本發(fā)明涉及一種提取活性蛋白和寬纓酮的方法，具體涉及一種從東革阿里中提取活性蛋白和寬纓酮的方法。
背景技術(shù)：
東革阿里為苦木科東革阿里屬植物，別名馬來西亞人參、鄉(xiāng)土人參及天然偉哥等。東革阿里是生長在靠近赤道的原始熱帶雨林中潮濕砂質(zhì)土壤里的一種灌木，主要分布在馬來西亞、印度尼西亞等東南亞地區(qū)，成熟期一般5年以上。常以根入藥，與燕窩、錫器一起并稱馬來西亞三大國寶。傳統(tǒng)上，在馬來西亞東革阿里常作為催情藥、滋補藥、退熱藥及中毒或蛇毒解藥，具有顯著的功效。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，東革阿里提取物活性成分具有顯著的藥理作用，主要有以下功能：改善性功能：能促進(jìn)人體自身分泌睪丸酮，最高可提高睪丸酮440%，從而彌補了人體隨著年齡增長睪丸酮水平下降的問題；抗癌活性：研究發(fā)現(xiàn)寬纓酮能通過抑制肺癌細(xì)胞抑制素蛋白、膜連蛋白和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白28這3種蛋白的表達(dá)從而達(dá)到抗癌效果；抗瘧疾、抗氧化及抗風(fēng)濕；提高人體免于能力，抗疲勞、抗抑郁；降血糖、治療痛風(fēng)、治療骨質(zhì)疏松等。
東革阿里的化學(xué)活性成分主要有萜類、生物堿、揮發(fā)油及其它，其中主要的一種活性成分為寬纓酮，其分子式：c20h24o9，分子量408.4，密度：1.63g/cm3，沸點：669.5℃，閃電：239.9℃，折射率：1.684，屬于甾酮，其結(jié)構(gòu)式如下：
東革阿里中還含有豐富的水溶性蛋白，含量約0.03～0.10%，此類水溶性蛋白具有顯著的功效，能增強人體機(jī)能，提高人體免疫力。而有關(guān)文獻(xiàn)對寬纓酮的提取報道較多，對此類水溶性蛋白的提取報道較少，在生產(chǎn)寬纓酮過程中，都是將這些水溶性蛋白當(dāng)作廢料排掉，不僅污染環(huán)境，也浪費資源。
而東革阿里中寬纓酮的提取方式主要有溶劑浸提、連續(xù)逆流提取、超臨界流體輔助提取、超聲波輔助提取、微波輔助提取等。溶劑浸提法是最廣泛使用的一種方法，操作簡單，設(shè)備投入小，但缺點是東革阿里中寬纓酮的提取率較低，提取雜質(zhì)較多，不利于連續(xù)化生產(chǎn)；連續(xù)逆流提取具有連續(xù)化生產(chǎn)，提取率高的優(yōu)點，但缺點是大部分只適合水為溶劑提取，不適用有機(jī)溶劑提取，而且溫度控制穩(wěn)定性差；而超臨界流體、超聲波或微波輔助提取的優(yōu)點均是提取成本較低，提取率較高，但都存在設(shè)備前期投入較大，設(shè)備操作復(fù)雜的缺點。
目前，寬纓酮的純化方法主要有溶劑萃取結(jié)晶法、柱層析法、膜分離、半仿生法及高速逆流色譜（hsccc）等。其中，運用最廣泛的是柱層析法，使用最多的是大孔吸附樹脂分離純化，樹脂型號如hpd-100、ab-8等，但大孔樹脂分離純化操作繁瑣，寬纓酮收率較低，純化的程度有限。溶劑萃取結(jié)晶法操作簡便，但存在產(chǎn)品收率低，有機(jī)溶劑使用量大，污染環(huán)境等問題。膜分離雖然操作簡單，周期短，分離效果顯著，但膜分離純化提升幅度有限。硅膠柱層析及hsccc雖然能獲得高含量的寬纓酮產(chǎn)品，但硅膠柱層析工藝復(fù)雜，溶劑損耗大，而hsccc設(shè)備一次性投入較大，回本周期長。
cn106366092a公開了一種從東革阿里中分離高純度寬纓酮的工業(yè)制備方法，是將東革阿里浸泡于水中，加纖維素酶酶解，再加熱浸提，冷卻，離心脫脂，脫脂液超濾、納濾，樹脂純化、真空濃縮，結(jié)晶、洗滌、重結(jié)晶，干燥。該純化工藝雖能獲得寬纓酮含量≥98.8%的產(chǎn)品。但是發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，使用纖維素酶浸泡酶解過程中，有少量的寬纓酮會溶于水中，而且纖維素酶對寬纓酮也有一定程度的損耗。而使用大孔樹脂純化，所得寬纓酮粗提物顏色較深，用結(jié)晶純化雖能去除大部分色素雜質(zhì)，但不徹底，而且結(jié)晶一般收率小于70%。
cn106474167a公開了一種東革阿里提取物、寬纓酮及其制備方法和應(yīng)用，是將東革阿里原料經(jīng)水或醇提取，大孔吸附樹脂純化，有機(jī)溶劑萃取，硅膠柱色譜分離，重結(jié)晶，從而獲得寬纓酮含量≥98%的產(chǎn)品。但是，該方法使用了大量的有機(jī)溶劑，對生產(chǎn)條件要求較高，對環(huán)境破壞較大。
cn103408564a公開了一種東革阿里植物中寬纓酮提取純化工藝，是將東革阿里用水、甲醇或乙醇在60～80℃提取，后用有機(jī)溶劑石油醚和乙酸乙酯萃取，硅膠柱色譜分離，活性炭脫色，濃縮、結(jié)晶，洗滌干燥。該純化工藝雖能獲得寬纓酮含量≥98.6%的產(chǎn)品，但是，存在有機(jī)溶劑使用量大，損耗量大，工藝過程復(fù)雜，生產(chǎn)周期長，效率低，產(chǎn)品回收率較低，質(zhì)量可控性差等技術(shù)缺陷。
cn105362315a公開了一種東革阿里提取物及其制備方法，是將東革阿里用水提取，提取液過大孔吸附樹脂，樹脂型號優(yōu)選ab-8和hpd-450，先用水清洗，再用20～50%乙醇洗脫，收集相應(yīng)乙醇洗脫液，濃縮、干燥。雖然東革阿里用水提成本低，操作簡便，大孔吸附樹脂的分離純化也能在一定程度上純化寬纓酮，但是，存在提取率低，吸附選擇專一性差等問題，純度提高程度有限。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，提供一種活性蛋白和寬纓酮產(chǎn)品純度和收率高，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，操作工藝簡單，提取時間短，能耗低，成本低，可實現(xiàn)連續(xù)大規(guī)模生產(chǎn)的從東革阿里中提取活性蛋白和寬纓酮的方法。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案如下：
一種從東革阿里中提取活性蛋白和寬纓酮的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）破碎、提?。簩|革阿里原料破碎，加水進(jìn)行連續(xù)逆流提取，冷卻，過濾，得提取液；
（2）離心、超濾：將步驟（1）所得提取液離心，離心液超濾，加水趕洗超濾膜上的濾渣至超濾膜透過液無色透明且無苦味為止，得超濾液；
（3）納濾、濃縮：將步驟（2）所得超濾液納濾，截留液真空濃縮，得濃縮液a；
（4）醇沉、脫色：將步驟（3）所得濃縮液a加入醇溶液中，靜置醇沉，離心，過濾，所得濾渣低溫真空干燥，粉碎過篩，得東革阿里活性蛋白；所得濾液用活性炭脫色，離心，離心液真空濃縮，得濃縮液b；
（5）氧化鋁柱層析：將步驟（4）所得濃縮液b上氧化鋁柱層析，然后先用水洗至水洗脫液無色，再用有機(jī)溶劑分級洗脫，將收集的洗脫液真空濃縮，得萃取浸膏；
（6）制備液相色譜純化：將步驟（5）所得萃取浸膏用有機(jī)溶劑溶解，進(jìn)樣至制備液相色譜，洗脫劑洗脫，收集目標(biāo)洗脫液，真空濃縮，真空干燥，得高純度寬纓酮產(chǎn)品。
優(yōu)選地，步驟（1）中，所述東革阿里原料取自東革阿里樹根，活性蛋白的質(zhì)量含量為0.03～0.10%，寬纓酮的質(zhì)量含量為0.05～0.10%。
優(yōu)選地，步驟（1）中，破碎至過20～40目篩的原料占總質(zhì)量的90～95%。
優(yōu)選地，步驟（1）中，所述水的用量為原料質(zhì)量的8～30倍（更優(yōu)選10～20倍），提取的溫度為80～100℃（更優(yōu)選90～95℃），提取的時間為2～4h。由于東革阿里中的水溶性蛋白和寬纓酮都易溶于熱水，所以使用水作為提取溶劑，既節(jié)約成本，又安全環(huán)保。
優(yōu)選地，步驟（1）中，所述過濾的目數(shù)為200～400目。優(yōu)選用濾布袋進(jìn)行過濾。
優(yōu)選地，步驟（1）中，所述冷卻為板式冷卻。
優(yōu)選地，步驟（2）中，所述離心的轉(zhuǎn)速為10000～30000r/min。優(yōu)選用管式離心機(jī)、臥式離心機(jī)或蝶式離心機(jī)中的一種或幾種進(jìn)行離心，通過離心可去除一些固體的細(xì)小雜質(zhì)。
優(yōu)選地，步驟（2）中，所述超濾的溫度為10～30℃，壓力為1.0～2.0mpa。超濾的目的是去除大分子懸濁物，使料液澄清透亮。
優(yōu)選地，步驟（2）中，用于超濾的超濾膜為陶瓷膜或高分子材料有機(jī)超濾膜，所述陶瓷膜的孔徑為0.3～0.5μm，所述高分子材料有機(jī)超濾膜的截留分子量為5000～10萬道爾頓。
優(yōu)選地，步驟（2）中，用于趕洗的水的用量是膜體積的3～5倍。
優(yōu)選地，步驟（3）中，所述納濾的溫度為10～30℃，壓力為2.0～4.0mpa。
優(yōu)選地，步驟（3）中，所述納濾先用截留分子量為5萬～10萬道爾頓的納濾膜分離，取透過液，再用截留分子量為100～400道爾頓（更優(yōu)選200～300道爾頓）的納濾膜納濾至截留液的固含量為8～30%（更優(yōu)選10～15%）。先用分子量大的納濾膜可分離去除大分子雜質(zhì)，再用小分子量的納濾膜可分離純化去除小分子雜質(zhì)。
通過超濾與納濾相結(jié)合的技術(shù)，能夠?qū)|革阿里水提取物中寬纓酮的質(zhì)量濃度從1～2%提升至5%以上，同時又能保留大部分東革阿里水溶蛋白，起到了輔助分離純化的作用。
優(yōu)選地，步驟（3）中，所述真空濃縮的溫度為60～80℃，壓力為-0.10～-0.06mpa，真空濃縮至固含量為65～75%。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述濃縮液加入醇溶液中的速度為10～30kg/min。加入過程中進(jìn)行攪拌。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述靜置醇沉的時間為2～4h。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述醇溶液的用量為濃縮液質(zhì)量的2～20倍（更優(yōu)選10～15倍）。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述醇溶液的體積濃度為80～95%，醇為甲醇和/或乙醇，更優(yōu)選乙醇。
由于寬纓酮易溶于醇中，而水溶性蛋白不溶于醇，所以可以使用醇沉的方式分離提純寬纓酮和水溶性蛋白，寬纓酮主要在上清液中，而醇沉渣主要為水溶性蛋白，相比用有機(jī)溶劑萃取純化方式更加環(huán)保安全，效果顯著，也更利于工業(yè)化。
優(yōu)選地，步驟（4）中，醇沉后，用三足離心機(jī)進(jìn)行離心；活性炭脫色后，先臥螺離心，再蝶式離心。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述低溫真空干燥的溫度為30～60℃，壓力為-0.10～-0.07mpa，干燥至含水率≤3%。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述活性炭與濾液的質(zhì)量比為1:5～12。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，在氧化鋁柱層析和制備液相色譜純化前，將醇沉上清液在醇相中采用活性炭脫色，活性炭對色素的脫除效果良好，而且相較水相中對寬纓酮的損耗較少，如果在氧化鋁柱層析和制備液相色譜純化前不脫色處理，會導(dǎo)致所得產(chǎn)品的顏色較深，而且對制備色譜填料的污染較嚴(yán)重。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述脫色的溫度為40～80℃，時間為2～4h。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述活性炭的目數(shù)為80～300目（更優(yōu)選100～200目）。
優(yōu)選地，步驟（4）中，所述真空濃縮的溫度為50～70℃，壓力為-0.10～-0.07mpa，濃縮至固含量為10～30%（更優(yōu)選20～28%）。
優(yōu)選地，步驟（5）中，所述分級洗脫是指：先用2.5～3.5bv體積分?jǐn)?shù)15～25%的乙醇水溶液，以0.4～0.8bv/h的流速洗脫，棄掉洗脫液，再用1.5～2.5bv體積分?jǐn)?shù)65～75%的乙醇水溶液，以0.8～1.2bv/h的流速洗脫，收集洗脫液。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，使用氧化鋁柱層析純化相較大孔吸附樹脂純化，對寬纓酮的純化效果更明顯，主要由于氧化鋁對甾酮類物質(zhì)選擇性更專一，而大孔吸附樹脂的選擇性更差，尤其會吸附大量色素，導(dǎo)致通過大孔吸附樹脂純化所得產(chǎn)品顏色通常很深，即使可以后續(xù)通過結(jié)晶及重結(jié)晶進(jìn)一步純化，但產(chǎn)品收率低，而且色澤不穩(wěn)定，而使用氧化鋁柱層析，則可以先通過低度乙醇洗脫極性較大的雜質(zhì)，比如黃酮類色素，再通過高度醇洗脫寬纓酮，以避免上述問題。
優(yōu)選地，步驟（5）中，所述氧化鋁柱的裝柱徑高比為1:3～8。
優(yōu)選地，步驟（5）中，所述氧化鋁為酸性氧化鋁或中性氧化鋁，目數(shù)為80～300目。
優(yōu)選地，步驟（5）中，使用前，先將氧化鋁在110～600℃（更優(yōu)選400～580℃）下，活化12～30h（更優(yōu)選20～28h）后，再用體積分?jǐn)?shù)85～99%的乙醇清洗至流出液無色透明，且除乙醇味外無其它氣味為止，最后用水洗至無乙醇味。
優(yōu)選地，步驟（5）中，所述真空濃縮的溫度為50～80℃，壓力為-0.10～-0.07mpa，濃縮至固含量為70～80%。真空濃縮的過程中可回收洗脫液中的有機(jī)溶劑。
優(yōu)選地，步驟（6）中，所述制備液相色譜中色譜柱的填料為c-18鍵合硅膠，裝柱徑高比為1:3～8。所述制備液相色譜優(yōu)選中低壓色譜柱的制備液相色譜，使用制備液相色譜可進(jìn)一步對寬纓酮進(jìn)行分離純化，較傳統(tǒng)硅膠色譜純化、結(jié)晶及重結(jié)晶純化，制備液相色譜純化的效果更好，操作簡單，自動化程度更高，溶劑用量及損耗更小，更環(huán)保安全，產(chǎn)品回收率較高，更有利于高純度產(chǎn)品工業(yè)化生產(chǎn)。
優(yōu)選地，步驟（6）中，所述洗脫劑為乙腈-水，體積比為20～40:80～60。本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，以洗脫效果及洗脫收率為參考指標(biāo)，使用乙腈-水為洗脫劑的效果最好，尤其體積比為20～40:80～60范圍內(nèi)洗脫收率最高。
優(yōu)選地，步驟（6）中，所述洗脫的流速為0.10～1.00bv/h（更優(yōu)選0.2～0.5bv/h），洗脫的次數(shù)≥1次。
優(yōu)選地，步驟（6）中，萃取浸膏用有機(jī)溶劑溶解至質(zhì)量濃度為38～80%（更優(yōu)選40～55%）。
優(yōu)選地，步驟（6）中，所述有機(jī)溶劑為甲醇和/或乙醇。
優(yōu)選地，步驟（6）中，所述真空濃縮的溫度為40～80℃，壓力為-0.10～-0.07mpa，濃縮至固含量為40～60%。
優(yōu)選地，步驟（6）中，所述真空干燥的溫度為60～80℃，壓力為-0.10～-0.07mpa，干燥至含水率≤3%。
本發(fā)明方法中優(yōu)選用單效、雙效或三效濃縮器進(jìn)行真空濃縮。
本發(fā)明方法的有益效果如下：
（1）按照本發(fā)明方法所得水溶性蛋白產(chǎn)品為淡黃色粉末，經(jīng)紫外檢測，所得產(chǎn)品中蛋白質(zhì)量含量≥53%，收率≥90%；所得寬纓酮產(chǎn)品為純白色粉末，經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法檢測，所得產(chǎn)品中寬纓酮的純度≥98%，收率≥93%；
（2）本發(fā)明方法提取的溶劑為水，采用連續(xù)逆流的提取方法，相比提取罐提取的方式，不僅用水量小，提取時間縮短，而且能耗低，成本低，可實現(xiàn)連續(xù)大規(guī)模生產(chǎn)；
（3）本發(fā)明方法采用了超濾與納濾相結(jié)合的技術(shù)，相比其它純化方式，如大孔樹脂吸附純化，不僅分離純化效果明顯，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，而且操作工藝簡單，生產(chǎn)成本低廉，能夠?qū)崿F(xiàn)連續(xù)化大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)；
（4）本發(fā)明方法采用醇沉、活性炭脫色、氧化鋁柱層析及制備液相色譜分離純化相結(jié)合的技術(shù)，實現(xiàn)了同時獲得高純度、高收率的水溶性蛋白和寬纓酮產(chǎn)品。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
本發(fā)明實施例所使用的東革阿里樹根購于馬來西亞，經(jīng)紫外檢測，活性蛋白的質(zhì)量含量為0.05%，經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法檢測，寬纓酮的質(zhì)量含量為0.08%；本發(fā)明實施例所使用的0.3μm、0.5μm孔徑的陶瓷膜，截留分子量為5萬道爾頓的高分子材料有機(jī)超濾膜均購于江蘇久安源環(huán)?？萍加邢薰?；本發(fā)明實施例所使用的nf8040-300d、nf8040-5wd、nf8040-8wd、nf8040-10wd型號的高分子材有機(jī)納濾膜，均購于江蘇久吾高科技股份有限公司；本發(fā)明實施例所使用的中性氧化鋁目數(shù)為200目，購于淄博碩創(chuàng)氧化鋁有限公司；本發(fā)明實施例所使用的甲醇的密度為0.7918g/ml；本發(fā)明實施例所使用的c-18反向鍵合硅膠，購于賽默飛世爾科技公司；本發(fā)明實施例所使用的原料和化學(xué)試劑，如無特殊說明，均通過常規(guī)商業(yè)途徑獲得。
參考例1
使用前，先將中性氧化鋁在550℃下，活化24h后，再用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇清洗至流出液無色透明，且除乙醇味外無其它氣味為止，最后用水洗至無乙醇味。
實施例1
（1）破碎、提?。簩?t東革阿里樹根破碎至過20目篩的原料占總質(zhì)量的95%，加20t水，在90℃下，連續(xù)逆流提取2h，板式冷卻，用200目濾布袋過濾，得提取液20t；
（2）離心、超濾：將步驟（1）所得20t提取液，在轉(zhuǎn)速為15000r/min下，用管式離心機(jī)離心，得離心液19t，再用750l孔徑0.3μm的陶瓷膜，在20℃，1.5mpa下，進(jìn)行超濾，然后加3000l水趕洗超濾膜上的濾渣至超濾膜透過液無色透明且無苦味為止，得超濾液22t；
（3）納濾、濃縮：將步驟（2）所得22t超濾液，在20℃，3mpa下，先用分子量為10萬道爾頓的納濾膜（膜型號nf8040-10wd）分離，取透過液，再用分子量為300道爾頓的納濾膜（膜型號nf8040-300d），納濾至截留液的固含量為10%，得納濾液1.2t，最后用單效濃縮器，將納濾液在60℃，-0.06mpa下，真空濃縮至固含量為68.2%，得濃縮液a175.9kg；
（4）醇沉、脫色：將步驟（3）所得175.9kg濃縮液a以20kg/min的速度加入盛有2t體積濃度為90%乙醇的醇沉罐中，加入過程中進(jìn)行攪拌，靜置醇沉4h，用三足離心機(jī)離心，過濾，濾渣在40℃，-0.07mpa下，低溫真空干燥至水分≤2%，粉碎過篩，得東革阿里活性蛋白產(chǎn)品1.688kg；所得2036kg濾液中加入200kg的150目活性炭，在50℃下，脫色3h，然后先臥螺離心，再蝶式離心，離心液再用單效濃縮器，在60℃，-0.07mpa下，真空濃縮至固含量為25.3%，得濃縮液b189.7kg；
（5）氧化鋁柱層析：將步驟（4）所得189.7kg濃縮液b上氧化鋁柱層析（使用參考例1活化后的中性氧化鋁為填料，裝柱徑高比為1:3），先用純水洗至水洗脫液無色，然后先用2.5bv體積分?jǐn)?shù)25%的乙醇水溶液，以0.4bv/h的流速洗脫，棄掉洗脫液，再用2.5bv體積分?jǐn)?shù)65%的乙醇水溶液，以1.2bv/h的流速洗脫，收集洗脫液，最后在50℃，-0.07mpa下，真空濃縮回收洗脫液中的乙醇至固含量為80%，得萃取浸膏25.5kg；
（6）制備液相色譜純化：將步驟（5）所得25.5kg萃取浸膏用46.7l甲醇溶解（萃取浸膏的質(zhì)量濃度為40.8%），進(jìn)樣至中低壓色譜柱的制備液相色譜（色譜柱填料為c-18鍵合硅膠，裝柱徑高比為1:3）中，再用體積比40:60的乙腈-水，以流速0.2bv/h洗脫2次，并收集目標(biāo)洗脫液，然后在50℃，-0.07mpa下，真空濃縮至固含量為50%，最后在60℃，-0.07mpa下，真空干燥至含水率≤2%，得1.54kg純度寬纓酮產(chǎn)品。
本實施例所得水溶性蛋白產(chǎn)品為淡黃色粉末，經(jīng)紫外檢測，所得產(chǎn)品中活性蛋白的質(zhì)量含量為53.6%，收率為90.5%；所得寬纓酮產(chǎn)品為純白色，經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法檢測，所得產(chǎn)品中寬纓酮的純度為98.7%，收率為95.3%。
實施例2
（1）破碎、提取：將2t東革阿里樹根破碎至過30目篩的原料占總質(zhì)量的95%，加30t水，在95℃下，連續(xù)逆流提取3h，板式冷卻，用300目濾布袋過濾，得提取液30t；
（2）離心、超濾：將步驟（1）所得30t提取液，在轉(zhuǎn)速為20000r/min下，用管式離心機(jī)離心，得離心液28t，再用937.5l孔徑0.5μm的陶瓷膜，在30℃，2.0mpa下，進(jìn)行超濾，然后加3000l水趕洗超濾膜上的濾渣至超濾膜透過液無色透明且無苦味為止，得超濾液31t；
（3）納濾、濃縮：將步驟（2）所得31t超濾液，在10℃，4mpa下，先用分子量為8萬道爾頓的納濾膜（膜型號nf8040-8wd）分離，取透過液，再用分子量為300道爾頓的納濾膜（型號nf8040-300d），納濾至截留液的固含量為12%，得納濾液1.0t，最后用單效濃縮器，將納濾液在70℃，-0.095mpa下，真空濃縮至固含量為71.5%，得濃縮液a167.8kg；
（4）醇沉、脫色：將步驟（3）所得167.8kg濃縮液a以30kg/min的速度加入盛有2t體積濃度為95%乙醇的醇沉罐中，加入過程中進(jìn)行攪拌，靜置醇沉3h，用三足離心機(jī)離心，過濾，濾渣在60℃，-0.095mpa下，低溫真空干燥至水分≤3%，粉碎過篩，得東革阿里活性蛋白產(chǎn)品1.642kg；所得2160.2kg濾液中加入400kg的200目活性炭，在60℃下，脫色2h，然后先臥螺離心，再蝶式離心，離心液再用三效濃縮器，在70℃，-0.095mpa下，真空濃縮至固含量為24.3%，得濃縮液b197.5kg；
（5）氧化鋁柱層析：將步驟（4）所得197.5kg濃縮液b上氧化鋁柱層析（使用參考例1活化后的中性氧化鋁為填料，裝柱徑高比為1:4），先用純水洗至水洗脫液無色，然后先用3bv體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇水溶液，以0.5bv/h的流速洗脫，棄掉洗脫液，再用2bv體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇水溶液，以1.0bv/h的流速洗脫，收集洗脫液，最后在60℃，-0.09mpa下，真空濃縮回收洗脫液中的乙醇至固含量為75%，得萃取浸膏26.7kg；
（6）制備液相色譜純化：將步驟（5）所得26.7kg萃取浸膏用50.5l甲醇溶解（萃取浸膏的質(zhì)量濃度為40.0%），進(jìn)樣至中低壓色譜柱的制備液相色譜（色譜柱填料為c-18鍵合硅膠，裝柱徑高比為1:4）中，再用體積比25:75的乙腈-水，以流速0.25bv/h洗脫2次，并收集目標(biāo)洗脫液，然后在70℃，-0.09mpa下，真空濃縮至固含量為40%，最后在80℃，-0.095mpa下，真空干燥至含水率≤3%，得1.57kg高純度寬纓酮產(chǎn)品。
本實施例所得水溶性蛋白產(chǎn)品為淡黃色粉末，經(jīng)紫外檢測，所得產(chǎn)品中活性蛋白的質(zhì)量含量為56.1%，收率為92.1%；所得寬纓酮產(chǎn)品為純白色，經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法檢測，所得產(chǎn)品中寬纓酮的純度為99.3%，收率為97.4%。
實施例3
（1）破碎、提取：將2t東革阿里樹根破碎至過40目篩的原料占總質(zhì)量的90%，加40t水，在95℃下，連續(xù)逆流提取2h，板式冷卻，用400目濾布袋過濾，得提取液40t；
（2）離心、超濾：將步驟（1）所得40t提取液，在轉(zhuǎn)速為30000r/min下，用管式離心機(jī)離心，得離心液38t，再用625l截留分子量為5萬道爾頓的高分子材料有機(jī)超濾膜，在30℃，1.5mpa下，進(jìn)行超濾，然后加3000l水趕洗超濾膜上的濾渣至超濾膜透過液無色透明且無苦味為止，得超濾液41t；
（3）納濾、濃縮：將步驟（2）所得41t超濾液，在30℃，2mpa下，先用分子量為5萬道爾頓的納濾膜（型號nf8040-5wd）分離，取透過液，再用分子量為300道爾頓的納濾膜（型號nf8040-300d），納濾至截留液的固含量為11.4%，得納濾液1.053t，最后用單效濃縮器，將納濾液在80℃，-0.08mpa下，真空濃縮至固含量為73.6%，得濃縮液a163.1kg；
（4）醇沉、脫色：將步驟（3）所得163.1kg濃縮液a以10kg/min的速度加入盛有2t體積濃度為85%乙醇的醇沉罐中，加入過程中進(jìn)行攪拌，靜置醇沉2h，用三足離心機(jī)離心，過濾，濾渣在50℃，-0.08mpa下，低溫真空干燥至水分≤3%，粉碎過篩，得東革阿里活性蛋白產(chǎn)品1.658kg；所得1968.5kg濾液中加入200kg的100目活性炭，在70℃下，脫色4h，然后先臥螺離心，再蝶式離心，離心液再用單效濃縮器，在50℃，-0.08mpa下，真空濃縮至固含量為23.9%，得濃縮液b200.8kg；
（5）氧化鋁柱層析：將步驟（4）所得200.8kg濃縮液b上氧化鋁柱層析（使用參考例1活化后的中性氧化鋁為填料，裝柱徑高比為1:6），先用純水洗至水洗脫液無色，然后先用3.5bv體積分?jǐn)?shù)15%的乙醇水溶液，以0.6bv/h的流速洗脫，棄掉洗脫液，再用1.5bv體積分?jǐn)?shù)75%的乙醇水溶液，以0.8bv/h的流速洗脫，收集洗脫液，最后在70℃，-0.08mpa下，真空濃縮回收洗脫液中的乙醇至固含量為80%，得萃取浸膏23.6kg；
（6）制備液相色譜純化：將步驟（5）所得23.6kg萃取浸膏用33.3l甲醇溶解（萃取浸膏的質(zhì)量濃度為47.2%），進(jìn)樣至中低壓色譜柱的制備液相色譜（色譜柱填料為c-18鍵合硅膠，裝柱徑高比為1:6）中，再用體積比35:65的乙腈-水，以流速0.3bv/h洗脫2次，并收集目標(biāo)洗脫液，然后在80℃，-0.08mpa下，真空濃縮至固含量為60%，最后在70℃，-0.08mpa下，真空干燥至含水率≤3%，得1.52kg高純度寬纓酮產(chǎn)品。
本實施例所得水溶性蛋白產(chǎn)品為淡黃色粉末，經(jīng)紫外檢測，所得產(chǎn)品中活性蛋白的質(zhì)量含量為55.2%，收率為91.5%；所得寬纓酮產(chǎn)品為純白色，經(jīng)高效液相色譜外標(biāo)法檢測，所得產(chǎn)品中寬纓酮的純度為98.5%，收率為93.6%。