本發(fā)明涉及生物防治植物病害領(lǐng)域，具體涉及一種地衣芽孢桿菌、該菌株與中生菌素復(fù)配及其在葡萄白腐病防治中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：近年綠色食品生產(chǎn)是當(dāng)前國際農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)的主要方向，隨著科學(xué)發(fā)展和人類對環(huán)境保護(hù)及人類自己健康認(rèn)識的不斷加深，綠色食品生產(chǎn)已愈來愈受到世界各國的重視。葡萄在全世界果樹中占重要地位，無論栽培面積和產(chǎn)量均位于第二位。在中國，葡萄也具有悠久的栽培歷史，根據(jù)史書記載己超過兩千年。葡萄的生物學(xué)和栽培方式具有特殊性，因此，在其生長發(fā)育過程中容易受到病菌危害，其病害種類之多、造成的損失之大倍受關(guān)注。目前，葡萄白腐病是葡萄種植中的主要病害之一。如何高效低毒的防治葡萄白腐病，已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)行業(yè)面臨的一個重要課題。葡萄白腐病(coniothyriumdiplodiella)又稱腐爛病，是葡萄生長期引起果實腐爛的主要病害，葡萄園地發(fā)生較普遍，果實損失率在10-15％，在嚴(yán)重的年份里可損失60％以上，甚至失收，高溫高濕季節(jié)，該病危害相當(dāng)嚴(yán)重。果梗和穗軸上發(fā)病處先產(chǎn)生淡褐色水浸狀近圓形病斑，病部腐爛變褐色，很快蔓延至果粒，果粒變褐軟，失去經(jīng)濟(jì)價值。目前葡萄白腐病的防治方法主要是加強田間管理、培育抗病品種和化學(xué)防治。防治葡萄白腐病的藥劑有50％退菌特可濕性粉劑800～1000倍液、70％代森猛鋅可濕性粉劑700倍液和50％福美雙可濕粉劑600～800倍液等。長期大量的使用化學(xué)合成類農(nóng)藥，對自然生態(tài)環(huán)境造成污染，使農(nóng)副產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留量增加，病蟲草害的抗藥性也日趨嚴(yán)重。據(jù)國外近幾年研究報導(dǎo)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)447種害蟲和害螨，100余種植物病原菌對一到數(shù)種化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生了抗藥性，而且分析預(yù)測今后將以每5年約10％的數(shù)量遞增。本研究采用生物防治葡萄白腐病對保障我國葡萄的安全生產(chǎn)和穩(wěn)產(chǎn)，減少因化學(xué)農(nóng)藥的大量投入使用產(chǎn)生的環(huán)境污染等問題起著重要的意義。由于生物防治具有對環(huán)境、生態(tài)和人類健康安全的優(yōu)點，在世界各國得到了廣泛的重視并發(fā)揮著越來越重要的作用。目前，成功應(yīng)用于植物病害生物防治的微生物涉及到真菌、細(xì)菌、放線菌等很多生物種群，其中細(xì)菌中芽孢桿菌屬的一些芽孢桿菌是近年來科研工作者研究的熱點。芽孢桿菌是一個多樣性十分豐富的微生物類群，分布廣泛，能產(chǎn)生抗逆性強的芽孢，其抑制植物病原菌的范圍很廣，包括根部、葉部、枝干、花部和收獲后果實等多種病害，是一種理想的生防微生物。芽孢桿菌中的地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)還具有許多優(yōu)良性能，如：有較廣的抑菌譜、生長速度快、適應(yīng)環(huán)境能力強、能在土壤和植物表面定殖并形成優(yōu)勢種群、誘導(dǎo)寄主產(chǎn)生抗病性和分泌產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)。本研究前期從葡萄葉片分離到一株地衣芽孢桿菌，該菌株對葡萄白腐病有良好的防治效果，同時也是一種對人畜十分安全的細(xì)菌性生防菌。為了提高殺菌劑的田間防治效果，延緩菌株對葡萄白腐病的抗藥性，延長現(xiàn)有藥劑的使用年限，開發(fā)新的復(fù)配藥劑是較為有效的方法之一。中生菌素是中國農(nóng)科院生防所研制成功的一種新型農(nóng)用抗生素，是由淡紫灰鏈霉菌海南變種產(chǎn)生的抗生素，屬n－糖苷類堿性水溶性物質(zhì)。80年代末90年代中期對中生菌素進(jìn)行了毒性測定、溫室實驗和田間試驗示范，結(jié)果表明中生菌素是一種低毒、廣譜的農(nóng)用抗生素，其對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、絲狀真菌都有強烈的抑制或殺死作用。目前，將地衣芽孢桿菌和中生菌素復(fù)配的生物殺菌劑并未見報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對以上所述的生產(chǎn)上大量使用化學(xué)農(nóng)藥防治葡萄白腐病，嚴(yán)重污染了葡萄園的生態(tài)環(huán)境，導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標(biāo)并影響葡萄的品質(zhì)等問題，本發(fā)明提供了一種對葡萄白腐病具有良好防治效果的地衣芽孢桿菌的復(fù)配組合物和復(fù)配制劑。地衣芽孢桿菌和中生菌素復(fù)配后，具有協(xié)同增效作用，能增強對葡萄白腐病的防治效果。通過該復(fù)配組合物和復(fù)配制劑的使用，在葡萄園生態(tài)環(huán)境中引入大量有益微生物，惡化病原菌的生存環(huán)境；結(jié)合栽培管理等農(nóng)業(yè)措施，形成一個穩(wěn)定的、平衡的、生物多樣化的葡萄園生態(tài)系統(tǒng)，達(dá)到一藥多治、持久地控制葡萄病害流行的目的。本發(fā)明的地衣芽孢桿菌的復(fù)配組合物和復(fù)配制劑在葡萄白腐病的生物防治中具有防治效果好、無污染、對人畜安全、無殘留和特異性強等優(yōu)點，且對保護(hù)環(huán)境、維持生態(tài)平衡具有重要的現(xiàn)實意義。根據(jù)本發(fā)明的一個方面提供一種地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(cgmcc)，保藏日期為2015年9月25日，保藏編號為cgmccno.11448。其中，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株分離于葡萄葉片。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面提供一種復(fù)配組合物，包含地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株的活芽孢數(shù)為4～16億/毫升，復(fù)配組合物還包括中生菌素，其含量為0.6～2.4％。其中，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株的活芽孢數(shù)為10億/毫升，中生菌素含量為1.5％。根據(jù)本發(fā)明的第三個方面提供一種復(fù)配制劑，包含地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株和中生菌素，還包括載體、分散劑、崩解劑和粘結(jié)劑，各組分的含量為:其中，載體為高嶺土，分散劑為木質(zhì)素磺酸鈉，崩解劑為硫酸銨，粘結(jié)劑為聚乙二醇。其中，復(fù)配制劑中各組分的含量為：本發(fā)明還提供地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株，復(fù)配組合物或復(fù)配制劑在用于抑制葡萄白腐病菌生長、防治葡萄白腐病的藥物的制備中的應(yīng)用。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種地衣芽孢桿菌與中生菌素的復(fù)配組合物，包括地衣芽孢桿菌和中生菌素，將地衣芽孢桿菌活芽孢發(fā)酵液制成的水劑與中生菌素按質(zhì)量比4:1、2:1、1:1、1:2和1:4進(jìn)行混合，其對應(yīng)的地衣芽孢桿菌芽孢數(shù)為4～16億/毫升，中生菌素含量為0.6～2.4％。復(fù)配組合物抑制葡萄白腐病菌的生長均好于單一菌劑，其中地衣芽孢桿菌y24活芽孢的含量為10億/毫升，中生菌素含量為1.5％，抑菌效果最好。復(fù)配制劑由復(fù)配組合物并加入一定量的載體、分散劑、崩解劑和粘結(jié)劑制成。具體地，復(fù)配制劑中地衣芽孢桿菌活芽孢的含量為6.2～6.4億/毫升，中生菌素含量為0.9～1％，高嶺土含量為31.4～32.7％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為1～2.1％，硫酸銨含量為0.6～1.9％，聚乙二醇含量為0.3～0.9％。復(fù)配制劑的室內(nèi)離體果防治葡萄白腐病研究中發(fā)現(xiàn)，復(fù)配制劑各組分含量優(yōu)選的為，地衣芽孢桿菌y24活芽孢的含量為6.4億/毫升，中生菌素含量為0.9％，高嶺土含量為32.1％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為1.6％，硫酸銨含量為1.3％，聚乙二醇含量為0.6％，防治效果最好。本發(fā)明復(fù)配制劑在葡萄白腐病田間防治應(yīng)用中的使用方法為：將復(fù)配制劑稀釋100倍，將稀釋后的復(fù)配制劑在葡萄生長期噴灑在果粒和葉面上，用于防治葡萄白腐病。采用手動式噴霧器噴藥，每隔6天噴藥一次，共噴9次，每畝復(fù)配生物制劑的用量為5kg。每株均勻噴霧，噴藥量以葉片和果實的正反面濕潤、樹體均勻著藥、稍有藥滴下淌為度。本發(fā)明的優(yōu)點在于將生防微生物地衣芽孢桿菌和中生菌素按一定比例混合使用，不僅能發(fā)揮地衣芽孢桿菌誘導(dǎo)葡萄植株抗病性、調(diào)控微生態(tài)環(huán)境來防治白腐病的作用，又能發(fā)揮中生菌素有效控制白腐病的作用。通過復(fù)配、協(xié)同作用，達(dá)到優(yōu)勢互補、擴(kuò)大防治范圍、減少用藥次數(shù)、降低用藥成本、提高防治效果的目的。由于有效成分含量高，便于存儲和運輸，使用時取水稀釋，非常方便。經(jīng)測試表明，本發(fā)明復(fù)配殺菌劑產(chǎn)品中的中生菌素對地衣芽孢桿菌的生長、繁殖無干擾作用，使產(chǎn)品具有穩(wěn)定的藥效。具體實施方式為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明的實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。需要說明的是，在不沖突的情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互任意組合。本發(fā)明提供的地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株，于2015年9月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院，中科院微生物研究所，郵編：100101)，其保藏號為cgmccno.11448。該菌株分離于葡萄葉片。一種包含地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株的復(fù)配組合物，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株的活芽孢數(shù)為4～16億/毫升，優(yōu)選的，為10億/毫升；還包含中生菌素0.6～2.4％，優(yōu)選的，為1.5％。包含該復(fù)配組合物的復(fù)配制劑，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株活芽孢的含量為6.2～6.4億/毫升，中生菌素含量為0.9～1％，高嶺土含量為31.4～32.7％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為1～2.1％，硫酸銨含量為0.6～1.9％，聚乙二醇含量為0.3～0.9％。優(yōu)選的，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株活芽孢的含量為6.4億/毫升，中生菌素含量為0.9％，高嶺土含量為32.1％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為1.6％，硫酸銨含量為1.3％，聚乙二醇含量為0.6％。地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株及其復(fù)配組合物和復(fù)配制劑在用于抑制葡萄白腐病菌生長、防治葡萄白腐病的藥物的制備中的應(yīng)用。實施例實施例1地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株的獲得于河北省衡水市趙圈鎮(zhèn)的葡萄種植園的葡萄葉片進(jìn)行樣品采集，用無菌紙袋帶回實驗室進(jìn)行分離。采用稀釋平板分離法，將葡萄葉片剪碎后懸浮于含有1％吐溫80的無菌水中，取100μl懸浮液涂布于yepd固體培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)3d，挑取單菌落進(jìn)行鑒定。地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株，在na培養(yǎng)基上的菌落為扁平、邊緣不整齊、微黃色、表面粗糙不透明，在液體培養(yǎng)基中生長時，常形成皺醭。細(xì)胞形態(tài)和排列呈桿狀、單生。革蘭氏陽性，長2.5～3.5μm；寬0.8～1.5μm，產(chǎn)生近中生的橢圓狀芽孢，孢囊稍膨大。無莢膜，無鞭毛，能運動。最佳生長溫度為30℃；最適生長ph為7.0。v-p反應(yīng)陽性；接觸酶陽性，卵磷脂陽性，還原硝酸鹽；在7％nacl和ph5-7肉湯中生長良好；可利用葡萄糖、木糖、甘露醇、檸檬酸鹽、淀粉和酪素，但不能利用阿拉伯糖。通過菌落特征、細(xì)胞形態(tài)特征、生理生化特征和16srdna序列特征，鑒定其為地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)y24菌株。實施例2復(fù)配組合物20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑的制備方法是在芽孢含量為20億/毫升的發(fā)酵液中加入1％吐溫80、0.5％山梨醇制成。中生菌素原藥：深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)，劑型為可濕性粉劑，中生菌素含量為3％。將20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑和中生菌素原藥按表1中質(zhì)量百分比混合。表1復(fù)配組合物實施例列表實施例3復(fù)配制劑復(fù)配制劑一取20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑100ml，100g中生菌素原藥，加入95g高嶺土，3g木質(zhì)素磺酸鈉，2g硫酸銨，1g聚乙二醇，混合均勻后進(jìn)行干燥、粉碎，320目篩分，得到復(fù)配制劑。其中地衣芽孢桿菌y24活芽孢的含量為6.6億/毫升，中生菌素含量為1％，高嶺土含量為31.4％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為1％，硫酸銨含量為0.6％，聚乙二醇含量為0.3％。復(fù)配制劑二取20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑100ml，100g中生菌素原藥，加入100g高嶺土，5g木質(zhì)素磺酸鈉，4g硫酸銨，2g聚乙二醇，混合均勻后進(jìn)行干燥、粉碎，320目篩分，得到復(fù)配制劑。其中地衣芽孢桿菌y24活芽孢的含量為6.4億/毫升，中生菌素含量為0.9％，高嶺土含量為32.1％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為1.6％，硫酸銨含量為1.3％，聚乙二醇含量為0.6％。復(fù)配制劑三取20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑100ml，100g中生菌素原藥，加入105g高嶺土，7g木質(zhì)素磺酸鈉，6g硫酸銨，3g聚乙二醇，混合均勻后進(jìn)行干燥、粉碎，320目篩分，得到復(fù)配制劑。其中地衣芽孢桿菌y24活芽孢的含量為6.2億/毫升，中生菌素含量為0.9％，高嶺土含量為32.7％，木質(zhì)素磺酸鈉含量為2.1％，硫酸銨含量為1.9％，聚乙二醇含量為0.9％。測試?yán)郎y試?yán)?復(fù)配組合物抑制葡萄白腐病菌生長的增效作用測定供試菌株：葡萄白腐病菌cfcc83954購于北京豫鼎新捷有限公司。被測藥劑：實施例2中提供的復(fù)配組合物一至五。對比藥劑：20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑由衡水學(xué)院生命科學(xué)系微生物學(xué)實驗室提供。3％中生菌素由深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司提供。1.室內(nèi)增效作用測定：供試葡萄白腐病菌cfcc83954菌株在pda(每升中含馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、自然ph)培養(yǎng)基上活化直到長出黑色的分生孢子器，用接種環(huán)刮取后溶于無菌蒸餾水中，振蕩后使分生孢子濃度達(dá)到105個/ml，吸取100μl均勻涂在pda平板上晾干，將1個直徑為6mm滅菌濾紙片放在平板中央備用。將20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑稀釋成8×106cfu/ml、4×106cfu/ml、8×105cfu/ml、4×105cfu/ml、8×104cfu/ml、4×104cfu/ml6個不同梯度。將3％中生菌素稀釋成800ppm、400ppm、80ppm、40ppm、8ppm、4ppm6個不同梯度。將復(fù)配組合物一至五稀釋5倍、10倍、50倍、100倍、500倍、1000倍6個不同梯度。將3種待測藥劑稀釋成6個不同梯度，然后分別吸取50μl不同濃度的待測藥液滴在滅菌濾紙片上，同時設(shè)立空白對照(將無菌水滴入滅菌濾紙片)，每處理3個重復(fù)。當(dāng)空白對照平板長滿葡萄白腐病菌時，測量抑菌圈直徑，并計算抑制率。抑制率(％)＝(對照組菌落直徑-處理組菌落直徑)/對照組菌落直徑×100采用毒力曲線法即取劑量對數(shù)為橫坐標(biāo)(x)，抑菌百分率值為縱坐標(biāo)(y)，在計算機上繪制毒力曲線，求出兩種藥劑毒力回歸方程(y＝a+bx)、相關(guān)系數(shù)(r)，進(jìn)而計算出ec50值。復(fù)配劑的理論ec50＝單劑ⅰec50×配比數(shù)+單劑ⅱec50×配比數(shù)增效系數(shù)sr＝混合物的理論ec50/混合物的實測ec50參考wadley公式，增效系數(shù)sr>1.5為增效作用，1.5>sr>1為相加作用，sr<1.0為拮抗作用。室內(nèi)試驗結(jié)果表明(表2)，被測的復(fù)配組合物均對抑制葡萄白腐病菌的生長均好于單一菌劑。復(fù)配組合物一、二、四、五的增效系數(shù)在這個范圍(1.5>sr>1)，所以這幾個復(fù)配組合表現(xiàn)出對抑制葡萄白腐病菌的生長有相加作用。特別是復(fù)配組合物三的增效系數(shù)達(dá)到2.26，其值>1.5，說明這個組合具有增效作用。表2復(fù)配組合物抑制葡萄白腐病菌生長的增效測定藥劑回歸方程ec50(μg/ml)增效系數(shù)20億活芽孢/毫升水劑y＝0.5214x+4.36916.22/3％中生菌素y＝0.2811+4.54342.45/復(fù)配組合物一y＝0.6367+4.16720.341.05復(fù)配組合物二y＝0.1608+4.81414.761.45復(fù)配組合物三y＝0.7756+4.2429.492.26復(fù)配組合物四y＝0.2773+4.65517.251.24復(fù)配組合物五y＝0.0778+4.89721.081.02測試?yán)?復(fù)配制劑防治葡萄白腐病的室內(nèi)離體果試驗試驗葡萄品種：巨峰被測藥劑：實施例3中提供的復(fù)配制劑一至三。對比藥劑：20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑由衡水學(xué)院生命科學(xué)系微生物學(xué)實驗室提供。3％中生菌素由深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司提供。1.室內(nèi)離體果試驗設(shè)計：試驗共6個處理：a、稀釋100倍的20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑；b、稀釋100倍的3％中生菌素；c、稀釋100倍的復(fù)配制劑一；d、稀釋100倍的復(fù)配制劑二；e、稀釋100倍的復(fù)配制劑三；f、無菌水對照。每處理噴施100粒葡萄，重復(fù)3次。先噴布單一菌劑或復(fù)配制劑，一天后用醫(yī)用采血針刺傷同一深度后接種白腐病菌孢子懸液(1×106個孢子/ml)，每個葡萄刺傷2個點，27℃保溫、保濕4日后觀察病斑大小。病情分級標(biāo)準(zhǔn)如下：0級：無病斑；1級：病斑面積占果實面積5％以下；3級：病斑面積占果實面積6-15％；5級：病斑面積占果實面積16-30％；7級：病斑面積占果實面積31-50％；9級：病斑面積占果實面積50％以上。試驗結(jié)果表明(表3)，復(fù)配制劑的室內(nèi)離體果的防治效果均好于單一菌劑，說明該菌劑復(fù)配后更有利于抑菌作用的發(fā)揮。在三種配比的復(fù)配制劑中，復(fù)配制劑二防治效果最好，防效可達(dá)89.77％。該復(fù)配制劑的防效好于復(fù)配制劑一和復(fù)配制劑三(防效分別為80.39％和75.68％)，明顯好于20億活芽孢/毫升水劑和3％中生菌素對葡萄白腐病的離體防治效果(防效分別為72.38％和64.31％)。表3復(fù)配制劑對葡萄白腐病的室內(nèi)離體果試驗處理病情指數(shù)防治效果(％)20億活芽孢/毫升水劑24.67±1.47c72.38±1.36b3％中生菌素31.88±1.39b64.31±1.19c復(fù)配制劑一17.52±0.42d80.39±2.44a復(fù)配制劑二9.13±0.36d89.77±2.78a復(fù)配制劑三23.73±0.89c75.68±1.89b無菌水對照89.34±3.55a-注：表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示經(jīng)duncan氏新復(fù)極差法檢驗在p<0.05水平差異顯著。測試?yán)?復(fù)配制劑防治葡萄白腐病的田間試驗試驗葡萄品種：巨峰被測藥劑：實施例3提供的復(fù)配制劑一至三。對比藥劑：20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑由衡水學(xué)院生命科學(xué)系微生物學(xué)實驗室提供。3％中生菌素由深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司提供。1.田間藥效試驗設(shè)計：試驗共6個處理：a、稀釋100倍的20億地衣芽孢桿菌y24活芽孢/毫升水劑；b、稀釋100倍的3％中生菌素；c、稀釋100倍的復(fù)配制劑一；d、稀釋100倍的復(fù)配制劑二；e、稀釋100倍的復(fù)配制劑三；f、無菌水對照。每處理噴施150株葡萄樹，重復(fù)3次，每畝復(fù)配生物殺菌劑的用量為5kg。采用手動式噴霧器噴藥，每隔6天噴藥一次，共噴9次。每株均勻噴霧，噴藥量以葉片和果實的正反面濕潤、樹體均勻著藥、稍有藥滴下淌為度。試驗期間無降雨，無災(zāi)難性氣候和其他病蟲害影響。45日后，調(diào)查各個處理區(qū)的葡萄白腐病發(fā)病指數(shù)，計算防治效果。病情的分級標(biāo)準(zhǔn)、病情指數(shù)和防治效果的計算方法同測試?yán)?。田間試驗結(jié)果表明(表4)，復(fù)配制劑的田間防效均好于單一菌劑，說明該菌劑復(fù)配后可以增強田間的防治效果。在三種配比的復(fù)配制劑中，復(fù)配制劑二防治效果最好，防效可達(dá)83.24％。該復(fù)配制劑的防效好于復(fù)配制劑一和復(fù)配制劑三(防效分別為78.65％和71.14％)，明顯好于20億活芽孢/毫升水劑和3％中生菌素對葡萄白腐病的防治效果(防效分別為65.87％和59.44％)。表4復(fù)配制劑對葡萄白腐病的田間防效試驗處理噴霧4次后病情指數(shù)防治效果(％)20億活芽孢/毫升水劑28.15±1.83c65.87±1.49b3％中生菌素33.45±1.26b59.44±1.24c復(fù)配制劑一17.61±0.38d78.65±2.35a復(fù)配制劑二13.82±0.41d83.24±2.14a復(fù)配制劑三23.81±0.82c71.14±1.29b無菌水對照82.47±3.96a-注：表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示經(jīng)duncan氏新復(fù)極差法檢驗在p<0.05水平差異顯著。綜上，本發(fā)明所涉及的地衣芽孢桿菌的復(fù)配組合物和復(fù)配制劑，具有協(xié)同增效作用，能增強對葡萄白腐病的防治效果。通過該復(fù)配組合物和復(fù)配制劑的使用，在葡萄園生態(tài)環(huán)境中引入大量有益微生物，惡化病原菌的生存環(huán)境；結(jié)合栽培管理等農(nóng)業(yè)措施，形成一個穩(wěn)定的、平衡的、生物多樣化的葡萄園生態(tài)系統(tǒng)，達(dá)到一藥多治、持久地控制葡萄病害流行的目的。防治效果好、無污染、對人畜安全、無殘留和特異性強等優(yōu)點，且對保護(hù)環(huán)境、維持生態(tài)平衡具有重要的現(xiàn)實意義。最后應(yīng)說明的是：在本文中，術(shù)語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包含一系列要素的過程、方法、物品或者設(shè)備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設(shè)備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個…”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設(shè)備中還存在另外的相同要素。以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制。盡管參照前述實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術(shù)方案的精神和范圍。當(dāng)前第1頁12