本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒及試劑盒的使用方法和試劑盒的用途。

背景技術(shù)：

幽門螺桿菌(helicobaeterpylori,hp)于1983年由澳大利亞科學(xué)家魯賓·華倫和巴利·馬歇爾首次從慢性活動性胃炎患者的胃粘膜活檢組織中成功分離出來的，是目前所知能夠在人胃中生存的惟一微生物種類，hp能夠引起慢性胃炎、胃潰房等消化道相關(guān)疾病，是who癌癥協(xié)會規(guī)定的原核生物中唯一的i類致癌因子。以質(zhì)子泵抑制劑(protonpumpinhibitor,ppi)結(jié)合阿莫西林和克拉霉素(或者甲硝唑)的三聯(lián)療法，是國內(nèi)外公認的一線抗hp感染治療組合?？死顾氐目咕鷻C制是藥物穿入菌體細胞內(nèi)，與核糖體緊密結(jié)合，作用于23srrnav功能區(qū)的多肽轉(zhuǎn)移環(huán)，抑制多肽轉(zhuǎn)移酶，影響核糖體的位移過程，阻止肽鏈延長，從而抑制細菌的蛋白質(zhì)合成。然而，由于克拉霉素的耐藥率的不斷上升，這種療法的成功率正在逐漸的下降。

幽門螺桿菌對克拉霉素的耐藥機制有以下幾種：l、rrna甲基化酶引起克拉霉素失活；2、細胞膜滲透性下降使進入細菌的藥物減少；3、克拉霉素排出增加；4、基因突變:主要為幽門螺桿菌23srrna的v區(qū)發(fā)生點突變，導(dǎo)致核糖體變構(gòu)，克拉霉素的結(jié)合位點發(fā)生改變，使幽門螺桿菌與克拉霉素的親合力減弱，不能阻止細菌的蛋白合成產(chǎn)生耐藥。國內(nèi)外學(xué)者普遍認為幽門螺桿菌對克拉霉素耐藥的主要機制是23srrna基因突變所致，其余的機制相對作用較弱。1997年taylor等人研究證實位于在23srrna基因的結(jié)構(gòu)域v中編碼的肽基轉(zhuǎn)移酶區(qū)的第2142位(其中腺嘌呤核苷酸被胞嘧啶或被鳥嘌呤取代)，或第2143位(其中腺嘌呤被鳥嘌呤取代)的3個點突變，這些突變在此微生物中與克拉霉素抗性機理密切相關(guān)；因此認為hp23srrnav區(qū)的a2142g/c、a2143g突變是引起克拉霉素耐藥的主要原因。liu等對北京65株克拉霉素耐藥株研究顯示：a2143g、a2142g和a2142c的突變率分別占84.6％,6.2％和1.5％；另外，raymond等對法國138株克拉霉素耐藥株研究發(fā)現(xiàn):a2143g、a2142g和a2142c的突變率分別占81.9％、14.5％和3.6％。因此，檢測hp23srdna中a2143g、a2142g和a2142c突變，可以檢測到中國90％以上的克拉霉素耐藥hp株，可以作為國內(nèi)檢測hp克拉霉素耐藥的靶點。

用于克拉霉素耐藥檢測的方法很多，包括如藥物敏感性試驗、dna直接測序、限制性片段長度多態(tài)性分析(rflp-pcr)、熒光定量pcr法等。其中藥敏實驗為耐藥檢測的金標(biāo)準，但此類方法是建立在細菌培養(yǎng)基礎(chǔ)上，其缺點為細菌培養(yǎng)時間長，培養(yǎng)要求較高，臨床上比較難做到。目前，世界上尚沒有一種商品化的用于hp克拉霉素耐藥檢測的試劑盒在實際應(yīng)用中得到認可。

擴增阻礙突變系統(tǒng)(amplificat1nrefractorymutat1nsystem，arms)于1989年建立，用于對已知突變基因進行檢測。該法通過設(shè)計突變arms引物，其3’末端堿基與待檢測突變型的突變堿基匹配，用于特異性擴增突變模板。arms的檢測靈敏度依賴于arms引物的特異性和反應(yīng)條件如酶，鎂離子濃度等的優(yōu)化。為了增加引物的特異性，減少引物與靶dna有錯配時的錯配延伸，可通過在引物3’端的第2-3個堿基引入另外一個或者兩個錯配堿基，使之與模板之間形成多重錯配以阻止錯誤延伸。arms-qpcr技術(shù)基于real-timepcr平臺，結(jié)合arms突變富集和taqman特異性熒光檢測兩種技術(shù)。利用arms引物對突變靶序列進行pcr擴增，taqman探針對擴增產(chǎn)物進行特異性位點檢測，在real-timepcr基礎(chǔ)上鑒定特定突變。

技術(shù)實現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明的目的是提供一種具有完善內(nèi)標(biāo)和通用系統(tǒng)，檢測快速準確，靈敏度高的用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒。采用arms-taqman熒光pcr技術(shù)的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒，具有完善內(nèi)標(biāo)和通用系統(tǒng)，從而實現(xiàn)快速、方便、靈敏、經(jīng)濟的檢測，適合推廣應(yīng)用和產(chǎn)業(yè)化。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題，提出的一種技術(shù)方案：一種試劑盒，包括23srrnapcr反應(yīng)液a、23srrnapcr反應(yīng)液b和23srrnapcr反應(yīng)液c，所述23srrnapcr反應(yīng)液a包括通用引物對、23srrna基因特異性探針、內(nèi)標(biāo)引物對、內(nèi)標(biāo)特異性探針；所述23srrnapcr反應(yīng)液b包括23srrna基因a2142g/c突變檢測特異性引物對、23srrna基因特異性探針、內(nèi)標(biāo)引物對、內(nèi)標(biāo)特異性探針；所述23srrnapcr反應(yīng)液c包括23srrna基因a2143g突變檢測特異性引物對、23srrna基因特異性探針、內(nèi)標(biāo)引物對、內(nèi)標(biāo)特異性探針。

上述技術(shù)方案的一種優(yōu)選：所述23srrna基因a2142g/c位點和a2143g位點突變檢測特異性引物的上游引物為arms引物；所述通用引物對的上游引物的核苷酸序列如seqidno.1所示，所述通用引物對的下游引物的核苷酸序列如seqidno.2所示；所述23srrna基因特異性探針的核苷酸序列如seqidno.3所示；所述23srrna基因a2142g突變檢測特異性引物對的上游引物如seqidno.4所示；所述23srrna基因a2142g突變檢測特異性引物對的下游引物如seqidno.2所示；所述23srrna基因a2142c突變檢測特異性引物對的上游引物如seqidno.5所示；所述23srrna基因a2142c突變檢測特異性引物對的下游引物如seqidno.2所示；所述23srrna基因a2143g突變檢測特異性引物對的上游引物如seqidno.6所示；所述23srrna基因a2143g突變檢測特異性引物對的下游引物如seqidno.2所示；所述23srrna基因特異性探針和所述的內(nèi)標(biāo)特異性探針帶有不同的熒光基團；所述內(nèi)標(biāo)引物對的上游引物核苷酸序列如seqidno.7所示，所述內(nèi)標(biāo)引物對的下游引物核苷酸序列如seqidno.8所示；所述內(nèi)標(biāo)特異性探針核苷酸序列如seqidno.9所示。

上述技術(shù)方案的一種優(yōu)選：上述23srrna基因特異性探針和所述的內(nèi)標(biāo)特異性探針的5’端分別標(biāo)有發(fā)光基團fam和vic，所述的23srrna基因特異性探針和所述的內(nèi)標(biāo)特異性探針的3’端均標(biāo)有淬滅基團bhq1。

上述技術(shù)方案的一種優(yōu)選：上述的試劑盒反應(yīng)體系為20～50μl，所述23srrnapcr反應(yīng)液a中，通用引物對的上、下游引物的終濃度均為0.1～0.4μμ，23srrna基因特異性探針的終濃度為0.1～0.2μμ，內(nèi)標(biāo)引物對的上、下游引物的終濃度均為0.1～0.4μμ，內(nèi)標(biāo)特異性探針的終濃度為0.1～0.2μμ；所述23srrnapcr反應(yīng)液b中23srrna基因a2142g/c突變檢測特異性引物對的上、下游引物的終濃度均為0.1～0.4μμ，23srrna基因特異性探針的終濃度為0.1～0.2μμ，內(nèi)標(biāo)引物對的上、下游引物的終濃度均為0.1～0.4μμ，內(nèi)標(biāo)特異性探針的終濃度為0.1～0.2μμ；所述23srrnapcr反應(yīng)液c中23srrna基因a2143g突變檢測特異性引物對的上、下游引物的終濃度均為0.1～0.4μμ，23srrna基因特異性探針的終濃度為0.1～0.2μμ，內(nèi)標(biāo)引物對的上、下游引物的終濃度均為0.1～0.4μμ，內(nèi)標(biāo)特異性探針的終濃度為0.1～0.2μμ；

上述技術(shù)方案的一種優(yōu)選：上述用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒還包括陽性對照和陰性對照，所述陽性對照液的濃度為10ng/μl的野生型基因組dna溶液，且陽性對照含有10％的23srrna基因a2143g突變和a2143g突變陽性質(zhì)粒；所述的陰性對照為含有內(nèi)標(biāo)模板的te緩沖液。

上述技術(shù)方案的一種優(yōu)選：上述用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒還包括pcr反應(yīng)液，所述的pcr反應(yīng)液包括pcr緩沖液、0.2mm的dntps、1.5～3mm的mgcl2和2～5u/test的熱啟動taqdna聚合酶；所述的pcr緩沖液包括100mm的tris-hcl(ph8.3)和500mm的kcl；所述的0.2mm的dntps包括0.2mm的datp、0.2mm的dgtp、0.2mm的dctp和0.2mm的dutp。

本發(fā)明還提供了一種試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

pcr反應(yīng)，其中具體包括：將23srrnapcr反應(yīng)液a、23srrnapcr反應(yīng)液b、23srrnapcr反應(yīng)液c和23srrnapcr激活劑平衡至室溫，混勻離心后進行加樣，并將配置的各反應(yīng)液分裝到pcr反應(yīng)管中；

加樣，其中具體包括：在裝有pcr反應(yīng)液的反應(yīng)管中用帶濾芯吸嘴分別加入5μl核酸模板，蓋上管蓋，轉(zhuǎn)移到擴增檢測區(qū)；

pcr擴增檢測，其中具體包括：將反應(yīng)管放入熒光pcr儀進行擴增檢測。

本發(fā)明還提供了一種試劑盒的用途，用于幽門螺桿菌克拉霉素藥物選擇。本發(fā)明具有積極的效果：

本發(fā)明的用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒采用arms-taqman熒光pcr技術(shù)，并引物內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)，內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)包括內(nèi)標(biāo)引物對，內(nèi)標(biāo)特異性探針，內(nèi)標(biāo)模板來自人源基因組dna；同時，經(jīng)反復(fù)實驗確認的內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)是不是影響質(zhì)控pcr反應(yīng)體系或檢測pcr反應(yīng)體系。內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)的引入檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒是為保證檢測結(jié)果的準確性，此步設(shè)計的優(yōu)勢在于：1)監(jiān)測每個測試樣本采集是否存在問題；2)監(jiān)測每個pcr管內(nèi)是否存在抑制導(dǎo)致的假陰性情況；3)判斷是否存在擴增孔間差；或4)每個pcr管內(nèi)是否存在人為加樣錯誤導(dǎo)致的假陰性結(jié)果。

本發(fā)明用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒的開發(fā)中，使每個樣本的檢測在三個pcr管內(nèi)平行進行實驗：1)一個通用pcr反應(yīng)及內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)；2)a2142g/c突變pcr反應(yīng)及內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)；3)a2143g突變pcr反應(yīng)及內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)。這樣設(shè)計的優(yōu)勢在于：既可以檢測模板質(zhì)量，又可以監(jiān)測假陰性及批間情況。

本發(fā)明用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒，采用將擴增阻礙突變系統(tǒng)(amplificationrefractorymutationsystem,arms)技術(shù)，通過優(yōu)化反應(yīng)體系，達到檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g等突變位點的突變情況。

本發(fā)明用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒，其檢測時間為70～90分鐘，實現(xiàn)了幽門螺桿菌23srrna基因突變檢測的高效、低成本、高靈敏度和準確性，對其它基因突變檢測試劑盒的開發(fā)具有有借鑒意義。

本發(fā)明用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒單次檢測成本在20元左右，預(yù)計試劑盒定價在200～300元，與國外動則數(shù)千元/次的檢測費用相比，能讓受檢者享受到實實在在的優(yōu)惠。

本發(fā)明用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒靈敏度高、內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)完善，與現(xiàn)有技術(shù)相比，更能適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用。

附圖說明

圖1：采用本發(fā)明的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒實施例1檢測a2142g/c位點突變樣本擴增圖。

圖2：采用本發(fā)明的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒實施例1檢測a2143g位點突變樣本擴增圖。

圖3：采用本發(fā)明的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒實施例1檢測未突變樣本擴增圖。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明進行具體的描述，有必要在此指出的是以下實施例只用于本發(fā)明進行進一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)上述本發(fā)明內(nèi)容對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整。文中未注明具體條件的實驗方法，通過按照常規(guī)條件進行，或按照原料制造商所建議的條件進行。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。

實施例1

一、試劑盒的組成

本實施例的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒，包括23srrnapcr反應(yīng)液a、23srrnapcr反應(yīng)液b、23srrnapcr反應(yīng)液c、23srrnapcr激活劑、陽性對照和陰性對照等，如表1所示。23srrnapcr反應(yīng)液a由10×pcr緩沖液、熱啟動taqdna聚合酶、dntps、通用引物對及探針和內(nèi)標(biāo)引物對及探針配制而成。23srrnapcr反應(yīng)液b由10×pcr緩沖液、熱啟動taqdna聚合酶、dntps、a2142g/c突變檢測特異性引物對及探針和內(nèi)標(biāo)引物對及探針配制而成。23srrnapcr反應(yīng)液c由10×pcr緩沖液、熱啟動taqdna聚合酶、dntps、a2143g突變檢測特異性引物對及探針和內(nèi)標(biāo)引物對及探針配制而成。其中10×pcr緩沖液包括100mm的tris-hcl(ph8.3)和500mm的kcl；dntps包括0.2mm的datp、0.2mm的dgtp、0.2mm的dctp和0.2mm的dutp。質(zhì)控品包括陽性對照和陰性對照分別分裝在兩個不同的管內(nèi)。

陽性對照是濃度為10ng/μl的野生型基因組dna溶液，且陽性對照含有10％的23srrna基因a2143g突變和a2143g突變陽性質(zhì)粒。

陰性對照為含有內(nèi)標(biāo)模板的te緩沖液。

應(yīng)用本發(fā)明的試劑盒進行幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變檢測時所采用的反應(yīng)體系為20～50ul，試劑盒各組分的使用濃度及在反應(yīng)體系中的終濃度見表1。

表1試劑盒組成表

通用引物對、a2142g/c特異性arms引物、a2143g特異性arms引物、23srrna基因特異性探針、內(nèi)標(biāo)特異性引物對及內(nèi)標(biāo)特異性探針的核苷酸序列如表2所示。

表2引物和探針特征表

如表2所示，23srrna基因特異性探針5’端標(biāo)記有fam熒光發(fā)光基團，3’端標(biāo)記有bhq1熒光淬滅基團。內(nèi)標(biāo)特異探針的核苷酸序列的5’端標(biāo)記有vic熒光發(fā)光基團，3’端標(biāo)記有bhq1熒光淬滅基團。23srrna基因特異性探針和內(nèi)標(biāo)特異探針的5’端標(biāo)記不同的熒光發(fā)光基團，在同一反應(yīng)體系中對同一標(biāo)本進行檢測。

二、試劑盒的使用方法

本實施例的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變檢測試劑盒的具體檢測步驟如下：

1、dna提取

采用廣州和實生物技術(shù)有限公司的組織dna提取試劑盒(磁珠法)提取胃黏膜組織樣本1、樣本2和樣本3，具體的操作可參考試劑盒的產(chǎn)品說明書。

2、樣本dna質(zhì)量檢測

獲得的樣本dna提取物后，通過nanodrop2000測定濃度和od260/od280的比值控制樣本質(zhì)量，最終加入反應(yīng)體系中的樣本，od260/od280的比值在1.8～2.0之間的可獲得最優(yōu)反應(yīng)結(jié)果，濃度為10～50ng/ul。

3、pcr反應(yīng)

1)配制25ulpcr反應(yīng)體系

從試劑盒中取出23srrnapcr反應(yīng)液a、23srrnapcr反應(yīng)液b、23srrnapcr反應(yīng)液c和23srrnapcr激活劑平衡至室溫，混勻離心后按照下表格進行加樣，并將配置的各反應(yīng)液分裝到pcr反應(yīng)管中(23srrnapcr反應(yīng)液a-c反應(yīng)液位置分別對應(yīng)pcr反應(yīng)管的幽門螺桿菌外控反應(yīng)孔、2142突變檢測反應(yīng)孔、2143突變檢測反應(yīng)孔和2144突變檢測反應(yīng)孔)，具體如表3所示。

表3

2)加樣

在裝有pcr反應(yīng)液的反應(yīng)管中用帶濾芯吸嘴分別加入5μl核酸模板，蓋上管蓋，轉(zhuǎn)移到擴增檢測區(qū)。

3)pcr擴增檢測

將反應(yīng)管放入熒光pcr儀進行擴增檢測。循環(huán)參數(shù)設(shè)定如表4所示：

表4

4)結(jié)果獲取

根據(jù)儀器軟件進行分析，得到各樣本的檢測結(jié)果。(基線優(yōu)先考慮儀器自動選擇；若使用手動選擇，建議選取3～15，或根據(jù)樣本檢測的具體情況設(shè)置基線，閾值線選在陰性對照正常擴增曲線的上方)

5)質(zhì)量控制

陰性對照：三個孔位的測定結(jié)果fam通道均為陰性(ct＝40或無數(shù)值)，vic通道均為陽性(22＜ct值＜32)。

陽性對照：三個孔位的測定結(jié)果fam通道均為陽性(22＜ct值＜32)。

6)檢驗結(jié)果的解釋

a)陰性對照的三個孔位的fam通道應(yīng)無擴增曲線(ct＝40或無數(shù)值)，vic通道應(yīng)有擴增曲線且22＜ct值＜32，否則該次實驗視為無效。陽性對照的三個孔位的fam通道應(yīng)有擴增曲線且22＜ct值＜32，否則該次實驗視為無效。

b)待測樣本的三個孔位的vic通道應(yīng)有擴增曲線，且ct值應(yīng)控制在20-30之間。若ct值大于30則說明存在pcr抑制或者加入的dna量過少，需重新提取dna；若ct值小于20，則說明加入過量的dna，需減少dna量。

c)待測樣本的外控反應(yīng)孔的fam通道若無擴增曲線(ct＝40或無數(shù)值)，說明該樣本無幽門螺桿菌感染；若fam通道有擴增曲線(ct值＜40)，說明該樣本存在幽門螺桿菌感染。

d)突變結(jié)果的判斷：確定待測樣本三個突變檢測反應(yīng)孔(2142突變檢測反應(yīng)孔和2143突變檢測反應(yīng)孔)的fam通道ct值與通用反應(yīng)孔的fam通道ct值，計算δct(δct＝突變檢測反應(yīng)孔ct值-通用反應(yīng)孔ct值)。通過比較|δct|與cut-offδct之間的關(guān)系來判讀結(jié)果，如下表所示進行判斷。若該突變檢測反應(yīng)孔的fam通道無擴增曲線(ct＝40或無數(shù)值)，則判斷為陰性，即無該類型突變。若該突變檢測反應(yīng)孔的fam通道ct值在0-38之間，則判斷|δct|：|δct|大于等于cut-offδct時，則判斷為陰性，即無該類型突變；|δct|小于cut-offδct時，則判斷為陽性，即存在該類型突變，具體如表5所示。

表5

當(dāng)完成試劑盒有效性的判定和檢測樣本有效性的判定后，確定檢測樣本、陽性對照、陰性對照以及內(nèi)標(biāo)基因均有效的前提下，在對樣本1、樣本2和樣本2檢測時，；若a管或b管|δct|＜cut-offδct，則判定該樣本為2142或2143位點突變陽性，參見圖1和圖2；若樣本fam通道無擴增曲線(ct＝40或無數(shù)值)或|δct|≥cut-offδct時，則樣本為陰性(非突變)，參見圖3。三、試劑盒的用途

本實施例的幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變檢測試劑盒，其應(yīng)用范圍包括：

通過檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變情況可受益的患者包括胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃十二指腸復(fù)合潰瘍、胃息肉、胃腫瘤等患者；

通過幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變檢測可指導(dǎo)克拉霉素用藥；

通過幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變檢測，以及結(jié)合ppi檢測可輔助臨床醫(yī)生進行診斷，從而實現(xiàn)精確治療。

實施例2

本實施例的用于幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變檢測試劑盒其余部分與實施例1相同，不同之處在于：23srrna基因特異性探針5’端標(biāo)記有vic熒光發(fā)光基團，3’端標(biāo)記有bhq1熒光淬滅基團；內(nèi)標(biāo)特異探針的核苷酸序列的5’端標(biāo)記有fam熒光發(fā)光基團，3’端標(biāo)記有bhq1熒光淬滅基團。pcr反應(yīng)時，vic通道采集23srrna基因的熒光信號，fam通道采集內(nèi)標(biāo)基因的熒光信號。

上述實施例僅僅是為了清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對本發(fā)明的實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而這些屬于本發(fā)明精神所引伸的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明的保護范圍之中。

序列表

sequencelisting

<110>上海芯超生物科技有限公司

<120>一種用于檢測幽門螺桿菌23srrna基因a2142g/c和a2143g位點突變的試劑盒

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