢子后再進(jìn)行提純工作，把高壓滅菌好并且凝固的斜面試管培養(yǎng)基放入超凈工作臺，把培養(yǎng)好的菌絲體放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌20分鐘后關(guān)閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養(yǎng)皿中從子實(shí)體四周長出的菌絲接入凝固試管培養(yǎng)基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴(yán)后放人生化培養(yǎng)箱15℃下培養(yǎng)，7天后試管內(nèi)的菌絲體長滿后，從而得到100％的羊肚菌母種。

實(shí)施例3

一種純度為100％的羊肚菌母種的制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

1、培養(yǎng)基的準(zhǔn)備：

a:把8個(gè)為一組的空白培養(yǎng)皿高壓滅菌后放入超凈工作臺備用；

b：把玻璃容器里的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基高壓滅菌，滅好菌后放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌，4.5分鐘后，關(guān)閉紫外線燈；

c：打開超凈工作臺送風(fēng)模式，在超凈工作臺里快速把經(jīng)過步驟b的液體狀態(tài)的母種培養(yǎng)基分裝到經(jīng)過步驟a中的每一個(gè)空白培養(yǎng)皿里，分裝到培養(yǎng)皿里的培養(yǎng)基的厚度為3.2mm；

2、羊肚菌子實(shí)體的準(zhǔn)備：把準(zhǔn)備好的羊肚菌新鮮子實(shí)體放入超凈工作臺，紫外線殺菌25分鐘后，關(guān)閉紫外線燈，后續(xù)步驟待用；

3、培養(yǎng)：開啟超凈工作臺其它工作模式，用手術(shù)刀取經(jīng)過步驟2的羊肚菌菌柄內(nèi)側(cè)的綠豆粒大小的子實(shí)體塊，再把子實(shí)體塊放入經(jīng)過步驟1中的培養(yǎng)皿的中心位置的培養(yǎng)基中，然后蓋上培養(yǎng)皿的蓋子用封口膜把培養(yǎng)皿的邊緣封好口，在放入生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)3.5天，溫控制在15℃，子實(shí)體塊四周長出菌絲體；

4、菌絲觀察：步驟3中得到的菌絲體用接種針挑取一些放到事先準(zhǔn)備好的蓋玻片上，并加少量無菌水滴在菌絲體上，并用載玻片壓實(shí)菌絲體后拿到顯微鏡下，用10倍物鏡觀察，確認(rèn)是羊肚菌的菌絲體，整個(gè)過程要在超凈工作臺其它工作模式開啟下進(jìn)行；

5、菌絲體提純：經(jīng)過步驟4觀察后，沒有其它雜菌菌絲和雜菌孢子后再進(jìn)行提純工作，把高壓滅菌好并且凝固的斜面試管培養(yǎng)基放入超凈工作臺，把培養(yǎng)好的菌絲體放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌25分鐘后關(guān)閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養(yǎng)皿中從子實(shí)體四周長出的菌絲接入凝固試管培養(yǎng)基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴(yán)后放人生化培養(yǎng)箱16℃下培養(yǎng)，7天后試管內(nèi)的菌絲體長滿后，從而得到100％的羊肚菌母種。

以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，本發(fā)明的專利保護(hù)范圍以權(quán)利要求書為準(zhǔn)，凡是運(yùn)用本發(fā)明的說明書的內(nèi)容所作的等同結(jié)構(gòu)變化，同理均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。