本申請是2014年1月7日提交的名稱為“含多環(huán)取代的吡唑類激酶活性抑制劑及其用途”的第201480004085.9號中國專利申請的分案申請。本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及4-(五元雜環(huán)并嘧啶/吡啶取代)氨基-1h-3-吡唑甲酰胺類衍生物、它們的制備方法、含有這些化合物的藥用組合物以及它們的醫(yī)療用途，特別是作為蛋白激酶抑制劑的抗腫瘤用途。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞周期在正常條件下，由一群相關(guān)蛋白酶負(fù)責(zé)進(jìn)行調(diào)控，它們擔(dān)負(fù)著不同的生物功能，包括抑制或促進(jìn)細(xì)胞周期的功能，其中促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)行的大多數(shù)蛋白都屬于激酶，激酶對調(diào)控蛋白質(zhì)進(jìn)行重要生理功能起著重要的作用，它在生物體內(nèi)的主要功能是將高能分子三磷酸腺苷(atp)的磷酸根轉(zhuǎn)移到受體分子上，以調(diào)控蛋白質(zhì)受體的活化或者去活化，蛋白質(zhì)的活化或者去活化會調(diào)控細(xì)胞周期，而許多癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)這些控制著正常細(xì)胞周期的激酶會突然不受調(diào)控，所以若是能夠抑制這些不受調(diào)控的激酶，相信就能抑制癌細(xì)胞的不斷增生。近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期依賴性激酶(cdk)、aurorakinase、polo-likekinase(plk)、驅(qū)動蛋白(kinesinsspindleprotein；ksp)和checkpointkinase(chk)等新型靶標(biāo)都和細(xì)胞周期有著密切的關(guān)系。其中，中心體上aurora激酶和cdk的共激活是啟動細(xì)胞有絲分裂必不可少的條件之一，它們在調(diào)節(jié)整個細(xì)胞周期和細(xì)胞有絲分裂的過程中彼此關(guān)聯(lián)、互相促進(jìn)。二者的相關(guān)抑制劑研究也較為深入，且多個化合物已進(jìn)入臨床階段，表現(xiàn)出良好的抗腫瘤藥物研發(fā)前景。研究發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的腫瘤都與細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制紊亂所導(dǎo)致的細(xì)胞生長失控、分化受阻、凋亡異常有關(guān)，而細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependentkinases,cdks)的過度活化是其中的一個重要原因。cdks是一類重要的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，其本身并不具有活性，必須與細(xì)胞周期蛋白(cyclins)結(jié)合后才能產(chǎn)生活性，可催化底物磷酸化，驅(qū)動細(xì)胞周期各時相進(jìn)程，依序完成dna合成和有絲分裂，引起細(xì)胞的生長和增殖。同時，cdks也能與cdks抑制因子(cdi)結(jié)合發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用，抑制細(xì)胞周期進(jìn)程，阻止細(xì)胞分裂。由于cdks在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖與凋亡中起關(guān)鍵作用，通過選擇性地抑制腫瘤組織中cdks的活性，可以對腫瘤等惡性增生性疾病的治療起到積極的作用，所以對cdks小分子抑制劑的篩選與研究已成為腫瘤治療和開發(fā)新型化療藥物的熱點(diǎn)領(lǐng)域之一。在cdks調(diào)控整個細(xì)胞周期的運(yùn)行中，以cdk1、cdk2、cdk4和cdk6較為重要。由于細(xì)胞周期失控是癌變的重要原因，如果能夠阻止細(xì)胞周期進(jìn)入s期，dna的異常復(fù)制就不會發(fā)生，而g1期進(jìn)入s期主要是由cdk2/cycline調(diào)控，因此cdk2抑制劑可以阻止細(xì)胞周期進(jìn)入s期進(jìn)行dna復(fù)制。此外，在整個細(xì)胞周期中，除了掌控g1期進(jìn)入s期，cdk2/cyclina還控制了s、g2期的進(jìn)行，由此可見，cdk2在細(xì)胞周期中扮演著相當(dāng)重要的角色，所以如果能有效抑制cdk2的活性，就可以控制細(xì)胞周期的進(jìn)行，進(jìn)而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖失控的功效。近年來，一些cdks小分子抑制劑已陸續(xù)公開發(fā)表，這些抑制劑大都對cdk2具有良好的抑制作用，主要是通過競爭性地結(jié)合于cdks中atp活性位點(diǎn)，從而起到抑制cdks的作用。aurora家族也是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，目前已知人類細(xì)胞中存在3種結(jié)構(gòu)和功能高度相關(guān)的aurora激酶亞型：auroraa、b和c。它參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的有絲分裂過程，包括中心體復(fù)制、兩極紡錘體的形成以及染色體在紡錘體上的重排等，并可對紡錘體檢測點(diǎn)(checkpoint)進(jìn)行精確監(jiān)測，中止錯誤的細(xì)胞周期進(jìn)程并完成修復(fù)過程。在整個細(xì)胞周期的運(yùn)行中，aurora激酶主要作用于m期，它與cdks共同啟動有絲分裂的一系列生化事件。其中，auroraa和aurorab與腫瘤密切相關(guān)。首先，auroraa定位在20q13.2，aurorab定位在17p13，都在易位、缺失或擴(kuò)增活躍的染色體區(qū)段，意味著它們具有天然的不穩(wěn)定性，這些研究表明當(dāng)auroraa過度表達(dá)時，它是一種潛在的致癌基因；而且這兩個染色體區(qū)在乳腺癌和結(jié)直腸癌腫瘤組織中以及乳腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤和宮頸癌細(xì)胞株普遍存在擴(kuò)增。目前人們對aurorac的致癌作用研究較少。auroraa、b和c在催化區(qū)具有很高的同源性，僅有調(diào)節(jié)區(qū)和催化區(qū)末端的一小段氨基酸序列存在差異，與抑制劑結(jié)合的活性位點(diǎn)則位于鉸鏈區(qū)。atp結(jié)構(gòu)中的嘌呤環(huán)可結(jié)合于aurora激酶結(jié)構(gòu)的疏水口袋，并與鉸鏈區(qū)的氨基酸殘基形成氫鍵，aurora激酶抑制劑則可競爭性結(jié)合atp與aurora激酶的結(jié)合位點(diǎn)，也屬于atp競爭性抑制劑。有文獻(xiàn)報(bào)道，在g2末期顯微注射aurora激酶抗體可致有絲分裂啟動顯著延遲,現(xiàn)在認(rèn)為其機(jī)制是auroraa激酶作為活化的細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cdks)/cyclin復(fù)合物的下游效應(yīng)物，參與完成了啟動有絲分裂的一系列生化事件；它與cdks/cyclin復(fù)合物形成正反饋交互活化環(huán)，即cdks/cyclin復(fù)合物先激活aurora激酶，反過來aurora激酶又促進(jìn)cdks的完全活化及該復(fù)合物的細(xì)胞核內(nèi)定位,而這兩個事件對于啟動有絲分裂來說極為重要。總之，在整個細(xì)胞周期的運(yùn)行中，中心體上aurora激酶和cdks的共激活是啟動細(xì)胞有絲分裂必不可少的條件之一，它們在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和細(xì)胞有絲分裂的過程中彼此關(guān)聯(lián)，因此若能同時抑制aurora激酶和cdks的活性，就能雙重抑制腫瘤細(xì)胞的過度繁殖，由此可見，開發(fā)新型cdks/aurora多靶點(diǎn)抑制劑極具價值。在整個細(xì)胞周期中，cdk2除了掌控g1期進(jìn)入s期，cdk2還控制了s、g2期的細(xì)胞運(yùn)行，因此抑制cdk2就可以阻止細(xì)胞周期中dna的正常復(fù)制。而在m期，調(diào)節(jié)細(xì)胞的有絲分裂主要是依靠auroraa，它在中心體復(fù)制、兩極紡錘體的形成以及染色體的重排等方面起著不可替代的作用，抑制auroraa就可以阻止細(xì)胞有絲分裂。因此，尋找對cdk和aurora激酶能同時作用的小分子多靶點(diǎn)抑制劑，多方式影響癌細(xì)胞的細(xì)胞周期，更好的達(dá)到治療腫瘤的目的。到目前為止，有大量的cdk2和auroraa的晶體復(fù)合物結(jié)構(gòu)已被解析，抑制劑與靶標(biāo)的作用模式已非常清晰，為基于結(jié)構(gòu)的多靶點(diǎn)藥物設(shè)計(jì)奠定了基礎(chǔ)。通過對比發(fā)現(xiàn)，cdk2和auroraa激酶抑制劑都競爭性的結(jié)合于atp結(jié)合口袋中，主要是通過氫鍵和疏水作用和酶結(jié)合。它們與小分子抑制劑的作用模式具有一些共同的特點(diǎn)，其共同的藥效作用區(qū)域表現(xiàn)如下：即cdk2和auroraa激酶的三維結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)如氫鍵、疏水性以及親水性的空間分布很相似：1)鉸鏈區(qū)(hinger)：鉸鏈區(qū)為所有atp競爭性抑制劑的重要作用區(qū)域，在此區(qū)域往往存在有2-3個關(guān)鍵性的氫鍵，這兩個激酶中參與氫鍵形成的殘基分別為glu81和leu83(cdk2)；glu211和ala213(auroraa)。另外該區(qū)域存在的往往為一些疏水性的平面結(jié)構(gòu)片段，以保證在鉸鏈區(qū)還存在有一定的疏水作用。2)疏水區(qū)a：指在鉸鏈區(qū)與天冬氨酸(cdk2為asp145，auroraa為asp274)之間形成的一個疏水空腔，該區(qū)域位置靠近激酶的dfg基序，由于該環(huán)區(qū)具有一定的柔性，使得該處的疏水性結(jié)構(gòu)片段的選擇表現(xiàn)出一定的多樣性。3)親水區(qū)：兩者的活性位點(diǎn)中都存在有一個親水性的區(qū)域，在這一區(qū)域的親水性基團(tuán)的引入對化合物的理化性質(zhì)的調(diào)節(jié)有著重要的意義。cdk2的親水區(qū)在gln85附近；auroraa的親水區(qū)在leu215附近。這些藥效作用區(qū)域在空間上有著高度的重疊性，從而使我們設(shè)計(jì)出cdk/aurora多靶點(diǎn)的抑制劑成為可能，通過重疊配體方式所產(chǎn)生多靶點(diǎn)藥物分子往往具有分子量小，理化性質(zhì)好，耐藥性大為改善的特點(diǎn)。同時，近年來隨著對蛋白激酶研究的深入，基于結(jié)構(gòu)與基因序列，蛋白家族這樣概念被不斷提出作為參與細(xì)胞內(nèi)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控、結(jié)構(gòu)和功能相似的酶家族。依據(jù)磷酸化底物的不同(例如蛋白質(zhì)-酪氨酸、蛋白質(zhì)-絲氨酸/蘇氨酸、脂質(zhì)等)，可將蛋白激酶分類為多個子家族。蛋白激酶的特征在于它們的調(diào)節(jié)機(jī)制。這些機(jī)制包括例如自磷酸化、通過其它激酶的轉(zhuǎn)磷酸作用、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)-脂類相互作用以及蛋白質(zhì)-多核苷酸相互作用。單一的蛋白激酶可參與多種機(jī)制調(diào)節(jié)。蛋白激酶的功能在于催化atp末端的δ-磷酸對蛋白質(zhì)中絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化，調(diào)控其底物活性，介導(dǎo)多數(shù)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而調(diào)節(jié)很多不同的細(xì)胞過程。所述的細(xì)胞過程包括但不限于增殖、分化、凋亡、運(yùn)動、轉(zhuǎn)錄、翻譯和其它信號過程。磷酸化事件用作分子開關(guān)，可調(diào)節(jié)或調(diào)控靶蛋白生物學(xué)功能。靶蛋白的磷酸化因響應(yīng)于多種細(xì)胞外信號(激素、神經(jīng)遞質(zhì)、生長和分化因子等)、細(xì)胞周期事件、環(huán)境或營養(yǎng)應(yīng)激等而發(fā)生。適合的蛋白激酶在(直接或間接)活化或鈍化例如代謝酶、調(diào)節(jié)蛋白、受體、細(xì)胞骨架蛋白、離子通道或泵或者轉(zhuǎn)錄因子的信號傳導(dǎo)途徑中發(fā)揮作用。由于蛋白磷酸化控制缺陷造成的信號傳導(dǎo)失控與多種疾病有關(guān)，所述的疾病包括例如炎癥、癌癥、糖尿病、變態(tài)反應(yīng)/哮喘、免疫系統(tǒng)的疾病和病癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病和病癥以及血管生成的疾病和病癥等。人類激酶組(humankinome)包含518種蛋白激酶，主要可分為酪氨酸激酶90種、絲氨酸/蘇氨酸激酶388種和非經(jīng)典激酶40種?；谶M(jìn)化分析，hanks和hunter通過對人類蛋白激酶進(jìn)行過幾次分類。隨著克隆蛋白激酶成員的增加,他們對蛋白激酶的分類越來越系統(tǒng)和詳細(xì)。他們以系統(tǒng)進(jìn)化樹作為蛋白激酶分類的基礎(chǔ)。hanks和hunter對1993年6月為止發(fā)表的蛋白激酶成員的整個功能域的氨基酸序列進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。此系統(tǒng)進(jìn)化樹中包括4個大的激酶家族:(a)agc家族,包括環(huán)核苷酸依賴家族(pka和pkg家族)，蛋白激酶c家族，b-腎上腺素受體激酶(bark)家族，核糖體s6激酶家族和其它相關(guān)激酶；(b)camk家族,包括ca2+/-鈣調(diào)素調(diào)節(jié)的蛋白激酶家族,snfl/ampk家族和其它相關(guān)蛋白激酶；(c)cmgc家族,包括細(xì)胞周期因子依賴蛋白激酶(cdk)家族,erk(map)蛋白激酶家族,糖原合成酶3激酶(gsk3)家族,酪蛋白激酶ⅱ家族,clk家族和其他相關(guān)激酶；(d)酪氨酸蛋白激酶家族。此系統(tǒng)進(jìn)化樹中還包括許多不屬于此四大家族的蛋白激酶。每個大家族可進(jìn)一步分類為亞家族，其中每大家族中至少顯示一個實(shí)例，即ablabelson激酶；aktakt/蛋白激酶b(pkb)；egfr表皮生長因子受體；fgfr纖維母細(xì)胞生長因子受體；mlk混合譜系激酶(mixed-lineagekinase)；pdgfr血小板衍生生長因子受體；tie有免疫球蛋白-樣酪氨酸激酶和egf-樣結(jié)構(gòu)區(qū)；vegfr血管內(nèi)皮生長因子受體。同一個家族的成員除了在一級結(jié)構(gòu)上有較高的一致性以外,它們在拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)方式和底物特異性方面具有相似性,進(jìn)化上相近的成員,功能上也具有相近性。cmgc是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶中的一類,它們大都磷酸化位于脯氨酸豐富的環(huán)境中的絲氨酸或蘇氨酸。這一家族的成員在ⅹ和?功能亞域有一較大的插入序列。由于dyrk(mnb),dyrk2,dyrk3都與yakl有較高同源性,因此應(yīng)歸于一個家族。其中cdk家族作為cmgc中一大類在本文之前有過介紹，如cdk1、cdk2、cdk4和cdk6主要參與調(diào)控整個細(xì)胞周期的運(yùn)行中，而其他cdk家族成員參與了其它生物化學(xué)過程。以cdk5舉例說明，cdk5在正確的神經(jīng)元發(fā)展中是必需的并且其也涉及數(shù)種神經(jīng)元蛋白(例如tau、nude-1、突觸蛋白1、darpp32和munc18/突觸融合蛋白1a復(fù)合體)的磷酸化。神經(jīng)元cdk5通常是通過與p35/p39蛋白結(jié)合而活化的。但是，cdk5的活性可以通過與p25(p35的截短形式)的結(jié)合而失調(diào)。p35至p25的轉(zhuǎn)化以及接下來cdk5活性的失調(diào)可以由局部缺血、興奮性中毒和β-淀粉樣肽誘導(dǎo)。因此，p25已經(jīng)涉及神經(jīng)變性疾病(例如阿爾茨海默病)的發(fā)病機(jī)制，并且因此其被關(guān)注作為直接治療這些疾病的靶標(biāo)。cdk7是具有cdc2cak活性并且與細(xì)胞周期蛋白h結(jié)合的核蛋白。已經(jīng)表明cdk7是具有rna聚合酶iic-末端結(jié)構(gòu)域(ctd)活性的tfiih轉(zhuǎn)錄復(fù)合體的組分。其通過tat-介導(dǎo)的生物化學(xué)途徑而與hiv-1轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)有關(guān)。cdk8與細(xì)胞周期蛋白c結(jié)合并且涉及rna聚合酶ii的ctd的磷酸化。類似地，cdk9/細(xì)胞周期蛋白-t1復(fù)合體(p-tefb復(fù)合體)涉及rna聚合酶ii的延長控制。ptef-b也需要hiv-1基因組通過與細(xì)胞周期蛋白t1相互作用而被病毒反式激活蛋白tat轉(zhuǎn)錄活化。因此，cdk7、cdk8、cdk9和p-tefb復(fù)合體是抗病毒治療的潛在靶標(biāo)。在分子水平調(diào)節(jié)cdk/細(xì)胞周期蛋白復(fù)合體的活性需要一系列刺激的和抑制的磷酸化或去磷酸化事件。cdk磷酸化是通過一組cdk活化激酶(cak)和/或激酶例如wee1、myt1和mik1而進(jìn)行的。去磷酸化是通過磷酸酶例如cdc25(a和c)、pp2a或kap進(jìn)行的。同時，人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期蛋白d1的過度表達(dá)與食管癌、乳腺癌、鱗狀癌和非小細(xì)胞肺癌有關(guān)。在肺癌發(fā)病機(jī)制中，作用抑癌基因的失活是目前研究中的一個熱點(diǎn)，抑癌基因p15/mts2(簡稱p15基因)編碼p15蛋白屬于ink4蛋白家族，它作用于細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cdk)與細(xì)胞周期蛋白(cyclin)復(fù)合物，特異性抑制cdk4及cdk16激酶活性，阻止其磷酸化r6蛋白，限制細(xì)胞由g1期向s期轉(zhuǎn)變，減少細(xì)胞增殖.。cmgc激酶的另一家族成員絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，mapk)是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，能將細(xì)胞外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞及核內(nèi)，通過保守的三級級聯(lián)反應(yīng)(mapkkk-mapkk-mapk)激活轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)基因表達(dá)。該通路存在于大多數(shù)細(xì)胞中，且與多種細(xì)胞功能相關(guān)，可參與細(xì)胞運(yùn)動、凋亡、分化及生長增殖等多種生理過程。已確定有4條mapk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路：每條信號通路都具有高度特異性，具有獨(dú)立的功能。在某些程度上幾條信號通路間存在著一定的串話(crosstalk)。利用抑制劑或激活劑對各條信號通路進(jìn)行研究，不僅可以非常好的了解信號通路的作用機(jī)制，而且可以為疾病的診斷和治療創(chuàng)造新的契機(jī)，erk信號通路是研究最透徹的通路之一，其中，mek是ras-raf-mek-erk信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)鍵酶，對不同的生長信號調(diào)節(jié)細(xì)胞應(yīng)答。至今發(fā)現(xiàn)7個mek亞型，分別磷酸化并激活下游的mapks，其中mek1和mek2激活erk，mek3和mek4激活p38，而mek5和mek6激活jnk。因此在erk信號通路研究中，常以mek1/mek2作為腫瘤治療的靶標(biāo)，開發(fā)具發(fā)展前景的抗腫瘤藥物。p38mapk信號通路是mapk通路的一條重要分支，該通路可被應(yīng)激刺激(滲透壓休克、uv、缺氧)、細(xì)胞因子刺激、胰島素、生長因子刺激激活，甚至在正常的免疫和炎性反應(yīng)中被活化。同時，近幾年另一信號通路p38的研究也成為熱點(diǎn)，是臨床上治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎攻克的主要靶標(biāo)。.c-junn端激酶(jnk)/應(yīng)激活化蛋白(sapk)信號通路jnks(c-junn端激酶)是mapks家族的重要成員之一。c-jun屬于ap-1轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物的一個成員，參與控制細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化、生存和死亡。jnk也能磷酸化p53和一些非核蛋白。jnk介導(dǎo)的目標(biāo)蛋白磷酸化作用極其重要，它能夠誘導(dǎo)白細(xì)胞介素、vegf、cox-2、mmp-9、血紅素加氧酶-1、icam-1,ncx1,gnrhr及其他細(xì)胞因子的基因表達(dá)。jnk信號通路參與炎癥及包括風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腸易激綜合征、動脈粥樣硬化在內(nèi)的自身免疫性疾病。k5/大絲裂素活化蛋白激酶(bmk1)信號通路erk5/bmk1是mapk家族最晚發(fā)現(xiàn)的信號通路，其胞外應(yīng)激物有高糖、低氧、血流切應(yīng)力、活性氧簇(ros)、滲透壓以及各種絲裂原如egf、ngf等。erk5/bmk1同樣遵循mapk的級聯(lián)反應(yīng)，mekk2/3(mapk-kk)-mek5(mapkk)-bmk1/erk5(mapk)。一旦激活后，erk5由胞漿移至核內(nèi)，并磷酸化大量的下游目標(biāo)，包括mef2c、c-myc、bim、ap-1等。erk5在細(xì)胞生存、增殖及分化中發(fā)揮著重要作用，目前研究發(fā)現(xiàn)其與糖尿病腎病、肝纖維化以及腫瘤等病理過程密切相關(guān)。糖原合酶激酶-3(gsk-3)是絲氨酸-蘇氨酸激酶，該酶在人體中以兩種普遍存在的表達(dá)的同種型(gsk3α和βgsk3β)存在。gsk3涉及在胚胎發(fā)育、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、微管動力學(xué)、細(xì)胞運(yùn)動和細(xì)胞凋亡中起作用。同樣gsk3涉及疾病狀態(tài)的進(jìn)程，所述的疾病狀態(tài)例如糖尿病、癌癥、阿爾茨海默病、中風(fēng)、癲癇、運(yùn)動神經(jīng)元疾病和/或頭部創(chuàng)傷。在系統(tǒng)發(fā)育方面，gsk3與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cdk)是最相關(guān)的。gsk3形成了哺乳動物胰島素響應(yīng)途徑的一部分并且能夠磷酸化，并且因此鈍化糖原合酶。通過gsk3的抑制，糖原合酶活性增量調(diào)節(jié)并且因此糖原合成已經(jīng)因此被認(rèn)為是對抗ii型或非胰島素依賴性糖尿病(niddm)(其中機(jī)體組織對胰島素刺激變得有抗性的病癥)的潛在的方法。抑制gsk3(例如通過“哺乳動物雷帕霉素靶標(biāo)”蛋白(mtor)的鈍化)可以增量調(diào)節(jié)蛋白的生物合成。最后，通過促細(xì)胞分裂原活化的蛋白激酶(mapk)途徑通過激酶(例如促細(xì)胞分裂原活化的蛋白激酶活化的蛋白激酶1(mapkap-k1或rsk))磷酸化gsk3來調(diào)節(jié)gsk3活性已經(jīng)有一些證據(jù)。這些數(shù)據(jù)表明gsk3的活性可以由促細(xì)胞分裂的、胰島素/或氨基酸刺激來調(diào)節(jié)。除此之外，gsk3β在脊椎動物wnt信號傳導(dǎo)途徑中是關(guān)鍵組分。已經(jīng)表明該生物化學(xué)途徑對于正常的胚胎發(fā)育是關(guān)鍵的并且調(diào)節(jié)正常組織中的細(xì)胞增殖。在對wnt刺激響應(yīng)中g(shù)sk3變?yōu)橐种频?。這可以引起gsk3底物(例如axin、腺瘤性結(jié)腸息肉(apc)基因產(chǎn)物和β-聯(lián)蛋白)的去磷酸化。wnt途徑的異常調(diào)節(jié)與許多癌癥有關(guān)。apc和/或β-聯(lián)蛋白中的突變在結(jié)腸直腸癌和其它腫瘤中是很普遍的。也表明β-聯(lián)蛋白在細(xì)胞粘附中很重要。因此，gsk3也可以在某種程度上調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附過程。除了已經(jīng)描述的生物化學(xué)途徑，也有涉及gsk3在通過細(xì)胞周期蛋白-d1的磷酸化來調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂中的數(shù)據(jù)、gsk3在轉(zhuǎn)錄因子(例如c-jun、ccaat/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(c/ebpα)、c-myc和/或其它底物，例如活化的t-細(xì)胞的核因子(nfatc)、熱休克因子(hsf-1)和c-amp響應(yīng)元件結(jié)合蛋白(creb))的磷酸化的數(shù)據(jù)。雖然具有組織特異性，但是gsk3也在調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用。gsk3在通過前凋亡機(jī)制調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡中的作用可能與可以發(fā)生神經(jīng)元凋亡的醫(yī)學(xué)病癥特別有關(guān)。這些病癥的實(shí)例是頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)、癲癇、阿爾茨海默病和運(yùn)動神經(jīng)元疾病、進(jìn)行性核上麻痹、皮質(zhì)基底節(jié)變性和皮膚病。體外已經(jīng)表明gsk3能夠過度磷酸化與蛋白tau有關(guān)的微管。tau的過度磷酸化破壞了其與微管的正常結(jié)合并且也可以引起細(xì)胞內(nèi)tau纖絲的形成。相信這些纖絲的逐步富集引起了最終的神經(jīng)元功能障礙和變性。因此，通過抑制gsk3而抑制tau磷酸化可以提供限制和/或預(yù)防神經(jīng)變性作用的方法。蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinases，ptks)作為另一類重要的蛋白激酶家族，它催化atp的γ磷酸基轉(zhuǎn)到許多重要蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上，使酚羥基磷酸化，在一般的正常細(xì)胞中(神經(jīng)細(xì)胞除外)，蛋白質(zhì)的酪氨酸磷酸化是極少發(fā)生的。雖然磷酸化的酪氨酸僅占體內(nèi)磷酸化氨基酸0.5‰，但是一系列證據(jù)表明，酪氨酸磷酸化在許多細(xì)胞調(diào)節(jié)過程中起著重要作用。它傳遞細(xì)胞信號，是信號傳遞過程中的重要因子。蛋白酪氨酸激酶參與一系列細(xì)胞功能，與細(xì)胞生長、分化、增殖密切相關(guān)。在細(xì)胞的惡性生長和增殖中，酪氨酸激酶起著非常重要的作用，酪氨酸激酶功能的失調(diào)，會導(dǎo)致其下游信號途徑激活，，引起細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)紊亂,最終導(dǎo)致腫瘤形成。所以酪氨酸激酶抑制劑可對惡性腫瘤有預(yù)防和治療作用。根據(jù)(ptks)是否存在于細(xì)胞膜受體可將其分為非受體酪氨酸激酶(nonreceptortyrosinekinases,簡稱nrtks)和受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinases，簡稱rtks)。目前發(fā)現(xiàn)受體酪氨酸激酶(rtks)58種。這些蛋白激酶的結(jié)構(gòu)上都存在一個由約270氨基酸殘基構(gòu)成的催化結(jié)構(gòu)區(qū)，這個結(jié)構(gòu)區(qū)非常相似。受體型的酪氨酸激酶(ptks)則是一種具有跨膜結(jié)構(gòu)的蛋白，通常具有一個細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、一個跨膜區(qū)以及一個細(xì)胞內(nèi)激酶域。癌癥臨床研究表明，這些受體及其配體與很多腫瘤都有重要聯(lián)系，很多癌癥出現(xiàn)了相關(guān)生長因子的過量表達(dá)，導(dǎo)致過量的酪氨酸磷酸化信號傳入細(xì)胞，其中包括血小板衍生生長因子(pdgf)受體(pdgf受體α和β)、集落刺激因子(csf-i)受體(csf-1r，c-fms)、flt-3和干細(xì)胞因子受體(c-kit)等，與多種細(xì)胞增生及炎癥等疾病有關(guān)。其中，flt3基因位于染色體13q12,是1991年發(fā)現(xiàn)的早期造血生長因子受體基因,其編碼的flt3受體屬于第iii類酪氨酸激酶(rtk)受體家族成員。當(dāng)flt-3受體的細(xì)胞膜外結(jié)構(gòu)域與其內(nèi)源性配體結(jié)合后，flt-3形成同源或異源二聚體復(fù)合物,致使其酪氨酸激酶活性被激活,活化環(huán)開啟,促使底物蛋白連接到atp結(jié)合位點(diǎn)上,進(jìn)一步催化底物蛋白的磷酸化,從而介導(dǎo)一系列下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo),導(dǎo)致細(xì)胞的增殖和分化。flt-3受體廣泛分布于骨髓造血干/祖細(xì)胞、胸腺、淋巴、胎盤、大腦、生殖腺等多種組織中。但flt-3基因突變(主要包括近膜結(jié)構(gòu)域的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)突變和酪氨酸激酶區(qū)域的點(diǎn)突變)、過度表達(dá)則會導(dǎo)致急性髓細(xì)胞性白血病等多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤疾病的發(fā)生,因此,將flt-3作為靶點(diǎn)用于腫瘤治療已經(jīng)成為研究的熱點(diǎn)，特別是在血液學(xué)惡性腫瘤中，flt3以高水平表達(dá)或者flt3突變引起不受控制的flt3受體和下游分子通道誘導(dǎo)，可能的ras活化。血液學(xué)惡性腫瘤包括"白血病、淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤)、霍奇金病(也稱為霍奇金淋巴瘤)和骨髓瘤一例如，急性淋巴細(xì)胞白血病(all)、急性粒細(xì)胞白血病(aml)、急性早幼粒細(xì)胞白血病(apl)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性粒細(xì)胞白血病(cml)、慢性嗜中性粒細(xì)胞白血病(cnl)、急性未分化細(xì)胞白血病(aul)、退行發(fā)育性大細(xì)胞性淋巴瘤(alcl)、幼淋巴細(xì)胞白血病(pml)、幼年型粒-單核細(xì)胞白血病(jmml)、成人t細(xì)胞all、伴有三鐠系(trilineage)脊髓發(fā)育不良的aml(aml/tmds)、混合型普系白血病(mll)、脊髓發(fā)育不良綜合征(mdss)、骨髓增生異常(mpd)、多發(fā)性骨髓瘤(mm)和脊髓肉瘤。同時，受體酪氨酸激酶胞外結(jié)構(gòu)區(qū)可結(jié)合特異性配基如生長因子，而細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)區(qū)達(dá)到激酶(自身)磷酸化。被受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路和生物學(xué)過程集中在血管生成，大量研究表明顯示了在血管生成中選擇涉及被受體酪氨酸激酶活化的通路。通路活化，例如通過vegfr或pdgfr可導(dǎo)致各種血管生成過程，如細(xì)胞增殖，遷移，生存和血管通透性。這與系列的血管類疾病密不可分。目前發(fā)現(xiàn)的32種非受體酪氨酸激酶(nrtks)，通常持續(xù)或暫時位于胞漿，或者在細(xì)胞內(nèi)側(cè)與跨膜蛋白結(jié)合，所以它們又被稱作胞漿型酪氨酸激酶，在腫瘤組織中nptks常被激活,促進(jìn)細(xì)胞增殖、抵抗細(xì)胞凋亡,促使腫瘤發(fā)生和發(fā)展。非受體酪氨酸激酶主要包括src、abl、jak、ack、csk、fak、fes、frk、tec、syk等10個家族。細(xì)胞因子(cytokine)能夠通過多種途徑進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而參與調(diào)控細(xì)胞生長和凋亡過程。細(xì)胞因子靶細(xì)胞生長，分化和凋亡過程。細(xì)胞因子受體通常在胞質(zhì)沒有ptks結(jié)構(gòu)域，但是在細(xì)胞因子靶細(xì)胞中在有nrptks一次介導(dǎo)細(xì)胞因子與其受體結(jié)合后的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。其中jak激酶與其下游的stat組成了重要的信號途徑。許多細(xì)胞因子都能激活jak/stat信號途徑，當(dāng)細(xì)胞因子與其受體結(jié)合引起細(xì)胞質(zhì)受體的構(gòu)象改變，進(jìn)而激活與受體結(jié)合引起細(xì)胞胞質(zhì)受體的構(gòu)象改變，進(jìn)而激活與受體關(guān)聯(lián)的jak激酶家族，jak激酶促使相應(yīng)的stat磷酸化而激活，激活的stat從受體上游離，形成二聚體后進(jìn)入細(xì)胞核，與gas增強(qiáng)家族成員結(jié)合，從而激活轉(zhuǎn)錄、誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，調(diào)控某些與細(xì)胞增殖和存活相關(guān)基因的表達(dá)，在腫瘤中的發(fā)生中起重要的作用。目前，受體酪氨酸激酶如血管內(nèi)皮生長因子受體現(xiàn)階段研究較多的是egfr和vegfr酪氨酸激酶抑制劑，是以血管生成抑制被發(fā)展為一種癌全身治療策略。早期上市的蛋白激酶抑制劑主要是針對單一靶點(diǎn)的單靶點(diǎn)抑制劑，雖然剛上市時在腫瘤治療中取得了令人矚目的成就，但是隨著使用時間的延長及治療病例的增多，問題逐漸暴露出來。相比較多靶點(diǎn)激酶抑制劑則顯示出一定的優(yōu)勢。由于同時靶向多個激酶分子和多條信號通路，不但可以避免單一靶點(diǎn)突變造成的耐藥性，而且可以顯著擴(kuò)大其抗瘤譜。單一靶點(diǎn)抑制劑su5416和su6668開發(fā)的失敗進(jìn)一步提示，多靶點(diǎn)激酶抑制劑應(yīng)將成為未來的主流發(fā)展方向。su5416和su6668分別靶向kdr和pdgfr-β，都因療效不佳而終止于臨床iii期和ii期，但同樣靶向kdr等多個激酶的sunitinib卻最終成功上市?，F(xiàn)在研究的化合物大多是針對多靶點(diǎn)設(shè)計(jì)的，這是因?yàn)槎喟悬c(diǎn)比單一靶點(diǎn)抑制活性和病人耐受性都好?，F(xiàn)在上市的和在臨床研究的小分子酪氨酸抑制劑根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)只要分為以下幾類：喹唑啉類、吲哚酮類、噠嗪類、氰基喹啉類和吡咯并嘧啶類等結(jié)構(gòu)。三種抗血管生成酪氨酸激酶抑制劑(tkis)，舒尼替尼(sunitinib)，索拉非尼(sorafenib)和帕唑帕尼(pazopanib)，與血管生成激酶有不同結(jié)合能力最近被批準(zhǔn)治療晚期癌癥(腎細(xì)胞癌，胃腸道間質(zhì)瘤，和肝細(xì)胞癌)患者。許多其它抗血管生成tkis正在i-iii期臨床試驗(yàn)研究。除了它們有益的抗腫瘤活性，用這些藥物還曾觀察到臨床耐受性和毒性。長期大劑量使用紫杉烷類注射液已造成病人耐藥現(xiàn)象并導(dǎo)致療效下降，越來越多的證據(jù)表明，耐藥現(xiàn)象會限制靶點(diǎn)受體酪氨酸激酶抑制劑的療效。因而，開發(fā)新一代的抗癌藥物，具有重要的意義。同時研究表明激酶類疾病存在內(nèi)源性的相關(guān)聯(lián)，單一的靶標(biāo)作用難以真正抑制其發(fā)生。由于cdk及auraroa其相關(guān)蛋白在增殖細(xì)胞中協(xié)調(diào)和推動細(xì)胞周期中的關(guān)鍵性作用，可用于增殖性障礙例如癌癥治療(應(yīng)用通常靶向cdk或特異性cdk的療法)，也可以用于治療其它病癥例如病毒感染、自身免疫疾病和神經(jīng)變性疾病等。當(dāng)與存在的或新的治療劑組合用于治療時，cdk靶向治療也可以在前面描述的疾病的治療中提供臨床益處。與許多目前的抗腫瘤劑相比，且相對于前文中的酪氨酸激酶，cdk的突變及其抑制劑的耐藥情況發(fā)生情況少，靶向抗癌治療具有潛在的優(yōu)勢，且不直接與dna相互作用并且因此可以降低繼發(fā)性腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)。小分子多靶點(diǎn)的cdk抑制劑,如flavopiridol和ucn201,已經(jīng)在ⅰ、ⅱ期臨床試驗(yàn)中顯示出良好的抗腫瘤活性。但多數(shù)抑制劑為單一家族抑制劑，這方面許多公司都開展了這類的抑制劑研究，如處于i/ii期研究階段的新型小分子多細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑at7519作用于cdk1/cyclinb,cdk2/cyclina,cdk3/cycline等多個靶點(diǎn)，同時，at7519也可通過下調(diào)同家族蛋白抑制劑gsk-3β磷酸化而誘導(dǎo)gsk-3β激活，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。相對而言，跨激酶蛋白家族的抑制劑的結(jié)構(gòu)類型目前報(bào)道尚不多，選擇性的作用于多個疾病特征性的靶點(diǎn)的激酶抑制劑的研發(fā)具有其突破性的意義。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明在研究了大量具有選擇性的cdk2、auroraa小分子抑制劑的基礎(chǔ)上，根據(jù)cdk2、auroraa的晶體結(jié)構(gòu)模型，利用計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)手段分別搭建了cdk2、auroraa抑制劑的構(gòu)效關(guān)系模型和藥物虛擬篩選模型，在此基礎(chǔ)上采用碎片增長的計(jì)算機(jī)輔助藥物設(shè)計(jì)方法構(gòu)建相關(guān)化合物庫，通過虛擬篩選，確定并合成了一系列以4-(五元雜環(huán)并嘧啶/吡啶取代)氨基-1h-3-吡唑甲酰胺為母核的全新結(jié)構(gòu)的化合物，藥理試驗(yàn)顯示，本發(fā)明的化合物均具有優(yōu)良的cdk2、auroraa雙重抑制活性的同時，還對多個cmcg家族及tk家族激酶具有抑制活性。對多種腫瘤細(xì)胞株具有強(qiáng)的抑制活性，部分化合物優(yōu)于目前已報(bào)道的cdk2抑制劑at-7519，auroraa抑制劑at-9283及多靶點(diǎn)抑制劑十字苞堿。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：通式(i)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽及互變異構(gòu)體：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；x、y各自獨(dú)立地表示n原子或ch原子團(tuán)；其中ch原子團(tuán)可任選被r4取代，r4可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；z、m各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch原子團(tuán)，且z、m必需有一個為nh、o或s；其中ch或nh原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r5取代，r5可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；a1各自獨(dú)立地表示nh、o、s或亞烷基原子團(tuán)；其中nh原子團(tuán)或亞烷基原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r6取代，r6可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；a2各自獨(dú)立地表示亞烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亞烷基-c(o)、c(o)-亞烷基、亞烷基-c(o)-亞烷基或nhc(o)nh；上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r7取代，r7可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；q1是選自芳基或het，其中芳基或het各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r8取代，r8可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；q2是選自芳基或het，其中芳基或het各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r9取代，r9可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；烷基為具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基；或?yàn)榫哂?-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；或?yàn)檫B接具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基的具有3-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；亞烷基為具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基；或?yàn)榫哂?-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；或?yàn)檫B接具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基的具有3-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基失去一個氫原子形成的基團(tuán)；烷氧基為具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基；或?yàn)榫哂?-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；或?yàn)檫B接具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基的具有3-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；其中各碳原子任選被氧取代；烷硫基為具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基；或?yàn)榫哂?-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；或?yàn)檫B接具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基的具有3-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；其中各碳原子任選被硫取代；烷氧基烷基為如上定義的烷氧基與烷基連接；芳基為選自苯基、萘基、苊基或四氫萘基的碳環(huán)，其各自任選被1、2或3個取代基取代，各取代基獨(dú)立地選自氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或het；芳烷基、二芳基烷基為如上定義的芳基與烷基連接；het為選自哌啶基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或噠嗪基的單環(huán)雜環(huán)；或選自喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、2,3-二氫苯并[1,4]二氧雜環(huán)己烯基或苯并[1,3]二氧雜環(huán)戊烯基的雙環(huán)雜環(huán)；各單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)任選被1、2或3個取代基取代，各取代基獨(dú)立選自鹵素、鹵代烷基、羥基、烷基或烷氧基；鹵素為選自氟、氯、溴或碘的取代基；鹵代烷基為具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基，或?yàn)榫哂?-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基，或?yàn)檫B接具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基的具有3-6個碳原子的環(huán)狀飽和烴基；其中一個或多個碳原子被一個或多個鹵原子取代。本發(fā)明的優(yōu)選方案在于：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基；x、y各自獨(dú)立地表示n原子或ch原子團(tuán)；其中ch原子團(tuán)可任選被r4取代，r4可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基；z、m各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch原子團(tuán)，且z、m必需有一個為nh、o或s；其中ch或nh原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r5取代，r5可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基；a1各自獨(dú)立地表示nh、o、s或亞烷基原子團(tuán)；其中nh原子團(tuán)或亞烷基原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r6取代，r6可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基；a2各自獨(dú)立地表示亞烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亞烷基-c(o)、c(o)-亞烷基、亞烷基-c(o)-亞烷基或nhc(o)nh；上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r7取代，r7可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基；q1是選自芳基或het，其中芳基或het各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r8取代，r8可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基；q2是選自芳基或het，其中芳基或het各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r9取代，r9可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基、烷氧基烷基、芳烷基或芳基。本發(fā)明的另一優(yōu)選方案在于：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；x、y各自獨(dú)立地表示n原子或ch原子團(tuán)；其中ch原子團(tuán)可任選被r4取代，r4可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；z、m各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch原子團(tuán)，且z、m必需有一個為nh、o或s；其中ch或nh原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r5取代，r5可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；a1各自獨(dú)立地表示nh、o、s或亞烷基原子團(tuán)；其中nh原子團(tuán)或亞烷基原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r6取代，r6可以氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；a2各自獨(dú)立地表示亞烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亞烷基-c(o)、c(o)-亞烷基、亞烷基-c(o)-亞烷基或nhc(o)nh；上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r7取代，r7可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；q1是選自芳基或het，其中芳基或het各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r8取代，r8可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；q2是選自芳基或het，其中芳基或het各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r9取代，r9可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基。本發(fā)明的另一優(yōu)選方案在于：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；x、y各自獨(dú)立地表示n原子或ch原子團(tuán)；其中ch原子團(tuán)可任選被r4取代，r4可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；z、m各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch原子團(tuán)，且z、m必需有一個為nh、o或s；其中ch或nh原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r5取代，r5可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；a1各自獨(dú)立地表示nh、o、s或亞烷基原子團(tuán)；其中nh原子團(tuán)或亞烷基原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r6取代，r6可以氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；a2各自獨(dú)立地表示亞烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亞烷基-c(o)、c(o)-亞烷基、亞烷基-c(o)-亞烷基或nhc(o)nh；上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r7取代，r7可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；q1是選自下列的芳香環(huán)或取代的芳香環(huán)：苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r8取代，r8可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；q2是選自下列的芳香環(huán)：苯基、萘基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，或c3-c8的脂肪族碳環(huán)，或下列的脂肪族雜環(huán)：四氫吡咯基、哌啶基、嗎啉基、甲基哌嗪基；上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被一個或多個r8取代，r8可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基。本發(fā)明的另一優(yōu)選方案在于：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；x、y各自獨(dú)立地表示n原子或ch原子團(tuán)；其中ch原子團(tuán)可任選被r4取代，r4可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；z、m各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch原子團(tuán)，且z、m必需有一個為nh、o或s；其中ch或nh原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r5取代，r5可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；a1各自獨(dú)立地表示nh、o、s或亞烷基原子團(tuán)；其中nh原子團(tuán)或亞烷基原子團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r6取代，r6可以氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；a2各自獨(dú)立地表示亞烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)、亞烷基-c(o)、c(o)-亞烷基、亞烷基-c(o)-亞烷基或nhc(o)nh；上述基團(tuán)各自獨(dú)立地可任選被r7取代，r7可以是氫、烷基、氰基、鹵素、鹵代烷基、羥基、巰基、烷氧基、烷硫基或烷氧基烷基；q1是選自下列的芳香環(huán)或取代的芳香環(huán)：苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，取代基可以是1～2個鹵素或三氟甲基；q2是選自下列的芳香環(huán)：苯基、萘基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，或c3-c8的脂肪族碳環(huán)，或下列的脂肪族雜環(huán)：四氫吡咯基、哌啶基、嗎啉基、甲基哌嗪基。本發(fā)明的另一優(yōu)選方案在于：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、c1-c4烷基；x、y各自獨(dú)立地表示n原子或ch原子團(tuán)；z、m各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch原子團(tuán)，且z、m必需有一個為nh、o或s；a1各自獨(dú)立地表示nh、o、s或ch2原子團(tuán)；a2各自獨(dú)立地表示鏈狀c1-c4亞烷基、c(o)nh、c(o)、nhc(o)；q1是選自下列的芳香環(huán)或取代的芳香環(huán)：苯基、萘基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，取代基可以是1～2個鹵素或三氟甲基；q2是選自下列的芳香環(huán)：苯基、萘基、吡唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，或c3-c8的脂肪族碳環(huán)，或下列的脂肪族雜環(huán)：四氫吡咯基、哌啶基、嗎啉基、甲基哌嗪基。本發(fā)明的另一優(yōu)選方案在于：其中r1、r2、r3各自獨(dú)立地表示氫、甲基；a1表示nh；a2表示ch2；q1表示苯基；q2表示嗎啉基、甲基哌嗪基。根據(jù)本發(fā)明，藥學(xué)上可接受的鹽包括通式i化合物與下列酸形成的酸加成鹽：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、萘磺酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、馬來酸或琥珀酸、富馬酸、水楊酸、苯基乙酸、杏仁酸。此外還包括無機(jī)堿的酸式鹽，如：含有堿性金屬陽離子、堿土金屬陽離子、銨陽離子鹽。當(dāng)存在硫時，其可以在相鄰原子和基團(tuán)的性質(zhì)允許時以-s-、-s(o)-或-s(o)2-存在。通式i的化合物優(yōu)選以下結(jié)構(gòu)化合物：4-(4-噻吩并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-1)4-(4-噻吩并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-2)4-(4-(6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-3)4-(4-(6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-4)4-(4-(5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-5)4-(4-(5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-6)4-(4-(5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-7)4-(4-(5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-8)4-(4-噻吩并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-9)4-(4-噻吩并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-10)4-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-11)4-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-12)4-(4-(6-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-13)4-(4-(6-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-14)4-(4-(5-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-15)4-(4-(5-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-16)4-(4-(5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-17)4-(4-(5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-18)4-(4-(6-甲基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-19)4-(4-(6-甲基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-20)4-(4-呋喃并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-21)4-(4-呋喃并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-22)4-(4-呋喃并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-23)4-(4-呋喃并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-24)4-(4-噻吩并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-25)4-(4-噻吩并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-26)4-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-27)4-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-28)4-(7-噻吩并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-29)4-(7-噻吩并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-30)4-(7-(3-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-31)4-(7-(3-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-32)4-(4-呋喃并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-33)4-(4-呋喃并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-34)4-(4-(2-甲基呋喃并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-35)4-(4-(2-甲基呋喃并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-36)4-(7-呋喃并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-37)4-(7-呋喃并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-38)4-(7-呋喃并[3,2-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-39)4-(7-呋喃并[3,2-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-40)4-(4-呋喃并[2,3-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-41)4-(4-呋喃并[2,3-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-42)4-(7-(1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-43)4-(7-(1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-44)4-(7-(2-甲基-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-45)4-(7-(2-甲基-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-46)4-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶)基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-47)4-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶)基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-48)本發(fā)明的部分化合物制備方法如下：方法一：方法二：方法三：方法四：本發(fā)明化合物都可以用上述或類似上述的制備方法制備得到，根據(jù)取代基的不同和取代基位置的不同選用相應(yīng)的原料即可。在式(i)化合物中，包括吡唑基團(tuán)可以是下列兩種互變異構(gòu)體形式a和b中的任何一種?；プ儺悩?gòu)體形式的其它實(shí)例包括例如酮-、烯醇-和烯醇化物-形式，如例如在下列互變異構(gòu)體對中：酮/醇(以下說明的)、亞胺/烯胺、酰胺/亞胺醇、脒/脒、亞硝基/肟、硫酮/烯硫醇以及硝基/酸式-硝基中。式(i)化合物及其亞組作為是cmgc家族激酶，特別選自cdk細(xì)胞周期蛋白激酶、gsk糖原合成激酶、促分裂素原活化蛋白激酶(mapk)和cdk-樣激酶(clk)家族激酶。優(yōu)選的化合物是抑制一種或多種cdk激酶、gsk激酶及mapk激酶的化合物，所述激酶選自cdk1、cdk2、cdk3、cdk4、cdk5、cdk6、cdk7、cdk9、gsk3、chk2、erk7、fgfr、vegfr、jak、jnk、kdr、pdgfr、c-scr、aurora和flt3。本發(fā)明化合物還被視為tk家族激酶抑制，特別是選自受體酪氨酸家族抑制劑及非受體酪氨酸家族抑制劑，其中特別選自受體激酶家族抑制劑,表皮生長因子受體(egfr)家族、血小板生長因子受體(pdgfr)家族、神經(jīng)生長因子受體(ngfr)、成纖維細(xì)胞生長因子受體(fgfr)家族、肝細(xì)胞生長因子受體(hgfr)家族、血管內(nèi)皮生長因子受體(vegfr)以及胰島素受體(insr)家族等等rtks非受體酪氨酸激酶主要包括src、abl、jak、ack、csk、fak、fes、frk、tec、syk等10個家族.作為它們調(diào)節(jié)或抑制cmgc家族和tk家族激酶的結(jié)果，預(yù)期它們可用于提供對細(xì)胞增殖，分化及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的異常的阻止或恢復(fù)性的控制手段。因此將證實(shí)可用于治療或預(yù)防細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)失調(diào)與紊亂，例如腫瘤。還可以想象本發(fā)明的化合物可用于治療如下疾病，例如炎癥，病毒感染，ii型或非胰島素依賴糖尿病、自身免疫疾病。頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)、癲癇，神經(jīng)性疾病(如阿爾默茲海姆癥)、運(yùn)動神經(jīng)元疾病。本發(fā)明化合物還被視為糖原合成酶激酶-3(gsk3)的抑制劑。作為它們調(diào)節(jié)或抑制cdk激酶和糖原合成酶激酶的活性的結(jié)果，預(yù)期它們可用于提供對異常分化細(xì)胞的細(xì)胞周期阻止性或恢復(fù)性控制的手段。因此，可以預(yù)見，這些化合物將證實(shí)可用于治療或預(yù)防增殖紊亂，例如癌癥。還可以想象本發(fā)明的化合物可用于治療下列病癥，例如病毒感染、ii型或非胰島素依賴型糖尿病、自身免疫性疾病、頭部創(chuàng)傷、中風(fēng)、癲癇、神經(jīng)變性疾病(如阿爾茨海默氏病)、運(yùn)動神經(jīng)元疾病、進(jìn)行性核上性麻痹、皮質(zhì)基底節(jié)變性和皮克氏病。本發(fā)明的化合物對其有用的疾病狀態(tài)和病癥的一個亞組包括病毒感染、自身免疫性疾病和神經(jīng)變性疾病?？杀灰种频哪[瘤實(shí)例包括但不限于癌：例如膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌肺癌)gsk3b可通過調(diào)節(jié)糖原合成酶、p27和等蛋白因子，以及參與胞內(nèi)經(jīng)典的信號通路等方式，調(diào)控癌細(xì)胞的分化增殖與凋亡，通過參與單胺神經(jīng)受體的行為調(diào)控作用，在神經(jīng)精神類疾病的發(fā)病機(jī)制中起到重要作用，同時還能通過通路以外的其他因子和通路介導(dǎo)神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生，因此，成為各種重大疾病治療中炙手可熱的抑制靶點(diǎn)。本發(fā)明包括本發(fā)明的化合物抑制細(xì)胞或受試者的flt3激酶活性、或治療與flt3激酶活性或表達(dá)有關(guān)的病癥的用途?？梢员灰种频陌┌Y的實(shí)例包括但是不限于癌癥，例如膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌(例如結(jié)腸直腸癌，例如結(jié)腸腺癌和結(jié)腸腺瘤)、腎癌、表皮癌、肝癌、肺癌(例如腺癌、小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌)、食道癌、膽囊癌、卵巢癌、胰腺癌(例如外分泌胰腺癌)、胃癌、宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌或皮膚癌(例如鱗狀細(xì)胞癌)；淋巴譜系的造血腫瘤(例如白血病、急性淋巴性白血病、b-細(xì)胞淋巴瘤、t-細(xì)胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、多毛細(xì)胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤)；骨髓譜系的造血腫瘤(例如急性或慢性髓性白血病、骨髓發(fā)育不良綜合癥或早幼粒細(xì)胞白血病)；甲狀腺濾泡癌；間充質(zhì)起源的腫瘤(例如纖維肉瘤或橫紋肌肉瘤)，中樞或外周神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤(例如星形細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或神經(jīng)鞘瘤)；黑素瘤；精原細(xì)胞瘤；惡性畸胎瘤；骨肉瘤；著色性干皮病；keratoctanthoma；甲狀腺濾泡癌；卡波西肉瘤，b-細(xì)胞淋巴瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病。本發(fā)明的化合物作為作為cmgc及tk雙家族激酶活性抑制劑的用途可以利用下文實(shí)施例中所述的測定法來測量，給定化合物所表現(xiàn)的活性水平可通過ic50值來限定。下面是部分藥理學(xué)試驗(yàn)及結(jié)果：(1)目標(biāo)化合物的cdk2抑制活性測定所合成的化合物用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fret)法測定對cdk2/a的抑制活性，并與陽性對照藥比較，篩選出活性較好的化合物。cdk2/a通過純化或直接購買試劑盒獲得。具體方法：cdk2/a用激酶稀釋液稀釋至合適濃度后使用。激酶反應(yīng)混合物中含cdk2/a、peptidesubstrate、hepes(ph7.5)、brij-35、mgcl2和edta。cdk2phospho-peptidesubstrate用作100％磷酸化對照，不加atp用作0％磷酸化對照。室溫下反應(yīng)1h后，向反應(yīng)體系中加入適度稀釋的developmentreagenta。室溫下繼續(xù)反應(yīng)1h，加入stopreagent中止反應(yīng)。激發(fā)波長400nm，同時檢測波長為445nm(coumarin)和520nm(fluorescein)的熒光強(qiáng)度。按公式計(jì)算受試化合物抑制率。(2)目標(biāo)化合物的auroraa抑制活性測定所合成的化合物用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fret)法測定對auroraa的抑制活性，并與陽性對照藥比較，篩選出活性較好的化合物。auroraa通過純化或直接購買試劑盒獲得。具體方法：auroraa用激酶稀釋液稀釋至合適濃度后使用。激酶反應(yīng)混合物中含auroraa、peptidesubstrate、hepes(ph7.5)、brij-35、mgcl2和edta。auroraaphospho-peptidesubstrate用作100％磷酸化對照，不加atp用作0％磷酸化對照。室溫下反應(yīng)1h后，向反應(yīng)體系中加入適度稀釋的developmentreagenta。室溫下繼續(xù)反應(yīng)1h，加入stopreagent中止反應(yīng)。激發(fā)波長400nm，同時檢測波長為445nm(coumarin)和520nm(fluorescein)的熒光強(qiáng)度。按公式計(jì)算受試化合物抑制率。(3)cdk2、auroraa抑制活性結(jié)果化合物cdk2抑制率％auroraa抑制化合物代cdk2抑制率％auroraa抑制(4)目標(biāo)化合物的多靶點(diǎn)篩選試驗(yàn)方法基于rcb公司開發(fā)的hotspot的激酶篩選平臺，使用標(biāo)準(zhǔn)放射性標(biāo)記的激酶試驗(yàn)法，激酶(通過克隆到桿狀病毒并表達(dá)激酶域的活性實(shí)驗(yàn)測定ic50值，桿狀病毒使用fastbac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)。)及底物及流程(原理：substrate+[33p]-atp33p-substrate+adp)可檢測待測化合物與342激酶及與突變變異型相關(guān)的疾病之間的相互作用，是目前最具綜合性的，對作用于人類激酶的化合物進(jìn)行高通量篩選的系統(tǒng)。激酶實(shí)驗(yàn)使用10μmatp,[33p]atp，及生物素肽段，使用sa-閃光板測定33p的合并率。實(shí)驗(yàn)使用多種濃度的，用一系列dmso儲液稀釋。使用不同濃度對應(yīng)的數(shù)據(jù)回歸曲線分析測定ic50值，或單一濃度進(jìn)行抑制率檢測。所合成的化合物對342個激酶進(jìn)行單劑量10μm雙孔復(fù)篩，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)篩選流程，其中陽性對照要十字苞堿(staurosporine)以4倍稀釋得到10個劑量，起始濃度為10μm，其他陽性對照藥則以3倍濃度得到10個劑量，起始濃度為20μm。所測342個激酶為：由美國賓夕法尼亞州的reactionbiology提供。dmso購自美國sigma公司。所測激酶：abl1(1)、abl2/arg(2)、ack1(3)、akt1(4)、akt2(5)、akt3(6)、alk(7)、alk1/acvrl1(8)、alk2/acvr1(9)、alk3/bmpr1a(10)、alk4/acvr1b(11)、alk5/tgfbr1(12)、alk6/bmpr1b(13)、araf(14)、ark5/nuak1(15)、ask1/map3k5(16)、auroraa(17)、aurorab(18)、aurorac(19)、axl(20)、blk(21)、bmpr2(22)、bmx/etk(23)、braf(24)、brk(25)、brsk1(26)、brsk2(27)、btk(28)、c-kit(29)、c-mer(30)、c-met(31)、c-src(32)、camk1a(33)、camk1b(34)、camk1d(35)、camk1g(36)、camk2a(37)、camk2b(38)、camk2d(39)、camk2g(40)、camk4(41)、camkk1(42)、camkk2(43)、cdc7/dbf4(44)、cdk1/cyclina(45)、cdk1/cyclinb(46)、cdk1/cycline(47)、cdk16/cycliny(pctaire)(48)、cdk2/cyclina(49)、cdk2/cyclina1(50)、cdk2/cycline(51)、cdk3/cycline(52)、cdk4/cyclind1(53)、cdk4/cyclind3(54)、cdk5/p25(55)、cdk5/p35(56)、cdk6/cyclind1(57)、cdk6/cyclind3(58)、cdk7/cyclinh(59)、cdk9/cyclink(60)、cdk9/cyclint1(61)、chk1(62)、chk2(63)、ck1a1(64)、ck1d(65)、ck1epsilon(66)、ck1g1(67)、ck1g2(68)、ck1g3(69)、ck2a(70)、ck2a2(71)、clk1(72)、clk2(73)、clk3(74)、clk4(75)、cot1/map3k8(76)、csk(77)、ctk/matk(78)、dapk1(79)、dapk2(80)、dcamkl1(81)、dcamkl2(82)、ddr1(83)、ddr2(84)、dlk/map3k12(85)、dmpk(86)、dmpk2(87)、drak1/stk17a(88)、dyrk1/dyrk1a(89)、dyrk1b(90)、dyrk2(91)、dyrk3(92)、dyrk4(93)、egfr(94)、epha1(95)、epha2(96)、epha3(97)、epha4(98)、epha5(99)、epha6(100)、epha7(101)、epha8(102)、ephb1(103)、ephb2(104)、ephb3(105)、ephb4(106)、erbb2/her2(107)、erbb4/her4(108)、erk1(109)、erk2/mapk1(110)、erk5/mapk7(111)、erk7/mapk15(112)、fak/ptk2(113)、fer(114)、fes/fps(115)、fgfr1(116)、fgfr2(117)、fgfr3(118)、fgfr4(119)、fgr(120)、flt1/vegfr1(121)、flt3(122)、flt4/vegfr3(123)、fms(124)、frk/ptk5(125)、fyn(126)、gck/map4k2(127)、glk/map4k3(128)、grk1(129)、grk2(130)、grk3(131)、grk4(132)、grk5(133)、grk6(134)、grk7(135)、gsk3a(136)、gsk3b(137)、haspin(138)、hck(139)、hgk/map4k4(140)、hipk1(141)、hipk2(142)、hipk3(143)、hipk4(144)、hpk1/map4k1(145)、igf1r(146)、ikka/chuk(147)、ikkb/ikbkb(148)、ikke/ikbke(149)、ir(150)、irak1(151)、irak4(152)、irr/insrr(153)、itk(154)、jak1(155)、jak2(156)、jak3(157)、jnk1(158)、jnk2(159)、jnk3(160)、kdr/vegfr2(161)、khs/map4k5(162)、lats1(163)、lats2(164)、lck(165)、lck2/ick(166)、limk1(167)、limk2(168)、lkb1(169)、lok/stk10(170)、lrrk2(171)、lyn(172)、lynb(173)、mapkapk2(174)、mapkapk3(175)、mapkapk5/prak(176)、mark1(177)、mark2/par-1ba(178)、mark3(179)、mark4(180)、mek1(181)、mek2(182)、mek3(183)、mekk1(184)、mekk2(185)、mekk3(186)、melk(187)、mink/mink1(188)、mkk4(189)、mkk6(190)、mlck/mylk(191)、mlck2/mylk2(192)、mlk1/map3k9(193)、mlk2/map3k10(194)、mlk3/map3k11(195)、mnk1(196)、mnk2(197)、mrcka/cdc42bpa(198)、mrckb/cdc42bpb(199)、msk1/rps6ka5(200)、msk2/rps6ka4(201)、mssk1/stk23(202)、mst1/stk4(203)、mst2/stk3(204)、mst3/stk24(205)、mst4(206)、musk(207)、mylk3(208)、myo3b(209)、nek1(210)、nek11(211)、nek2(212)、nek3(213)、nek4(214)、nek5(215)、nek6(216)、nek7(217)、nek9(218)、nlk(219)、osr1/oxsr1(220)、p38a/mapk14(221)、p38b/mapk11(222)、p38d/mapk13(223)、p38g(224)、p70s6k/rps6kb1(225)、p70s6kb/rps6kb2(226)、pak1(227)、pak2(228)、pak3(229)、pak4(230)、pak5(231)、pak6(232)、pask(233)、pbk/topk(234)、pdgfra(235)、pdgfrb(236)、pdk1/pdpk1(237)、phkg1(238)、phkg2(239)、pim1(240)、pim2(241)、pim3(242)、pka(243)、pkacb(244)、pkacg(245)、pkca(246)、pkcb1(247)、pkcb2(248)、pkcd(249)、pkcepsilon(250)、pkceta(251)、pkcg(252)、pkciota(253)、pkcmu/prkd1(254)、pkcnu/prkd3(255)、pkctheta(256)、pkczeta(257)、pkd2/prkd2(258)、pkg1a(259)、pkg1b(260)、pkg2/prkg2(261)、pkn1/prk1(262)、pkn2/prk2(263)、pkn3/prk3(264)、plk1(265)、plk2(266)、plk3(267)、plk4/sak(268)、prkx(269)、pyk2(270)、raf1(271)、ret(272)、ripk2(273)、ripk3(274)、ripk5(275)、rock1(276)、rock2(277)、ron/mst1r(278)、ros/ros1(279)、rsk1(280)、rsk2(281)、rsk3(282)、rsk4(283)、sgk1(284)、sgk2(285)、sgk3/sgkl(286)、sik1(287)、sik2(288)、sik3(289)、slk/stk2(290)、snark/nuak2(291)、srms(292)、srpk1(293)、srpk2(294)、sstk/tssk6(295)、stk16(296)、stk22d/tssk1(297)、stk25/ysk1(298)、stk32b/yank2(299)、stk32c/yank3(300)、stk33(301)、stk38/ndr1(302)、stk38l/ndr2(303)、stk39/stlk3(304)、syk(305)、tak1(306)、taok1(307)、taok2/tao1(308)、taok3/jik(309)、tbk1(310)、tec(311)、tesk1(312)、tgfbr2(313)、tie2/tek(314)、tlk1(315)、tlk2(316)、tnik(317)、tnk1(318)、trka(319)、trkb(320)、trkc(321)、tssk2(322)、tssk3/stk22c(323)、ttbk1(324)、ttbk2(325)、txk(326)、tyk1/ltk(327)、tyk2(328)、tyro3/sky(329)、ulk1(330)、ulk2(331)、ulk3(332)、vrk1(333)、vrk2(334)、wee1(335)、wnk1(336)、wnk2(337)、wnk3(338)、yes/yes1(339)、zak/mltk(340)、zap70(341)、zipk/dapk3(342)。部分化合物試驗(yàn)結(jié)果如附圖1所示：化合物對進(jìn)200個激酶(kinaseno.標(biāo)記于外圈)抑制活性達(dá)到90％以上，同時選擇性的對gmgc家族：cdk家族激酶cdk6/cyclind1(57)、cdk6/cyclind3(58)、cdk4/cyclind1(53)、cdk4/cyclind3(54)、cdk5/p35(56)、gsk3b激酶(137)，cdk5/p25(55)、cdk16/cyclinypim1(48)、dapk2(98)、erk7/mapk15(112)以及tk家族：kdr/vegfr2(161)、flt1/vegfr1(121)、flt4/vegr3(123)、flt3(122)。其抑制活性在99％以上。同時針對gmgc家族及tk家族的激酶對所發(fā)明化合物進(jìn)行ic50測試，以起始濃度為1μm，在100％dmso溶液中制備每個化合物10個點(diǎn)3倍濃度系列稀釋液，反應(yīng)液中含20μmatp，激酶及其底物生物素肽。通過使用定量、精密、敏感、檢測相關(guān)33p標(biāo)記的同位素標(biāo)記方法測試，以判斷篩選"hits。其中％trl＝[(待測化合物信號-陽性對照信號)/(陰性對照信號-陽性對照信號)]％陰性對照＝dmso、(100％ctrl)；陽性對照＝對照化合物(0％ctrl)。通過標(biāo)準(zhǔn)的劑量-反應(yīng)曲線，使用hill方程計(jì)算ic50；用prismgraphpad5計(jì)算ic50部分結(jié)果如下表所示：激酶篩選結(jié)果表明，所合成化合物對激酶酪氨酸蛋白激酶受體(rtk)家族的fgfr1、fgfr2、kdr/vegfr2、flt1/vegfr1、flt3、flt4/vegfr3和cgcm家族的cdk激酶、gsk3b、jak、erk7/mapk15等激酶表現(xiàn)出活性和選擇性，尤其對激酶cdk，gsk3b以及flt3具有極高的活性和選擇性。而同時對vegfr和cdk現(xiàn)出的抑制活性具有特殊的意義。(4)目標(biāo)化合物的體外抗腫瘤活性測定用mtt法測定對乳腺癌細(xì)胞株mda231、胃癌細(xì)胞株mgc803、胃癌細(xì)胞株bsg823、白血病細(xì)胞株k562、乳腺癌細(xì)胞株mcf7、耐藥乳腺癌細(xì)胞株mcf7、白血病細(xì)胞株nb4、肝癌細(xì)胞株hepg2、臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株huvec、肺癌細(xì)胞株a549、結(jié)腸癌細(xì)胞株hct116、大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株h460、肝癌細(xì)胞7721、肺癌細(xì)胞h1299等腫瘤細(xì)胞株的抑制作用。mtt法利用活細(xì)胞線粒體中存在與nadp相關(guān)的脫氫酶能使外源性的mtt還原成難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物(formazan)，并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。再用二甲基亞砜(dmso)或三聯(lián)液(10％sds-5％異丁醇-0.01mol/lhcl)溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其od值間接反應(yīng)其活細(xì)胞量。具體方法：將處于細(xì)胞對數(shù)生長期的要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的腫瘤細(xì)胞按一定的細(xì)胞量接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h后加入所篩的樣品(懸浮細(xì)胞接板后可直接加)，細(xì)胞在37℃、5％co2條件下繼續(xù)培養(yǎng)48小時后，加入mtt繼續(xù)培養(yǎng)4小時，用dmso溶解結(jié)晶，在酶標(biāo)儀下進(jìn)行檢測。部分目標(biāo)化合物對結(jié)腸癌細(xì)胞hct116、肝癌細(xì)胞7721、肺癌細(xì)胞h1299的體外抗腫瘤活性結(jié)果如下：目標(biāo)化合物i-1對乳腺癌細(xì)胞株mda231、胃癌細(xì)胞株mgc803、胃癌細(xì)胞株bsg823、白血病細(xì)胞株k562、乳腺癌細(xì)胞株mcf7、耐藥乳腺癌細(xì)胞株mcf7、白血病細(xì)胞株nb4、肝癌細(xì)胞株hepg2、臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株huvec、肺癌細(xì)胞株a549、結(jié)腸癌細(xì)胞株hct116、大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株h460的體外抗腫瘤活性結(jié)果如下：細(xì)胞株i-1(ic50/μm)at-7519(ic50/μm)mda2315.452.58mgc8032.271.93bsg82320.7316.72k5623.203.24mcf70.422.04耐藥mcf73.7322.10nb40.740.62hepg225.2453.58huvec2.545.67a54950.2653.52hct1160.252.63h4602.725.63藥理測試結(jié)果表明，本發(fā)明化合物具有多重激酶抑制活性，可用于預(yù)防或治療與蛋白激酶抑制劑有關(guān)的臨床疾病，這些疾病可以是：黑色素瘤、肝癌、腎癌、急性白血病、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、甲狀腺癌、皮膚癌、結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌、骨髓增生異常綜合癥、食管癌、胃腸道癌或間皮瘤等。藥物制劑可單獨(dú)施用活性化合物，也可作為藥物組合(例如制劑)的形式出給，所述組合化合物包含至少一種本發(fā)明的活性化合物和一種或多種可藥用載體、助劑、賦形劑、稀釋劑、填充劑、穩(wěn)定劑、防腐劑。另一方面。本發(fā)明提供了藥物合物形式的所合成化合物及其亞型，例如本文所定義的式(i)化合物及其亞組。藥物組合可以是任意適于口服、胃腸道外、局部、鼻內(nèi)、眼用、耳用、直腸、陰道內(nèi)或頭皮給藥的形式。當(dāng)組合物意欲用于胃腸道外給藥時，它們可被配制成靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下給藥或者通過注射、輸注或其它遞送手段直接遞送至靶器官或組織的形式。部分制劑制備方法如：1、凍干制劑：將等量配制的本文定義的式(i)的化合物及其亞組放入50ml小瓶中并且凍干。在凍干期間，在-45℃下應(yīng)用一步冷凍方法冷凍組合物。將溫度升至-10℃退火，然后降低至-45℃冷凍，隨后在25℃進(jìn)行第一步干燥時間約3400分鐘，隨后升溫至50℃進(jìn)行第二步干燥。第一步干燥和第二步干燥過程中的壓力設(shè)為80毫托。2、片劑:252mg含有所合成化合物的片劑組合物如下制備：按照已知方式將50mg化合物與作為稀釋劑的197mg乳糖(bp)以及作為潤滑劑的:3mg硬脂酸鎂混合并壓片。3、膠囊劑:膠囊劑如下制備：將100mg所合成化合物與100mg乳糖混合，將所得混合物填充入標(biāo)準(zhǔn)的不透明硬明膠膠囊中。4、(iii)注射劑i注射給藥的胃腸道外組合物如下制備：所合成化合物(例如鹽形式)溶于含有10％丙二醇的水中，得到活性化合物的濃度為1.5重量％。然后將溶液過濾除菌，灌裝在安瓿中，密封。5、(iv)注射劑ii供注射的胃腸道外組合物如下制備：在水中溶解所合成化合物(2mg/ml)和甘露糖醇(50mg/ml)，無菌過濾該溶液，灌裝在可密封的1ml小瓶或安瓿中。6、(iv)皮下注射劑皮下給藥組合物如下制備：將所合成化合物與藥物級玉米油混合，得到濃度為5mg/ml。將組合物滅菌，灌裝在適合的容器中。本發(fā)明還提供了如本文所定義的結(jié)構(gòu)(i)化合物及其亞組作為抗真菌劑的用途。這些化合物可以用在動物醫(yī)學(xué)中(例如治療哺乳動物，例如人)，或者用在植物的處理中(例如農(nóng)業(yè)和園藝)，或者用作一般性的抗真菌劑，例如用作防腐劑和消毒劑。另一方面，本發(fā)明提供了農(nóng)業(yè)(包括園藝)用途的抗真菌組合物，該組合物包含如上所定義的式(i)化合物及其亞組、例如結(jié)構(gòu)(i)以及農(nóng)業(yè)上可接受的稀釋劑或載體。例如：采用下列方案測定所合成化合物的抗真菌活性，包括近平滑念珠菌(candidaparapsilosis)、熱帶念珠菌(candidatropicalis)、白色念珠菌-atcc36082和新型隱球菌(cryptococcusneoformans)。在4℃下，在sabourahd葡萄糖瓊脂斜面上維持測試微生物。每一微生物的單態(tài)混懸液如下制備：于27℃在轉(zhuǎn)鼓上，在含有氨基酸(difc0，detr0it，mich.)(ph7.0)和0.05嗎啉丙磺酸(mops)的酵母-氮基肉湯(ynb)中，使酵母生長過夜。然后將混懸液離心，用0.85％nacl洗滌兩次，然后將經(jīng)洗滌的細(xì)胞混懸液用聲波處理4秒(bransonsonifier,350型，danbury，conn.)。在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)單態(tài)(singlet)芽生孢子，在0.85％nacl中調(diào)節(jié)至所需濃度。采用肉湯微量稀釋技術(shù)的修改方法測定測試化合物的活性。將測試化合物在dmso中稀釋至1.0mg/ml比率，然后在含有mops的ynb肉湯(ph7·0)中稀釋至64μg/ml(使用氟康唑作為對照)，得到每種化合物的工作溶液。采用96孔板，用ynb肉湯準(zhǔn)備第1和3至12孔，在第2至11孔制備化合物溶液的十倍稀釋液(濃度范圍為64至0.125μg/ml)。第1431孔充當(dāng)分光光度測定的無菌對照和空白。第12孔充當(dāng)生長對照。向微量板第2至11孔每孔接種10μ1(最終接種物數(shù)目為104個生物/ml)。將經(jīng)接種的板在35℃下溫育48小時用潤方混合器(vorte-genie2mixer,scientificindustries,inc.,bolemia7n.y.)振蕩板2分鐘后，通過測量420nm下的吸光度(automaticmicroplatereader,dupontinstruments，wilmington，del.)，按分光光度法測定mic值。mic終點(diǎn)被定義為表現(xiàn)出生長與對照孔相比減少約50％(或以上)的最低藥物濃度。在濁度測定中，這被定義為小孔濁度為<50％對照的最低藥物濃度(ic50)。最小細(xì)胞溶解濃度(mcc)如下確定：在sabourahd葡萄糖瓊脂(sda)板上移種96孔板的所有小孔，在35℃下溫育1至2天，然后檢查存活性。部分測試結(jié)果如下表：本發(fā)明還提供了治療植物或種子真菌感染的方法，該方法包括用抗真菌有效量的如上所定義的殺真菌組合物處理植物或種子。將所合成化合物溶于丙酮，隨后在丙酮中系列稀釋，得到一定范圍的所需濃度。加入9體積0.05％tween-20tm水溶液或tritonx-100tm,這因病原體而異，得到最終處理體積。然后采用下列方案，使用組合物來測試本發(fā)明化合物對抗番茄葉枯病(致病疫霉(phytophthorainfestans))的活性。使番茄(rutgers品種)種子在無土泥炭類罐裝混合物中生長，直至幼苗高10-20cm。然后向植物噴灑測試化合物至溢流，比率100ppm。24小時后，向測試植物噴灑蔓延疫霉的孢子囊水混懸液進(jìn)行接種，在露室(dewchamber)內(nèi)保存過夜。然后將植物轉(zhuǎn)移至溫室，直至疾病在未經(jīng)處理的對照植物上形成。部分化合物測試如下所示：a++++：大于60％的枯葉現(xiàn)象，+++：40-60％的枯葉現(xiàn)象，++：15-40％的枯葉現(xiàn)象，+：0-15％的枯葉現(xiàn)象，—：無枯葉現(xiàn)象。附圖說明圖1是示出部分化合物對342個激酶的抑制率，其中激酶以編號(見上文)表示。具體實(shí)施方式熔點(diǎn)用b形熔點(diǎn)管測定，介質(zhì)為甲基硅油，溫度計(jì)未校正；ir譜用nicoletimpact410型紅外光譜儀測定，kbr壓片；1hnmr用jeolfx90q型傅立葉變換核磁共振儀、brukeracf-300型核磁共振儀和brukeram-500型核磁共振儀完成(tms內(nèi)標(biāo))；ms用nicolet2000型傅立葉變換質(zhì)譜儀和mat-212型質(zhì)譜儀測定；微波反應(yīng)用cemdiscover單模微波儀。實(shí)施例14-甲基-1-(4-硝基芐基)哌嗪(i-a)在500ml單頸瓶中加入對硝基溴芐10g(46.3mmol)和二氯甲烷100ml，在冰水浴下(0-5℃)緩慢滴加n-甲基哌嗪4.7g(47.0mmol)和三乙胺7.1g(70.3mmol)的二氯甲烷20ml混合液，加畢加熱回流1hr，tlc檢測原料消失(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。將氯仿150ml和飽和碳酸氫鈉溶液100ml加入反應(yīng)液中，于室溫劇烈攪拌30min。反應(yīng)液用氯仿萃取(100ml×3)，合并有機(jī)層，分別用水和飽和氯化鈉各洗一次(100ml×1)。無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸除溶劑得淡黃色固體8.5g，收率78.1％，產(chǎn)品無需進(jìn)一步純化，直接投入下一步反應(yīng)。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.15(3h,s,-ch3),2.3-2.5(8h,m,-ch2-×4),3.5(2h,s,-ch2-),7.5(2h,d,j＝8.7hz,arh),8.1(2h,d,j＝8.7hz,arh).實(shí)施例24-(4-硝基芐基)嗎啉(i-b)在500ml單頸瓶中加入對硝基溴芐10g(46.5mmol)和二氯甲烷100ml，在冰水浴下(0-5℃)緩慢滴加嗎啉4.1g(47.1mmol)和三乙胺7.1g(70.3mmol)的二氯甲烷20ml混合液，加畢加熱回流1hr，tlc檢測原料消失(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)。將氯仿150ml和飽和碳酸氫鈉溶液100ml加入反應(yīng)液中，于室溫劇烈攪拌30min。反應(yīng)液用氯仿萃取(100ml×3)，合并有機(jī)層，分別用水和飽和氯化鈉各洗一次(100ml×1)。無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸除溶劑得淡黃色固體(i-b)8.7g，收率84.5％，產(chǎn)品無需進(jìn)一步純化，直接投入下一步反應(yīng)。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,m,-nch2-×2),3.3-3.5(6h,m,-och2-×2,-ch2-),6.9(2h,d,j＝8.7hz,arh),7.6(2h,d,j＝8.7hz,arh).實(shí)施例34-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯胺(i-c)在500ml單頸瓶中加入i-a粗品8.5g(36.2mmol)、feo(oh)/c催化劑2.0g和95％乙醇100ml，加熱回流，緩慢滴加水合肼25ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶15)。趁熱抽濾，濾餅用熱的乙醇洗兩次(30ml×2)，減壓蒸除溶劑得白色固體，真空干燥得(i-c)6.7g，收率90.3％。產(chǎn)品無需進(jìn)一步純化，直接投入下一步反應(yīng)。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.3-2.5(8h,m,-ch2-×4),3.5(2h,s,-ch2-),4.0(2h,s,-nh2),7.5(2h,d,j＝8.7hz,arh),8.1(2h,d,j＝8.7hz,arh).實(shí)施例44-((4-嗎啉基)甲基)苯胺(i-d)在500ml單頸瓶中加入i-b粗品8.5g(38.3mmol)、feo(oh)/c催化劑2.0g和95％乙醇100ml，加熱回流，緩慢滴加水合肼25ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶20)。趁熱抽濾，濾餅用熱的乙醇洗兩次(30ml×2)，減壓蒸除溶劑得白色固體，真空干燥得(i-d)6.6g，收率89.7％。產(chǎn)品無需進(jìn)一步純化，直接投入下一步反應(yīng)。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,m,-nch2-×2),3.2(4h,m,-och2-×2),3.5(2h,s,-ch2-),4.9(2h,s,-nh2),6.5(2h,d,j＝8.4hz,arh),6.9(2h,d,j＝8.4hz,arh).實(shí)施例5n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-硝基-1h-3-吡唑甲酰胺(i-e)在250ml圓底燒瓶中加入i-c粗品7.5g(36.6mmol)、4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸6.3g(40.1mmol)、edc.hcl8.4g(44.0mmol)、hobt6.0g(44.4mmol)和無水dmf100ml，室溫?cái)嚢?4hr。tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。將反應(yīng)液到入冰水200ml中，析出大量淡黃色固體，靜置，抽慮得黃色固體，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶劑重結(jié)晶得(i-e)11.1g，收率88.2％。mp:194-196℃,ms[m+h]+345.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.2(3h,s,-ch3),2.3-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.8(1h,s,arh),10.6(1h,s,-nhco-),14.2(1h,s,-nh-,pyrazole).實(shí)施例6n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-硝基-1h-3-吡唑甲酰胺(i-f)在250ml圓底燒瓶中加入i-d粗品7.5g(39.0mmol)、4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸6.3g(40.1mmol)、edc.hcl8.4g(44.0mmol)、hobt6.0g(44.4mmol)和無水dmf100ml，室溫?cái)嚢?4hr。tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶20)。將反應(yīng)液到入冰水200ml中，析出大量淡黃色固體，靜置，抽慮得黃色固體，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶劑重結(jié)晶得(i-f)11.6g，收率89.7％。mp:208-210℃,ms[m+h]+332.4。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.1hz,-nch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.1hz,-och2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.9(1h,s,arh),10.7(1h,s,-nhco-),14.2(1h,s,pyrazole).實(shí)施例7n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺(i-g)在250ml單頸瓶中加入i-e6.0g(17.4mmol)、feo(oh)/c催化劑2g和95％乙醇100ml，加熱回流，緩慢滴加水合肼25ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。趁熱抽濾，濾餅用熱的乙醇洗兩次(30ml×2)，減壓蒸除溶劑得類白色固體，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶劑重結(jié)晶得(i-g)3.5g，產(chǎn)率63.9％。mp:199-201℃,ms[m+h]+315.8。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.3-2.5(8h,m,-ch2-×4),3.3(2h,s,-ch2-),4.7(2h,s,-nh2),7.1-7.2(3h,m,arh),7.7(2h,d,arh),9.7(1h,s,-nhco-),12.7(1h,s,pyrazole).實(shí)施例8n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺(i-h)在250ml單頸瓶中加入i-f6.0g(18.1mmol)、feo(oh)/c催化劑2g和95％乙醇100ml，加熱回流，緩慢滴加水合肼25ml和95％乙醇20ml的混合液，tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)。趁熱抽濾，濾餅用熱的乙醇洗兩次(30ml×2)，減壓蒸除溶劑得類白色固體，所得粗品用乙酸乙酯和甲醇混合溶劑重結(jié)晶得(i-h)3.2g，產(chǎn)率58.6％。mp:216-218℃,ms[m+h]+302.0。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.5(4h,m,-nch2-×2),3.3(2h,s,-ch2-),3.6(4h,m,-och2-×2),4.7(2h,s,-nh2),7.2(3h,m,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),9.7(1h,s,-nhco-),12.7(1h,s,pyrazole)。實(shí)施例94-(4-噻吩并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-1)在50ml單頸瓶中加入n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺129mg(0.41mmol)、4-氯噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.41mmol)和50％乙酸水溶液25ml，加熱回流，tlc檢測原料消失(甲醇∶氯仿＝1∶10)，反應(yīng)液冷卻至室溫，用飽和氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)ph到8-9，乙酸乙酯萃取3次(50ml×3)，合并萃取液，無水硫酸鎂干燥，抽濾后減壓蒸除溶劑得淡黃色固體，粗品經(jīng)柱層析(流動相：甲醇∶氯仿＝1∶15)，得(i-1)70mg，收率37.8％。mp:285-287℃,[m+h]+449.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.4hz,arh),7.7-7.8(3h,m,arh),8.5(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),10.0(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例104-(4-噻吩并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-2)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺124mg(0.41mmol)和4-氯噻吩[2,3-d]并嘧啶70mg(0.41mmol)為原料，得(i-2)78mg，收率43.6％。mp:262-265℃,ms[m+h]+436.2。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.5(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4,arh),7.5(1h,d,j＝6.0hz,arh),7.7-7.8(3h,m,arh),8.5(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.9(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例114-(4-(6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-3)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺120mg(0.38mmol)和4-氯-6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-3)75mg，收率42.9％。mp:235-238℃,ms[m+h]+463.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.2(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.5(2h,s,arh),9.8(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例124-(4-(6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-4)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺118mg(0.38mmol)和4-氯-6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-4)80mg，收率47％。mp:>280℃,ms[m+h]+450.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.2(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.5(2h,s,arh),9.8(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例134-(4-(5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-5)制備方法類似于(i-5),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺120mg(0.38mmol)和4-氯-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-5)72mg，收率41.1％。mp:245-247℃,ms[m+h]+463.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.8(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.6(1h,s,arh),8.7(1h,s,arh),10.2(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例144-(4-(5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-6)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺118mg(0.38mmol)和4-氯-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-6)64mg，收率37.6％。mp:>280℃,ms[m+h]+450.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.8(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.6(1h,s,arh),8.7(1h,s,arh),10.2(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例154-(4-(5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-7)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺111mg(0.35mmol)和4-氯-5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.35mmol)為原料，得(i-7)66mg，收率39.3％。mp:264-267℃,ms[m+h]+477.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),2.8(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.6(1h,s,arh),8.7(1h,s,arh),10.2(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole)實(shí)施例164-(4-(5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-8)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺110mg(0.35mmol)和4-氯-5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶70mg(0.35mmol)為原料，得(i-8)73mg，收率44.5％。mp:254-256℃,ms[m+h]+464.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.6(3h,s,-ch3),2.8(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.6(1h,s,arh),8.7(1h,s,arh),10.2(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例174-(4-噻吩并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-9)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺129mg(0.41mmol)和4-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶70mg(0.41mmol)為原料，得(i-9)88mg，收率47.8％。mp:>280℃,ms[m+h]+449.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.2(3h,s,-ch3),δ2.3-2.5(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.3hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.2(1h,d,j＝5.3hz,arh),8.5(1h,s,arh),8.7(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例184-(4-噻吩并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-10)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺128mg(0.41mmol)和4-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶70mg(0.41mmol)為原料，得(i-10)93mg，收率52.0％。mp:275-277℃,ms[m+h]+436.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.2hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.3(1h,d,j＝5.2hz,arh),8.5(1h,s,arh),8.7(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例194-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-11)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺144mg(0.46mmol)和4-氯-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-11)63mg，收率32.0％。mp:229-230℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.5(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例204-(4-(7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-12)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺142mg(0.46mmol)和4-氯-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-12)70mg，收率36.6％。mp:213-214℃,ms[m+h]+419.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),2.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),6.5(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例214-(4-(6-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-13)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺132mg(0.42mmol)和4-氯-6-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-13)56mg，收率23.0％。mp:268-270℃,ms[m+h]+446.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(11h,m,-ch2-×4,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),6.5(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例224-(4-(6-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-14)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺130mg(0.42mmol)和4-氯-6-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-14)61mg，收率33.7％。mp:271-273℃,ms[m+h]+433.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(7h,m,-ch2-×2,-ch3),2.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),6.5(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例234-(4-(5-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-15)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺132mg(0.45mmol)和4-氯-5-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶70mg(0.45mmol)為原料，得(i-15)53mg，收率28.3％。mp:258-261℃,ms[m+h]+446.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例244-(4-(5-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-16)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺130mg(0.45mmol)和4-氯-5-甲基-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶70mg(0.45mmol)為原料，得(i-16)62mg，收率34.3％。mp:267-269℃,ms[m+h]+433.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),2.4(2h,s,-ch2-),2.6(3h,s,-ch3),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例254-(4-(5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-17)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺144mg(0.46mmol)和4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-17)50mg，收率25.4％。mp:261-263℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.2(1h,s,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例264-(4-(5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-18)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺142mg(0.46mmol)和4-氯-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-18)67mg，收率35.1％。mp:258-260℃,ms[m+h]+419.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),2.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.2(1h,s,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例274-(4-(6-甲基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-19)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺132mg(0.42mmol)和4-氯-6-甲基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-19)55mg，收率29.4％。mp:265-267℃,ms[m+h]+446.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例284-(4-(6-甲基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-20)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺130mg(0.42mmol)和4-氯-6-甲基-5h-吡咯并[3,2-d]嘧啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-20)69mg，收率38.1％。mp:268-270℃,ms[m+h]+433.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),2.4(2h,s,-ch2-),2.6(3h,s,-ch3),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.6(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例294-(4-呋喃并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-21)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺143mg(0.45mmol)和4-氯呋喃并[2,3-d]嘧啶70mg(0.45mmol)為原料，得(i-21)45mg，收率23.0％。mp:255-257℃,ms[m+h]+433.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.1(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.0(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例304-(4-呋喃并[2,3-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-22)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺141mg(0.45mmol)和4-氯呋喃并[2,3-d]嘧啶70mg(0.45mmol)為原料，得(i-22)53mg，收率27.9％。mp:>280℃,ms[m+h]+420.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.1(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.2hz,arh),8.0(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例314-(4-呋喃并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-23)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺143mg(0.45mmol)和4-氯呋喃并[3,2-d]嘧啶70mg(0.45mmol)為原料，得(i-23)71mg，收率36.2％。mp:277-279℃,ms[m+h]+433.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.2(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例324-(4-呋喃并[3,2-d]嘧啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-24)制備方法類似于(i-1),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺141mg(0.45mmol)和4-氯呋喃并[3,2-d]嘧啶70mg(0.45mmol)為原料，得(i-24)80mg，收率42.1％。mp:271-273℃,ms[m+h]+420.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.2(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例334-(4-噻吩并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-25)將n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺129mg(0.41mmol)、4-氯噻吩并[3,2-c]吡啶70mg(0.41mmol)和冰醋酸1ml溶解在8ml異丙醇中，在190℃下，微波反應(yīng)(300w)30分鐘，減壓蒸處異丙醇，蒸餾水將所得固體溶解，用飽和氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)ph到8-9，用乙酸乙酯萃取3次(50ml×3)，合并萃取液，無水硫酸鎂干燥，抽濾后減壓蒸除溶劑得到淡黃色固體，粗品經(jīng)柱層析(流動相：甲醇∶氯仿＝1∶15)，得(i-25)67mg，收率36.4％。mp:268-270℃,ms[m+h]+448.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.4hz,arh),7.7-7.8(3h,m,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.5(1h,s,arh),10.0(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例344-(4-噻吩并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-26)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺128mg(0.41mmol)和4-氯噻吩并[3,2-c]吡啶70mg(0.41mmol)為原料，得(i-26)71mg，收率39.7％。mp:269-271℃,ms[m+h]+435.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.5(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.4hz,arh),7.7-7.8(3h,m,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.5(1h,s,arh),9.9(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例354-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-27)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺121mg(0.38mmol)和4-氯-2-甲基噻吩并[3,2-c]吡啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-27)68mg，收率38.6％。mp:267-269℃,ms[m+h]+462.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.6(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.2(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.5(1h,s,arh),10.0(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例364-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-28)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺119mg(0.38mmol)和4-氯-2-甲基噻吩并[3,2-c]吡啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-28)59mg，收率34.5％。mp:265-267℃,ms[m+h]+449.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.5(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.2(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.5(1h,s,arh),9.9(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例374-(7-噻吩并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-29)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺129mg(0.41mmol)和7-氯噻吩并[2,3-c]吡啶70mg(0.41mmol)為原料，得(i-29)56mg，收率30.4％。mp:274-276℃,ms[m+h]+448.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.2(3h,s,-ch3),δ2.3-2.5(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.3hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.2(1h,d,j＝5.3hz,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例384-(7-噻吩并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-30)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺128mg(0.41mmol)和7-氯噻吩并[2,3-c]吡啶70mg(0.41mmol)為原料，得(i-30)81mg，收率45.3％。mp:271-273℃,ms[m+h]+435.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.5(1h,d,j＝5.2hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.3(1h,d,j＝5.2hz,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例394-(7-(3-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-31)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺121mg(0.38mmol)和7-氯-3-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-31)71mg，收率40.3％。mp:258-260℃,ms[m+h]+462.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.2(3h,s,-ch3),δ2.3-2.5(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.2(1h,s,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例404-(7-(3-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-32)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺119mg(0.38mmol)和7-氯-3-甲基噻吩并[2,3-c]吡啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-32)73mg，收率42.7％。mp:275-277℃,ms[m+h]+449.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.4(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.3(1h,s,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例414-(4-呋喃并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-33)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺120mg(0.46mmol)和4-氯呋喃并[3,2-c]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-33)75mg，收率38.1％。mp:268-270℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.1(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.0(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例424-(4-呋喃并[3,2-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-34)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺119mg(0.46mmol)和4-氯呋喃并[3,2-c]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-34)68mg，收率35.6％。mp:268-271℃,ms[m+h]+419.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.1(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.0(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例434-(4-(2-甲基呋喃并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-35)制備方法類似于(i-25),以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺144mg(0.42mmol)和4-氯-2-甲基呋喃并[3,2-c]吡啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-35)47mg，收率25.1％。mp:274-276℃,ms[m+h]+446.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.1(1h,s,arh),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例444-(4-(2-甲基呋喃并[3,2-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-36)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺142mg(0.42mmol)和4-氯-2-甲基呋喃并[3,2-c]吡啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-36)63mg，收率34.8％。mp:275-277℃,ms[m+h]+433.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.1(1h,s,arh),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例454-(7-呋喃并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-37)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺132mg(0.46mmol)和7-氯呋喃并[2,3-c]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-37)45mg，收率22.8％。mp:258-261℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.3(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例464-(7-呋喃并[2,3-c]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-38)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺130mg(0.46mmol)和7-氯呋喃并[2,3-c]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-38)47mg，收率24.6％。mp:268-272℃,ms[m+h]+419.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.9(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.3(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例474-(7-呋喃并[3,2-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-39)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺144mg(0.46mmol)和7-氯呋喃并[3,2-b]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-39)48mg，收率24.4％。mp:268-270℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,s,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.8(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.2(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.3(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例484-(7-呋喃并[3,2-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-40)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺142mg(0.46mmol)和7-氯呋喃并[3,2-b]吡啶為70mg(0.46mmol)原料，得(i-40)53mg，收率27.7％。mp:275-278℃,ms[m+h]+419.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.2(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.3(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例494-(4-呋喃并[2,3-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-41)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺144mg(0.46mmol)和4-氯呋喃并[2,3-b]吡啶為70mg(0.46mmol)原料，得(i-41)64mg，收率32.5％。mp:273-276℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.1(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.2(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.7(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.0(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.2(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例504-(4-呋喃并[2,3-b]吡啶基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-42)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺142mg(0.46mmol)和4-氯呋喃并[2,3-b]吡啶為70mg(0.46mmol)原料，得(i-42)56mg，收率29.3％。mp:269-271℃,ms[m+h]+419.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch3×2),6.7(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.1(1h,d,j＝2.5hz,arh),7.3(2h,d,j＝8.2hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.2hz,arh),8.0(1h,d,j＝2.5hz,arh),8.2(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例514-(7-(1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-43)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺145mg(0.46mmol)和7-氯-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-43)64mg，收率32.3％。mp:279-282℃,ms[m+h]+431.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.0(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.2(1h,s,arh),8.4(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例524-(7-(1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-44)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺143mg(0.46mmol)和7-氯-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶70mg(0.46mmol)為原料，得(i-44)52mg，收率27.1％。mp:265-267℃,ms[m+h]+420.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),2.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.0(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.2(1h,s,arh),8.4(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例534-(7-(2-甲基-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-45)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺132mg(0.42mmol)和7-氯-2-甲基-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-45)49mg，收率26.2％。mp:276-278℃,ms[m+h]+445.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.4(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.0(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例544-(7-(2-甲基-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶基)氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-46)制備方法類似于(i-25)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺131mg(0.42mmol)和7-氯-2-甲基-1h-吡咯并[2,3-c]吡啶70mg(0.42mmol)為原料，得(i-46)73mg，收率40.1％。mp:254-258℃,ms[m+h]+432.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),2.4(2h,s,-ch2-),2.6(3h,s,-ch3),3.6(4h,t,j＝4.4hz,-ch2-×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,d,j＝8.0hz,arh),7.6(1h,s,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.0(1h,d,j＝8.0hz,arh),8.4(1h,s,arh),9.2(1h,s,-nhco-),10.2(1h,s,-nh-),12.0(1h,s,pyrrole),13.4(1h,s,pyrazole).實(shí)施例554-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶)基氨基)-n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-47)制備方法類似于(i-1)，以n-(4-((4-甲基-1-哌嗪基)甲基)苯基-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺120mg(0.38mmol)和4-氯-2-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-47)85mg，收率49.7％。mp:>280℃,ms[m+h]+463.3。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.1(3h,s,-ch3),2.2-2.5(8h,m,-ch2-×4),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,d,j＝4.1hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.2(1h,d,j＝4.1hz,arh),8.6(1h,s,arh),9.6(1h,s,-nhco-),10.3(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例564-(4-(2-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶)基氨基)-n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-1h-3-吡唑甲酰胺(i-48)制備方法類似于(i-1)，以n-(4-((4-嗎啡啉基)甲基)苯基)-4-氨基-1h-3-吡唑甲酰胺119mg(0.38mmol)和4-氯-2-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶70mg(0.38mmol)為原料，得(i-48)93mg，收率54.4％。mp:259-262℃,ms[m+h]+450.2。1h-nmr[300mhz,dmso-d6]:δ2.3(4h,t,j＝4.2hz,-ch2-×2),2.6(3h,s,-ch3),3.4(2h,s,-ch2-),3.6(4h,t,j＝4.2hz,-ch3×2),7.3(2h,d,j＝8.4hz,arh),7.4(1h,d,j＝4.1hz,arh),7.8(2h,d,j＝8.4hz,arh),8.2(1h,d,j＝4.1hz,arh),8.5(1h,s,arh),9.7(1h,s,-nhco-),10.4(1h,s,-nh-),13.5(1h,s,pyrazole).實(shí)施例571、實(shí)驗(yàn)材料試劑、藥品及耗材:化合物1，化合物1的甲磺酸鹽(is)，化合物2，化合物2的甲磺酸鹽(2s)，乙腈，乙酸乙酯，甲醇，色譜柱hypersilods(4.6mmx200mm,5mm)，離心管，ep管，槍頭，橡膠手套，1ml注射器等。2、主要儀器agilent1200高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)；水浴恒溫振蕩器shz-88(金壇市文化儀器廠有限公司)；kq3200db型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；uv-2102pcs型紫外分光光度儀(上海龍尼柯儀器有限公司)；tgl-16臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；xw-80a旋渦混合器(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)；瑞士梅特勒-托利多pl203電子天平(瑞士)。實(shí)驗(yàn)動物：健康雄性wistar大鼠，體重(200士20)g(中國藥科大學(xué)動物中心提供)。3、方法與結(jié)果水中溶解度的測定：取過量的樣品于50ml三角瓶中，并加入10ml蒸餾水，并于25℃下恒溫振蕩器中振蕩72h，將溶液于10000rpm離心15min后，取上清液過0.22μm的微孔濾膜除去未溶解的藥物，取2ml續(xù)濾液用甲醇定容至10ml，20μl進(jìn)樣測定藥物的含量。得到結(jié)果如表3。表3水中溶解度的測定由表3結(jié)果可知：化合物i-1及化合物i-2成甲磺酸鹽(i-1-s)及(i-2-s)后在水中的溶解度增加。4、油水分配系數(shù)(logp)的測定將正辛醇和蒸餾水互相飽和24h，然后精密稱取一定量的樣品于50ml容量瓶中，用水飽和的正辛醇定容(樣品完全溶解)，隨后取10ml樣品的正辛醇溶液于50ml的三角瓶中，接著加入10ml正辛醇飽和的蒸餾水，25℃下，125rpm恒溫振蕩器中振蕩72h。分別測定實(shí)驗(yàn)前正辛醇儲備液和實(shí)驗(yàn)后正辛醇層中藥物的濃度，從而計(jì)算樣品的油水分配系數(shù)。結(jié)果見表4。表4油水分配系數(shù)由表4結(jié)果可知：化合物i-1及化合物i-2成甲磺酸鹽(i-1-s)和(i-2-s)后的油水分配系數(shù)(logp)變化不大。3.穩(wěn)定性考察：3.1血漿樣品的處理精密吸取大鼠血漿300μl并含30μl甲醇，2ml乙酸乙酯，旋渦3min，4000rpm離心15min，量取上清液，移至另一離心管中，下層同法提取1次，合并上清液，在氮?dú)饬飨麓蹈?。用甲?50μl復(fù)溶后，過0.22μm微孔濾膜，取20μl進(jìn)樣。3.2在血漿中的穩(wěn)定性別將化合物i-1和i-2標(biāo)準(zhǔn)溶液定量稀釋于血漿中，分別于0、l、2、4、6、8、12、24h取樣，按“3.1”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣20μl記錄色譜圖峰面積，確定藥物濃度，考察1和2在血漿中的穩(wěn)定性。結(jié)果見表5。表5在血漿中穩(wěn)定性結(jié)果結(jié)果：由上表可知化合物1和2在血漿中24h均穩(wěn)定。4動物實(shí)驗(yàn)4.1設(shè)計(jì)及經(jīng)時血藥濃度數(shù)據(jù)精密稱取藥物適量，配制含3mg/ml藥物的cmc-na水溶液。取健康雄性wistar大鼠12只，隨機(jī)分為2組，每組6只。第1組為口服給藥2，第2組為口服給藥2。給藥劑量均為30mg/kg(相當(dāng)于每只大鼠給藥2ml)，大鼠給藥前禁食12h，自由飲水，給藥后分別于0.5、1、1·5、2、2.5、3、5、8、12、24h靜脈竇取血0.6ml，加入經(jīng)肝素鈉潤洗過的ep管中，4000r/min離心15min取上層血漿，精密量取血漿300μl，進(jìn)樣測定記錄色譜圖和峰面積，計(jì)算1和2血藥濃度，繪制平均藥-時曲線。結(jié)果見表6和7。表6化合物1大鼠口服后經(jīng)時血藥濃度(ng*ml/1)表7化合物2大鼠口服后經(jīng)時血藥濃度(ng·ml/1)4.2數(shù)據(jù)處理采用das2.0程序?qū)蝿┝靠诜o藥后的血藥濃度數(shù)據(jù)表6、7結(jié)果進(jìn)行處理。應(yīng)用擬合度法及aic判別法進(jìn)行模型判斷，擬合度越大、aic越小，模型擬合越好的原則，口服給藥均符合二室模型。采用統(tǒng)計(jì)距參數(shù)比較2種藥物的藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果見表8。表8大鼠口服1和2藥代動力學(xué)參數(shù)(auc：藥時曲線下面積；tmax：藥峰時間；t1/2：半衰期；mrt：平均滯留時間；cmax：藥峰濃度)由表8結(jié)果可知：化合物1和2均具有可接受的藥代動力學(xué)參數(shù)。實(shí)施例58藥物對動物移植性腫瘤s180的抑制作用1試驗(yàn)材料及動物受試藥物:化合物i-1陽性藥物名稱：at7519購買自jinangreatchemicalco.,ltd。品系和來源：icr小鼠，清潔級；揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，許可證號：scxk(蘇)2007-0001；體重：18-22g；性別：雌性；飼料：顆粒飼料，由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司供給；飼養(yǎng)條件:空調(diào)房間,溫度18-240c,相對濕度70％。瘤株來源：s180由江蘇省腫瘤藥物研究所提供。儀器：yj-875型醫(yī)用凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備廠)。2、實(shí)驗(yàn)方法取icr小鼠，按移植性腫瘤研究法，接種實(shí)體型瘤(在無菌操作下取瘤塊，稱重，用玻璃組織勻漿器研磨，磨勻后放入無菌容器內(nèi)，加生理鹽水稀釋成1:3的細(xì)胞懸液，容器置冰塊上，用空針抽吸，每次抽吸前將細(xì)胞混勻，每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2ml)，接種后24小時稱鼠重，并隨機(jī)分為5組，每組10只。各給藥組于接種24小時后(d1)第一次給藥，靜脈注射給藥，每天給藥一次，共給藥7次，給藥體積均為0.4ml/20g。于接種后第8天(d8)處死荷瘤小鼠稱重，并分離瘤塊稱重，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。劑量設(shè)置：共設(shè)5組模型對照組；陽性對照組：at751915mg/kg；待測藥：30mg/kg；待測藥：15mg/kg；待測藥：7.5mg/kg4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表1藥物對小鼠移植瘤s180抑制作用*p<0.05**p<0.01與模型對照組比較5、實(shí)驗(yàn)結(jié)論結(jié)果表明，與模型對照組相比，待測藥(30mg/kg和15mg/kg)對s180的腫瘤生長有極顯著的抑制作用(p<0.01)，待測藥7.5mg/kg劑量對s180的腫瘤生長有顯著的抑制作用(p<0.05)。待測藥(30mg/kg和15mg/kg)對實(shí)驗(yàn)動物體重有顯著抑制作用(p<0.05)。當(dāng)前第1頁12