本發(fā)明涉及有機(jī)合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制備方法。

背景技術(shù)：

吲哚及其衍生物是一種在自然界廣泛存在的生物堿。由于該類化合物具有多樣的生物活性，所以多年來一直受到化學(xué)家及藥物學(xué)家的廣泛關(guān)注。在眾多的吲哚衍生物中，9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚是許多功能小分子化合物的重要結(jié)構(gòu)單元。另外，以9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚為堿基而合成得到的堿基擴(kuò)展核苷，還被成功引入到寡聚核苷酸中，并被用作生物探針以研究dna的空間結(jié)構(gòu)和性能。關(guān)于9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚類化合物的合成，現(xiàn)有的方法主要是通過在已有吲哚骨架上進(jìn)行功能團(tuán)化而得到，這不僅使反應(yīng)底物的范圍受到限制，而且提高了原料成本，不利于其在實(shí)際生產(chǎn)中得到應(yīng)用。鑒于9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚類化合物的重要性，進(jìn)一步發(fā)展合成該類化合物高效、經(jīng)濟(jì)新方法具有重要的意義。

但是，目前報(bào)道的9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚類化合物的合成方法比較少，并且合成過程比較復(fù)雜，難度高，存在著諸多問題，如：(1)反應(yīng)原料比較難得，需要通過多步的合成路徑才能獲得；(2)反應(yīng)條件過于苛刻，反應(yīng)溫度太高，合成產(chǎn)率低等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種簡單有效的4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚及其制備方法。

本發(fā)明提供了一種4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚，其分子式如下：

本發(fā)明提供了一種4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚的制備方法，制備步驟如下：

(1)2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪與2-氨基吲哚反應(yīng)得到中間體ⅰ9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯，純化中間體?。?/p>

(2)中間體ⅰ用堿性溶液溶解并加熱至回流，冷卻至室溫，抽濾得到中間體ⅱ；

(3)中間體ⅱ用有機(jī)溶劑溶解，加入濃硝酸和濃硫酸的混合溶液，溶解并加熱至回流，冷卻至室溫，然后催化還原得到中間體ⅲ；

(4)將中間體ⅲ在堿性溶液中與鹵代乙烷進(jìn)行取代反應(yīng)，得到中間體ⅳ；

(5)將中間體ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

優(yōu)選的，在步驟(1)中，所述中間體的制備工藝為：取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪溶于dmso，n2保護(hù)，加熱至50℃.攪拌下加入2-氨基吲哚，反應(yīng)結(jié)束得到中間體ⅰ嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。

優(yōu)選的，所述中間體ⅰ的純化工藝為：首先用h2o、二氯甲烷萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥，回收溶劑得固體化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得黃色粉末。

優(yōu)選的，在步驟(2)中，所述堿性溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鋰的水溶液中的至少一種。

優(yōu)選的，在步驟(2)中，所述加熱回流的溫度為80～100℃，回流時(shí)間為30～240min。

優(yōu)選的，在步驟(3)中，所述加熱回流溫度為68～85℃，時(shí)間為20～100min。

優(yōu)選的，在步驟(3)中，所述催化還原工藝為在催化劑的存在下，進(jìn)行催化加氫反應(yīng)，所述催化劑為鎳、鈀、鉑中的至少一種。

優(yōu)選的，在步驟(4)中，所述取代反應(yīng)的工藝為在冰水浴中，攪拌15～60min。

優(yōu)選的，在步驟(4)中，所述氧化工藝為在高錳酸鉀和氧氣存在的條件下，氧化；所述氧化的溫度為100～150℃。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：本發(fā)明以4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪與2-氨基吲哚為原料，發(fā)生反電子環(huán)加成反應(yīng)得到中間產(chǎn)物，再經(jīng)過酯基水解選擇性脫羧、酰胺縮合反應(yīng)制得目標(biāo)產(chǎn)物，工藝簡單、目標(biāo)產(chǎn)物收率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明所制備的4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚在治療腎間質(zhì)纖維化及糖尿病腎病具有潛在的預(yù)防和治療應(yīng)用。

附圖說明

圖1：4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚對(duì)大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的抑制作用；

圖2：不同濃度的4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚對(duì)大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞的作用；

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例1：

1、中間體ⅰ的合成

取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪1.49g溶于10mldmso，n2保護(hù)，加熱至50℃.攪拌下加入2-氨基吲哚。2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪是一個(gè)活性較高的雙烯體，強(qiáng)給電子基團(tuán)氨基能夠提高2-氨基吲哚作為親雙烯體的反應(yīng)活性，兩者發(fā)生加成反應(yīng)得到的中間體失去氨,最后發(fā)生一個(gè)retro-diels-alder反應(yīng)失去nc-cooet形成了9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。反應(yīng)結(jié)束后首先用100mlh2o、二氯甲烷萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得黃色粉末，熔點(diǎn)201-202℃。

1hnmr(300mhz,cdcl3)δ:12.13(s,1h),8.87(d,j＝8.1hz,1h),8.07(d,j＝8.1hz,1h),7.73-7.68(m,1h),7.49-7.43(m,1h),4.59(d,j＝7.5hz,4h),1.63-1.56(m,6h)；

13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:165.3,160.3,157.0,154.0，147.1,141.5,130.4,128.6,125.3,118.9,115.5,113.3,63.3,53.8,14.3,14.2；

es-ms:314[m+h]+。

2.中間體ⅱ的合成

中間體ⅰ用50毫升氫氧化鈉水溶液溶解并在100℃下加熱至回流240min，中間體ⅰ上的二個(gè)酯基發(fā)生水解反應(yīng)，并且4位上的羧基脫去，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫。抽濾得到黃色固體，熔點(diǎn)223-226℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:12.68(s,1h),9.00(s,1h),8.68(d,j＝8.1hz,1h),7.63-7.62(m,2h),7.42-7.35(m,1h)；

13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:135.6,128.5,118.6,127.9；

esi-ms:215[m+h+]。

3.中間體ⅲ的合成

將中間體ⅱ用20ml惰性有機(jī)溶劑thf溶解，50ml濃硫酸和濃硝酸的混合溶液，在85℃下加熱回流100min，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，，用水洗滌至中性，抽濾得到黃色固體，將黃色固體與鉑接觸，在25～35℃反應(yīng)2h，將產(chǎn)物溶解于thf中，過濾除去濾渣，將濾液用乙酸乙酯萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得固體，熔點(diǎn)184-186℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:8.56(s,1h),7.60-7.57(m,2h),7.37-7.32(m,1h),3.28-3.19(m,2h),1.65-1.56(m,2h),1.43-1.31(m,2h),1.05-1.08(t,j＝7.2hz,3h)；

13cnmr(75mhz,dmso-d6)δ:128.5,127.4,121.0,121.0,118.4,111.4,58.9,58.3,47.6,38.6,31.2,19.6,13.7；

esi-ms:m/z287[m+h]+。

中間體ⅳ的合成

將中間體ⅲ在氫氧化鈉溶液中溶解，在冰水浴下，向混合體系中通入氯乙烷反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶解于thf中，將濾液用乙酸乙酯萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得固體749mg，產(chǎn)率82％。熔點(diǎn)176～178℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:11.25(s,1h),9.41-8.69(m,2h),7.60-7.57(m,2h),7.45-7.38(m,1h),1.43-1.31(m,2h),1.05～1.12(t,j＝7.2hz,3h)；

13cnmr(75mhz,dmso-d6)δ:128.5,125.4,121.3,59.3,58.2,41.3,38.6,31.2,19.6,13.7；

esi-ms:m/z305[m+h]+。

(5)將中間體ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

中間體ⅳ的合成

將中間體ⅳ在酸性高錳酸鉀溶液中溶解，升溫至150℃，攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)結(jié)束后首先用100mlh2o，乙酸乙酯萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得固體熔點(diǎn)195～198℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:10.8(s,1h),9.12-9.00(m,2h),7.37-7.32(m,1h),3.41-3.25(m,2h),1.41-1.35(m,2h),0.93(t,j＝7.2hz,3h)；

13cnmr(75mhz,dmso-d6)δ:183.2,181.6,176.3,157.4,152.8,139.5,128.5,127.4,121.0,121.0,63.5,58.6,48.3,38.6,31.2,19.6；

esi-ms:m/z275[m+h]+。

實(shí)施例2：

1、中間體ⅰ的合成

取2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪1.49g溶于10mldmso，n2保護(hù)，加熱至50℃.攪拌下加入2-氨基吲哚。2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪是一個(gè)活性較高的雙烯體，強(qiáng)給電子基團(tuán)氨基能夠提高2-氨基吲哚作為親雙烯體的反應(yīng)活性，兩者發(fā)生加成反應(yīng)得到的中間體失去氨,最后發(fā)生一個(gè)retro-diels-alder反應(yīng)失去nc-cooet形成了9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2,4-二羧酸乙酯。反應(yīng)結(jié)束后首先用100mlh2o、二氯甲烷萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得黃色粉末，熔點(diǎn)201-202℃。

1hnmr(300mhz,cdcl3)δ:12.05(s,1h),8.71(d,j＝8.1hz,1h),8.01(d,j＝8.1hz,1h),7.81-7.75(m,1h),7.17-7.08(m,1h),4.32(d,j＝7.5hz,4h),1.25-1.16(m,6h)；

13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:163.3,161.3,158.0,159.0，145.1,141.5,132.4,128.5,125.1,116.9,115.6,113.4,63.3,53.2,14.9,14.3，；

es-ms:314[m+h]+。

2.中間體ⅱ的合成

中間體ⅰ用50毫升氫氧化鉀水溶液溶解并在80℃下加熱至回流30min，中間體ⅰ上的二個(gè)酯基發(fā)生水解反應(yīng)，并且4位上的羧基脫去，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫。抽濾得到黃色固體，熔點(diǎn)223-226℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:12.56(s,1h),9.12(s,1h),8.31(d,j＝8.1hz,1h),7.55-7.62(m,2h),7.14-7.25(m,1h)；

13cnmr(75mhz,cdcl3)δ:136.6,123.5,119.6,126.9；

esi-ms:215[m+h+]。

3.中間體ⅲ的合成

將中間體ⅱ用20ml惰性有機(jī)溶劑thf溶解，50ml濃硫酸和濃硝酸的混合溶液，在68℃下加熱回流20min，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，，用水洗滌至中性，抽濾得到黃色固體，將黃色固體與鉑接觸，在25～35℃反應(yīng)2h，將產(chǎn)物溶解于thf中，過濾除去濾渣，將濾液用乙酸乙酯萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得固體，熔點(diǎn)184-186℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:8.95(s,1h),7.56-7.48(m,2h),7.39-7.32(m,1h),3.16-3.05(m,2h),1.67-1.61(m,2h),1.48-1.40(m,2h),1.01-1.08(t,j＝7.2hz,3h)；

13cnmr(75mhz,dmso-d6)δ:128.8,128.4,123.0,121.0,116.4,111.9,59.9,58.1,47.5,39.6,37.2,18.6,11.7；

esi-ms:m/z287[m+h]+。

中間體ⅳ的合成

將中間體ⅲ在氫氧化鈉溶液中溶解，在冰水浴下，向混合體系中通入氯乙烷反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶解于thf中，將濾液用乙酸乙酯萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得固體，熔點(diǎn)176～178℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:11.05(s,1h),9.31-8.85(m,2h),7.63-7.59(m,2h),7.45-7.42(m,1h),1.38-1.33(m,2h),1.05～1.12(t,j＝7.2hz,3h)；

13cnmr(75mhz,dmso-d6)δ:126.5,125.4,123.3,59.1,58.7,41.3,39.6,36.2,15.6,13.7；

esi-ms:m/z305[m+h]+。

(5)將中間體ⅳ氧化得到4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚。

中間體ⅳ的合成

將中間體ⅳ在酸性高錳酸鉀溶液中溶解，升溫至100℃，攪拌反應(yīng)30min，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)結(jié)束后首先用100mlh2o，乙酸乙酯萃取三次，再用有機(jī)相依次水洗、飽和氯化鈉水溶液依次洗滌，na2so4干燥?；厥杖軇┑霉腆w化合物，柱色譜分離，用石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯洗脫獲得固體熔點(diǎn)195～196℃。

1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ:10.6(s,1h),9.15-9.06(m,2h),7.34-7.31(m,1h),3.36-3.25(m,2h),1.43-1.32(m,2h),0.91(t,j＝7.2hz,3h)；

13cnmr(75mhz,dmso-d6)δ:181.2,180.6,196.3,155.4,153.8,138.5,128.1,127.6,121.5,120.8,61.5,57.6,48.3,38.5,31.1,19.3；

esi-ms:m/z275[m+h]+。

藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)：

1、4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚對(duì)nrk49f增殖能力的影響

實(shí)驗(yàn)步驟：

將處于對(duì)數(shù)生長期的大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞細(xì)胞(nrk49f)接種于96孔板，3×10³個(gè)/孔，待細(xì)胞完全貼壁后，將其分為正常組(ctrl組)及10^-9～8×10^-4mol/l9個(gè)不同濃度4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚處理組。正常組細(xì)胞換用無血清dmem培養(yǎng)液；9個(gè)不同濃度4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚處理組分別換用含4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚10^-9mol/l、10^-8mol/l、10^-7mol/l、10^-6mol/l、10^-5mol/l、10^-4mol/l、2×10^-4mol/l、4×10^-4mol/l及8×10^-4mol/l的無血清dmem培養(yǎng)液。各組細(xì)胞在換用相應(yīng)條件培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔加入5mg/mlmtt溶液20μl，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育，4h后棄去每孔培養(yǎng)上清并加150μldmso充分溶解甲臜沉淀。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上選定490nm波長處測(cè)定吸光度(od)值，參比波長620nm。計(jì)算細(xì)胞生長抑制率及ic50。每組設(shè)6-8個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如表1和圖1所示，各4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚各濃度處理組與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，各4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚各濃度處理組間也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表14-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚對(duì)nrk49f增殖能力的影響

從上述結(jié)果可以看出，不同濃度(10^-9～8×10^-4mol/l)4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚作用于nrk49f24h后，可見此化合物在10^-9～2×10^-4mol/l時(shí)，對(duì)nrk49f的正常增殖有一定刺激作用，但與正常組合比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，此作用也未顯示出明顯劑量-效應(yīng)關(guān)系，高于2×10^-4mol/l(4×10^-4～8×10^-4mol/l)時(shí)，4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚對(duì)nrk49f的增殖顯示出了一定的抑制作用，與正常對(duì)照組比較，亦未顯示出明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這些結(jié)果表明，4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚對(duì)正常生長的腎臟成纖維細(xì)胞無明顯刺激作用，亦無明體外顯毒性作用，ic50遠(yuǎn)大于8×10^-4mol/l。

2、4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚抑制nrk49f過度增殖作用

實(shí)驗(yàn)步驟：

將處于對(duì)數(shù)生長期的大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞細(xì)胞(nrk49f)接種于96孔板，3×10³個(gè)/孔，待細(xì)胞完全貼壁后，將其分為正常組(ctrl組)、uii刺激組及10^-7mol/l4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚處理組。正常組細(xì)胞換用無血清dmem培養(yǎng)液；尾加壓素ii(urotensinii，uii)刺激組換用含10^-8mol/luii的無血清dmem培養(yǎng)液；10^-7mol/l4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚處理組用含10^-8mol/luii和10^-7mol/l4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚的的無血清dmem培養(yǎng)液。各組細(xì)胞在換用相應(yīng)條件培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔加入5mg/mlmtt溶液20μl，于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育，4h后棄去每孔培養(yǎng)上清并加150μldmso充分溶解甲臜沉淀。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上選定490nm波長處測(cè)定吸光度(od)值，參比波長620nm。每組設(shè)6-8個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

如表2和圖2所示，與對(duì)照組比較，uii刺激組細(xì)胞增殖能力顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與uii刺激組比較，10^-8mol/l4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚處理組細(xì)胞增殖能力明顯下降，二者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表24-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚抑制nrk49f過度增殖作用

^*與對(duì)照組比較，p<0.05；^#與對(duì)照組比較，p<0.05。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，uii可明顯刺激nrk49f增殖，4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚則可明顯抑制uii的這種作用，腎臟成纖維細(xì)胞是腎間質(zhì)纖維化及糖尿病腎病的主要靶細(xì)胞，故可認(rèn)為，化合物可能具有抑制腎間質(zhì)纖維化作用，對(duì)糖尿病腎病也可能有防治作用。

嘧啶并吲哚(pi)衍生物是一類人工合成的尾加壓素ii(uii)抑制劑。有研究表明，uii與心血管疾病、腎病及糖尿病的病理過程及發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。根據(jù)目前研究結(jié)果，pi-1401有明確的拮抗uii作用，判斷pi類衍生物有抗心肌纖維化，抗動(dòng)脈粥樣硬化，抗腎間質(zhì)纖維化，降低血糖，保護(hù)糖尿病腎臟的作用。

申請(qǐng)人根據(jù)文獻(xiàn)查閱結(jié)果發(fā)現(xiàn)，9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚(pi)對(duì)腫瘤細(xì)胞存在抑制增殖的作用，根據(jù)pi為母環(huán)，在2位，4位，9位作不同取代基，研究嘧啶并吲哚類衍生物對(duì)細(xì)胞增殖作用的影響。

根據(jù)目前研究結(jié)果，pi-1401、pi-1403、pi-1404對(duì)正常生長的人血管平滑肌細(xì)胞(vsmc)有抑制作用，pi-1402則對(duì)vsmc有促進(jìn)作用。

①pi-1401、pi的比較：

pi-1401在母環(huán)2位酰胺取代，對(duì)細(xì)胞仍有抑制增殖的作用，判斷2-酰胺有抑制細(xì)胞增殖的作用；

②pi-1401，pi-1402，pi的比較：

pi-1402與pi-1401在2-取代基完全相同，在9位添加芐基取代，對(duì)細(xì)胞有促增殖作用，判斷9-芐基有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用；

③pi-1403，pi-1404與pi的比較：

pi-1403,pi-1404均為母環(huán)4位取代，判斷4-氨基有抑制細(xì)胞增殖的作用；同時(shí)，pi-1403對(duì)細(xì)胞的抑制作用隨著濃度的增大而增大，判斷其抑制增殖作用有劑量依賴性；而pi-1404則隨著化合物濃度增大，抑制作用先增大后降低，最大抑制濃度為10^-7mol/l，判斷低濃度-cooh取代有抑制細(xì)胞增殖作用，高濃度-cooh取代存在保護(hù)細(xì)胞作用。

因此，本發(fā)明所制備的到4-乙胺(2-羧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚在治療心血管疾病、腎病及糖尿病具有廣大的前景。

上述描述僅是對(duì)本發(fā)明部分實(shí)施例的描述，并非對(duì)本發(fā)明范圍的任何限定，本行業(yè)的普通技術(shù)人員可根據(jù)本發(fā)明對(duì)上述實(shí)施例做出改進(jìn)或修改，但均屬于本發(fā)明保護(hù)范圍。